雷公藤内酯醇抗心脏移植排斥反应的实验研究

验证雷公藤内酯醇的抗移植排斥反应作用。方法应用小鼠同种异位心肌移植模型。结果和结论雷公藤内酯醇可明显延长移植心的存活期。其免疫抑制效果与用药剂量和给药时有机有关，术后给药可明显延长移植物存活期。     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

雷藤氯内酯醇的半合成研究——雷公藤内酯醇和雷公藤内酯酮的结构改造

通过HCl对雷公藤内酯醇(triptolide)的12-C进行选择性亲核进攻,将雷公藤植物中分离获得的雷公藤内酯醇(triptolide)和雷公藤内酯酮(triptonide)结构,改造为具有强抗炎、免疫抑制和雄性抗生育活性的雷藤氯内酯醇(tripchlorolide)。并通过二维NMR谱和选择性远程DFPT等图谱分析,归属了雷公藤内酯醇、雷公藤内酯酮和表雷公藤内酯醇(epitriptolide)NMR谱的全部碳和氢的信号。     

雷公藤氯内酯醇对人外周血淋巴细胞内钙离子浓度的影响

近年来，有关雷公藤抑制免疫机制的研究取得不少进展，但其胞内作用机制仍不清楚。研究表明有丝分裂原激活Ｔ淋巴细胞的过程有赖于胞内钙信号系统。本研究采用Ｆｕｒａ２／Ａｍ荧光法观察不同浓度雷公藤氯内酯醇（Ｔ４）对人外周血Ｔ淋巴细胞内钙离子浓度影响，以期进一步探讨Ｔ４作用的细胞内机制。方法　（１）分离人外周血淋巴细胞，在淋巴细胞悬液中，加入５μｍｏｌ／ＬＦｕｒａ２／Ａｍ，于３７℃５％ＣＯ２孵育４０ｍｉｎ；（２）采用Ｆ２０００荧光分光光度计分别检测非负载淋巴细胞内自发荧光强度、负载后淋巴细胞静息时以及…     

雷公藤内酯醇抗心脏移植排斥反应的实验研究

目的验证雷公藤内酯醇的抗移植排斥反应作用。方法应用小鼠同种异位心肌移植模型。结果和结论雷公藤内酯醇可明显延长移植心的存活期,其免疫抑制效果与用药剂量和给药时机有关,术后给药可明显延长移植物存活期。     

HPLC法测定雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇

目的 建立雷公藤内酯醇生物贴的质量标准,雷公藤内酯醇生物贴中雷公藤内酯醇的定量测定方法。方法 雷公藤内酯醇生物贴经甲醇超声提取。色谱柱为Agilent Zorbax SBC₁₈色谱柱(250 mm×4.6 mm,5 μm),流动相为乙腈-水(3∶7),检测波长为220 nm。结果 雷公藤内酯醇在5～120 μg/mL,线性关系良好(r＝0.9981)。平均回收率96.5%(n＝9)。RSD＜3%。结论 本方法重现性好,灵敏度高。     

雷公藤中雷藤氯内酯醇（T4）的分离与结构测定

A new compound named tripchlorolide was isolated from Total Glucosides (T II) extracted from the woody part of the root of Tripterygium wilfordii Hook. f. Tripchlorolide (T4) was obtained as white needle-like crystals, mp 256-258 degrees C. Its molecular formula is C20H25O6Cl. The structure of T4 was elucidated on the basis of spectral (UV, IR, MS, FTMS/SCI, 1H-NMR, 13C-NMR, 1H-1H cosy, 13C-1H cosy) analyses, X-ray and chemical evidence. In preliminary pharmacologic assay, tripchlorolide showed definite anti-inflammatory actions and strong immunosuppressive and antifertile activities, the potency of the latter being 100 times stronger than that of T II.     

雷藤氯内酯醇对大鼠睾丸间质细胞的影响

20只雄性SD大鼠随机分成二组.用药组(n=10)灌报雷藤氯内酯醇,剂量为每日50μg/kg混悬于1%CMC中.对照组(n=10)灌服等量1%CMC.每周用药6天,灌药6周后雄性大鼠生育力降至零时取材实验.结果表明:与对照组相比,用药组睾酮靶器官睾丸及前列腺的重量,血清睾酮含量及睾丸间质细胞的形态均无明显变化.体外培养雷藤氯内酯醇对睾丸间质细胞产生睾酮的抑制作用不随药物浓度增加而改变.用药组睾丸间质细胞睾酮基础分泌量和HCG刺激后分泌量均明显下降.据此作者认为,抗生育剂量雷藤党内酯醇对大鼠睾丸间质细胞有轻度抑制作用.     

雷帕霉素对大鼠移植心脏血管病变的作用

目的研究雷帕霉素在大鼠移植心脏血管病变中的作用。方法建立大鼠腹腔心脏移植模型。异系移植以近交系Wistar大鼠为供体,SD大鼠为受体,随机分为雷帕霉素组(以雷帕霉素每天1.25 mg/kg灌胃)和环孢霉素组(以环孢霉素A每天10 mg/kg灌胃),于移植后90天留取移植心脏待检;同系移植组以Wistar大鼠作供、受体,行心脏移植未行抗免疫排斥治疗。假手术组为仅做腹部开关手术的Wistar大鼠。采用HE、Van Gie-son染色分析移植心脏血管狭窄的情况。结果假手术组心肌无炎性细胞浸润,冠状血管无狭窄。同系移植心脏无明显炎性细胞浸润,血管内膜稍增厚,管腔无狭窄。环孢霉素组可见冠状动脉管腔明显狭窄,血管壁及心肌内均可见大量炎性细胞浸润,心肌变性坏死,心肌纤维化。雷帕霉素组冠状血管狭窄程度及炎性细胞浸润情况明显减轻,与环孢霉素组比较差异有显著性(P<0.01)。结论雷帕霉素具有预防大鼠心脏移植物血管病变的作用。     

东莨菪碱对大鼠供心的保护作用

目的 研究东莨菪碱在心脏移植中延长供体心脏低温保存时间的作用，探讨其可能的机制。方法 将48只SD大鼠随机分为3组（n=16）：对照组（C组，供心保存6h）、东莨菪碱组1（S1组，供心保存6h）和东莨菪碱组2（S2组，供心保存12h）。建立大鼠异位心脏移植模型。S1组和S2组的保存液中添加东莨菪碱（3mg／L），并在循环开放前静脉注射东莨菪碱（3μg／kg）。使用工作心脏模型检测心功能指标，取心肌组织检测NO含量，一氧化氮合酶（iNOS、cNOS）的活性和ICAM-1水平，以及iNOS、cNOS和ICAM-1mRNA表达。结果 东莨菪碱能够改善移植后的心功能；下调再灌注后iNOSmRNA表达，降低iNOS活性，抑制cNOS的活性，总体上降低NO含量；通过下调ICAM-1mRNA水平，降低ICAM-1的表达。结论 东莨菪碱能够减轻心肌缺血再灌注损伤，在心脏移植中延长供心低温缺血保存时间。其机制与调节心肌组织中NO水平、降低ICAM-1表达有关。     

血小板源生长因子在大鼠移植心脏组织中的表达

目的 研究血小板源生长因子(PDGF)在大鼠移植心脏组织中的表达及意义.方法 取近交系Wistar大鼠为供体、SD大鼠为受体建立腹腔异位心脏移植模型,术后每天给环孢霉素A 10mg/kg皮下注射.另取供、受体均为SD大鼠各12只行同系移植作为对照.于移植后60天留取移植心脏,检测冠状血管狭窄程度.采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)法研究PDGF-A mRNA在移植心脏组织中的表达情况.结果 异系移植大鼠心脏血管明显狭窄,而同系移植大鼠心脏血管无明显狭窄.PDGF-A mRNA在异系移植组明显增高,与同系移植组比较具有显著性差异(p＜0.01).结论 血小板源生长因子在异系移植心脏组织中表达明显增高,血小板源生长因子的高表达可能与大鼠移植心脏血管病变的形成有关.     

辐照同种异体血管移植的实验研究

目的探讨在不用免疫抑制的条件下，开展同种异体血管移植的可行性。方法（1）在无菌条件及无刨伤原则下切取Wistar大鼠股动脉，-10℃～-20℃保存或真空包装常温保存，16kGy ^60Coγ射线照射。（2）分辐照同种异体血管移植组、新鲜同种异体血管移植组和新鲜自体血管移植组进行血管移植。于移植后1周、2周、1个月、2个月、3个月5个时间点观察移植血管的通畅率，并取材作组织学检测。结果：（1）辐照处理的同种异体动脉无任何组织学结构改变，肉眼观察外形无明显变化。（2）辐照同种异体血管移植组、新鲜同种异体血管移植组和新鲜自体血管移植组移植血管的通畅率分别为90％（27／30）、30％（9／30）和93．3％（28／30）。辐照同种异体血管移植组和新鲜自体血管移植组移植后2周移植血管内膜出现内皮细胞，移植后3个月移植血管内膜内皮细胞覆盖完整。新鲜同种异体血管移植组移植早期有淋巴细胞及炎性细胞浸润，有明显血管结构破坏出现，移植血管内膜未见内皮细胞覆盖。结论辐照同种异体血管完全符合理想的血管移植物所具备的条件；在不使用任何免疫抑制的条件下，应用辐照同种异体血管进行同种异体血管移植是可行的。     

火把花根防治同种移植肾慢性排斥反应实验研究

目的:探索更有效、安全和经济的防治移植肾慢性排斥反应的途径,为临床提高远期移植器官存活率提供理论和技术基础.方法:应用标准的慢性排斥反应动物模型,观察移植24周后135 mg/d火把花根片灌胃组和单纯肾移植对照组间24h尿蛋白定量、血肌酐和组织病理改变等的差异,评价火把花根对移植肾功能的影响.结果:火把花根可减少慢性排斥反应大鼠的尿蛋白、血清肌酐以及移植肾单个核细胞浸润和慢性纤维化病理评分,与对照组相比差异有显著意义(P＜0.05).结论:火把花根可有效减轻大鼠慢性排斥反应病变程度,可为临床防治慢性移植肾病提供新的措施和更广泛的选择.     

强心饮对心衰病模型大鼠心功能及心肌肥厚影响的实验研究

目的：观察强心饮对阿霉素诱导的心肌肥厚大鼠相关调控细胞生长与增殖蛋白表达的变化,以探讨强心饮对心肌肥厚潜在的作用机制。方法40只SD大鼠随机分为5组：模型组、正常组、雷帕霉素组、强心饮大剂量组、强心饮小剂量组。采取腹腔注射阿霉素复制大鼠心肌肥厚模型,观察大鼠心肌形态学、血流动力学、心衰指标及调控心肌肥厚相关蛋白表达的变化。结果与模型组比较,强心饮治疗组明显改善心肌肥厚大鼠心脏结构及功能,降低心肌组织BNP含量,抑制调控细胞生长蛋白mTOR及p70S6K的磷酸化（P＜0.01或P＜0.05）。结论强心饮能改善心肌肥厚大鼠心功能及抑制心肌肥厚,其机制可能调控p-mTOR及p-p70S6K的表达有关。     

供体特异输注对同种异体小鼠心脏移植生存期的影响

目的：探讨供体特异输注（ＤＳＴ）对同种异体小鼠心脏移植生存期的影响。方法：实验共分５组：ＰＢＳ组、环孢霉素Ａ（ＣｓＡ）组、ＣｓＡ组／全血组、ＣｓＡ／红细胞组、ＣｓＡ／周围淋巴细胞组，比较各组生存时间，心肌病理改变。结果：术前１天应用ＤＳＴ与低剂量ＣｓＡ具有协同作用。ＤＳＴ对同种异体小鼠心脏移植生存期影响中，以淋巴细胞作为特异输注效果最佳。结论：本实验研究为ＤＳＴ的临床应用提供了基础     

西罗莫斯为主的四联免疫抑制方案治疗移植肾功能不全

目的：观察西罗莫斯为主的四联免疫抑制治疗对于移植肾功能不全的治疗效果。 方法：59名（男/女：44/15）移植肾功能不全患者（血肌酐148.88±27.64umol/L）,均服用三联免疫抑制剂治疗（霉酚酸制剂/咪唑立宾+钙调磷酸酶抑制剂+激素）。患者在减少钙调磷酸酶抑制剂（CNI）剂量同时,加用小剂量西罗莫斯（起始剂量0.5mg/日,目标浓度2-4ng/ml）,转化为四联药物治疗。 结果：1.全部患者完成四联治疗转换,西罗莫斯后血药浓度（4.74±1.62ng/ml）,CNI浓度平均降低38%。2.调整治疗后,患者血肌酐显著降低（111.53±24.87vs.148.88±27.64umol/L,p<0.01）,甘油三酯（1.93±1.08vs.1.89±0.77mmol/L）和胆固醇（5.30±1.39vs.4.96±1.19mmol/L）变化不明显。3.将59名患者分为早期转换组（肾移植术后2年内转换四联治疗,n=44）和晚期转换组（术后2年以上转换,n=15）,早期转换组有更多患者肾功能恢复正常（34/44 vs. 6/15,p<0.05）,早期转换组血肌酐较转换前显著降低（106.4±19.78 vs.151.4±128.68 umol/L, p<0.05）,晚期转换组肌酐降低不明显（126.53±32.18 vs.141.4±24.76, p >0.05）。 结果：在减少CNI剂量的同时,增加小剂量西罗莫斯,可以显著改善肾移植术后移植肾功能不全,血脂异常的副作用不明显。小剂量西罗莫斯为主的四联免疫抑制治疗,对于术后早期（2年内）的移植肾功能不全患者,疗效更好。 关键词：移植肾功能不全,西罗莫司,钙调磷酸酶抑制剂     

金葡液对冻干异体骨移植愈合影响的实验研究

目的 观察金葡液对冻干异体骨移植愈合的影响，并探讨其作用机制。方法 24只兔右侧桡骨造成15mm缺损模型，植入冻干异体骨，随机分成两组，每组12只。术后第10d开始，实验组局部注射金葡液，对照组注射等体积的生理盐水。术后不同时间分别行X线片、组织学和放射性核素骨扫描检查，并测定血清钙、磷及碱性磷酸酶(ALP)含量。结果 实验组术后不同时间的骨代谢活性、新骨生成和血清P及ALP含量均高于对照组，而血清Ca低于对照组。实验组异体骨90d完全愈合，对照组仍未愈合。结论 金葡液作为一种促进骨折愈合药物，可有效加快冻干异体骨的愈合，加速新骨生成。     

常山酮对大鼠心脏移植急性排斥反应的抑制作用

目的:研究常山酮(HF)对大鼠异基因心脏移植急性排斥反应的影响及相关机制。方法:SPF级近交系Wistar雌性大鼠30只,SD雌性大鼠60只,随机分为3组行颈部心脏移植手术:同系对照组15对(供、受体均为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃),排斥组15对(供体为Wistar大鼠,受体为SD大鼠,术前第1天及术后均用生理盐水灌胃)及HF治疗组15对(供、受体同排斥组,术前第1天及术后均用HF溶液灌胃)。移植后第3,5,7天每组各处死5只受体大鼠,留取移植心行组织病理学及分子生物学检测。结果:与排斥组相比,HF治疗组移植心存活时间延长,免疫排斥反应减轻,血清中白细胞介素-17(IL-17)呈低水平,供心心肌组织中相关细胞因子白细胞介素-6(IL-6)、白细胞介素-8(IL-8)及肿瘤坏死因子-α(TNF-α)呈低表达,具有统计学差异。结论:常山酮可以有效抑制大鼠心脏移植模型体内由于急性排斥反应引起的多种促炎性细胞因子的异常升高,具有抗急性移植排斥反应的潜能,其机制可能与抑制了Th17分泌IL-17减少相关。