艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的保护作用及机制研究

目的探讨艾塞那肽对高糖诱导的小鼠足细胞损伤的作用及相关机制。方法将足细胞系MPC5细胞按照不同葡萄糖培养浓度和干预因素分为以下5组:正糖对照组(5.5 mmol/L葡萄糖,n=3)、甘露醇高渗对照组(5.5 mmol/L葡萄糖+19.5 mmol/L甘露醇,n=3)、高糖组(25.0 mmol/L葡萄糖,n=3)、高糖+艾塞那肽组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽,n=3)和高糖+艾塞那肽+LY294002组(25.0 mmol/L葡萄糖+100 nmol/L艾塞那肽+50μmol/L磷脂酰肌醇-3-激酶抑制剂LY294002,n=3)。采用原位缺口末端标记法荧光染色观察细胞凋亡,膜联蛋白Ⅴ-异硫氰酸荧光素/碘化丙啶双染法检测细胞凋亡率,Western blot检测细胞内裂孔膜肾病蛋白(nephrin)、磷酸化蛋白激酶B(p-AKT)以及磷酸化Bcl-xL/Bcl-2相关死亡启动子(p-BAD)水平。多组间比较采用单因素方差分析,组间多重比较采用最小显著性差异t检验。结果与正糖对照组和甘露醇高渗对照组比较,高糖组足细胞凋亡率显著增加[分别为(28.60±2.65)%、(4.50±0.75)%和(4.55±0.65)%,t=-19.19、-19.15,均P<0.01],细胞内nephrin蛋白表达降低(分别为0.22±0.03、0.72±0.06和0.73±0.08,t=11.43、11.52,均P<0.01),p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(分别为0.14±0.03、0.83±0.06和0.86±0.04,0.16±0.03、0.66±0.06和0.68±0.04,均P<0.01)。与高糖组比较,高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率显著下降,细胞内nephrin表达升高,p-AKT和p-BAD蛋白表达上调(均P<0.01)。而高糖+艾塞那肽+LY294002组较高糖+艾塞那肽组足细胞凋亡率增加,细胞内nephrin蛋白表达降低,p-AKT和p-BAD蛋白表达下调(均P<0.05)。结论艾塞那肽通过上调足细胞中nephrin蛋白表达和减少足细胞凋亡从而保护高糖诱导的足细胞,其机制可能与激活AKT/BAD信号途径有关。     

活性维生素D对糖尿病肾病大鼠足细胞损伤的抑制效果及其可能机制

目的探讨活性维生素D对糖尿病肾病(DN)大鼠足细胞损伤的抑制效果及其可能机制。方法将48只Wistar雄性大鼠随机分为正常对照组(NC组)、正常大鼠给予活性维生素D干预组(VD组)、DN模型组(DN组)、给予活性维生素D干预的DN模型组(DN+VD组),每组10只。定期收集血、尿标本,18 w末处死,检测尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、尿蛋白水平;分别采用过碘酸雪夫(PAS)、Mssson染色观察肾组织病理改变,电镜下观察足细胞改变。免疫组化检测肾组织VDR和相关蛋白表达情况。Western印迹分析相关蛋白表达与PI3K/p-Akt信号通路的关系。结果造模后6~18 w,与NC组、VD组相比,DN组尿蛋白量明显上升(P<0.05),在给予VD干预后18 w结束时约降低37%。造模18 w后,DN组肾质量体质量比明显高于NC组和VD组(P<0.05),给予VD干预后明显下降。DN组、DN+VD组血BUN水平明显高于NC组和VD组(P<0.05)。NC组和VD组高表达Podocin和Nephrin,DN组大鼠以上两种蛋白表达明显减少;NC组大鼠低表达Desmin,DN组大鼠表达明显增加。给予VD干预后Podocin和Nephrin表达均明显高于DN组,但仍明显低于NC组和VD组;Desmin表达明显低于DN组。DN组大鼠VDR表达水平明显低于NC组和VD组,给予VD干预后表达水平明显上升。DN组大鼠肾组织PI3K-p85表白水平明显低于NC组和VD组,给予VD干预后表达水平明显上升。四组间总Akt水平无明显差异,但DN组p-Akt水平表达明显降低,经VD干预后明显上升。相关性分析显示,Nephrin与VDR、PI3K-p85、p-Akt之间均呈明显的正相关。结论活性维生素D可有效抑制链脲佐菌素(STZ)诱导的DN大鼠足细胞损伤,其机制可能与影响PI3K/p-Akt信号通路有关。     

益智仁-乌药配伍对糖尿病肾病小鼠肾小球细胞外基质的影响及作用机制

目的 从细胞外基质(ECM)角度探讨中药益智仁-乌药配伍治疗糖尿病肾病(DKD)的作用机制。方法 以C57BL/KSJ-db/db小鼠为DKD研究模型,经缬沙坦[16 mg/(kg·d)]和不同剂量益智仁-乌药[4、8、16 g生药/(kg·d)]干预8 w,这期间每2 w进行血糖检测;8 w后进行24 h蛋白尿检测,采用透射电镜观察肾组织超微结构改变,采用实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-qPCR)技术、免疫荧光染色检测肾组织ECM成分：黏连蛋白(Laminin)、纤维连接蛋白(Fibronectin)和Ⅰ/Ⅳ胶原蛋白(Collagen)mRNA和蛋白表达情况。结果 与模型组相比,益智仁-乌药各剂量组空腹血糖水平有所降低,但差异无统计学意义(P>0.05),益智仁-乌药中剂量组24 h蛋白尿水平明显降低(P<0.01)。益智仁-乌药配伍可明显减轻DKD小鼠肾小球基底膜增厚程度及减少细胞外基质沉积,不同程度降低DKD小鼠肾组织中Laminin、Fibronectin、CollagenⅠ、ⅣmRNA及蛋白表达。结论 益智仁-乌药降低DKD小鼠血糖与24 h蛋白尿的作用与减轻肾...     

艾塞那肽抑制高糖诱导内皮细胞凋亡的作用机制

在正常糖浓度(5.5 mmol/L)和高糖(33 mmol/L)培养的人脐静脉内皮细胞(HUVECs)分别加入不同浓度的艾塞那肽并干预不同时间后,噻唑蓝(MTF)法检测细胞活力,应用流式细胞仪检测细胞早期凋亡率,Western印迹法检测蛋白激酶B(Akt)磷酸化、Bcl-2和Bax蛋白表达水平.结果显示,HUVECs经高糖培养48和72 h后,细胞活力明显下降(P＜0.01).经1、10和100 nmol/L艾塞那肽干预48 h后,细胞活力明显增加,并呈浓度依赖性(P＜0.01).与正常糖浓度组比较,高糖组细胞凋亡率升高,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达水平下降,Bax蛋白表达增加,Bcl-2/Bax比值降低(P＜0.01).艾塞那肽干预后,细胞凋亡率下降,Akt磷酸化和Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达下降,Bcl-2/Bax比值升高(P＜0.01),而艾塞那肽的作用可被磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002所对抗(P＜0.01).提示艾塞那肽可通过PI3 k/Akt信号通路调节Bcl-2/Bax蛋白表达来抑制高糖诱导的内皮细胞凋亡,起到保护内皮细胞的作用.     

川芎嗪通过激活Akt/eNOS通路预防阿霉素致小鼠心脏毒性

目的研究川芎嗪对阿霉素诱导的小鼠心脏毒性的预防作用及其机制。方法建立阿霉素诱导的心脏毒性小鼠模型,将小鼠随机分为3组:对照组、阿霉素组(阿霉素15 mg/kg)、川芎嗪组[川芎嗪60 mg/(kg·d)+阿霉素15 mg/kg],心脏超声检测川芎嗪干预后阿霉素对小鼠心脏功能的影响,HE染色及Masson三色染色检测小鼠心脏组织学及胶原蛋白的变化,TUNEL染色检测小鼠心肌细胞凋亡情况,Western blot检测p-Akt、Akt、p-eNOS、eNOS及cleaved Caspase-3蛋白的表达。结果与阿霉素组相比,川芎嗪组左心室短轴缩短率(FS)和左心室射血分数(EF)显著升高(P0.01);川芎嗪显著降低小鼠心肌细胞凋亡(P0.01),明显抑制小鼠心肌纤维化和炎症细胞浸润(P0.01);与阿霉素组相比,川芎嗪组显著上调p-Akt和p-eNOS的表达(P0.05),显著下调cleaved Caspase-3的表达(P0.01)。结论川芎嗪通过激活Akt/eNOS通路抑制心肌细胞凋亡保护阿霉素诱导损伤心肌可能是川芎嗪预防阿霉素致心脏毒性的一个潜在机制。     

前列腺素E1对糖尿病肾病大鼠肾功能及肾组织细胞凋亡的影响

目的观察前列腺素E1(PGE1)对糖尿病肾病(DN)大鼠肾功能及肾组织细胞凋亡的影响。方法雄性Wistar大鼠65只,其中55只采用单次腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备DN大鼠模型。将造模成功的46只大鼠随机分为4组。P组予凯时10μg/(kg.d)尾静脉静注,连续10 d。A组予洛汀新10 mg/d,灌胃8周。P+A组同时给予上述两种药物,用法同上。DN组仅给予相同体积生理盐水。10只不造模的大鼠为正常对照组,处理同DN组。8周后处死所有动物,测定24 h尿白蛋白、BUN、血肌酐(sCr),同时取肾组织行HE染色行形态学观察,采用TUNEL法染色观察细胞凋亡情况。结果治疗后8周,DN组尿白蛋白水平显著高于N组(P<0.01),各用药组尿白蛋白水平显著低于DN组(P<0.01)。各用药组的BUN、sCr水平均低于DN组(P<0.01或P<0.05。DN组出现肾脏损伤的病理改变,而各用药组病理改变较DN组减轻。TUNEL检测可见在肾小球区域细胞凋亡不明显,不同组之间凋亡细胞数无统计学差异。肾小管区域细胞凋亡明显,细胞凋亡数显著多于肾小球。结论 PGE1可以明显减少DN大鼠尿蛋白排泄,降低血清BUN、sCr,减少肾小管细胞凋亡,但对肾小球细胞凋亡无明显影响。     

缬沙坦对糖尿病肾病大鼠肾脏TRPC6表达的影响

目的探讨缬沙坦对糖尿病肾病(DN)大鼠肾脏TRPC6表达的影响。方法高脂高糖喂养联合小剂量链脲佐霉素建立DN模型,将模型大鼠随机分为两组:模型对照组(DN组)与缬沙坦治疗组(DV组),另设正常对照组(NC组)。干预8周末测生化指标及24 h尿蛋白,光镜观察大鼠肾脏病理改变,免疫组化法测肾脏Nephrin、TRPC6表达并作半定量分析。结果与NC组相比DN组大鼠表现为高血糖、高血脂、胰岛素抵抗和蛋白尿,病理出现系膜基质增多,Nephrin表达减低而TRPC6表达增高。经缬沙坦治疗后Nephrin表达增加,TRPC6表达显著降低。TRPC6与尿蛋白呈正相关,Nephrin的与尿蛋白呈负相关。结论 DN大鼠肾脏出现足细胞损伤和TRPC6表达增加,缬沙坦可通过下调TRPC6的表达而发挥足细胞保护作用。     

吡格列酮对2型糖尿病患者尿Nephrin排泄的影响

目的探讨2型糖尿病(T2DM)患者尿Nephrin排泄的变化以及吡格列酮干预对其的影响。方法将98例T2DM患者随机分为磺脲类药物干预组(DS组)、吡格列酮干预组(DP组),观察治疗前后相关代谢指标及尿Nephrin排泄的变化,选择同期健康体检人群49名为正常对照(NC)组。结果 DP组、DS组患者FPG、HbA_1c、尿白蛋白(UAlb)/尿肌酐(UCr)比值较NC组明显升高(P0.01)。NC组尿中未检测到Nephrin;DP组干预后尿Nephrin/UCr比值明显下降(P0.01),DS组干预前后尿Nephrin/UCr比值的差异无统计学意义(P0.05)。结论吡格列酮可降低T2DM患者尿Nephrin排泄,对肾小球足细胞有保护作用。     

艾塞那肽部分通过抑制聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1途径延缓糖尿病动脉粥样硬化的发展

目的探讨艾塞那肽对糖尿病动脉粥样硬化的影响。方法将雄性Apo E基因敲除(Apo E-/-)小鼠分为对照组、糖尿病组和艾塞那肽组(糖尿病+艾塞那肽)三组,6周后测量小鼠体重、心脏重量,检测其血糖及血脂水平,HE染色、油红O染色及免疫组织化学法测量主动脉斑块面积大小、组分及其稳定指数,Western Blot检测聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1及诱导型一氧化氮合酶的表达。结果与对照组相比,糖尿病组小鼠的血清总胆固醇、甘油三酯和血糖水平明显升高,主动脉根部斑块面积占血管管腔面积的百分比明显增高,斑块稳定性明显降低,聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1及诱导型一氧化氮合酶表达增高。与糖尿病组相比,艾塞那肽组小鼠的血清总胆固醇水平明显降低,甘油三酯降低,主动脉根部斑块面积百分比显著降低,斑块稳定性明显增高,聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1及诱导型一氧化氮合酶表达降低。结论艾塞那肽可以部分通过抑制聚二磷酸腺苷核糖聚合酶1途径减少糖尿病小鼠动脉粥样硬化斑块的面积,增加斑块的稳定性。     

冬虫夏草对DN大鼠肾足细胞的保护作用观察

目的观察冬虫夏草对糖尿病肾病（DN）大鼠肾足细胞的保护作用,并探讨其机制。方法将60只SD大鼠随机分为正常对照组（A组）、DN模型组（B组）、冬虫夏草治疗组（C组）,各20只。B、C组建立DN模型,C组给给予冬虫夏草菌粉5g／（kg·d）每日灌胃。8周后观察24h尿白蛋白排泄量（UAER）,肾小球、肾小管形态学变化,足细胞超微结构变化,以及肾皮质中Nephfin和Podocin蛋白分布情况。结果与A组比较,B、C组24hUAER明显增高（P均〈0．01）,肾小球、小管间质及足细胞病变明显,肾组织中Nephrin和Podocin分布减少（P均〈0．01）。与B组比较,C组24hUAER明显减少,肾小球、小管间质及足细胞病变明显减轻（P均〈0．01）,肾组织中Nephrin和Podocin蛋白分布有明显增加（P均〈0．01）。结论冬虫夏草具有保护及修复DN大鼠肾足细胞的作用,其机制可能与其上调肾组织中Nephrin和Podocin蛋白表达有关。     

The PI3K/p-Akt signaling pathway participates in calcitriol ameliorating podocyte injury in DN rats

Objectives

The present study aimed to investigate the relationship between PI3K/p-Akt signaling pathway and podocyte impairment in DN rats as well as the protective effect of calcitriol.

Methods

SD rats were randomly divided into four groups: normal control (NC), normal treated with calcitriol (NC + VD), diabetic nephropathy (DN) and DN treated with calcitriol (DN + VD); all VD rats were treated with 0.1 μg/kg/d calcitriol by gavage. DN model rats were established by intraperitoneal injections of streptozotocin (STZ). Rats were sacrificed after 18 weeks of treatments.

Results

In the present study, increased albuminuria was observed as early as 3 weeks of diabetes and continued to increase more than six-fold throughout the length of the study (18 weeks). Expectedly, animals receiving the treatment with calcitriol was protected from this increase, lower about one third. Meanwhile, the expression of podocyte specific markers, including nephrin and podocin, together with PI3K/p-Akt was significantly decreased in DN rats, whereas calcitriol reversed these above changes accompanied by elevated the expression levels of VDR. Additionally, a positive correlation was observed between the expression levels of nephrin and VDR (r = 0.776, P < 0.05). Likewise, the expression of nephrin was positively correlated with both PI3K-p85 and p-Akt (r = 0.736, P < 0.05; r = 0.855, P < 0.05, respectively).

Conclusion

PI3K/p-Akt signaling pathway participates in calcitriol ameliorating podocyte injury in DN rats. The manipulation of calcitriol might act as a promising therapeutic intervention for diabetic nephropathy.     

Podocytes as a target of insulin

Diabetic nephropathy (DN) presents with a gradual breakdown of the glomerular filtration barrier to protein, culminating in widespread glomerular damage and renal failure. The podocyte is the central cell of the glomerular filtration barrier, and possesses unique architectural and signaling properties guided by the expression of key podocyte specific proteins. How these cellular features are damaged by the diabetic milieu is unclear, but what is becoming increasingly clear is that damage to the podocyte is a central event in DN. Here we present accumulating evidence that insulin action itself is important in podocyte biology, and may be deranged in the pathomechanism of early DN. This introduces a rationale for therapeutic intervention to improve podocyte insulin sensitivity early in the presentation of DN.     

间充质干细胞条件培养基对糖尿病肾病大鼠肾脏的保护作用

目的利用微量渗透泵持续恒量地向糖尿病肾病(DN)模型大鼠腹腔内泵入间充质干细胞(MSCs)条件培养基,观察其对DN大鼠的保护作用。方法将30只SD大鼠随机分为3组:正常组,DN模型组和MSCs条件培养基组,每组10只。正常组给予普通饲料喂养;DN模型组大鼠每天给予高脂高糖饲料;MSCs条件培养基组是对造模成功的DN大鼠植入Alzet微量渗透泵。检测血糖、血清胰岛素和甘油三酯等指标,观察肾脏病理情况,免疫印迹法(Western blot)检测肾组织nephbin蛋白的表达情况。结果与DN模型组大鼠相比,MSCs条件培养基组的血糖、血清胰岛素、24 h尿蛋白、血肌酐和血尿素氮均显著增高,差异具有统计学意义(P0.05)。MSCs条件培养基组大鼠的肾小球系膜截面积与肾小球体积均显著减小(P0.05)。与正常组大鼠相比,MSCs条件培养基组大鼠nephrin蛋白的表达情况显著降低(P0.05),但与DN模型组相比显著增加(P0.05)。结论微量渗透泵持续泵入MSCs条件培养基可显著改善DN大鼠肾功能。     

糖尿病糖脂代谢紊乱与足细胞损害的实验研究

目的　观察糖脂代谢紊乱对糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞的影响 ,以探讨糖尿病肾病的发病机制。方法　采用链脲佐菌素诱导糖尿病大鼠模型 ,喂养 5周后 ,测定血糖、糖化血红蛋白、甘油三酯、总胆固醇、血肌酐、尿素氮和尿白蛋白排泄率 ,应用免疫组化检测肾小球足细胞损伤标志蛋白 -desmin的表达 ,同时利用透射电子显微镜观察肾小球足细胞超微结构。结果　糖尿病大鼠血糖、糖化血红蛋白、总胆固醇、血肌酐、尿素氮、尿白蛋白排泄率水平明显升高 (P <0 .0 5 ) ,肾小球内desmin蛋白表达上调 ,足细胞部分足突融合 ;同时 ,两组间血甘油三酯水平无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　糖脂代谢紊乱可导致糖尿病大鼠肾小球滤过屏障外层足细胞明显损害 ,尿白蛋白排泄率增加 ,这可能是糖尿病肾脏损害、蛋白尿出现的机制之一     

雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocin表达的影响

目的 观察雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病肾病大鼠足细胞nephrin和podocinmRNA和蛋白表达的影响.方法 将体重200 ～ 260 g的50只SD大鼠按随机数字表法分为正常对照组和4个模型组（n=10）,后者分别应用链脲佐菌素造模成功后分为糖尿病肾病组（DN组）、厄贝沙坦组、雷公藤多甙组和雷公藤多甙联合厄贝沙坦组.给予相应干预8周后,检测血尿指标,HE染色观察肾组织病理变化,逆转录-多聚酶链反应（RT-PCR）法检测各组大鼠肾皮质中nephrin和podocinmRNA和蛋白表达.结果 （1）与DN组大鼠比较,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾皮质nephrin mRNA （0.507±0.024比0.276 ±0.015,P ＜0.01）和podocin mRNA （0.533±0.024比0.463±0.022,P＜0.01）表达上调.（2）与DN组大鼠比较,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾皮质nephrin蛋白（0.738±0.029比0.199±0.012,P＜0.01）和podocin蛋白（0.811 ±0.032比0.227±0.014,P＜0.01）表达上调.（3） HE染色和Masson染色显示,糖尿病组大鼠肾脏肾小球体积增大,系膜基质弥漫增多,系膜细胞明显增多,基底膜弥漫增厚,间质可见灶性淋巴细胞及单核细胞浸润,厄贝沙坦组和雷公藤多甙组病变较糖尿病组减轻,雷公藤多甙联合厄贝沙坦组大鼠肾脏组织病变较厄贝沙坦组和雷公藤多甙组进一步减轻.结论 雷公藤多甙联合厄贝沙坦对糖尿病大鼠的肾脏足细胞具有保护作用,这种保护作用可能是通过上调足细胞nephrin和podocin mRNA和蛋白表达有关.     

肾上腺髓质素与糖尿病肾病肾小管间质病变的关系研究

目的研究肾上腺髓质素(ADM)水平的变化对糖尿病肾病(DN)肾小管间质病变的关系。方法将42例糖尿病患者分为单纯糖尿病组(A组)、早期糖尿病肾病(DN)组(B组)、临床期DN组(C组),另选11例健康志愿者为D组。检测其ADM、内皮素-1(ET-1)水平,分析其与肾小管间质损伤标志物尿α1-MG、β1-MG水平的相关性。结果 4组研究对象血浆ADM及ET-1水平比较,差异均有统计学意义(P<0.05);血浆ADM与肾小管间质损伤标志物血、尿α1-MG,尿β1-MG水平呈正相关(均P<0.05)。结论 DN早期的肾脏血流动力学紊乱,ADM在肾小管间质病变的发展中可能起着重要的作用。     

糖尿病肾病患者肾小球中nephrin表达及其临床意义

目的检测糖尿病肾病（DN）患者肾小球组织中nephrin的表达,以探讨nephrin在DN患者蛋白尿发生机理中可能的作用.方法免疫荧光染色图像分析及RT-PCR法检测DN组、单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组肾小球组织nephrin的表达水平.结果DN组肾小球组织nephrin的表达量显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.DN组患者肾小球组织中nephrin的mRNA表达量也显著低于单纯糖尿病组、单纯血尿组及对照组（P＜0.05）.结论DN患者肾小球组织nephrin的表达减少,可能影响肾小球滤过屏障的通透性,导致蛋白尿的产生.     

Ultrastructural changes in the glomerular filtration barrier and occurrence of proteinuria in Chinese patients with type 2 diabetic nephropathy

AimDiabetic nephropathy (DN) is one of the most important causes of end stage renal disease in the world. Its hallmark is proteinuria. Therefore, we set out to clarify the structural changes that occur in the glomerular filtration barrier in Chinese patients with true type 2 diabetic nephropathy, and to examine the relationship between these structural changes and proteinuria.Methods42 Chinese patients with true T2DN were divided into three groups according to urinary protein excretion. Glomerular volume, endothelial cell density, endothelial cell number, glomerular basement membrane (GBM) width, podocyte density, podocyte number and foot process width were evaluated using light and electron microscopic morphometry.ResultGlomerular volume and endothelial cell number were increased in diabetic patients, but there was no difference between patients with respect to the degree of proteinuria. As proteinuria progressed, endothelial cell density remained unchanged, while the glomerular basement membrane (GBM) and podocyte foot process width increased, podocyte density and number decreased.ConclusionsPodocyte and GBM change more obviously during the development of proteinuria. Besides, proteinuria was inversely related to podocyte density, and directly related to GBM and glomerular volume.     

Proteinuria and the expression of the podocyte slit diaphragm protein,nephrin, in diabetic nephropathy: effects of angiotensin converting enzyme inhibition

AIMS/HYPOTHESIS: Proteinuria, reflecting increased glomerular permeability to macromolecules is a characteristic feature of diabetic nephropathy. Nephrin, a 1241-residue transmembrane protein is a key component of the podocyte slit pore membrane and a major contributor of the glomerular filtration barrier. We investigated the expression of nephrin in human kidney tissue from patients with diabetic nephropathy to elucidate its relationship with proteinuria and the effects of anti-proteinuric therapy with angiotensin converting enzyme inhibition. METHODS: Renal biopsies were examined from 14 patients with Type II (non-insulin-dependent) diabetes mellitus and proteinuria who had been randomised to receive treatment with the ACE inhibitor, perindopril (4 mg/day) or placebo for the preceding 2 years. These specimens were compared with control human tissue sections, obtained from areas of normal renal cortex following nephrectomy for malignancy. Proteinuria was measured, specimens were examined histologically for injury and the expression of nephrin messenger RNA was assessed by quantitative in situ hybridisation. RESULTS: Glomeruli from placebo-treated patients with diabetic nephropathy, showed a 62% reduction in nephrin expression compared with control subjects (p=0.0003). In contrast, nephrin RNA in glomeruli from perindopril treated patients was similar to that in the non-diabetic control group. In both placebo and perindopril treated patients, a close inverse correlation was noted between the magnitude of nephrin gene expression and the degree of proteinuria (placebo: r=0.86, p=0.013, perindopril: r=0.91, p=0.004). CONCLUSION/INTERPRETATION: Modulation in nephrin expression is related to the extent of proteinuria in diabetic nephropathy. These changes define, at a molecular level alterations in the glomerulus that occur in relation to proteinuria in diabetes and the effects of anti-proteinuric treatment with ACE inhibition.     

膜型狼疮肾炎中NEPH1与Nephrin的研究

目的 研究肾小球足细胞相关蛋白NEPH1和Nephrin在膜型狼疮肾炎(V-LN)蛋白尿产生中的作用.方法 选择V-LN 25例,18例同期住院的特发性膜性肾病(IMN)作对照,另取5例因肾脏肿瘤行一侧肾切除的远端相对正常肾脏组织作为健康对照;检测尿常规、尿蛋白定量(24 h)、肝功能、肾功能、血脂、血清补体、尿补体(C3)及尿N-乙酰-β-D氨基葡萄糖苷酶(NAG),2组病例肾组织作常规病理检查和NEPH1、Nephrin免疫荧光染色,激光共聚焦显微镜观察NEPH1、Nephrin表达和分布的变化,组间两两比较采用t检验.结果 2组病例尿蛋白定量(24 h)[(3.5±0.6)和(3.7±0.7)g]、血清白蛋白[(26±3)和(24±3)g/L]、血清肌酐[(108±9)和(102±8)μmol/L]、尿C3[(3.4±0.8)和(3.8±1.1)mg/L]差异无统计学意义(P>0.05),V-LN组血清总胆固醇[(6.3±0.9)mmol/L]、甘油三酯[(2.0±0.3)mmol/L]、血清补体C3[(0.40±0.16)g/L]、C4[(0.05±0.02)g/L]均低于IMN组[分别为(9.2±1.3)、(3.7±0.5)mmol/L,(0.72±0.06)、(0.12±0.01)g/L](P<0.05),而V-LN组尿红细胞和尿NAG(P<0.05,P<0.01)均高于IMN组;间接免疫荧光显示V-LN及IMN患者肾组织中NEPH1、Nephrin的表达均减弱,但V-LN组的表达减弱不如IMN组明显.结论 足细胞相关蛋白NEPH1、Nephrin表达下降可能参与了LN蛋白尿的发生,其他机制如肾小管上皮细胞的损害可能在V-LN蛋白尿的发生中也起了一定作用.