铅对大鼠脑区POU蛋白Brn-3a的mRNA转录水平的影响

目的探讨铅对大鼠中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a基因mRNA转录水平的影响。方法雌性大鼠经围产期饮水染铅(对照组蒸馏水、低铅组0.5g/L、中铅组1.0g/L、高铅组2.0g/L)后,对其21日龄仔鼠不同脑区的Brn-3a mRNA基因转录水平进行了观察,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和组织原位杂交半定量检测Brn-3a的mRNA水平。结果RT-PCR凝胶成像系统结果显示,各染铅剂量组脑组织海马区扩增产物的电泳条带密度与对照组相比差异有显著性(P<0.05),皮层及小脑部位与对照组相比差异无显著性。原位杂交检测Brn-3a的mRNA图像分析结果显示,高铅组与对照组相比,在大脑皮层和海马部位可见平均灰度值升高(P<0.05),表明mRNA的表达量减弱,而小脑部位未见明显变化。在海马部位还可见阳性面积比显著下降(P<0.01)。结论结果表明,仔鼠大脑海马区Brn-3a基因转录水平有所下降,Brn-3a作为转录调节因子参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。     

雌鼠围产期染铅对仔鼠脑组织POU域蛋白Brn-3a基因转录及蛋白表达的影响

目的探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a表达的影响。方法雌性SD大鼠在围产期经饮水染铅(对照组饮用蒸馏水,低、中、高剂量组染铅剂量分别为0.5、1.0、2.0g/L醋酸铅),取21日龄仔鼠脑组织进行观察,采用逆转录酶-聚合酶链反应(RT-PCR)和组织原位杂交半定量检测Brn-3a的mRNA转录水平,采用免疫组织化学方法对Brn-3a蛋白进行检测以了解其表达水平。结果RT-PCR凝胶成像系统结果分析表明,各染铅剂量组脑组织海马区扩增产物的电泳条带密度与对照组比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。原位杂交检测Brn-3a的mRNA图像分析结果表明,高剂量组与对照组比较,在大脑皮层和海马部位可见平均灰度值升高(P<0.05),表明mRNA的表达量减弱,在海马部位还可见阳性面积比显著下降(P<0.01)。免疫组织化学图像分析表明,中、高剂量组脑组织皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度与对照组比较,其差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性的变化。染铅组Brn-3a表达低于对照组。结论大鼠脑组织基因转录水平和蛋白表达水平有所下降,提示铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式,Brn-3a作为转录调节因子可能参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。     

雌鼠围产期染铅对仔鼠脑组织Brn-3a基因转录及蛋白表达的影响

[目的]探讨雌鼠围产期染铅对仔鼠中枢神经系统神经细胞内Brn-3a基因转录及蛋白的影响。[方法]雌性大鼠在围产期经饮水染铅，分为低（0．5g/L）、中（1．0g/L）、高（2．0g/L）3个染铅组，对照组饮用蒸馏水。取21日龄仔鼠脑组织进行观察，采用组织原位杂交半定量方法检测Brn-3a基因mRNA转录水平，采用免疫组织化学方法检测Brn-3a蛋白表达水平。[结果]原位杂交检测Brn-3a基因mRNA图像分析结果表明，高铅组与对照组相比，大脑皮质和海马部位平均灰度值升高（P〈0．05），表明mRNA的表达量减弱，海马部位阳性面积比明显下降（P〈0．01）。免疫组织化学图像分析表明，与对照组相比，各染铅组大脑皮质、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa（％）]、平均灰度的差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），并呈剂量依赖性关系。染铅组Brn-3a蛋白表达低于对照组。[结论]大鼠脑组织基因转录水平和蛋白表达水平有所下降，提示在本实验染毒剂量下，铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式。     

铅对仔鼠脑Brn-3a蛋白及神经丝蛋白表达影响

目的 探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a及神经丝蛋白(NF)表达的影响。方法 雌性大鼠在围产期经饮水染醋酸铅(对照组蒸馏水、低0.5,中1.0,高2.0g/L染毒后,取其21d龄仔鼠脑组织,采用免疫组织化学方法对Brn-3a蛋白及神经丝蛋白进行检测,以了解其表达水平。结果 免疫组织化学图像分析表明,各染铅组脑组织皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度与对照组比较,差异有统计学意义(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖关系。染铅组Brn-3a蛋白表达低于对照组。与对照组比较,低铅组、中铅组NF蛋白阳性细胞无明显改变,而高铅组大脑皮层、海马和小脑NF蛋白阳性细胞普遍数量减少,着色变浅,神经丝蛋白表达减少。结论 在染铅后,大鼠脑组织Brn-3a和NF蛋白表达水平有所下降,提示铅干扰了Brn-3a蛋白的正常表达模式,Brn-3a作为转录调节因子进而影响下游NF蛋白的正常表达。     

铅暴露母体的仔鼠脑组织Brn-3a mRNA转录水平变化

目的研究铅暴露母体的仔鼠脑组织中POU域蛋白Brn-3a mRNA转录的情况。方法雌性大鼠自妊娠第15天开始经饮水染铅（2.0g／L，对照组饮蒸馏水）至仔鼠出生后21d断乳为止。随机取各组仔鼠断头，制作冰冻切片，采用原位杂交检测Brn-3a mRNA水平。结果与对照组相比，大脑皮层和海马部位可见Brn-3a mRNA平均灰度值升高（P〈0．05），表明mRNA的表达量减弱，而小脑部位未见明显变化（P〉0．05）。海马部位还可见阳性面积比下降有显著性（P〈0．01）。结论不同脑区，Brn-3a基因转录水平有不同程度的下降，提示铅可能干扰了Brn-3a的正常表达模式，并由此影响神经元的正常分化。     

母鼠围产期铅暴露对仔鼠不同脑区POU域蛋白表达的影响

目的探讨POU域蛋白在铅的神经毒性机制中的作用。方法受孕雌性大鼠从妊娠第15天开始经饮水染铅(对照饮蒸馏水,试验组醋酸铅低0.5g L、中1.0g L、高2.0g L),至仔鼠出生后21日断乳为止。分别取21日龄仔鼠大脑皮层、海马、小脑部位组织制作冰冻切片,采用免疫组织化学方法测定不同脑区的Oct2和Brn3a蛋白表达水平。结果显微图像分析表明,染铅组脑组织皮层、海马及小脑的Oct2和Brn3a蛋白表达的阳性面积比[Aa(%)]、平均灰度与对照组相比其差异有不同程度的显著性(P<0.05或P<0.01),并呈剂量依赖性的变化。染铅组Oct2表达高于对照组,而Brn3a表达低于对照组。结论POU域蛋白作为转录调节因子参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。     

雌性SD大鼠围产期铅染毒对仔鼠脑细胞Brn-3a表达及凋亡的影响

目的探讨铅对中枢神经系统神经细胞内转录因子Brn-3a表达的影响及诱导细胞凋亡的作用.方法20只受孕SD大鼠随机分为4组,经围产期饮水染铅(0、0.5、1.0、2.0g/L)后,对其21日龄仔鼠不同脑区的Brn-3a蛋白表达水平进行观察,采用流式细胞仪测定细胞凋亡率及应用间接免疫荧光反应测定Bcl-2蛋白的表达情况.结果染铅组大鼠大脑皮层、海马及小脑的Brn-3a蛋白表达的阳性面积比、平均灰度与对照组比较,其差异均有统计学意义(P＜0.05或P＜0.01),并呈剂量依赖性的变化,Brn-3a表达低于对照组;染铅组大鼠海马组织细胞凋亡率高于对照组(P＜0.01);染铅组大脑皮层、海马、小脑部位Bcl-2蛋白表达下降(P＜0.05或P＜0.01).结论铅对发育期神经组织的损害可能与其诱导的神经细胞凋亡相关联,铅致Brn-3a蛋白表达下降可能是铅致神经细胞凋亡的途径之一.     

铅对海马神经细胞Brn-3a表达的影响与致凋亡作用

目的　探讨体外条件下铅对神经细胞内转录因子Brn 3a的表达和致凋亡作用。方法　采用海马神经细胞体外培养建立细胞模型 ,醋酸铅的染毒浓度分别为 0 1、1、10、10 0、10 0 0 μmol L ,对照组给予等量培养液。染毒后 2 4h及 4 8h时MTT法测定各组细胞的存活率 ;免疫组织化学法测定Brn 3a的表达以及TUNEL法检测神经细胞凋亡。结果　引起海马神经细胞存活率明显下降的醋酸铅的最低浓度是 10 μmol L ,醋酸铅浓度越高 ,细胞存活率越低。1μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性细胞积分光密度显著下降 (P <0 0 5 ) ,10 μmol L醋酸铅可引起Brn 3a阳性面积比的显著下降 (P <0 0 1)。 1μmol L是醋酸铅引起培养海马神经细胞凋亡的最低浓度 ,各组细胞凋亡程度呈现明显的浓度依赖效应。结论　铅对发育期海马组织的损害至少部分是与铅所致神经细胞凋亡相关联的 ,并且铅导致培养海马神经细胞Brn 3a的表达下降很可能是铅诱导神经细胞凋亡的原因之一     

妊娠期铅暴露对新生仔鼠脑组织MDA、SOD的影响及金属硫蛋白的诱导

目的　探讨妊娠期铅暴露对新生仔鼠脑组织丙二醛 (MDA)、超氧化物歧化酶 (SOD)的影响及对金属硫蛋白 (MT)的诱导。方法　采用灌胃方式于C57小鼠孕第 0d至妊娠结束进行醋酸铅染毒 ,仔鼠出生后第 1d处死 ,取脑组织测定MDA含量及SOD活性 ,同时测定脑组织中MT的含量。结果　妊娠期铅暴露使新生仔鼠脑组织MDA及MT含量升高 ,SOD活性降低 ,均呈明显的剂量 效应关系 (P <0 0 1)。结论　铅的脑发育毒性与其引起脑组织脂质过氧化产物MDA增高及抗氧化酶SOD活性降低有关 ;金属铅可诱导发育中脑组织MT的产生 ,提示MT在体内铅的转运、代谢乃至解毒方面可能具有一定作用     

转录因子Brn-3a的研究及其与宫颈癌的关系

Brn-3a转录因子主要表达于周围神经系统的神经元亚群中,参与神经元的生存和分化相关基因的激活。对Brn-3a的调节包括启动子调节、磷酸化和尤文氏肉瘤蛋白的激活作用。而Brn-3a对神经细胞的调节包括抑制bHLH基因NeuroD4(Math3)和NeuroD1、影响p53的作用、激活α-Internexin启动子、控制感觉神经元中酪氨酸激酶受体A(TrkA)表达及与甾体激素受体共活化物(Src-1)交互作用等。人乳头瘤病毒(HPV)感染是导致宫颈癌的关键因素。已有研究表明Brn-3a与人乳头瘤病毒感染后引起的宫颈细胞癌变有关。但其具体机制及与不同型别人乳头瘤病毒感染的关系等尚有待进一步研究。     

妊娠大鼠低铅暴露对子代海马GFAP表达影响

目的观察母体孕期低水平铅暴露对子代大鼠海马组织胶质原纤维酸性蛋白（GFAP）和mRNA表达的影响，探讨铅影响学习记忆的分子机制。方法孕鼠随机分为4组，自怀孕1d起分别给予蒸馏水、125，250，500mg／L醋酸铅饮水，直到仔鼠出生。分别在仔鼠出生后1，21，60d，采用免疫组化和原位杂交方法观察海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达的变化。结果各染铅组仔鼠1，21d时海马CA1区GFAP蛋白和mRNA阳性细胞数显著高于对照组（P〈0．05），而60d时未见明显差异。结论妊娠期母体低水平铅暴露可以使仔鼠海马CA1区GFAP蛋白和mRNA表达增加，这可能是铅影响学习记忆的分子机制之一。     

铅对大鼠不同脑区IEG表达的影响

为了研究即刻早期基因（ＩＥＧ）在铅的神经毒性机制中的作用,本实验应用ＦＯＳ和ＪＵＮ蛋白免疫组织化学方法对腹腔注射染铅１３ｍｇ／ｋｇ及１３０ｍｇ／ｋｇ的大鼠不同脑区ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达水平进行了观察。图像分析及统计检验结果表明,急性染铅２小时后,大鼠脑组织皮层、海马ＣＡ３区及小脑的ｃ－ｆｏｓ、ｃ－ｊｕｎ表达的阳性面积比［Ａａ（％）］、平均灰度或阳性细胞个数等参数与对照组相比有显著性差异（Ｐ＜０．０５）,即染铅组ＩＥＧ表达高于对照组。这一结果提示第三信使ＩＥＧ作为转录调控因子可能参与了铅对学习记忆损害的神经毒性过程。这对深入阐明铅神经毒性的分子机制提供了一定的实验依据。