激光共聚焦显微镜观察免疫荧光双重标记的前列腺癌内基质金属蛋白酶及其作用底物的表达

目的：探讨应用激光共聚焦显微镜观察免疫荧光双重标记的前列腺癌标本的可行性及优点。方法：应用激光扫描共聚焦显微镜同时检测前列腺癌中基质金属蛋白酶(MMPs)和其作用底物的表达情况。结果:在激光扫描共聚焦显微镜下,可以清晰地观察MMP-7和层粘连蛋白（LN）可共同表达于前列腺癌细胞及基质中的基底膜、血管平滑肌和神经纤维;MMP-9和Ⅳ型胶原的主要表达于细胞外基质中的基底膜。结论:结合应用激光扫描共聚焦显微镜和免疫荧光双重标记技术能对蛋白进行精确的定位研究。     

两种方法介导外源基因稳定转染大鼠肝癌细胞株的有效性及其对细胞生长影响的比较

目的探讨磷酸钙共沉淀法与阳离子脂质体试剂形成复合物法两种基因转染方法构建大鼠肝癌细胞克隆株的有效性及对生长影响的比较。方法将携带增强型绿色荧光蛋白的真核表达载体pEGFP-N1分别用脂质体形成复合物法、磷酸钙共沉淀法导入大鼠肝癌CBRH-7919细胞,G418筛选基因稳定转染阳性单细胞克隆株。RT-PCR法检测EGFP基因在细胞中的表达。结果两种方法转染CBRH-7919细胞24h后,倒置相差荧光显微镜下观察均见绿色荧光。G418加压筛选14d后均形成阳性克隆,倒置相差荧光显微镜下可见绿色荧光,脂质体法的细胞克隆荧光强度强于磷酸钙。阳性克隆株经RT-PCR法检测,750bp于450bp处均有特异性条带。结论两种细胞转染方法均可使增强型绿色荧光蛋白基因稳定转染CBRH-7919,为今后探讨外源目的基因对靶细胞生长特性的影响奠定前期实验基础。     

角质细胞生长因子对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响

目的 研究角质细胞生长因子(keratinocyte growth factor, KGF)对大鼠肝癌细胞CBRH-7919增殖的影响.方法 MTT法检测不同浓度的重组人角质细胞生长因子(K102)对CBRH-7919细胞增殖的影响;免疫细胞化学技术检测角质细胞生长因子受体(keratinocyte growth factor receptor, KGFR)在CBRH-7919细胞中的表达.结果 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中均有表达,MTT实验显示K102对CBRH-7919细胞增殖作用与对照组相比无统计学差异(P＞0.05).结论 KGFR在CBRH-7919细胞的胞膜和胞质中存在表达,但K102对肝癌细胞CBRH-7919的增殖无明显作用.     

内质网应激机制在虾青素作用下的CBRH-7919细胞中的调控

目的 通过检测虾青素(Astaxanthin)对大鼠肝癌CBRH-7919细胞内质网应激机制的影响,从海洋活性成分中筛选抗肝癌的药物.方法 CBRH-7919细胞分为空白对照组、70 μmol/ml虾青素作用12 h组、24 h组,光镜下观察细胞形态变化,透射电子显微镜下观察细胞内质网变化,倒置荧光显微镜下观测Fura-2 AM标记的Ca2+荧光强度变化,流式细胞仪检测RH-123标记的线粒体跨膜电位变化.结果 虾青素作用后,细胞变形、贴壁松弛,内质网脱颗粒,线粒体膜、核膜等膜结构破碎,Ca2+浓度升高,线粒体跨膜电位降低.结论 虾青素能够抑制CBRH-7919细胞的生长,这可能是由于虾青素引起细胞内质网应激机制,长期过强的应激启动了细胞死亡通路,导致了细胞死亡.     

三氯化镧对CBRH-7919细胞Cyclin D_1基因表达的影响

目的:研究三氯化镧对大鼠肝癌细胞CyclinD1基因表达的影响,探讨三氯化镧抑制肝癌细胞生长的机制。方法:以体外培养大鼠肝癌细胞株CBRH-7919为研究对象,给予0.01、0.1、1.0mmol/LLaCl3,培养3、5、7d后,运用流式细胞术检测CBRH-7919的细胞周期时相变化。采用半定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)、免疫细胞化学技术检测CyclinD1的基因表达。结果:0.1、1.0mmol/LLaCl3组培养3、5、7d后,G0/G1期细胞百分数均有显著性增加;CyclinD1的转录和蛋白表达均显著减弱。结论:LaCl3可通过下调CyclinD1的转录和蛋白表达,使肿瘤细胞从G1期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞的生长。     

IQGAP1在调节足细胞细胞骨架重组中的作用

目的:研究支架蛋白IQGAP1在足细胞骨架重组中的作用。方法:用嘌呤霉素(PAN)刺激小鼠足细胞,实时定量PCR检测IQGAP1mRNA的表达,免疫印迹法检测足细胞IQGAP1蛋白的表达,激光共聚焦显微镜观察足细胞骨架F-actin分布,F-actin肌动蛋白评分系统(CFS)分析骨架重组;IQGAP1siRNA和IQGAP1质粒转染足细胞,分别观察下调和上调足细胞IQGAP1表达对嘌呤霉素诱导足细胞细胞骨架重组的改变。结果:嘌呤霉素刺激足细胞后IQGAP1mRNA和蛋白表达下调(P<0.05),足细胞F-actin分布发生明显重组;转染IQGAP1siRNA,嘌呤霉素刺激足细胞F-actin重组进一步加重;转染IQGAP1质粒,嘌呤霉素刺激足细胞F-actin重组减轻。结论:IQGAP1可能参与嘌呤霉素诱导的足细胞细胞骨架重组。     

六味地黄丸调控肝癌CBRH7919细胞Cx43表达的体外研究

【目的】探讨六味地黄丸对大鼠肝癌CBRH7919细胞缝隙连接蛋白(Cx)43表达的影响。【方法】应用血清药理学方法制备六味地黄丸含药血清,分别采用蛋白免疫印迹(Western blot)法、异硫氰酸荧光素(FITC)标记间接免疫荧光染色—激光共聚焦显微镜技术、流式细胞术检测不同剂量(体积分数0%、2.5%、5%、10%)六味地黄丸含药血清组CBRH7919细胞Cx43蛋白的表达,采用实时定量逆转录—聚合酶链反应(RT-q PCR)检测各组肝癌细胞Cx43 m RNA的表达。【结果】与对照组(0%六味地黄丸含药血清)比较,体积分数为2.5%、5%、10%的六味地黄丸含药血清均能明显提高肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及m RNA表达水平。【结论】六味地黄丸可能是通过促进肝癌CBRH7919细胞Cx43蛋白及m RNA的表达,改变Cx43膜定位,改善细胞间缝隙连接通讯功能,从而发挥抑制肝癌的作用。     

肝细胞核因子4α抑制大鼠肝癌细胞增殖、侵袭能力和新生血管生成相关基因表达

目的 :研究肝细胞核因子4α(hepatocyte nuclear factor 4α,HNF4α)在体内、体外实验中与大鼠肝癌新生血管生成相关基因表达之间的相互关系。方法:将过表达HNF4α腺病毒转染CBRH-7919细胞,采用CCK-8法检测细胞增殖效应,Transwell法检测细胞侵袭能力,RT-PCR和Western blot检测血管生成素2(angiopoietin-2,Ang-2)、血管内皮生长因子(vascular endothelial grouth factor,VEGF)的表达情况。体内试验建立肝大部切除模型(70%),分别在残肝上注入CBRH-7919细胞(空白组)或转染空载体腺病毒CBRH-7919细胞(阴性对照组)或转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞(实验组)。4周后处死大鼠,通过免疫组化来观察肝标本Ang-2、VEGF的表达情况。结果:转染过表达HNF4α腺病毒的CBRH-7919细胞增殖能力和侵袭能力较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05);实验组Ang-2、VEGF在基因、蛋白水平表达较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。体内实验大鼠肝脏组织免疫组织化学切片显示实验组Ang-2、VEGF蛋白表达水平较空白、阴性对照组均明显抑制(P<0.05)。结论 :HNF4a可以抑制大鼠肝癌7919的增殖、侵袭能力,并且抑制肝癌新生血管生成相关基因Ang-2、VEGF的表达。     

IQGAP1在调节足细胞细胞骨架重组中的作用

目的：探讨IQ 结 构 域 GTP 酶 活 化 蛋 白 1（IQ domain GTPase-activating protein 1, IQGAP1）对足细胞细胞骨架重组的调节作用。方法：嘌呤霉素（PAN）刺激小鼠足细胞后,运用实时定量PCR和Western blot印迹法分别检测细胞内IQGAP1 mRNA和蛋白表达水平,激光共聚焦显微镜观察足细胞骨架F-actin的分布,F-actin肌动蛋白评分系统（CFS）对骨架重组进行分析,并进一步观察上调和下调足细胞IQGAP1表达对PAN诱导的足细胞骨架重组的影响。结果：①与对照组相比,PAN刺激组足细胞内IQGAP1 mRNA和蛋白表达明显下降（P<0.05）,足细胞F-actin排列紊乱,CFS明显升高;②IQGAP1 siRNA进一步抑制IQGAP1表达后,PAN引起的上述足细胞F-actin重组更加明显（P<0.05）;③转染pCantag-myc-IQGAP1质粒促进IQGAP1表达后,PAN诱导的足细胞F-actin排列紊乱显著减轻,CFS明显下降（P<0.05）。结论：IQGAP1能抑制嘌呤霉素诱导的足细胞骨架重组,对维持足细胞正常骨架结构起着重要作用。     

柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE 2骨架的作用

目的：探讨柞蚕抗菌肽对癌细胞骨架的破坏作用。方法：用柞蚕抗菌肽对人鼻咽癌细胞CNE2处理12和18h，抗微管蛋白单克隆抗体检测细胞骨架结构的变化。结果：免疫组织化学染色见抗菌肽处理后细胞骨架分布不均匀，形态不规则，散乱，卷缩。结论：柞蚕抗菌肽具有较明显的破坏人鼻咽癌细胞株CNE2细胞骨架的作用。     

猫人参注射液体外抗肝癌实验研究

目的:观察单味猫人参注射液在体外对肝癌细胞的抑制作用.方法:噻唑蓝还原法(MTT法)检测猫人参注射液对体外培养的人肝癌细胞株SMMC-7721、小鼠肝癌细胞株H22、大鼠肝癌细胞株CBRH-7919的生长抑制作用.结果:体外实验结果表明:250mg/ml浓度猫人参注射液对H22、CBRH-7919、SMMC-7721肝癌细胞株均有抑制作用,抑制率分别63.68%、41.51%、32.92%,IC50分别为:107.70mg/ml、519.49mg/ml、667.56mg/ml;在24h,48h,72h三个时相,对小鼠H22肝癌细胞的生长抑制作用存在较明显的时效关系,在72h内16.88mg/ml～250mg/ml浓度内药物浓度与抑制作用有正相关趋势,其相关系数为0.91.结论:猫人参注射液对不同肝癌细胞株有一定的抑制作用.     

高温合并化疗对耐药性大鼠肝癌CBRH-7919细胞多药耐药基因的影响

【目的】观察热化疗对多药耐药性CBRH-7919细胞MDR基因的影响。【方法】采用单纯化疗,单纯热疗及热疗联合化疗,分别作用于CBRH-7919及CBRH-7919mdr 1细胞。观察不同处理组细胞的存活率、mdr1mRNA及P-gp的表达情况。【结果】热化疗组细胞的存活率明显低于单纯加热组及单纯化疗组,同时热化疗组细胞mdr1mRNA的表达明显减低或消失,P-gp表达明显减低。【结论】热化疗可以使多药耐药细胞mdr1mRNA表达降低或消失,使P-gp表达降低,从而逆转了肿瘤细胞的多药耐药性,提高了化疗的敏感性。     

三氯化镧对肝癌细胞P16和P21蛋白表达的影响

目的: 研究三氯化镧（LaCl₃）对大鼠肝癌细胞P16和P21蛋白表达的影响。法：实验分为4组,3个实验组：CBRH-7919细胞分别培养在含0.01、0.10和1.00 mmol•L-1 LaCl₃的DMEM培养液中;对照组：CBRH-7919培养在不含LaCl₃的DMEM培养液中。培养时间分别为1、3和5 d。观察细胞生长变化,运用流式细胞术检测细胞周期变化,采用免疫细胞化学方法检测与G₁期调控有关的P16和P21的变化情况。结果：与对照组比较,0.10和1.00 mmol•L-1LaCl₃组培养后3 和 5 d CBRH-7919细胞的生长抑制率均明显增加（P< 0.01）,G₀/G₁期细胞百分数显著增加（P< 0.01）,P16和P21阳性率明显增加（P< 0.01）。 结论：LaCl₃可通过上调P16和P21,使肿瘤细胞从G₁期进入S期受阻,从而抑制CBRH-7919细胞生长。     

Construction of Retroviral Vectors Containing Rat Fas Ligand Gene and FasL Expression Mediated by the Vectors in Hepatocellular Carcinoma Cells

Apoptosis is a form of cell death differentfrom necrosis.It is believed to be the essentialphysiologic process underlying controlled or pro-grammed celldeletion during phenomena such asembryonic development,cell differentiation,ortissue turnover[1] .Fas antigen or Apo- 1 ( recent-ly designated as CD95 ) is now known to belongto the TNF/ nerve growth factor receptor fami-ly.Itis a48- ku type transmembrane glycopro-tein.Fasreceptormakesan importantcontribu-tion to determining the lymphocyte l…     

大鼠正常肝细胞与肝癌细胞磷脂酰胆碱及脂肪酸组成的比较研究

目的 :探讨肝癌细胞的膜磷脂组分变化。方法 :采用高效薄板层析方法并配合无机磷的测定 ,比较了大鼠正常肝细胞与癌变细胞磷脂的组成及摩尔分数 ,用气相色谱法对其中含量最多的磷脂组分磷脂酰胆碱 (PC)的脂肪酸组成进行了测定。结果与结论 :肝癌细胞的PC含量明显减少 (P <0 .0 5 ) ,PC中长链及不饱和脂肪酸含量显著减少 (P <0 .0 5 )。     

虾青素缓解Tau蛋白过度磷酸化减轻视神经放射性损伤的分子生物学机制探讨

目的 分析视神经放射性损伤的分子生物学机制及虾青素对Tau蛋白过度磷酸化减轻效果.方法 选取64例离体培养鼠视网膜神经节细胞株RGC-5培养的神经元,30 Gyγ射线电离辐射,随机选择64个细胞培养小室,根据有无虾青素滴加分为虾青素标准品组及无虾青素标准品组各32个,观察两组照射后12 h、24 h、48 h、1周后Tau蛋白激酶、GSK-3β蛋白、PP-2A蛋白表达差异.结果 同组不同时间比较可见虾青素标准品组照射后随时间增长,Tau蛋白激酶、GSK-3β蛋白有所下降,PP-2A蛋白表达有所上升,这种变化在无虾青素标准品组表现不明显(P>0.05),同时间组间比较照射后不同时间虾青素标准品组Tau蛋白激酶、GSK-3β蛋白表达低于无虾青素标准品组,而PP-2A蛋白表达高于无虾青素标准品组,数据经统计学处理,差异均有统计学意义(P<0.05).结论 虾青素能够有效降低GSK-3β蛋白的表达及提高PP-2A蛋白表达,降低γ射线电离辐射致Tau蛋白过度磷酸化,从而可能对抑制Tau蛋白过度磷酸化而预防电离辐射对视神经的损伤.     

SD大鼠移植性CBRH-7919肝癌模型的建立

目的探讨SD大鼠种植性CBRH-7919肝癌模型的制作方法。方法先用CBRH-7919大鼠肝癌细胞瘤株接种裸鼠肩胛部皮下,再将生成的肿瘤组织移植接种于30只成年SD大鼠肝脏内,术前1周、术后连续2周内给每只大鼠肌注地塞米松2.5毫克/天。术后4周用超声检查仪和核磁共振（MRI）检查肿瘤生长情况,筛选建模成功的大鼠,并从中随机抽取5只大鼠,处死后取出肝脏内肿瘤进行病理学检查。结果 30只大鼠中有4只死亡。剩余的26只中有23只大鼠共长出28个肿瘤样结节,建模成功率为76.7%（23/30）。肿瘤大小为8.3±4.2mm。病理类型均为肝细胞性肝癌。结论直视下向免疫抑制SD大鼠肝脏内接种制作大鼠肝细胞癌模型,是一种操作方便、简单、成功率高的方法。适用于介入治疗等实验方面的研究。