荧光PCR探针熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药性的价值

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

Value of fluorescence PCR probe melting curve method in detecting resistance of Mycobacterium tuberculosis

搜集全部2017年9月至2019年8月西安市胸科医院确诊的结核病住院患者546例作为研究对象,评价荧光聚合酶链反应(polymerase chain reaction, PCR)探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的临床应用价值。收集患者痰标本,每份标本量均不少于2ml。经菌种鉴定,最终纳入531例(株)为研究对象。每例患者采用同一标本进行BACTEC MGIT 960液体培养药物敏感性试验(简称“MGIT 960药敏试验”)和熔解曲线法耐药基因检测,对MGIT 960药敏试验和熔解曲线法检测利福平、异烟肼耐药性结果不一致者采用基因芯片法耐药基因检测对熔解曲线法结果进行验证。以MGIT 960药敏试验检测结果为参考标准,熔解曲线法检测肺结核患者痰标本MTB对链霉素耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为86.67% (39/45)、99.38% (483/486)、98.31% (522/531)和0.887;检测肺结核患者痰标本MTB对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为69.23% (54/78)、98.68% (447/453)、94.35% (501/531)和0.751;检测肺结核患者痰标本MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为87.50% (42/48)、96.89% (468/483)、96.05% (510/531)和0.778;检测肺结核患者痰标本MTB对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、符合率和Kappa值分别为50.00% (9/18)、98.83% (507/513)、97.18% (516/531)和0.531。在熔解曲线法检测结果为耐药而MGIT 960药敏试验为敏感的30例患者中,熔解曲线法检测结果显示:对异烟肼耐药的6例均为katG 315位密码子突变;对利福平耐药的15例中,ropB 507-512、ropB 521-528、 ropB 529-533位密码子突变分别为3例、3例、9例;对链霉素耐药的3例均为rrs 513-517位点突变;对乙胺丁醇耐药的6例均为embB 306位密码子突变。基因芯片法耐药基因检测结果显示:对异烟肼耐药的6例中katG 315 (AGC→ACC)突变和katG 315 (AGC→AAC)突变各3例;对利福平耐药的15例中,ropB基因511位CTG→CCG突变、526位CAC→TAC突变和531位TCG→TGG突变各3例、3例、9例,与熔解曲线法检测结果一致。可见,荧光PCR探针熔解曲线法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇耐药性突变位点检测具有较好的检测效能,可用于临床上对一线抗结核药品耐药情况的快速筛查。     

结核分枝杆菌利福平基因型药敏和表型药敏检测结果不一致原因分析

目的: 探讨荧光PCR探针熔解曲线法(简称“熔解曲线法”)与微孔板法检测利福平药物敏感性试验(简称“药敏试验”)结果不一致的原因,为临床基因型与表型药敏结果不一致提供解释。 方法: 收集2019年8月至2020年9月西安市胸科医院收治的分枝杆菌培养阳性的结核病患者资料,共2562例,筛选同时进行利福平熔解曲线法耐药基因检测和微孔板法表型药敏试验且结果不一致的菌株1294株。通过对rpoB基因测序,分析不一致结果与rpoB基因突变位点的相关性。 结果: 54例(4.17%,54/1294)熔解曲线法与微孔板法检测结果不一致的患者中,45例为熔解曲线法检测突变型而微孔板法检测敏感,8例为熔解曲线法检测野生型而微孔板法检测耐药,1例熔解曲线法检测出异质性耐药,未纳入分析。其中rpoB基因在507~512位密码子发生突变时,其与微孔板法结果不一致率最高,为70.59%(24/34),且不一致的菌株在微孔板法中最低抑菌浓度(MIC)的测定值多分布在≤1μg/ml。Leu511Pro是观察到不一致菌株最多的突变位点,占45.28%(24/53),其次观察到较多的突变位点是Leu533Pro,占所有不一致菌株的15.09%(8/53),Asp516Tyr 和His526Asn突变率均为5.66%(3/53)。8例熔解曲线法检测敏感而微孔板法检测耐药的菌株进行测序,结果显示rpoB基因区域未发生突变。结论: rpoB基因Leu511Pro、Leu533Pro、Asp516Tyr和His526Asn位点突变是造成临床结核分枝杆菌基因型与表型药敏结果不一致的主要原因,但其是否与低水平耐药机制有关还需要进一步研究。     

荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌对五种抗结核药物耐药性的研究

目的运用荧光PCR探针熔解曲线技术检测结核分枝杆菌(MTB)对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、氟喹诺酮类共5种抗结核药物的耐药性,并评价其临床应用价值。方法收集2018年1—8月分离自抚顺市第四人民医院门诊患者的153株MTB临床分离株,采用荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性。以比例法药物敏感性试验(简称"药敏试验")为金标准,评价荧光PCR探针熔解曲线法的敏感度、特异度和一致率。结果以比例法药敏试验为金标准,荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平耐药性的敏感度为95.56%(43/45),特异度为94.44%(102/108),一致率为94.77%(145/153),Kappa值为0.88;对异烟肼耐药性的敏感度为90. 57%(48/53),特异度为96.00%(96/100),一致率为94.12%(144/153),Kappa值为0.87;对乙胺丁醇耐药性的敏感度为85.71%(18/21),特异度为92.42%(122/132),一致率为91. 50%(140/153),Kappa值为0. 69;对链霉素耐药性的敏感度为89. 66%(26/29),特异度为92.74%(115/124),一致率为92.16%(141/153),Kappa值为0.76;对氟喹诺酮类药物耐药性的敏感度为93. 75%(15/16),特异度为96. 35%(132/137),一致率为96. 08%(147/153),Kappa值为0. 81。结论荧光PCR探针熔解曲线法检测MTB对利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素和氟喹诺酮类药物的耐药性具有良好的效能,可为医生制定用药方案提供重要依据。     

两种分子检测技术对结核分枝杆菌临床分离株耐药性诊断价值的评价

目的评价荧光PCR探针熔解曲线方法和线性探针技术检测结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药性突变的应用价值。方法回顾性分析2013年12月-2014年3月广州市胸科医院荧光PCR探针熔解曲线及线性探针检测142例结核分枝杆菌临床分离株利福平和异烟肼耐药突变情况,以表型药敏试验结果为标准,评价上述两种分子检测技术的检验效能。结果 142份结核分枝杆菌临床分离株中,以表型药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测利福平耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为92.86%、96.49%和95.77%;对异烟肼敏感度、特异度和符合率分别为72.09%、100.00%和91.55%。以表型药敏试验结果为标准,线性探针法检测142份结核分枝杆菌临床分离株利福平耐药性的敏感度、特异度和符合率分别为82.14%、98.25%和95.07%;对异烟肼敏感度、特异度和符合率分别为67.44%、100.00%和90.14%。荧光PCR熔解曲线法和线性探针方法对利福平和异烟肼耐药性的检测结果比较,差异无统计学意义(P0.05)。荧光PCR熔解曲线法与表型药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的Kappa值为0.87,对异烟肼耐药性的Kappa值为0.72。线性探针法与表型药物敏感性试验检测结核分枝杆菌对利福平耐药性的Kappa值为0.84,对异烟肼耐药性的Kappa值为0.67。结论荧光PCR探针熔解曲线方法和线性探针方法在检测结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药性方面,具有同等的检验效能,可以早期快速诊断耐药结核病。     

四种实验室检测技术对利福平和异烟肼耐药性检测的临床价值

目的 探讨微孔板法、实时荧光PCR熔解曲线技术(简称“熔解曲线法”)、多色巢式实时荧光定量PCR技术(简称“Xpert 法”)和罗氏药物敏感性试验(L-J药敏试验,简称“比例法”)用于快速筛查耐多药结核病(MDR-TB)的临床价值。方法 从医院信息系统(hospital information system,HIS)连续收集2014年7月至2018年3月重庆市公共卫生医疗救治中心收治的确诊为结核病,且具有微孔板法、比例法、熔解曲线法、Xpert 法检测MTB对利福平、异烟肼耐药性诊断结果的2792例患者资料;其中微孔板法、比例法采用阳性分离菌株检测,熔解曲线法和Xpert 法采用患者标本直接检测。纳入同时具有微孔板法和比例法耐药性检测结果的1488例患者作为研究对象,其中341例行微孔板法+比例法+Xpert法检测利福平耐药性,87例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测利福平耐药性,66例行微孔板法+比例法+熔解曲线法检测异烟肼耐药性。以比例法为标准,采用SPSS 13.0软件分别计算微孔板法、熔解曲线法、Xpert法检测利福平和(或)异烟肼耐药性的敏感度、特异度、符合率、Kappa值等。结果 以比例法为标准,微孔板法、Xpert法、熔解曲线法检测利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为97.2%(731/752)、96.9%(713/736)、96.9%(731/754)、97.1%(713/734)、97.0%(1444/1488)、0.94,97.2%(140/144)、94.9%(187/197)、93.3%(140/150)、97.9%(187/191)、95.9%(327/341)、0.92,97.1%(33/34)、84.9%(45/53)、80.5%(33/41)、97.8%(45/46)、89.7%(78/87)、0.79;微孔板法和熔解曲线法检测异烟肼耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率、Kappa值分别为94.8%(751/792)、95.7%(667/697)、96.3%(751/780)、94.2%(667/708)、97.9%(1418/1448)、0.91, 97.3%(36/37)、86.2%(25/29)、90.0%(36/40)、96.2%(25/26)、92.4%(61/66)、0.84。结论 微孔板法、熔解曲线法、Xpert 法检测利福平和(或)异烟肼耐药性均具有较高的敏感度和特异度,适合快速筛查耐多药结核病;微孔板法还能获得各药物最低药物浓度,为临床用药剂量的选择提供参考依据。     

微孔板法在一线抗结核药物敏感性试验中的应用价值

目的 分析微孔板法在一线抗结核药物药物敏感性试验(简称“药敏试验”)中的应用价值。方法 收集2019年1—6月西安市胸科医院经BACTEC MGIT 960液体培养(简称MGIT 960法)培养阳性的1086份标本,选择其中经菌种鉴定为结核分枝杆菌且同时对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇行MGIT 960 法和微孔板法药敏试验的331份菌液,分析两种试验方法的检测情况;并以MGIT 960法为标准,评估微孔板法药敏试验的检测效能,对结果不一致的菌液以熔解曲线法检测耐药基因予以核实。结果 以MGIT 960法为标准,微孔板法对链霉素、异烟肼、利福平、乙胺丁醇等4种药品的敏感度、特异度、Kappa值分别为88.7%(63/71)、100.0%(260/260)、0.93,93.9%(77/82)、98.8%(246/249)、0.94,93.8%(45/48)、99.6%(282/283)、0.95,66.7%(14/21)、99.0%(307/310)、0.72。微孔板法与MGIT 960法检测4种药品耐药性结果不一致者分别为链霉素10份、异烟肼8份、利福平6份、乙胺丁醇16份。经熔解曲线耐药基因分析后,结果显示微孔板法为中敏、MGIT 960法为耐药者10份(3.0%,10/331),耐药基因检测结果均为突变,分别为链霉素2份、利福平2份、乙胺丁醇6份;而微孔板法为中敏、MGIT 960法为敏感仅乙胺丁醇1份(0.3%,1/331),耐药基因检测结果为突变;微孔板法为敏感、MGIT 960法为耐药者23份(6.9%,23/331),耐药基因检测结果为野生型10份(分别为链霉素6份、异烟肼4份)、突变型13份(分别为链霉素2份、异烟肼1份、利福平3份、乙胺丁醇7份);微孔板法为耐药、MGIT 960法为敏感者6份(1.8%,6/331),耐药基因检测结果为野生型3份(分别为异烟肼、利福平、乙胺丁醇各1份)、突变型3份(分别为异烟肼2份、乙胺丁醇1份)。结论 微孔板法对一线抗结核药物的耐药性检测操作简便,与MGIT 960法一致性高,且可检测出低浓度耐药情况,可作为临床选择药物及使用剂量时的参考。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌耐药基因的结果分析

目的 分析和探讨荧光PCR熔解曲线法对结核病的诊断和耐药检测的应用价值。方法 收集2015年9月至2016年12月新疆维吾尔自治区胸科医院的976例疑似结核病患者的痰标本,运用探针荧光PCR熔解曲线法来检测结核分枝杆菌及其对利福平、异烟肼的耐药突变情况。以BACTEC MGIT 960液体培养法及液体药敏试验检测结果为标准,评价探针荧光PCR熔解曲线法鉴定结核分枝杆菌及其耐药突变检测的敏感度、特异度、一致率、Kappa值等。结果 以MGIT 960液体培养结果为标准,荧光PCR熔解曲线法鉴定结核DNA的敏感度为85.44%(135/158),特异度为94.01%(769/818),Kappa值为0.75,诊断符合率为92.62%(904/976)。以MGIT 960液体药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法对异烟肼耐药突变检测的敏感度为83.33%(20/24),特异度为94.59%(105/111),Kappa值为0.76,诊断符合率为92.59%(125/135);荧光PCR熔解曲线法对利福平耐药突变检测的敏感度为95.83%(23/24),特异度为95.50%(106/111),Kappa值为0.86,诊断符合率为95.56%(129/135)。结论 荧光PCR熔解曲线法检测速度快,对利福平和异烟肼耐药突变检测结果具有良好的敏感度和特异度,可用于临床上对结核分枝杆菌利福平和异烟肼耐药情况的快速筛查。     

荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平和异烟肼耐药性的价值北大核心CSCD

目的分析南京市结核分枝杆菌(MTB)感染患者的耐药情况,评价荧光PCR熔解曲线法检测结核分枝杆菌对利福平(RFP)和异烟肼(INH)耐药性的临床价值,探究RFP和INH耐药相关基因突变的特征。方法对鉴定为MTB的780株菌株同时进行绝对浓度法药物敏感性试验和荧光PCR熔解曲线法检测对RFP和INH的耐药性。以绝对浓度法药物敏感性试验结果为标准,分析熔解曲线法检测RFP和INH的灵敏度、特异度、符合率和一致性(Kappa检验)。结果780株MTB中,22株(2.82%)为RFP单耐药,62株(7.95%)为INH单耐药,143株(18.33%)为耐多药。以绝对浓度法药敏试验结果为标准,荧光PCR熔解曲线法检测MTB对RFP和INH耐药性的灵敏度分别为98.18%和85.85%,特异度分别为95.28%和97.39%,符合率分别为95.90%和94.36%,Kappa值分别为0.88和0.85。RFP分子耐药菌株中全部检测出rpoB基因位点突变,其中以rpoB 529~533位点为最常见的突变(63.87%,122/191),突变位点为rpoB 507~512的20株菌株中只有7株表型耐药,rpoB基因双位点突变的18株菌株全部表型耐药;INH分子耐药菌株中最常见的突变为katG 315位点(66.49%,127/191),其次是inhA启动子区(17.80%,34/191),90%以上的INH分子耐药菌株为表型耐药。结论南京市结核耐药情况严重,以耐多药结核病为主。荧光PCR熔解曲线法与药敏试验结果高度一致,且弥补了药敏试验对于低度耐药突变株菌检测的局限性。耐药相关基因突变位点的检测有利于结核病的及时诊断和个体化治疗的实施。     

三种分子生物学方法检测结核分枝杆菌耐药性的效能分析

目的 评价GeneXpert MTB/RIF(简称“GeneXpert”)、基因芯片检测及实时荧光定量PCR熔解曲线法(简称“PCR熔解曲线法”)检测结核分枝杆菌(MTB)耐药性的价值。方法 选取2017年1月至2018年1月西安市胸科医院有表型药物敏感性试验(简称“表型药敏试验”)结果的痰MTB培养阳性的774例肺结核患者作为研究对象,收集其表型药敏试验、GeneXpert、基因芯片及PCR熔解曲线法检测结果。以表型药敏试验结果为参照标准,评估3种分子生物学方法检测MTB耐药性的效能;根据受试者工作特征曲线(ROC曲线)下面积比较3种分子生物学方法检测MTB对利福平(RFP)耐药性的准确度。结果 以表型药敏试验结果为参照标准,GeneXpert检测MTB对RFP耐药性的敏感度和特异度分别为95.6%(87/91)和93.6%(249/266);基因芯片检测MTB对RFP和异烟肼(INH)耐药性的敏感度分别为92.8%(90/97)和78.8%(130/165),特异度分别为96.8%(610/630)和99.1%(557/562);PCR熔解曲线法检测MTB对RFP、INH、左氧氟沙星(Lfx)和阿米卡星(Am)耐药性的敏感度分别为:94.4%(51/54)、82.4%(61/74)、87.1%(27/31)、75.0%(6/8),特异度分别为:93.9%(138/147)、95.3%(121/127)、98.8%(164/166)、99.5%(188/189)。以表型药敏试验结果为参照标准,GeneXpert检测MTB对RFP耐药性ROC曲线下面积为0.95±0.02,基因芯片法和PCR熔解曲线法检测MTB对RFP耐药性曲线下面积均为0.93±0.03。结论 GeneXpert、基因芯片及PCR熔解曲线法检测MTB培养阳性肺结核患者对一线抗结核药物耐药性均比较可靠;PCR熔解曲线法检测MTB对Lfx和Am耐药性比较可靠。     

两种分子药物敏感性试验与表型药物敏感性试验检测结核分枝杆菌耐药性的效能比较

目的：评价基因芯片法和荧光定量PCR探针熔解曲线法直接检测结核病患者临床标本中结核分枝杆菌(MTB)耐药性的价值。方法：选取解放军总医院第八医学中心结核病医学部住院结核病患者临床标本44份(例),以传统药物敏感性试验(简称“药敏试验”)绝对浓度法为对照,应用基因芯片法直接检测临床标本中MTB对利福平、异烟肼的耐药性,以...     

扩增子测序技术检测石蜡包埋组织标本耐药结核基因的研究

目的 用基于多重PCR (multiplex PCR,mPCR)扩增子的二代测序(next-generation sequencing,NGS)技术(mPCR-NGS)检测MTB的耐药基因突变,并评估其检测石蜡包埋组织标本诊断耐药结核病的临床应用价值.方法 选取北京市昌平区结核病防治所2013年4月至2015年10月常规进行了利福平、异烟肼、乙胺丁醇、链霉素、卷曲霉素、卡那霉素、阿米卡星和氧氟沙星比例法检测且具有药敏试验结果的50株MTB临床分离株,包括42株耐药MTB和8株敏感MTB菌株.参考耐药基因数据库及相关文献,针对以上8种抗结核药物主要耐药基因及常见位点设计耐药基因组合,建立有效的检测方案.收集首都医科大学附属北京胸科医院病理科2017年11月至2018年9月耐药结核病患者55例的石蜡包埋组织标本,探针熔解曲线法检测结果为利福平、异烟肼、乙胺丁醇和氟喹诺酮类至少存在一种耐药相关基因突变.首先对已知表型药敏试验结果的MTB临床分离株进行mPCR-NGS检测,验证该方法检测纯菌样本的有效性,再进一步检测结核病患者石蜡包埋组织标本进行临床验证.主要评价指标为敏感度和特异度以及一致性.结果 以比例法为金标准,mPCR-NGS检测利福平、异烟肼、链霉素和乙胺丁醇的敏感度分别为95% (38/40)、93%(27/29)、93% (27/29)和72%(13/18),特异度分别为100%(10/10)、95% (20/21)、100%(21/21)和94%(30/32);二线注射类药物卷曲霉素、卡那霉素和阿米卡星敏感度均为100% (2/2,3/3,3/3),特异度分别为98%(47/48)、100%(33/33)和100%(47/47);氧氟沙星的敏感度为70%(7/10),特异度为100%(40/40).总符合率为94%,一致性检验Kappa值为0.87.纳入的55例石蜡包埋组织标本经探针熔解曲线法检测,28例利福平耐药,37例异烟肼耐药,13例乙胺丁醇耐药,17例氟喹诺酮类耐药.mPCR-NGS与探针熔解曲线法比较,利福平、异烟肼、乙胺丁醇和氟喹诺酮类的敏感度分别为100%(28/28)、95%(35/37)、100%(13/13)和100%(17/17);特异度均为100%(27/27,18/18,42/42,38/38).两种方法总符合率为99%,一致性检验Kappa值为0.98.结论 mPCR-NGS检测MTB临床分离株及结核病患者石蜡包埋组织标本耐药基因突变的敏感度、特异度和符合率较高,有望成为耐药结核病准确、快速的分子病理诊断新技术.     

实时荧光定量PCR检测耐药结核分枝杆菌中耐药相关基因whiB7的表达

目的探讨结核分枝杆菌耐药性与whiB7基因表达水平之间的关系。方法以耐受利福平、异烟肼、链霉素、乙胺丁醇和氟喹诺酮的结核分枝杆菌临床分离株为研究对象。利用实时定量PCR的方法．检测药物刺激结核分枝杆菌后whiB7基因表达水平的变化。结果除利福平刺激相应的菌株后。whiB7基因的表达水平变化不明显外．其余药物的刺激均会引起结核分枝杆菌耐约株的whiB7基因表达水平发生显著变化。结论结核分枝杆菌的whiB7基因是对多种抗生素刺激发生反应的基因。推测whiB7的表达参与结核分枝杆菌的耐药过程。     

PCR-反向点杂交法检测复治涂阳患者结核分枝杆菌耐药性的价值

目的 评估PCR-反向点杂交法检测复治涂阳患者痰标本中MTB耐药性的价值。方法 收集2015年6月至2019年1月上海市肺科医院诊治的400例复治涂阳肺结核患者的痰标本,每份标本量均不少于2ml;每例患者采用同一标本进行PCR-反向点杂交法MTB耐药基因检测、GeneXpert MTB/RIF检测和BACTEC MGIT 960液体培养、菌种鉴定、微孔板法药物敏感性试验(简称“药敏试验”),最终纳入357例(株)为研究对象。以微孔板法药敏试验结果为参考标准,评价PCR-反向点杂交法的检测效能。结果 以微孔板法药敏试验结果为参考标准,PCR-反向点杂交法检测MTB对利福平耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为97.5%(115/118)、97.1%(232/239)、94.3%(115/122)、98.7%(232/235)、97.2%(347/357)和0.937,对异烟肼耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为82.5%(113/137)、99.1%(218/220)、98.3%(113/115)、90.1%(218/242)、92.7%(331/357)和0.841,对链霉素耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为86.5%(115/133)、99.1%(222/224)、98.3%(115/117)、92.5%(222/240)、94.4%(337/357)和0.877,对乙胺丁醇耐药性的敏感度、特异度、阳性预测值、阴性预测值、符合率和Kappa值分别为60.7%(37/61)、98.6%(292/296)、90.2%(37/41)、92.4%(292/316)、92.2%(329/357)和0.682。结论 PCR-反向点杂交法检测复治涂阳患者痰标本中MTB耐药性有较好的效能。