三氧化二砷诱导K562细胞凋亡的机制探讨

本研究旨在探讨三氧化二砷(arsenic trioxide，ATO)诱导P210^Bcr-Abl K562细胞凋亡的发生机制。采用细胞培养、细胞形态观察、流式细胞术(FCM)测定凋亡细胞和细胞周期，应用半定量逆转录一-合酶链反应(RT—PCR)分析ATO作用不同时间后K562细胞bcl—Xl和bcr-abl基因的改变，并检测胞浆细胞色素C(cyt C)、半胱天冬酶3(caspase-3)蛋白的表达。结果表明：2．5μmol／L ATO作用48小时可诱导K562细胞凋亡，凋亡进程中细胞胞浆内cyt C蛋白浓度增高，caspase-3活性增强；RT—PCR显示ATO对bcr-abl基因表达无明显影响，但12小时可下调bcl-XL基因。结论：ATO通过激活胞浆线粒体下游的cyt C和caspase-3激酶活性而诱导K562细胞凋亡，bcl—XL基因下调也促进了细胞凋亡。     

外源性Wnt5a诱导K562细胞分化表型的实验研究

本研究探讨外源性Wnt5a诱导K562细胞定向分化的作用。用重组腺病毒AdWnt5a、AdGFP感染CHO细胞,分别制备Wnt5a和GFP对照条件培养液,并处理K562细胞1-7天,用光学显微镜和电子显微镜观察细胞形态变化;采用过氧化物酶(POX)、糖原(PAS)和非特异性酯酶(α-NAE)染色、细胞表面分化抗原CD13、CD14、CD68鉴定K562细胞的分化表型;用流式细胞术检测细胞分化周期的变化。结果表明:与对照GFP条件培养液相比,Wnt5a条件培养液处理的K562细胞形态和超微结构均出现了分化成熟的特征;POX、PAS、α-NAE细胞化学染色均为阳性,并且α-NAE阳性70%可被氟化钠抑制;单核细胞系表面标志抗原CD14、CD68和粒细胞系表面标志抗原CD13经免疫细胞化学染色均呈阳性,但CD13与对照比较无显著性差异;Wnt5a处理K562细胞5天,细胞周期阻滞在G2期。结论:外源性的Wnt5a可诱导K562细胞向成熟方向分化,并且有向单核细胞系分化的现象。     

三氧化二砷对K562及其多药耐药细胞系K562/A02细胞的诱导凋亡研究

Ｐ170表达阳性的白血病细胞往往对多种不同化学结构和作用靶点的药物同时发生耐药。我们观察了三氧化二砷(Ａｓ2 Ｏ3 )对体外培养的人急性红白血病细胞系Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞的凋亡诱导作用 ,以探讨Ａｓ2 Ｏ3 对多药耐药白血病细胞的作用。材料和方法1　药品　Ａｓ2 Ｏ3 (Ｓｉｇｍａ公司 )溶于Ｈａｎｋｓ缓冲液中 ,配制成 1ｍｍｏｌ/Ｌ ,保存于 4℃。2　细胞株及细胞培养　Ｋ5 6 2及其多药耐药细胞系Ｋ5 6 2 /Ａ0 2细胞 (中国医学科学院、中国协和医科大学血液学研究所提供 )置于含体积分数为 10 %小牛血清的ＲＰＭ…     

人类红白血病细胞株K562的诱导分化机制

目前，肿瘤细胞的诱导分化是国内外研究的热点之一，有临床应用前景的K562细胞株是研究较多的实验材料。关于K562细胞的诱导分化中各种受体、细胞因子、转录因子、癌基因及其产物、酶所起的作用以及分化中DNA、RNA的改变有大量的报道。本文将它们作一简述。     

高压氧和三氧化二砷对K562细胞增殖抑制及相关机制研究

本研究旨在探讨高压氧联合三氧化二砷(As2O3)对K562细胞增殖、凋亡及低氧诱导因子-1a(HIF-1a)、血管内皮生长因子(VEGF)及caspase-3 mRNA表达的影响。用MTT法检测各组K562细胞在药物作用各时间点(24、48、72 h)的增殖率;AnnexinⅤ/PI荧光标记法检测K562细胞的凋亡率;实时荧光定量PCR检测K562细胞HIF-1a、VEGF、caspase-3 mRNA的表达。结果表明:与单用As2O3比较,As2O3联合高压氧可使K562细胞的增殖抑制率增加,凋亡作用明显加强,并可明显下调HIF-1a、VEGF的表达,上调caspase-3的表达,两者联用具有协同作用,效果明显优于单用As2O3(P<0.05)。结论:高压氧联合As2O3对K562细胞抑制增殖及加速凋亡的作用优于单独应用As2O3;二者联合后HIF-1a、VEGF mRNA的表达减弱,而Caspase-3 mRNA的表达增强。HIF-1a、VEGF、caspase-3mRNA表达的变化可能是As2O3与高压氧联合产生抗白血病细胞协同作用的分子机制之一。     

三氧化二砷对白血病细胞株K562的杀伤作用

目的探讨三氧化二砷(As2O3)对白血病细胞株K562的杀伤作用。方法采用台盼蓝拒染法计数活细胞数，并计算细胞生长率；细胞涂片经Wright—Giemsa染色，光镜下观察细胞的形态。结果As2O3对白血病K562细胞的增殖具有明显的抑制作用。4μmol／L的As2O3能够使K562细胞发生M期阻滞，引起部分细胞发生凋亡。结论As2O3：不但抑制K562细胞的增殖，而且导致K562细胞M期阻滞。     

抑制钠氢交换蛋白1促进低氧诱导的K562细胞分化

本研究主要探讨低氧微环境对慢性髓系白血病细胞系K562分化的影响及钠氢交换蛋白1(NHE1)在该过程中的作用。利用低氧模拟物CoCl2或于低氧(2%O2、5%CO2和93%N2)环境中培养K562细胞,应用激光共聚焦显微镜测定细胞内pH值(intracellular pH,pHi),瑞氏染色观察细胞形态,实时定量RT-PCR检测基因表达,Western blot技术检测MAPK磷酸化水平的改变。结果表明:与对照组相比,低氧培养的K562细胞表现出成熟相关的形态学改变,并伴随CCAAT/增强子结合蛋白(C/EBPα)的mRNA水平上调;特异性NHE1抑制剂Cariporide预处理能够促进低氧诱导的K562细胞分化,Cariporide处理后K562细胞的P38和ERK5蛋白激酶磷酸化水平显著增强。结论 :低氧及低氧模拟物能够诱导K562细胞系分化,抑制NHE1活性协同促进低氧诱导的K562细胞分化,其机制可能是通过增强细胞内MAPK蛋白激酶磷酸化水平促进分化。     

人类红白血病细胞株K562的诱导分化机制

目前，肿瘤细胞的诱导分化是国内外研究的热点之一，有临床应用前景的Ｋ５６２细胞株是研究较多的实验材料，关于Ｋ５６２细胞的诱导分化中各种受体，细胞因子，转录因子，癌基因及其产物，酶所起的作用以及分化中ＤＮＡ，ＲＮＡ的改变有大量的报道。本文将它们作一简述。     

诱导K562细胞增殖分化的信号转导机制

人类红白血病细胞系Ｋ５６２是由Ｌｏｚｉｏ等［１］于１９７５年从１例处于原始细胞危象中的慢性髓系白血病患者的胸膜渗出液中建立的,具有费城染色体（Ｐｈ）。因其在受到多种因素的诱导时,具有向红系、单核系或巨核细胞系分化的能力［２５］,以及其它一些特点,Ｋ...     

三氧化二砷、人参皂甙和β榄香烯对K562细胞株端粒-端粒酶系统作用机制的研究

本研究目的是探索三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯等几种药物在不同浓度作用时对K562细胞株端粒长度和端粒酶活性的调节及抑制作用，并研究上述药物抗白血病的作用机制，为寻求治疗急性白血病的新方法奠定基础。用3组不同浓度的三氧化二砷、人参皂甙及β榄香烯与人类红白血病细胞株K562共培养，采用PCR-ELISA法检测端粒酶活性，Southem blot法检测端粒长度。观察上述药物对K562细胞端粒酶活性及端粒长度的影响。结果表明：①经人参皂甙、三氧化二砷及β榄香烯作用后，K562细胞株端粒酶活性下降，下降程度呈浓度、时间依赖性，在一定浓度及作用时间后端粒酶呈阴性。②三氧化二砷、人参皂甙、β-榄香烯作用后K562细胞的存活率下降，且抑制作用呈浓度、时间依赖性。③三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯作用于K562细胞72小时后，端粒长度略有延长。结论：①三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的端粒酶活性，抑制作用呈浓度、时间依赖性。抑制端粒酶活性可能是其抗肿瘤作用的机制之一。②三氧化二砷、人参皂甙及β-榄香烯均能抑制K562细胞的生长，抑制作用呈浓度、时间依赖性。③抑制端粒酶活性后，K562细胞的端粒长度略有延长。本研究结果提示除了端粒酶以外，白血病细胞可能存在其他的端粒长度调节机制。     

超声诱导K562细胞凋亡机制的研究

目的本实验探讨超声体外诱导K562细胞凋亡的影响及其机制。 方法频率为1．8MHz的超声波辐照正常外周血单核细胞和体外培养的K562细胞，辐照后用光学显微镜观察凋亡细胞形态学改变、流式细胞仪检测原位末端脱氧核苷酸转移酶（TUNEL）和p53、bcl-2、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平。 结果电压为10mV超声辐照细胞10min后12h和24h，光学显微镜下可见凋亡小体形成等典型形态学改变，K562细胞凋亡率及p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达水平分别显著高于对照组（P〈0．001）；而bcl-2蛋白表达水平明显低于对照组（P〈0．001）。 结论超声可以诱导K562细胞凋亡，其机制可能与p53、caspase-3、Fas、FasL蛋白表达增高及bcl-2蛋白表达降低有关。     

佛波酯诱导K562细胞分化过程中WT1基因表达及其异构体比例变化的研究

目的 分析佛波酯（TPA）诱导K562细胞分化过程中WT1基因及其四种异构体表达水平及比例变化，探讨WT1基因不同异构体与细胞分化的关系。方法采用TPA诱导K562细胞分化，以硝基四氮唑蓝（NBT）还原实验及细胞免疫表型CD9检测判断细胞分化程度；实时荧光定量RT—PCR技术检测K562细胞被诱导分化过程中总WT1基因表达水平，并计算出WT1（＋／＋）、WT1（＋／-）、WT1（-／＋）、WT1（-／-）四种异构体在细胞分化过程中的比例变化。结果 TPA诱导K562细胞分化过程中NBT阳性率及CD9表达阳性率均有显著增加（P〈0．05）。WT1相对表达水平由分化前（4．67±1．11）×10^-3，降到（1．67±0．45）×10^-3（P〈0．05），随后回升，96h达（4．64±1．53）×10^-1；四种异构体比例变化不-致，WT1（＋／＋）比例由0h的（39．65±19．46）％降至96h的（15．25±7．27）％，而WT1（-／-）异构体由0h的（15．38±11．34）％上升至96h的（37．60±11．90）％，另外两种异构体比例变化无显著性差异。结论 TPA诱导K562细胞分化过程中总WT1表达水平24h内迅速下降，随后回升。分化前异构体以WT1（＋／＋）为主，而分化后以WT1（-／-）为主，提示WT1基因可能通过调节四种异构体的比例而发挥抑制分化或促进分化的作用。     

全反式维甲酸对K562细胞的诱导分化及c-myc基因表达的抑制

目的观察ATRA对K562细胞的诱导分化作用,探讨c-myc基因表达与诱导分化的关系及可能的作用机制。方法 采用形态学观察、流式细胞术及RT-PCR方法,检测K562细胞向粒系分化特征及c-myc基因的表达。结果 ATRA诱导K562细胞的诱导分化的同时,伴有c-myc基因mRNA水平表达下降。结论ATRA可通过下调c-myc基因表达而诱导K562细胞向粒系成熟方向分化。     

STI571诱导K562细胞凋亡机制研究

目的　研究格列卫 (Glivec ,STI5 71)诱导P2 10BCR/ABL(+)K5 6 2细胞凋亡机制。方法　采用Annexin Ⅴ /PI双染实验、DNA的PI染色、碘化二己基恶碳菁 (DiOC6 [3])染色、2 ,7 二氯荧光素二乙酸酯 (DCFH DA)染色及DNALadder等方法测定凋亡细胞。利用Westernblot实验分析K5 6 2细胞蛋白酪氨酸磷酸化水平 ,测定Bcl XL、caspase 3蛋白的表达并分别测定线粒体及胞浆部分的细胞色素C(cytoC)蛋白。结果　STI5 71可诱导K5 6 2细胞凋亡 ,出现DNA亚二倍体凋亡峰及DNALadder,线粒体跨膜电位及活性氧物质降低 ,P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平降低 ,Bcl XL、蛋白减少 ,caspase 3蛋白前体活化降解出相对分子质量为 2 0× 10 3 亚单位 ,胞浆部分出现cytoC ,同时线粒体cytoC减少。结论　STI5 71可迅速使P2 10BCR/ABL酪氨酸磷酸化水平下降 ,线粒体cytoC胞浆转位介导的信号通路是STI5 71诱导K5 6 2细胞凋亡的途径之一 ,STI5 71是有效的基因靶向治疗剂     

TPA诱导K562细胞分化过程中线粒体铁蛋白表达情况研究

为了研究K562白血病细胞在十四烷酰佛波醇-乙酯（TPA）诱导分化过程中线粒体铁蛋白（MtF）、运铁蛋白受体Ⅰ（TfR1）和铁蛋白（Fn）mRNA表达水平的变化情况,并探讨MtF在白血病细胞增殖和细胞铁代谢方面的作用,采用TPA（终浓度16nmol/L）诱导K562白血病细胞向单核细胞定向分化,并于诱导分化后第1、3和5天收集细胞,用瑞氏染色法观察各时点细胞形态,流式细胞术检测细胞表面分化抗原CD64的表达水平,使用半定量RT-PCR方法检测各时点细胞MtF、TfR1和Fn mRNA表达水平,管家基因β-actin用作对照。结果表明,TPA（16nmol/L）可诱导K562细胞向单核细胞分化,细胞呈现单核细胞典型的形态学特征,在诱导培养第5天诱导分化率可达95%,细胞表面CD64表达水平显著增加。诱导分化前K562细胞具有一定水平MtF表达,但随着TPA诱导细胞分化的增强,MtF和TfR1 mRNA表达水平进行性下调,诱导分化第5天的表达水平分别为诱导分化前的50.3%和68.2%,而Fn mRNA表达水平则逐渐上调,诱导分化第5天表达水平为诱导分化前的1.97倍。结论：TPA诱导K562细胞向单核细胞分化过程中MtF和TfR1 mRNA表达下调,而Fn mRNA表达上调;这种协调变化有助于降低细胞通过TfR1介导的铁摄取,从而抑制或影响细胞增殖能力。     

单用A23187快速诱导K562细胞分化成树突细胞的研究

目的探索一种快速、简便、廉价而高效获取树突细胞(DC)的方法。方法通过单用A23187、A23187+GMCSF或联合细胞因子(GMCSF、IL4及TNFα)将K562细胞诱导分化为DC(K562DC),倒置显微镜下观察细胞形态并摄相,流式细胞术检测K562DC表面分子表达情况。用MTT法检测K562DC刺激异基因淋巴细胞增殖及介导T细胞杀伤靶细胞的能力。结果上述3种细胞因子组合均能诱导K562细胞向成熟DC分化,均高表达CD1a、CD80、HLADR、CD83和CD86;含A23187的两组诱导72h获得DC数量分别为(69.5±17.2)%、(73.1±13.9)%,均高于细胞因子组的诱导率[(28.5±12.3)%],也高于细胞因子组诱导7d后的诱导率[(51.2±10.7)%](P值均<0.05);诱导7d后,含A23187的两组诱导的DC低表达CD1a,分别为(8.2±2.3)%和(10.3±5.1)%,而CD83表达分别高达(85.6±8.8)%和(82.4±9.1)%,而细胞因子组CD1a和CD83表达率分别为(17.2±1.6)%和(77.4±12.9)%;3组所获得的DC在对异基因淋巴细胞的刺激增殖能力及其致敏T细胞对靶细胞的杀伤作用差异无统计学意义(P值均>0.05)。结论单用A23187可快速(72h以内)诱导K562细胞向成熟DC转化,与联合细胞因子相比,该方法所获得的DC更趋成熟从而更适用于临床免疫治疗。单用A23187快速诱导白血病细胞生成DC是一种快速、简便、廉价而高效获取DC的方法。     

三氧化二砷联合TPA对K562细胞作用的实验研究

本研究旨在观察三氧化二砷（As2O3）单独或联合12-氧-十四烷酰佛波醇-13-乙酸酯（TPA）对髓系白血病细胞系K562细胞的细胞周期、分化和凋亡的影响,并探讨其可能的作用机制.采用TPA、As2O3、TPA联合As2O3分别作用于K562细胞株,在倒置显微镜下观察细胞形态改变,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Annexin V法及琼脂糖凝胶电泳观察K562细胞凋亡情况,集落形成实验检测K562集落形成率,流式细胞术检测K562细胞分化及细胞周期改变,Western b1ot检测P38及p-P38蛋白的表达.结果表明,TPA联合As2O3对K562细胞的促凋亡作用较单药组明显增强;As2O3使K562细胞集落形成能力降低;TPA促使K562细胞向单核巨噬细胞分化;TPA使K562细胞阻滞于G1期,As2O3使K562细胞阻滞于G2期,TPA可增强As2O3对细胞周期的影响;TPA与As2O3联用增强As2O3促磷酸化P38蛋白表达的作用.结论：TPA与As2O3联合作用能增强As2O3对K562细胞的促凋亡作用及对其细胞周期的影响.     

2-甲氧基雌二醇诱导HL-60、K562细胞分化作用初探

2-甲氧基雌二醇（2-methoxyestradiol，2ME2）为雌二醇的生理代谢产物，已被证实具有多种抗肿瘤活性。国外有文献报道2ME2浓度〉0．5μmol／L即可抑制白血病等肿瘤细胞的增殖，并且对正常细胞无明显毒副作用，目前该药已应用于Ⅱ期临床试验中。但低剂量的2ME2是否具有诱导白血病细胞分化的作用目前尚未见报道。我们以髓系白血病细胞系HL-60和K562为研究对象，初步探讨2ME2对HL-60和K562细胞系的体外诱导分化作用。     

三氧化二砷对K562细胞基质金属蛋白酶-2、9活性的影响

目的探讨三氧化二砷(ATO)对白血病K562细胞株基质金属蛋白酶-2、9(MMP-2、MMP-9)活性的影响。方法用0、0.05、0.40和3.20μmol/L的ATO分别处理K562细胞,培养24、48、72 h后收获细胞,对细胞上清进行明胶酶谱分析。结果①MMP-2、9在K562细胞均有表达,其活性条带在对照组以MMP-2(72 kd)最宽,MMP-9次之,MMP-2(62 kd)最窄。②MMP-2、9经0.05μmol/L ATO处理72 h后差异具有显著性(P<0.05);经0.4、3.2μmol/L的ATO处理后随作用时间延长而抑制现象也逐渐增强,与对照组比较均有显著性差异(P<0.05)。结论ATO可以有效抑制K562细胞MMP-2、MMP-9的活性,但其作用的强度与剂量及作用时间有关。ATO对MMP-2、MMP-9的活性的抑制可能是其抗白血病细胞血管新生的机制之一。     

苦参碱对K562细胞增殖与分化作用的机制研究

细胞反分化假说是目前在分子水平上关于肿瘤发生机制的主要学说之一。８０年代以来,肿瘤细胞的诱导分化治疗已成为肿瘤治疗的研究热点。全反式维甲酸的应用推动了国内外诱导分化研究的进展。苦参是我国常用的传统中药,近年来在传统研究基础上,对有效成分分离纯化、测定...