低离子抗球蛋白试验

作者通过相容和筛选试验,对7种血清学方法作了评价,认为低离子抗球蛋白试验(LIAGT)明显优于其它方法。材料:冷冻20年以上的抗-RHI血清,以及新鲜和冷冻15年的其它抗血清。方法:1.无花果蛋白酶(Ficin)法:Ficin处理细胞1滴加入同种抗血清1滴或4滴,37℃孵育20分钟,离心分析结果。2.Ficin-聚乙烯吡咯烷酮(PVP)法:Ficin试验完后,离心弃上清液,加1滴PVP-BSV,37℃孵育5分钟,离心后加2滴新鲜盐水,观察凝集。3.Ficin-抗球蛋白试验(AGT)法:观察Ficin-PVP法结果后,细胞经盐     

固相抗球蛋白试验

本文介绍一种借助于机器读数的固相抗球蛋白试验(SPT)。方法:①间接抗球蛋白试验(IAHG);在试管中加3滴血清和1滴3-5%洗涤红细胞悬液,37℃孵育30分钟,生理盐水洗3次,再加滴抗球蛋白试剂,混匀、离心、低倍显微镜看结果。以0-12积分评价结果,0为阴性,12为明显看到最强凝集。②固相物的制备:每支试管加纤维蛋白原溶液0.2ml至管底完全复盖为止。室温(21℃)放置5分钟,用磷酸盐缓冲液(PBS)冲洗3次,再加免疫球蛋白溶液0.1 ml,随后加1%戍二醛(?)滴(约50μl)。室温放置30分钟,再以PBS冲洗2次,以牛血清白蛋白(10g/L)冲洗5分钟以上。然后每管加多特异性抗人球蛋白0.1ml,室温放置5     

不灭能的快速胶乳法测定抗“O”

一、方法(一) 血清标本用生理盐水作:1:50稀释。取两列试管分装之,其中一列56℃灭能30分钟。取稀释血清各一滴(包括阳性及阴性对照血清),滴加在反应板的相应格子上。(二) 应用上海市医学化验所生产的抗“O”试剂盒,取其溶血素“O”每格加一滴,轻摇2分钟,混匀。     

甘露醇在血涂片免疫组化染色中的应用

1　材料和方法制取一系列血涂片分别用甲醇、乙醇、丙酮、4 %甲醛、1%戊二醛固定 5 min,倾去固定液用 PBS冲洗后晾干。分别用生理盐水、0 .1MPH7.4 PBS、蒸馏水和 2 0 %甘露醇浸泡各种方法固定的血涂片室温 30 min。各涂片进行瑞氏染色后显微镜下观察。取经离心浓缩后的抗凝血的白细胞层做涂片 ,4 %甲醛固定5 min。滴加山羊血清封闭液 ,室温 10 min。甩去多余液体 ,不洗。滴加单克隆小鼠抗人 CD3,CD4和 CD8抗原的抗体 ,37℃ 1h,甘露醇洗 2 min3次。滴加生物素化山羊抗小鼠 Ig G,37℃ 2 0min甘露醇洗 2 min3次。滴加 SABC- POD,37…     

冷凝集素过高影响冷疑集试验分析

目的分析冷凝集形成的因素及解决方法.方法利用血清递倍稀释法,受检红细胞经反复十几次盐水洗涤,反复放37℃温箱及4℃冰箱多次,求得冷凝集素的最高效价.结果三例血样冷凝集效价均大大高于正常.结论冷凝集效价过高,这给临床实验室诸多实验带来重大隐患,利用多次盐水洗涤法和巯醇处理红细胞法能较好的解决这一问题.     

血清前清蛋白的免疫散射测定

我们用Beckman公司的ICS-Ⅱ分析仪,用国产试剂、手动法测定血清前清蛋白(PA),报告如下。一、材料和方法1.缓冲液和稀释液:ICS-Ⅱ分析仪配套试剂。2.抗PA 血清:上海生物制品研究所产(批号8502,效价1∶120).取此抗血清用缓冲液作1∶8稀释后加0.3ml 美兰;4℃冰箱放24小时或37℃1小时后3000g 离心10分钟,弃去沉渣,置4℃冰箱待用.     

仙居县乡级医院消毒质量监测

<正> 1997年～2001年,每年对仙居县16所乡级医院消毒工作状况进行监测。 对使用中消毒液用无菌吸管吸1ml加到含9ml相应中和剂的营养肉汤中,用无菌吸管吸0.2ml上述稀释液,滴于普通营养琼脂平板上,一式二份,一个平板放37℃温箱培养3d,另一个放室温(20℃)培养7d,以细菌总数≤100cfu/ml,致病菌不得检出为合格。对室     

免疫荧光直接法染色的两点经验

用荧光素标记免抗人的ＩｇＡ、ＩｇＧ、ＩｇＭ三种免疫球蛋白对8例肾穿刺新鲜组织,分别进行不同厚度切片和反复冻融试剂染色〔1,2〕。两种试验结果显示组织切片厚度在8～10μｍ染色更好,冻融一次的试剂与未冻融的试剂染色差异不大。我们注意到这两点对做好肾小球疾病免疫病理诊断及研究有实用价值。1　方法冰冻切片置冰箱内干燥20分钟。滴加2%小牛血清白蛋白覆盖组织。吸去多余血清,分别滴加免疫荧光试剂,温盒内,室温孵育30～40分钟。001ＭｐＨ74ＰＢｓ洗三次,每次5分钟。滴加缓冲甘油封片,4℃冰箱保存,待观察。2　结果切片在荧光显微镜下观…     

固相红细胞吸附法用于输注血小板前的配合试验

近期开展的固相红细胞吸附试验(Sp-RCA)可同时检测出HLA,血小板和血型抗原的相容性,操作简易,可筛选成批的献血员。方法为取献血员的全血,以EDTA抗凝,离心200×g,10分钟,制成富含血小板的血浆(PRP),无需计数血小板含量。加两滴PRP于专用的结合血小板的U型微孔板内,将板离心35×g、经5分钟以形成固相血小板层,未结合的血小板用0.85%NaCl轻轻地洗涤6-8次除掉。再加入受检者的血清1滴,低离子强度溶液3滴,混匀,于37℃作用30分钟,未结合的血清以0.85%NaCl轻洗5次除去,再加1滴0.2-0.4%抗IgG结合的指示红细胞,使与血小板结合的抗体作用;将板离心700×g、1分钟后肉眼观察结果。阳性者指示红细胞吸附于整个孔的表面,阴性者只有孤立的含细胞的斑点。     

改良衣原体、支原体荧光检测法

采用军事医学科学院微生物检验中心生产试剂的原方法 ,是将标本涂于载玻片上 ,然后以甲醇固定 10ｍｉｎ ,再将荧光抗体染液滴于标本上 ,置湿盒中 ,于 37℃温箱孵育 30ｍｉｎ后 ,冲洗、晾干、封片、镜检 ,所需时间近 1ｈ。改进后 ,我们利用过氧化氢的氧化作用加速抗原抗体反应 ,大大缩短了试验过程。改良如下 :用记号笔在玻片背面划一小区 ,将标本涂于正面载玻片上所划小区内 ,然后滴加甲醇 3滴 ,2～作者单位 :0 10 0 2 0呼和浩特市内蒙古妇幼保健院检验科3ｍｉｎ后 ,甲醇挥发后 ,标本即固定好 ,用微量移液管加荧光抗体染液 2 0 μｌ,再加 2 …     

微波快速免疫荧光染色法检测抗核抗体

随着免疫荧光技术的发展，测定抗核抗体已成为有用的临床工具”’。本文将微波辐射方法引入抗核抗体免疫荧光染色，这种方法与间接免疫荧光常规染色法相比耗时短，背景清楚，操作简便，结果令人满意。观介绍如下：1材料和方法1.1材料小鼠肝组织切片。购自北京医科大学，－20”C冰冻保存。羊抗人FITC标记的IgG（北京生物制品所出品），微波炉（日本National，700W）1·2间接免疫荧光常规染色法取各用的肝印片滴加20μl：10倍稀释的血清均匀地铺在肝印片上，置入温盒内37℃孵育30分钟，洗涤，滴加最适稀释度的FITC标记的IgG20μl，置入…     

滴注FDP致高热1例

病例介绍 兰某某,男,23岁,以L_1压缩骨折伴截瘫1.5月,于1992年5月20日入院.体检;神志清楚,心肺(一),腹壁及膝反射均消失.X线片示:T_(12)～L_2压缩性骨折,Harringtan棒固定.T37℃,P85次/分,R20次/分,BP110/70mmHg.住院期间,6月6日遵医嘱给静脉滴注FDP(1,6一二磷酸果糖钠盐)50ml(PDP液内未加任何药物),10分钟滴完.3小时后患者出现寒战、高热,T40.3℃,经物理降温,安痛定2ml肌注,1小时后T40.1℃,即用10％GS250ml、地塞米松5mg静滴;10％GS250ml、先锋霉素V3.0g静滴后,体温逐渐正常.6月7日FDP滴完40分钟后又出现寒战高热T40.1℃,经上述处置后体温转正常.6月8日FDP滴完30分钟     

血常规标本冷凝集素的检测及意义

目的探讨用不同的方法检测血常规标本中冷凝集素的临床意义。方法对27例冷凝集素标本在室温常规测定,37℃温箱孵育30min后测定,比较血细胞结果和仪器报警信息;在不同温度下进行肉眼观察及涂片显微镜检查;冷凝集素试验,血清学、抗体特异性鉴定。结果不同温度条件下测量的血细胞结果和仪器报警信息均有差别;在室温、4℃、37℃的温度变化过程中冷凝集素标本呈现可逆性凝集特性;标本中冷凝集素效价平均滴度为70.9,且为抗I型抗体。结论联合MCH≥35g/L和仪器报警信息、冷凝集素试验、血清学、抗体特异性鉴定等方法共同检测血常规标本中冷凝集素有重要意义,对受冷凝集素影响的血常规标本必须置37℃温箱孵育30min消除冷凝集素影响后进行重新测定才能发出检验报告。     

T、B淋巴细胞非特异性酯酶染色鉴别法的研究

用酯酶染色法区别T、D淋巴细胞己在应用。但传统方法较繁琐,染色不大理想。为此,我们对Ranki氏法进行了研究和改进:1.微量手指血肝素毛细管自然沉降法代替静脉采血法。优点是取血量少,增加白细胞密度,便于计数。2.用42℃45分钟孵育替代37℃3小时孵育,可以缩短实验时间。3.用氯仿处理的1％甲基绿染色,使对比清晰,便于细胞分类。4.自来水代替蒸馏水冲洗,标本片37℃温箱干燥代替空气自然干燥,此既经济又方便,染色效果无影响。     

血清(浆)及尿中肌酸直接测定法

一、试剂及原理(见本刊1984;2(4):37).二、操作1.血清(浆)肌酸测定:血清(浆)0.5ml 置于试管内,加蒸馏水4ml,加氢氧化钡溶液0.25ml,混匀;加硫酸锌溶液0.25ml,充分振摇;2000rpm 离心10分钟.取上清液3.5ml 于另一试管内,加漂白土100mg,振摇1分钟;2000rpm 离心5分钟,吸出上     

荧光假单胞菌增殖速率的研究

荧光假单胞菌为库存血液常见的污染菌之一.10-36号菌株在4℃、22℃、37℃三种温度下进行培养,观察其生长延迟期和对数生长期的增长速率.结果表明,该菌株在37℃培养时生长缓慢,延迟期和对数期无明显界限,其增代时间为900分钟;22℃时生长延迟期为5小时,对数生长期增代时间为29分钟;4℃时,生长延迟期为30小时,对数期增代时间为300分钟.     

冻干质控血清复溶时间及葡萄糖值的变化

冻干定值质控血清(批号83-28)4瓶,同时加去离子水3.0ml,双手搓转混匀10分钟,室温静置30分钟;在GEMSTAR 生化分析仪上用GOD-POD 法测定葡萄糖,每瓶血清测10次共测40次。剩余血清贮于4℃冰箱内,至复溶后1、6、12、24、36、48小时     

微柱凝胶法检测ABO疑难血型的临床应用

目的 探讨微柱凝胶法(MGT)检测ABO疑难血型的敏感性及影响因素.方法 应用(MGT)法检测38 600例患者的ABO血型,同时用试管法进行复查对照,对正反定结果不一致的血标本,增加离心或37℃孵育时间去除血清中的纤维蛋白和冷凝集素,对血型抗原明显减弱或抗体效价降低者,采用增加定型血清或被检血清的剂量,预先将抗原抗体混合置37℃反应15-30 min,然后采用(MGT)法检测.结果 MGT法检测ABO血型抗原明显减弱或抗体效价降低者的敏感性高于试管法.MGT法检测ABO血型,对正反定结果不一致者35例,其中患者血浆含纤维蛋白9例、血清蛋白异常增高4例、高效价冷凝集素5例、血型抗原明显减弱8例、抗体效价降低9例.结论 纤维蛋白、高效价冷凝集素、血型抗原减弱或抗体效价降低均可干扰ABO血型鉴定结果.增加离心或37℃孵育时间去除定型血清或患者血浆剂量血清中的纤维蛋白和冷凝集素,增加定型血清或患者血浆的剂量,预先将抗原抗体混合置37℃反应15-30分钟,然后采用MGT法检测,可提高ABO血型鉴定的准确性和输血安全.     

用亲和素-生物素-免疫酶法(NABA)检测溶菌酶

本法可用于测定正常人和急性髓样白血病患者血清中的溶菌酶,步骤如下:用抗溶菌酶抗体(15μg/ml)包被微孔板,置4℃过夜后洗涤。加样品(100μl),置37℃1小时。经洗涤后加生物素化抗溶菌酶抗体(100μl,1:500),同法温育并洗涤。加酶标亲和素(1mg/ml 原液经1:2000稀释,每孔加100μl),置室温10分钟。洗涤,加底物,置室温10分钟终止反应。若采用快速法,加样品、生物素化抗体、酶标亲和素及底物后的温育时间应分别缩短为20分钟、20分钟、5分钟和5分钟。同时以竞争性亲和素-生物素-免疫酶测定法作对比。竞争     

用免疫酶标分析法测定纤维蛋白原降解物(FDP)

应用酶标抗原竞争法测定血清FDP,灵敏度高于血凝抑制技术,与放射免疫分析法一致.其原理是将待测的FDP抗原和已标记过氧化物酶的FDP混合,再与兔抗人纤维蛋白原(Fg)的抗血清一起保温,待测FDP和已标记酶的FDP在与抗体结合时发生竞争,应用免疫吸附剂(羊抗兔丙种球蛋白,即第二抗体敏化的玻璃细珠)把已结合上抗体的酶标记FDP复合物与游离的未结合抗体的标记FDP分离,结合到免疫吸附剂上的标记抗原,可在过氧化氢和邻联茴香胺(orthodianiside)存在下,测定过氧化物酶活性.材料制备:(一)抗人Fg血清,免疫电泳上出现清晰D、E碎片;(二)FDP是以Fg10mg加20U链激酶,37℃孵育30分钟,用Kunitz抑制剂终止反应,得早期FDP,使凝血酶时间延长至2分