大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I cDNA片段在肝癌及非肝细胞中表达体系的构建

观察０．５８７和０．７１２ｋｂＣＰＳＩｃＤＮＡ片段分别与ｐＳＶ＿２载体的重组质粒ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０５）和ｐＳＶ＿２－ＣＰＳ＿（５０７）在人肝癌和非肝细胞中的表达情况。结果证实，两种重组的表达质粒转染的７４０２人肝癌细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞均能有效地表达ＣＰＳＩ，ＣＰＳＩ基因的非翻译区顺序与其高度组织特异性无关。这些体系的建立为体外生产ＣＰＳＩ抗原和天然ＣＰＳＩ蛋白提供了细胞模型和实验依据，对深入了解ＣＰＳＩ的表达过程及其癌变和分化的关系具有重要的意义。     

氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ上游顺序功能和特性和CAT检测

首次构建了一系列含有不同长度氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ（ＣＰＳ１）上游ＤＮＡ顺序的ＰＫＣＰＳｘ－ＣＡＴ表达质粒，并通过ＣＡＴ检测观察了ＣＰＳⅠ调控顺序的功能及特性。结果表明，ＣＰＳⅠ上海顺序具有高度组织特异性基因表达调控作用；－１４２－－３８ｂｐ上游顺序与特异调腔有密切关系，是维持ＣＰＳⅠ转录必不可少的顺序；－１７００－１６１ｂｐ顺序中含有增强ＣＰＳⅠ启动子转录作用的顺序。地塞米松和促分化剂硫杂脯氨酸对肝     

氨甲酰磷酸合成酶缺乏症Ⅰ型1例报告

<正>尿素是通过五种酶和尿素循环的作用形成的。这些酶缺乏症的患者多发生在新生儿期,典型表现为急性高氨血症。氨甲酰磷酸合成酶缺乏症缺乏症(CPS)携带者的基因特征是一种遗传代谢性疾病,CPS的致病原因是氨甲酰磷酸合成酶缺乏,使尿素循环阻断,血氨增高,对脑产生毒性。笔者总结氨甲酰磷酸合成酶缺乏症Ⅰ型1例的经验和体会报告如下。     

新生儿筛查发现的氨甲酰磷酸合成酶1缺乏症患儿长期随访研究

目的:研究浙江省新生儿筛查发现的氨甲酰磷酸合成酶1(CPS1)缺乏症患儿的基因型和表型特点及长期预后。方法:回顾性分析2013年9月至2023年8月浙江省新生儿疾病筛查中心采用干血斑串联质谱法筛查并联合基因检测诊断的CPS1缺乏症患者的所有筛查及临床随访资料。结果:共筛查新生儿4 056 755名，联合表型及基因检测诊断CPS1缺乏症6例；基因检测结果发现CPS1 10种变异，包括2种已知致病性变异（c.2359C>T、c.1549+1G>T）及8种未报道变异（c.3405-1G>T、c.2372C>T、c.1436C>T、c.2228T>C、c.2441G>A、c.3031G>A、c.3075T>C、c.390-403del）。患儿初筛血瓜氨酸值均有下降（2.72～6.21μmol/L），伴有血氨不同程度升高；诊断后给予限制天然蛋白摄入（特殊奶粉）、精氨酸及支持治疗，分别随访至9个月～10岁，有高氨血症发作3例，注意力缺陷多动、一过性口角抽动、肌张力增高各1例；除1例死亡，5例存活患儿的年龄与发育进程问卷及格里菲斯发育评估量表评分...     

大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶I基因在非肝细胞中的表达

氨甲酰磷酸合成酶Ｉ（ＣＰＳＩ）ｃＤＮＡ全序列基因片段与ｐＳＶ２载体的重组及重组质粒ｐＳＶ２－ＣＰＳｃｆ在７４０２人肝癌细胞、ＣＨＯ细胞和ＮＩＨ／３Ｔ３细胞中的表达结果表明，ｐＳＶ２－ＣＰＳｃｆ转染的以上３株细胞均可稳定、高效地表达ＣＰＳＩ。通过核Ｒｕｎ－ｏｆｆ转录活性的检测和Ｎｏｒｔｈｅｒｎ杂交证实，表达的ＣＰＳＩ转录产物结构完整。提示ＣＰＳＩ肝组织特异表达主要与转录改变有关。     

大鼠肝氨甲酰磷酸合成酶T基因在非肝细胞中的表达

氨甲酰磷酸合成酶I(CPSI)cDNA全序列基因片段与pSV_2载体的重组及重组质粒pSV_2-CPScf在7402人肝癌细胞、CHO细胞和NIH/3T3细胞中的表达结果表明,pSV_2-CPScf转染的以上3株细胞均可稳定、高效地表达CPSI。通过核Run-off转录活性的检测和Northern杂交证实,表达的CPSI转录产物结构完整。提示CPSI肝组织特异表达主要与转录改变有关。     

大鼠肝癌组织中CD3合成酶升高的特异性研究

作者改进了鞘糖脂糖基转移酶的检测方法，用ＳｅｐｈａｄｅｘＧ－５０Ｆｉｎｅ成功地分离了酶反应的同位素标记产物与底物。从而缩短了酶活性的测定时间，简经了操作步骤，并减少了同位素的污染机会，在此基础上系统检测了二乙基亚硝胺诱发肝癌大鼠及正常大鼠各脏器（肝、脾、肾、心、脑、肺、胃）ＧＤ３合成酶（ＣＭＰ－ＮｅｎＡｃ：ＧＭ３唾液酸转移酶；ＳＴ２）及目前报道的其他４种鞘糖脂唾液酸转移酶的活性，企图从中选择一种Ｓ     

癌变原理研究Ⅷ.大鼠肝鸟氨酸氨甲酰转移酶的提纯及致癌过程中酶的免疫化学滴定

大鼠肝线粒体OCT提纯至均一纯。免疫化学证明OCT活性可被抗OCT血清完全中和。DENA诱发大鼠肝癌及发育过程中OCT活性的变化与酶蛋白量的变化是相关的。未见免疫化学性质的差异。     

氨甲酰磷酸合成酶IcDNA的克隆及大鼠肝癌癌变过程中CPS1 mRNA量的变化(简报)

以前工作表明,在化学致癌过程中与肝细胞分化有关的组织特异酶,氨甲酰磷酸合成酶I(CSP1)活性下降,同时与细胞增殖有关的天门冬氨酸氨甲酰转移酶活性升高,二者相对活性的变化与肝细胞恶性变相关。并证明癌变过程中CPS1活性的降低与酶蛋白生物合成速度及聚核糖体可翻译的CPS1 mRNA含量的降低有关。本文从纯化的CPS1 mRNA经过逆转录酶的作用合成CPS1 cDNA,通过与同聚物脱氧胞核苷酸接尾,再与同聚物脱氧鸟核苷酸接尾的PBR322 DNA重组,在受体细菌E.Coli HB 101转化,经过克隆筛选及杂交选择翻译法选出含CPS1 cDNA克隆,纯化的含CPS1 cDNA质粒经Pst I切割后,电泳得到     

肝硬变及肝癌癌旁肝组织中小多角肝细胞性质的免疫…

应用免疫组织化学的方法对６０例ＨＣＣ，癌旁肝组织和４７例肝硬变组织中ＨＢｓＡｇ和ＩＧＦ－Ⅱ表达进行实验观察，以探讨小多角肝细胞（ＳＰＬＣ）的性质。结果显示，在癌旁肝和肝硬变的ＳＰＬＣ中ＨＢｘＡｇ和ＩＧＦ－Ⅱ的阳性表达率分别为６９．１４％和６６．６７％，其中ＨＢｘＡｇ阳性的ＳＰＬＣ中ＩＧＦ－Ⅱ阳性率为８２．１４％，而ＨＢｘＡｇ阴性的ＳＰＬＣ中ＩＧＦ－Ⅱ阳性率为３２．００％，ＩＧＦ－Ⅱ的ＨＢｘＡｇ了性     

大鼠肝抑素纯化及其对再生肝细胞和肝癌细胞增殖的影响

制备大鼠肝抑素纯品，研究它对再生肝细胞和肝癌细胞体外增殖的影响。用ＤＥＡＥ－Ｃｅｌｌｕｏｓｅ离子交换层析法提取ＨＣ纯品，用液法检测ＨＣ样品的生物活性，结果：提取的ＨＣ纯品的ＳＤＳ电泳纯度达８９．５％，Ｍｒ１３．５×１０＾３；该ＨＣ纯品对大鼠再生肝细胞和人肝癌细胞体外增殖有明显抑制作用。     

癌变原理研究Ⅵ.大鼠肝及肝癌中氨甲酰磷酸合成酶Ⅰ的免疫化学研究

在研究大鼠肝癌变过程中氨甲酰磷酸合成酶I(CPS_1)活性降低机制同时,作者自大鼠肝线粒体中,经十六烷基三甲基溴化铵处理,硫酸铵分步沉淀及QAE-Sephadex A-50柱层析,分离提纯了CPS_1。本法能将CPS_1从尿素循环中另一线粒体酶鸟氨酸氨甲酰转移酶(OCT)中全部析出。纯化的 CPS_1制剂在聚丙烯酰胺凝胶电泳中呈均一状。由纯化的CPS_1制备的单价兔抗血清可以完全抑制正常大鼠肝及二乙基亚硝胺(DENA)诱发肝癌中的CPS_1     

肝细胞癌和癌旁肝组织中c—myc,N—ras癌基因的表达

应用生物素标记的ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓｃＤＮＡ探讨对２１例肝细胞癌石蜡切片进行原位杂交研究，结果显示，在２３１例肝癌组织中９例呈ｃ－ｍｙｃ阳性（４２．９％），４例为Ｎ－ｒａｓ阳性（１９％），而癌旁肝组织中仅有４例呈ｃ－ｍｙｃ弱阳性，１例呈Ｎ－ｒａｓ弱阳性，Ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ多分布于肝癌细胞浆中，显微分光光度计检测结果显示，肝癌细胞中ｃ－ｍｙｃ，Ｎ－ｒａｓ，ｍＲＮＡ阳性信号明显高于癌六     

肝细胞生长因子及其受体基因在人肝癌和癌旁肝组织中的表达

目的：了解肝细胞生长因子（ＨＧＦ）及其受体基因在人肝癌和癌旁肝组织中的表达的变化规律，以及这种变化与肿瘤生物学行为的关系。方法：采用地高辛标记的ＨＧＦ及其受体ＤＮＡ探针，检测２６例人原发性肝癌及其癌旁肝组织中ＨＧＦ及其受体基因的表达。结果：ＨＧＦ在人肝部和癌旁肝组织中虽都有表达，但阳性率不及其受体基因表达，ＨＧＦ受体在肝癌和癌旁肝组织中均呈过度表达，且肝癌组织中杂交信号明显高于癌旁肝组织，有肝内外     

大鼠肝癌诱发过程中肝组织细胞间粘附分子—1的异常表达

研究大鼠肝癌诱发过程中细胞粘附分子－１的不同表达。方法，采用二乙基亚硝胺诱发大鼠肝癌模型，分别检测非特异性药物反应，非癌增生性改变和肝癌发生３个阶段６个时相的肝组织中ＩＣＡＭ－１的表达。结果 在诱癌的前２个阶段ＩＣＡＭ－１的表达逐渐增强，到２０周左右ＩＣＡＭ－１的表达到高峰，其后表达减弱。     

肝复健冲剂对大鼠实验性肝癌细胞周期相关因子表达的影响

目的　检测中药肝复健冲剂对 DEN诱导大鼠肝癌过程中细胞周期相关因子的影响 .方法　建立 DEN诱肝癌模型的同时预防性应用肝复健冲剂 ,采用免疫组化染色方法及计算机图像分析技术检测肝复健冲剂对 DEN诱癌不同时期大鼠肝细胞 CDK4,cyclin D1及 p2 7阳性表达的影响 .结果　 DEN诱癌过程中 CDK4,cyclin D1呈逐渐增加趋势 ,p2 7变化不明显 ,三者相关性无显著意义 .肝复健冲剂可明显降低DEN诱癌不同时段 CDK4的阳性表达 [(86± 3)～ (10 1± 6 ) ,(4wk) ;(6 7± 3)～ (92± 5 ) ,(8wk) ;(94± 6 )～ (116± 7) ,(12 wk) ;(10 2± 4)～ (119± 2 ) ,(16 wk) ;(97± 4)～ (119±4) ,(2 0 wk) ],显著降低诱癌后期肝细胞 cyclin D1的阳性表达 (84± 2 )～ (116± 12 ) ,(P<0 .0 5 ) .对 p2 7表达变化影响无显著意义 .结论　肝复健冲剂对 DEN诱导大鼠肝癌的预防作用可能与其降低细胞周期正性调节因子 CDK4,cyclin D1等的表达有关     

人原发性肝癌及癌周肝组织中C-myc基因的表达

①目的探讨癌周肝组织与肝癌组织发生之间的关系。②方法应用免疫组织化学方法对６０例原发性肝癌及其癌周组织中Ｃ－ｍｙｃ基因进行检测。③结果Ｃ－ｍｙｃ基因在肝癌和癌周增生结节及癌周肝硬变组织中的阳性率分别为３８．３％（２３／６０），４０．５％（１５／３７）和２６．７％（８／３０）。经统计学处理，肝癌与增生结节、肝硬变组织间差异均无显著性（χ２＝０．０５，１．２１，Ｐ均＞０．０５），增生结节与肝硬变组织间差异亦无显著性（χ２＝１．４１，Ｐ＞０．０５）。④结论Ｃ－ｍｙｃ癌基因过度表达是肝癌癌变过程中的重要因素；Ｃ－ｍｙｃ癌基因的过度表达可能与癌周增生结节的恶性转化有较密切的关系。癌周增生结节属癌前期病变，与肝癌的发生有关