外源性透明质酸酶对人乳腺癌细胞侵袭力及血管形成能力的影响

目的　探讨外源性透明质酸酶(hyaluronidase, Hyase)对人乳腺癌细胞ZR 75 30 侵袭潜力及血管形成能力的影响。方法　通过建立体外侵袭模型和应用双室联合培养技术,观察外源性Hyase对ZR 75 30细胞穿透Matrigel(人工基底膜)的能力以及诱导血管内皮细胞形成血管能力的影响。结果　实验组的穿膜细胞数为(70.625±11.64)个,明显高于对照组的(22.125±6.09)个(P<0.01); 实验组的血管管腔数目为(34.5±2.4)条,明显高于对照组的(8.5±1.5)条(P<0.01)。结论　外源性Hyase有促进人乳腺癌细胞侵袭及诱导血管形成的作用。     

人大隐静脉内皮细胞种植人工血管的实验研究

目的　探讨人自体静脉内皮细胞移植到人工血管上的可行性。方法　将人大隐静脉内皮细胞在体外扩增培养１３ ．０８ ±１ ．２４ 天, 将扩增培养的内皮细胞衬里用于纤维蛋白胶预衬的膨体聚四氟乙烯（ｅｘｐａｎｄｅｄ ｐｏｌｙｔｅｔｒａｆｌｕｏｒｅｔｈｙｌｅｎｅ ｐａｔｃｈ 〔ＧｏｒｅＴｅｘ〕Ｒ, ｅＰＴＦＥ） 人工血管继续培养９ 天。结果　所培养的细胞为二倍体细胞,纯度为９９ ％ 。原代及传代细胞培养上清液中６酮前列环素（６ｋｅｔｏＰＧＦ１α） 和Ｖｏｎ Ｗｉｌｌｅｂｒａｎｄ 因子（ｖ ＷＦ） 含量差异无显著性意义（ Ｐ＞ ０ ．０５） 。细胞种植后第９ 天人工血管腔面见一层均匀的基质,其表面有一层连续的内皮细胞单层,内皮细胞排列紧密,呈梭形,形态饱满。结论　人自体大隐静脉内皮细胞可有效地移植到人工血管,为人自体细胞内皮化人工血管应用于临床奠定了理论基础。     

动态旋转系统构建组织工程化血管模型中血管内皮细胞分泌功能监测

目的 比较静态和动态旋转系统中构建组织工程化血管模型中血管内皮细胞分泌功能。方法新型可降解材料聚羟基丁酸酯(PHB),用胶原包埋,形成多孔状PHB 胶原管形支架。分离传代、分化人脐静脉内皮细胞,接种于PHB管型支架内腔面,分别在静态、动态旋转系统中培养14 d后,测定血管内皮细胞分泌一氧化氮(NO)、前列环素(PGI2)水平。结果 在动态旋转系统构建组织工程化血管模型中血管内皮细胞分泌NO、PGI2水平显著高于静态系统,在11 d NO分别为(120.52±3.83)μmmol／L、(80.98±5.98)μmmol／L,PGI2分另9为(20.48±1.52)μg／L,(16.59±1.29)μg／L,与静态系统相比,差异有显著性(P<0.05)。结论胶原包埋PHB支架有利于细胞的黏附和生长,可作为组织工程化血管的支架材料。在动态旋转系统构建组织工程化血管模型中血管内皮细胞,具有与正常血管类似的"生理功能"。     

血管腔内技术与手术治疗锁骨下动脉闭塞症

目的探讨血管腔内技术与手术治疗锁骨下动脉闭塞症的临床效果及合适的治疗程序。方法1997年6月至2004年5月采取血管腔内技术与手术治疗锁骨下动脉闭塞症39例。26例患者采用血管腔内治疗,置入27枚支架,14例经股动脉途径,12例经肱动脉逆行支架置入,其中8例在彩色多普勒超声定位下穿刺肱动脉。13例未能行支架置入,行血管旁路转流术。9例伴有颈动脉或椎动脉严重狭窄者行支架置入。结果39例患者术后患侧与健侧血压差<10mmHg(1mmHg=0.133kPa),患侧/健侧血压指数由术前的平均0.62±0.11提高至0.98±0.04(t=4.738,P<0.01);腔内治疗患者与手术患者平均血管通畅时间分别为(57.6±3.7)和(60.2±7.2)个月。结论血管腔内治疗与手术治疗锁骨下动脉闭塞症疗效相当,由于血管腔内治疗的微创性和安全性,应优先选择血管腔内治疗。     

门静脉高压症病人肝内血管内皮细胞凋亡的研究

目的　研究门静脉高压症病人肝组织内血管及肝窦壁内皮细胞的凋亡及其对肝微循环的影响。方法　对 37例门静脉高压症病人、10例正常人肝组织 ,用TUNEL法检测血管内皮细胞及肝窦壁内皮细胞凋亡 ,免疫组化法检测Bax和Bcl 2基因的蛋白表达。结果　肝硬化门静脉高压症病人 ,门管区血管内膜破坏、断裂 ,内皮细胞脱落。管腔内血栓形成。血管壁和肝窦壁内皮细胞TUNEL 阳性细胞数为 (2 9 2 9± 4 15 ) % ,与对照组仅 (0 5± 0 2 ) % ,有显著性差异 (P <0 0 0 1) ;门管区血管内皮细胞和肝窦壁内皮细胞Bax和Bcl 2强阳性表达率分别为 (33 5 1± 5 6 9) %和 (2 4 6 4± 5 87) % ,对照组均为阴性 (P <0 0 0 1)。结论　肝硬化门静脉高压症病人门管区内皮细胞和肝窦壁内皮细胞凋亡和坏死明显增加 ,内皮细胞的凋亡和坏死激活凝血系统 ,促使血栓形成 ,从而破坏了肝脏微循环。     

人类骨肉瘤细胞血管形成因子的研究

目的　研究部分纯化骨肉瘤血管形成因子并探讨其生物学特性。方法　通过对培养中收集的大量条件培养基进行超滤、层析、透析等截留相对分子质量 8～ 10ku的蛋白质纯化 ,获取 19个层析柱。以人类脐静脉和猪主动脉内皮细胞增殖反应为实验对象 ,用作检验条件培养基和层析产物的生物学活性。结果　条件培养基能显著促进人类内皮细胞和猪主动脉内皮细胞的增殖分别为(336 .91± 49.12 ) /min和 (190 8.33± 2 2 8.38) /min ,层析中的 4～ 6柱 (A值分别为 0 .732± 0 .10 4、0 .80 8± 0 .113、0 .791± 0 .0 91) ,具有显著的促进内皮细胞增殖的生物学效应。结论　人类骨肉瘤细胞能够合成并分泌血管形成因子 ,其相对分子质量在 8～ 10ku之间。     

不同应力环境对组织工程血管形成的影响

目的探讨体内不同应力环境对组织工程血管形成的影响。方法清洁级犬10只,体重15~20kg;切取一侧隐动脉10cm,消化、离心收集内皮细胞和平滑肌细胞,与154g/L型胶原蛋白凝胶均匀混合,种植于猪小肠黏膜下层(small intestinal submucosa,SIS)组织膜,包绕直径3mm、管壁厚度0.2mm的聚乙烯管,制备血管组织工程支架30支。将血管组织工程支架分别植于犬皮下、股四头肌和股动脉管壁外,即皮下组、肌内组和动脉周围组(n=10)。术后4周,取出培养组织行大体和组织学观察,并行组织工程血管形成评分及抗静水压检测。结果三种不同应力环境下的培养组织,在管腔结构、细胞生长增殖和组织塑形方面有明显差异。皮下组管腔结构不完整,内皮及平滑肌种子细胞增殖弱,SIS支架材料分解慢,腔面无内皮细胞覆盖;肌内组有完整管状结构形成,种子细胞有一定程度生长增殖,腔面见稀疏内皮细胞覆盖,少许SIS支架材料未分解,管壁细胞和纤维结构排列无序;动脉周围组可见完整血管样结构形成,种子细胞生长增殖良好,管腔有完整内皮细胞覆盖,平滑肌细胞形态、分布良好。皮下组、肌内组和动脉周围组组织工程血管形成总评分分别为5.529±0.272、8.875±0.248和14.824±0.253分,组间差异均有统计学意义(P<0.05);抗静水压三组分别为67.0±5.8、104.0±7.6和247.0±3.5kPa,动脉周围组与皮下组和肌内组比较,差异均有统计学意义(P<0.01)。结论应力刺激对体内细胞增殖和组织工程血管形成有明显影响。     

血管内皮细胞培养与观察

目的 :通过血管内皮细胞 (VEC)培养 ,为实验研究提供材料和方法。　方法 :采用 Jaffe A方法 ,培养脐带静脉内皮细胞并传代 ,倒置显微镜下测定其生长率 ,采用 PAP法鉴定。　结果 :消化获得的 EC总数平均为 1～ 3× 10 5 个 ,贴壁率为 70 %。细胞初为圆形 ,伸展后为多角形或菱形 ,第 2天开始生长 ,3天～ 5天生长加快 ,6天～ 8天基本停止生长 ,并且受胶原酶、培养液、生长因子等多种因素影响。　结论 :培养 EC可做为相关基础和临床研究的细胞模型     

孤立性髂动脉瘤的腔内治疗

目的探讨利用血管腔内技术治疗孤立性髂动脉瘤的安全性、可行性、有效性和存在的问题。方法自1997年5月至2006年1月,对15例孤立性髂动脉瘤患者行血管腔内治疗。真性动脉瘤12例(80％),假性动脉瘤3例(20％);髂总动脉瘤9例(60％),髂内动脉瘤3例(20％),髂外动脉瘤3例(20％)。瘤径3．5-9．0 cm,平均(5．97±1．49)cm。髂内动脉瘤采用直接栓塞技术;髂总以及髂外动脉瘤采用支架型血管腔内修复技术或结合外科手术方法及栓塞技术进行治疗。术后观察瘤腔内血液动力学改变、髂内动脉以及下肢动脉供血的改变。结果术后仅1例保留双侧髂内动脉,其余仅保留单侧。术后2例发生内漏(13％)。无围手术期死亡,无移植物错放、移位、瘤体破裂、中转手术以及由于覆盖单侧髂内动脉而引起的肠道缺血、性功能改变等并发症发生,1例术后出现一侧臀肌酸痛症状。手术时间0．5-4．0 h,平均(1．9±1．1)h;出血量30-300 ml,平均(126．7±70．1) ml;恢复活动时间0．5-4 d,平均(2．1±1．1)d;住院时间3-12 d,平均(5．5±4．7)d。结论腔内技术治疗孤立性髂动脉瘤是一种安全、可行、有效的方法。髂内动脉的处理以及内漏防治仍是困难的问题。     

血管内皮生长因子抗体治疗骨肉瘤的实验研究

目的　探讨血管内皮生长因子 (VEGF)抗体对骨肉瘤OS 732细胞株血管形成及瘤细胞生长状态的影响 ,为从抗血管生成途径治疗骨肉瘤提供依据。　方法　应用鸡胚绒毛尿囊膜模型 ,通过解剖显微镜下血管计数、原位铺片、组织切片HE染色及PCNA免疫组化和原位末端标记技术检测VEGF抗体对肿瘤血管形成、肿瘤生长的抑制作用及其对细胞增殖和凋亡的影响。　结果　VEGF抗体组血管密度 [给予抗体第 8天时为 (30 6± 4 6 ) ]明显低于对照组 [给予抗体第 8天时为 (5 1 0±6 9) ],瘤细胞较对照组减少 ,肿瘤细胞凋亡指数 (16 98± 4 81)显著高于PBS对照组 (3 75± 0 73) ,增殖指数两组差异不明显 ,同时VEGF抗体组凋亡的微血管内皮细胞增多 ,增殖期微血管内皮细胞少见。　结论　VEGF抗体能够显著抑制骨肉瘤OS 732血管形成 ,抑制内皮细胞增殖 ,促进内皮细胞凋亡 ,可能是VEGF抗体发挥抗血管生成作用的途径之一 ,并通过抑制血管形成而促进肿瘤细胞凋亡 ,最终达到抑制瘤细胞生长的作用。     

血管内皮细胞与平滑肌细胞复合构建组织工程人工血管的实验研究

目的：构建既具有活性血管平滑肌细胞（VSMC）中膜层，又有血管内皮细胞（VEC）内皮化的复层结构组织工程血管支架材料。方法（1）将聚羟基乙俊（PGA）纤维无纺网，VSMC和胶原纤维相混合，设计构建VSMC活性的组织工程血支架材料。（2）采用酶消化法从兔主动脉中分离培养兔VEC并传代，纯化，接种于组织工程人工血管支架的内腔，体外培养，并行电镜观察。结果：构建的支架材料具有一定弹性和韧性，VEC在其内表达形成较完整内皮细胞层，且VSMC能够保持活性，生长状况良好。结论：经胶原包埋处理的PGA支架可作为组织工程化人工血管研究较理想支架材料，为组织工程方法构建具有分层结构的组织工程血管奠定实验基础     

体外组织工程血管支架内皮化的实验研究

目的：研究兔血管内皮细胞种植于组织工程血管支架内腔面的生长状况。方法：（1）将聚羟基乙酸（Plyglycolic acid,PGA)纤维无纺网和胶原纤维相混合，设计构建组织工程血管支架材料。（2）采用酶消化法从兔主动脉中分离培养兔血管内皮细胞并传代，纯化，接种于组织工程血管支架的内腔面，体外培养，并行电镜等观察。结果：该支架具有一定弹性和韧性，内皮细胞在其内表面形成较完整内皮细胞层，生长状况良好。结论：胶原包埋处理的PGA支架可以作为组织工程人工血管研究的较理想支架材料。为组织工程方法构筑具有分层结构的组织工程血管打下实验基础。     

组织工程血管模型体外构建的实验研究

目的：在体外环境下，探索构建分别含内皮细胞，平滑肌细胞及成纤维细胞的三层结构的组织工程化血管，三种细胞相互作用，相互支持，形成一个在形态和功能与正常血管近似的组织工程化血管。方法：通过用胶原分别包埋处理的三个管径大小不同，但能相互嵌套的聚羟基乙酸（PGA）管形支架，并种植人脐静脉内皮细胞，人血管平滑肌细胞，人成纤维细胞进行三维立体生长培养，观察细胞生长分化情况。采用酶消化法和组织块法分离培养人脐静脉内皮细胞，人血管平滑肌细胞，人成纤维细胞并传代，纯化，将聚羟基乙酸（PGA）无纺网用胶原溶液包埋，真空冷冻干燥，形成多孔状PGA＋胶原管型支架；接种3代－7代人脐静脉内皮细胞，人血管平滑肌细胞及人成纤维细胞与其内腔面，采用动脉旋转培养技术体外培养3周，行扫描电镜观察。结果：构建后的血管模型，层与层结构紧密，内皮细胞，平滑肌细胞及成纤维细胞分泌细胞外基质，相互进行物质交换，类似于生理条件。结论：该支架具有一定弹性和韧性，在培养液中，能较长时间保持形状。此方法的进一步应用组织工程方法构筑具有分层结构的人造血管打下基础。     

复合可降解基质膜片制备及血管内皮细胞在其吸附生长的实验研究

目的　制备几种复合可降解基质膜片 ,观察血管内皮细胞在其上的生长情况。方法　用胶原酶消化法分离牛主动脉血管内皮细胞 (VEC) ,另采用两步盐析法提取牛骨 型胶原。将交联胶原包埋处理聚羟基乙酸 (PGA)、聚乳酸 (PL A)及聚β羟基丁酸 (PHB)形成可降解基质材料膜片 ,并接种牛 VEC,采用 MTT法比较 VEC在几种可降解基质材料膜片的生长情况。结果　胶原、PGA/胶原、PL A/胶原膜质地均匀柔韧 ,固定成形 ,具有一定弹性和吸水性 ;MTT比色实验表明 VEC在胶原、PGA/胶原、PL A/胶原上均生长良好 ,优于 PHB/胶原组。尤以 PGA/胶原所形成的基质材料固定成形 ,弹性和韧性好 ,VEC在其上贴附生长良好。结论　通过生物材料与人工可降解材料有机结合 ,PGA/胶原物理性能互补 ,是组织工程再造血管较理想的基质材料之一。     

Morphologic and mechanical characteristics of engineered bovine arteries

OBJECTIVE: The ideal small-caliber arterial graft remains elusive despite several decades of intense research. A novel approach to the development of small-caliber arterial prostheses with a biomimetic system for in vitro vessel culture has recently been described. In this study we examined the effects of culture time and tissue culture scaffolding on engineered vessel morphology and function and found that these parameters greatly influence the function of engineered vessels. METHODS: This report describes the effects of culture time and scaffold type on vessel morphology, cellular differentiation, and vessel mechanical characteristics. Engineered vessels were cultured from bovine aortic smooth muscle cells (SMCs) and endothelial cells that were seeded onto biodegradable polymer scaffolds and cultured under physiologically pulsatile conditions. Engineered vessels were subjected to histologic, ultrastructural, immunocytochemical, and mechanical analyses. RESULTS: Vessel morphology and mechanical characteristics improved as time in culture increased to 8 weeks. SMCs in the engineered vessel wall were organized into a highly lamellar structure, with cells separated by alternating layers of collagen fibrils. Polymer scaffold remnants were present in vessels cultured for 8 weeks, and SMCs that were in proximity to polymer remnants exhibited a dedifferentiated phenotype. CONCLUSIONS: These findings aid in the systematic understanding of the effects of in vitro parameters on engineered vessels and will be useful for the translation of vessel culture techniques to human cells for the development of autologous human vascular grafts.     

组织工程人工血管支架的预构

目的：探讨具有血管平滑肌细胞（vascular smooth muscle cells,VSMCs）活性的组织工程人工血管支架的构建方法。方法：①将聚羟基乙酸（polyglycolic acid,PGA）纤维无纺网支架材料、血管平滑肌细胞和胶原纤维相混合，构建组织工程血管。②将VSMCs置入胶原凝胶中，观察VSMCs的生长状况。③观察VSMCs胶原悬液滴入该支架材料中的生长。结果：①VSMCs在胶原凝胶中的位置固定，分布于不同层次，约3－4h逐渐形成多个胞质突起。随时间推移，胞质突起继续伸展，部分细胞呈梭形、纺锤形。②VSMCs胶原悬液滴入胶原包埋处理的PGA支架中后，大部分细胞随胶原凝胶状态的形成，滞留于支架材料网孔中，细胞可沿PGA纤维表面生长。结论：胶原包埋处理的PGA纤维无纺网是良好的携带VSMCs的多孔生物降解材料。     

反应器内构建组织工程血管平滑肌层的实验研究

目的 探讨生物反应器内构建组织工程血管的可行性.方法 于6个月龄犬颈总动脉血管获取平滑肌细胞,经体外培养扩增后接种于聚羟基乙酸(PGA)上,形成细胞-材料复合物,并将其置于生物反应器内培养.实验组模拟成年哺乳动物循环系统的参数予以动态力学刺激培养(搏动频率:75次/分;扩张量＜5%);对照组为静态培养,其余与实验组相同,分别于3与6周后取材检测.结果 生物反应器内培养的血管大体观察具有良好的弹性,管腔圆,色泽光亮;HE染色显示平滑肌纤维成分排列较规则,有层次感;弹力纤维染色显示弹力纤维成分较多而密;免疫组织化学检测显示为棕黄色层状排列的平滑肌纤维.对照组弹性欠佳,管腔塌陷,色泽暗淡;平滑肌纤维与弹力纤维成分较少且排列紊乱,层次感差.结论 应用生物反应器可构建具有良好结构的血管样结构的平滑肌层组织.     

Canine endothelial progenitor cell-lined hybrid vascular graft with nonthrombogenic potential

OBJECTIVE: We sought to fabricate a compliant engineered vascular graft (inner diameter of approximately 4.5 mm and length of 6 cm) lined with endothelial progenitor cells derived from circulating peripheral canine blood and to verify its nonthrombogenicity potential in vivo. METHODS: Autologous circulating endothelial progenitor cells derived from the peripheral veins of 6 adult mongrel dogs were isolated by using a density gradient method. The cells were proliferated in vitro in EGM-2 culture medium, prelined on the luminal surface of in situ-formed collagen type I meshes as an extracellular matrix, and wrapped with a segmented polyurethane thin film with multiple micropores as a compliant scaffold. After canine carotid arteries were bilaterally implanted with these grafts for 1 and 3 months, microscopic observation, histologic staining, and immunochemical staining were performed to evaluate morphogenesis. RESULTS: After 33.3 +/- 10.5 days of culture in vitro, 4.2 +/- 1.2 x 10(6) endothelial progenitor cells were obtained. Eleven of the 12 engineered vascular grafts were patent. The grafts possessed smooth, glistening, and ivory-colored luminal surfaces at the predetermined observation period up to 3 months. The intimal layer was covered with confluent, cobblestone-like monolayered cells that were positively stained with factor VIIIB-related antigen. The thickness of the neoarterial walls was approximately 300 microm at 3 months after implantation. A few smooth muscle cells were observed in the medial tissue, and fibroblasts dominated the adventitial tissue. CONCLUSION: Circulating endothelial progenitor cells could be a substitute source of endothelial cells for endothelialization on small-diameter-vessel prostheses to ensure nonthrombogenicity.     

应用生物反应器构建组织工程化血管的实验研究

目的探讨利用生物反应器体外构建具有完整结构的组织工程化血管的可行性。方法从6月龄毕格犬颈总动脉获取平滑肌细胞,颈外静脉获取内皮细胞,经体外培养扩增。然后,先将平滑肌细胞接种于聚羟基乙酸(PGA)上,形成细胞—材料复合物,将该复合物置于生物反应器内培养。模拟成年哺乳动物循环系统的参数,予以动态力学刺激(搏动频率:75次/分;扩张量<5%)。8周后,在其上接种内皮细胞,对照组不接种内皮细胞,培养5d后取材检测。结果组织学染色显示,平滑肌纤维成分排列较规则,有层次感,内皮细胞完整;对照组未见内皮细胞层结构。结论利用生物反应器可在体外构建具有完整结构的组织工程化血管。     

自体组织工程化肌腱预制的初步研究

目的：应用组织工程技术研究组织工程化肌腱体内形成的可行性。方法：取成年家鸡的趾深屈肌腱，用酶消化法分离，培养肌腱细胞，将在体外扩增到一定浓度的肌腱细胞接种到聚羟基乙酸（PGA）上，形成细胞－材料复合物，体外培养5d后，将此复合物回植至自体右翼皮下，左侧以单纯PGA作为对照，培养后第3，4，6，8周取材，从大体，组织学等方面进行分析。结果；术后8周见组织工程化肌腱呈白色，有光泽，组织学见胶原组织平行排列，但仍可见未降解的PGA及少量炎性细胞，对照组则无任何组织形成，结论：自体肌腱细胞与生物材料复合后在免疫功能正常的自体动物体内能够再生出肌腱样组织，新生的肌腱样组织在大体，组织学等方面均与正常肌腱相似。