慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫功能

背景：研究认为间充质干细胞可能是骨髓造血微环境的免疫保护位点。由于慢性粒细胞白血病存在造血微环境异常和免疫异常,所以推测间充质干细胞可能在慢性粒细胞白血病的病理过程中扮演了一个重要角色。目的：观察慢性粒细胞白血病骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞是否存在免疫功能的异常。方法：分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用。结果与结论：慢性粒细胞白血病和正常志愿者骨髓来源的间充质干细胞形态和表型没有差异,慢性粒细胞白血病患者来源的间充质干细胞抑制T细胞增殖的作用减弱,抑制T细胞周期及活化的能力减弱,慢性粒细胞白血病患者抑制T细胞凋亡的作用增强。提示慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用慢性粒细胞白血病患者自体的间充质干细胞移植治疗可能不是一种很好的选择,对于骨髓增生异常综合征患者最好是选用异基因的间充质干细胞移植。     

体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景：课题组从胎儿骨髓间充质干细胞的培养体系中鉴定出一类贴壁细胞,已证实此类细胞在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的：检测骨髓间充质干细胞的生物学特性,为慢性粒细胞白血病的治疗提供相关的依据。方法：以慢性粒细胞白血病患者骨髓为研究对象,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测其BCR/ABL融合基因的表达、免疫学特性和生长曲线,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提示慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的骨髓间充质干细胞水平上,对慢性粒细胞白血病的疾病起源及干细胞移植治疗有重要的意义。     

慢性粒细胞白血病肿瘤干细胞的免疫功能

背景:研究认为间充质干细胞可能是骨髓造血微环境的免疫保护位点。由于慢性粒细胞白血病存在造血微环境异常和免疫异常,所以推测间充质干细胞可能在慢性粒细胞白血病的病理过程中扮演了一个重要角色。目的:观察慢性粒细胞白血病骨髓来源的肿瘤干细胞的免疫学特征,比较其与正常人来源的间充质干细胞是否存在免疫功能的异常。方法:分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们对T细胞周期、活化、抑制和增殖的作用。结果与结论:慢性粒细胞白血病和正常志愿者骨髓来源的间充质干细胞形态和表型没有差异,慢性粒细胞白血病患者来源的间充质干细胞抑制T细胞增殖的作用减弱,抑制T细胞周期及活化的能力减弱,慢性粒细胞白血病患者抑制T细胞凋亡的作用增强。提示慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞存在明显的免疫调节功能缺陷,如果使用慢性粒细胞白血病患者自体的间充质干细胞移植治疗可能不是一种很好的选择,对于骨髓增生异常综合征患者最好是选用异基因的间充质干细胞移植。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性及其造血调控

背景:由于慢性粒细胞白血病存在造血微环境异常和免疫异常,推测间充质干细胞可能在慢性粒细胞白血病的病理过程中扮演了一个重要角色.目的:观察慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞的生物学特征和对造血调控的影响,比较其与正常人骨髓来源的间充质干细胞的异常.方法:分离正常人和慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞,分别检测它们的形态、表型、生长曲线和对T细胞活化的能力;将它们分别与脐带血干细胞共培养,检测共培养体系中对集落形成的影响和相关分子表达的差异.结果与结论:慢性粒细胞白血病患者和正常志愿者骨髓来源的间充质干细胞的细胞形态、表型和干细胞的倍增时间均没有差异,慢性粒细胞白血病患者的骨髓间充质干细胞抑制T细胞活化的能力减弱;共培养体系中,悬浮细胞簇增加,说明造血干细胞与间充质干细胞之间的黏附性减弱,同时蛋白和RNA水平显示慢粒组中基质金属蛋白酶9升高,同时使ICAM-1的KitL从膜形式转变为可溶性形式.结果提示,慢性粒细胞白血病骨髓间充质干细胞是细胞分化发育的微环境,其基础的机制在于基质金属蛋白酶9对细胞外基质的降解和黏附分子的裂解,改变骨髓微环境对造血干细胞黏附,增殖和分化的支持作用,导致造血干细胞异常增殖和动员,降低了恶变细胞对免疫细胞的敏感性导致免疫逃逸.     

体外培养慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞的生物学特性

背景:课题组从胎儿骨髓间充质干细胞的培养体系中鉴定出一类贴壁细胞,已证实此类细胞在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化.目的:检测骨髓间充质干细胞的生物学特性,为慢性粒细胞白血病的治疗提供相关的依据.方法:以慢性粒细胞白血病患者骨髓为研究对象,体外培养并扩增原始间充质干细胞,检测其BCR/ABL融合基因的表达、免疫学特性和生长曲线,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况.结果与结论:慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达.提示慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的骨髓间充质干细胞水平上,对慢性粒细胞白血病的疾病起源及干细胞移植治疗有重要的意义.     

慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1^＋CD31^-CD34^-间充质干细胞中BCR／ABL融合基因的检测

背景：免疫表型为Flk1^＋CD31^-CD34^-的问充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的：观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCPdABL融合基冈的表达情况。方法：体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞剧期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论：慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,人部分细胞处于G0／G1期,并儿高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR／ABL融合基因的表达。提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管千细胞水平上。     

缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞的实验研究

目的：观察缺血性脑血管病患者骨髓间充质干细胞形态学特征。方法：将缺血性脑血管病患者自体骨髓中的阃充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM—MSCs）经密度梯度离心法分离、纯化和培养，观察原代和传代细胞的形态。结果：原代培养的BM—MSCs最佳贴壁时间为3d，生长性状不一，呈散在圆形细胞群、散在梭形细胞群、克隆圆形细胞群、花带状细胞群、漩涡状细胞群，而传代培养的细胞，增殖速度较快，性状一致，排列规则，呈饱满的梭行。结论：通过体外非诱导培养获得的自体BM—MSCs，有较强的增殖能力和多向分化潜能，为缺血性脑血管病的临床治疗提供了实验依据。     

脑损伤患者骨髓间充质干细胞形态学特征

目的：骨髓间充质干细胞(hone marrow mesenchvmal stem cells,BM-MSCs)具有自我复制能力，可以经过不可逆的终末分化过程产生子代细胞，神经元细胞，极有可能成为组织工程较为理想的种子细胞。观察脑损伤患者骨髓间充质干细胞形态学变化，以寻求另一种治疗方式。方法：实验于2003-09／11在河南省人民医院生物治疗研究中心完成。将脑损伤患者的BM-MSCs。自体骨髓经密度梯度离心分离、纯化和培养，观察原代和传代细胞的细胞形态。结果：原代培养的BM-MSCs最佳的贴壁时间为3d，生长性状不一，呈散在圆形细胞群、克隆圆形细胞群、散在梭形细胞群、花带状细胞群、旋涡状细胞群，而传代培养的细胞，增殖速度较快，性状一致，排列规则，呈饱满的梭行。结论：体外非诱导培养的BM-MSCs方法可能为临床治疗脑损伤患者提供种子细胞。     

慢性粒细胞白血病患者骨髓来源Flk1~+CD31~-CD34~-间充质干细胞中BCR/ABL融合基因的检测

背景:免疫表型为Flk1+CD31-CD34-的间充质干细胞体内外实验研究均证实在单细胞水平可以向造血及内皮细胞分化。目的:观察慢性粒细胞白血病患者骨髓BCR/ABL融合基因的表达情况。方法:体外培养扩增慢性粒细胞白血病患者骨髓来源原始间充质干细胞,测定其生长曲线,分析其细胞周期及免疫表型,使用RT-PCR和FISH的方法检测其BCR/ABL融合基因的表达情况。结果与结论:慢性粒细胞白血病患者骨髓来源的原始间充质干细胞呈成纤维样生长,大部分细胞处于G0/G1期,并且高表达Flk1,CD13,CD29,CD44,用RT-PCR和FISH的方法能够检测出BCR/ABL融合基因的表达。提出慢性粒细胞白血病的白血病基因转化可能发生在比造血干细胞更高的血液血管干细胞水平上。     

基质金属蛋白酶9在慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞中表达及其对造血干细胞黏附的影响

背景:骨髓微环境中持续存在的肿瘤干细胞改变了骨髓基质细胞及细胞外基质的特征,从而参与了造血干细胞恶性转化的过程.目的:探讨慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9的表达,及其对造血干细胞黏附的影响.设计、时间及地点:细胞学体外对照观察,于2007-09/2008-02在北京协和医学院基础学院完成.材料:骨髓标本来源于4例慢性粒细胞白血病患者和4例健康志愿者,由解放军第三○九医院血液科提供.脐血由北京脐带血造血干细胞库提供,293T细胞由南开大学孔德领教授馈赠.方法:分别采集健康志愿者和慢性粒细胞白血病患者的骨髓,Ficoll法体外分离培养获得骨髓间充质干细胞.将脐血分装,离心弃上清,吸取中河层,同法分离培养获得脐血单个核细胞.取处于对数生长期的骨髓间充质干细胞,按1×107L-1接种于96孔板,培养至近100%融合时再将脐血单个核细胞按1×105/孔接种于同一培养板中,孵育1 h后对收集未黏附细胞,计算黏附率.取第2代骨髓间充质干细胞,ELISA法检测细胞培养上清中可溶性形式细胞问黏附分子1的质量浓度.构建MPP-9-siRNA干扰载体,以脂质体法转染包装293T细胞,扩增病毒后进行骨髓间充质干细胞转染.主要观察指标:健康供者与慢性粒细胞白血病患者之间的5项指标比较,病毒转染前后慢性粒细胞白血病患者自身的3项指标比较.结果:与健康供者比较,慢性粒细胞白血病患者骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9 mRNA及蛋白表达水平明显升高,细胞间黏附分子1的蛋白表达无明显差异,培养上清中可溶性形式细胞间黏附分子1的质量浓度明显升高(P＜0.05),对脐血单个核细胞的黏附率明显降低(P＜0.05).与未转染的骨髓间充质干细胞比较,病毒转染后骨髓间充质干细胞基质金属蛋白酶9mRNA表达明显降低,细胞间黏附分子1的蛋白表达未受影响,对脐血单个核细胞的黏附率明显增加(P＜0.05).结论:慢性粒细胞自血病患者的骨髓间充质干细胞可能存在基质金属蛋白酶9裂解细胞间黏附分子1的作用机制,推测游离的可溶性形式细胞间黏附分子1可能阻断了LFA-1的结合位点,从而影响骨髓间充质干细胞对造血干细胞的黏附.     

用于造血干细胞移植的人骨髓间充质干细胞体外扩增研究

本研究旨在检查4种不同培养液体外培养人骨髓间充质干细胞（bone marrow mesenchymal stem cells，BM-MSCs）的效果，建立一种基于临床移植需要的分离、培养人BM-MSC的方法，为BM-MSC联合造血干细胞移植的临床应用提供实验基础。采用Ficoll Paque细胞分离液从16例新鲜成人骨髓穿刺液中分离BM—MSC，分别用含10％脐带血血清、胎牛血清、成人血清的DMEM／F12培养液和MesenCuh培养液培养，用流式细胞术检测细胞表面抗原，以成骨诱导体系及脂肪诱导体系分别诱导各组BM-MSC定向分化，通过细胞形态观察、免疫表型及免疫化学染色进行鉴定。结果表明：4种培养液都能从成人骨髓液中分离培养出BM—MSC，脐带血血清组和Mesen Cuh组培养的BM—MSC在增殖数量和速度上相似，但均优于FCS组和AB型血清组。脐带血血清组和Mesen Cuh组培养的BM-MSC表达CD29、CD73、CD105的阳性率比FCS组和AB型血清组高（P〈0．05），而CD31阳性率低于FCS组和AB型血清组（P〈0．05），脐带血血清组和MesenCuh组培养的BM—MSC诱导为成骨细胞和脂肪细胞阳性率高于FCS组和AB型血清组（P〈0．05）。结论：4种不同培养液能够从成人骨髓液中分离出BM—MSC，脐带血血清组和MesenCuh组培养的BM-MSC的纯度和体外诱导分化能力比FCS组和AB型血清组高，含有脐带血血清的培养体系具有临床应用价值。     

骨髓增生异常综合征患者源成骨细胞表达多种细胞因子并体外维持造血祖细胞存活

为了解骨髓增生异常综合征（MDS）患者成骨细胞的生物学特性,并探讨其对体外造血的支持能力,利用骨髓间充质干细胞多向分化潜能将其诱导分化为成骨细胞,在体外和造血细胞构建二维培养体系,研究其体外支持造血祖细胞生存的作用;同时采用RT-PCR的方法在mRNA水平上分析由骨髓间充质干细胞诱导分化的成骨细胞细胞因子的表达并与人成骨细胞系hFOB1.19比较。结果发现,来源于MDS患者的成骨细胞在无外源性细胞因子的条件下能够短期维持GM-CFC造血祖细胞的存活。经过RT-PCR证实,人成骨细胞系hFOB1.19表达SCF、IL-6、SDF-1α、G-CSF、GM-CSF等细胞因子,来源于MDS患者和正常人的成骨细胞也能表达上述细胞因子,但却不表达GM-CSF。结论：与正常人相比,MDS患者源的成骨细胞同样能够维持GM-CFC的存活,这可能和成骨细胞表达多种重要的造血相关的细胞因子有关。     

人脐带和骨髓源间充质干细胞生物学特征的对比研究

为了对比人脐带组织源间充质干细胞（UC-MSC）与骨髓源间充质干细胞（BM-MSC）的生物学特性,从足月胎儿脐带组织和成人骨髓中分离出间充质干细胞（MSC）。用有限稀释法、流式细胞术、倒置显微镜检及RT-PCR等方法检测UC-MSC和BM-MSC的分离成功率、细胞产量、成纤维细胞集落形成单位（CFU-F）、增殖特性、免疫表型和多向诱导分化能力等并对比性研究二者的生物学特性。结果表明,UC-MSC和BM-MSC的分离成功率均达100%;虽然由脐带组织中分离的有核细胞数低于骨髓（1×10^6/cmvs5.5×10^7/ml）（p=0.0002）,但在培养第14天由脐带和骨髓中得到的贴壁细胞数无差异（8.6×10^5/cmvs8.4×10^5/ml）（p〉0.05）;UC-MSC形态、大多数分子表型、细胞周期状态、脂肪和骨诱导分化能力与BM-MSC相似,但UC-MSC的CFU-F比例（1∶1609±0.18）高于BM-MSC的CFU-F比例（1∶35700±0.01）（p〈0.05）。此外,UC-MSC具有比BM-MSC更强的增殖能力（p〈0.05）。UC-MSCHLA-ABC和CD106分子表达低于BM-MSC（p〈0.05）。结论：脐带组织源间充质干细胞产量和绝大多数生物学特征与BM-MSC的相似,且具有比BM-MSC更高的增殖能力、较低的HLA-ABC和HLA-DR表达,UC-MSC有望成为BM-MSC理想的替代来源。     

颅骨来源骨髓基质干细胞的分离培养方法

背景：从小鼠颅骨提取的一类骨髓基质干细胞称为PA6细胞,研究者发现当PA6细胞与其他干细胞共培养时可向神经细胞分化,此特性可被应用于神经损伤部位的修复。所以,PA6细胞越来越受到研究者的关注,但目前国内对类似骨髓基质干细胞PA6的提取方法鲜见报道。目的：分离培养SD大鼠颅骨来源的骨髓基质干细胞,体外观察细胞形态并免疫荧光鉴定。方法：无菌条件下,取新生的SD大鼠颅骨将其剪碎,用含体积分数为10%胎牛血清的DMEM培养液冲洗颅骨碎片,反复吹打制成单细胞悬液,将其置于培养瓶中培养,多次换液培养纯化细胞。取第2代生长均一的细胞,倒置显微镜下观察细胞形态,并用免疫荧光染色法进行细胞表面标记鉴定。结果与结论：原代细胞培养24 h后,骨髓基质干细胞开始贴壁;3 d后细胞数量增多,形态呈不规则形、多角形、三角形和扁平形;细胞传代后,形态基本均一,细胞排列呈放射状和束状,贴壁能力较强,部分细胞呈聚集生长,增殖速度比原代有明显的加快。免疫荧光染色检测CD105、CD73、CD44、CD90表达呈阳性, CD45、CD34、CD14和HLA-DR表达呈阴性,证实了提取的细胞为骨髓基质干细胞。     

兔骨髓间充质干细胞的生物学特征及其对不同生长因子的反应

为了研究兔骨髓间充质干细胞（rBM—MSC）的生物学特征及其对不同生长因子的反应，使用贴壁培养法从兔骨髓单个核细胞中获得间充质干细胞（MSC），在光学显微镜和电子显微镜下观察其基本生长行为和生物学特征；使用流式细胞仪检测rBM—MSC的免疫学表型；RT—PCR法检测其胶原表达；诱导rBM—MSC多向分化并使用特异性染色和RT—PCR予以鉴定；最后使用MTT法检测IL—1、3、8和HGF对rBM—MSC生长增殖的影响。结果显示：贴壁生长的rBM—MSC具有典型的成纤维样细胞形态，可传15代以上，第5代rBM—MSC高表达基质受体CD44（32％），低表达造血细胞标记CD45（4．7％）；RT—PCR显示高表达Ⅰ型胶原，弱表达Ⅱ型胶原，不表达X型胶原；在不同的诱导条件下．rBM—MSC可被诱导分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞和神经元样细胞。rBM—MSC对IL-3最为敏感．10ng／ml的低浓度IL-3可显著促进细胞增殖达32％以上（P〈0．01），而高浓度IL-3能显著抑制其生长。结论：分离培养了rBM—MSC，其生物学特征与人和猕猴等BM—MSC相似的生物学特性，低浓度IL-3可有效促进其增殖。     

兔骨髓基质细胞与陶瓷样异种骨的体外培养实验兔骨髓基质细胞形态、生长、附着及增殖性能观察

背景天然异种骨采用适当的理化方法可将其抗原性削弱或消除,且能保留其天然的网状孔隙系统,从而使其结构和组成符合生理要求,可望作为一种骨移植替代材料.目的采用传代的骨髓基质细胞与陶瓷样异种骨体外复合培养,以了解陶瓷样异种骨对兔骨髓基质细胞形态、生长、附着及增殖的影响.设计空白对照实验.单位昆明医学院第一附属医院中心实验室.材料3个月龄日本大耳白兔5只,体质量1.5～2.0kg,雌雄不限.方法实验于2003-06/10在昆明医学院第一附属医院中心实验室完成.取市售新鲜猪肋骨经理化处理制备陶瓷样异种骨,采用X射线衍射仪分析证实,其主要成分为羟基磷灰石;经扫描电镜观察证实该材料具有原骨组织的网状孔隙结构系统.取日本大耳白兔5只各抽取骨髓1 mL,经PRMI 1640培养液稀释制成骨髓基质细胞悬液,取上层细胞培养.以细胞1×106个/瓶,共接种25 mL培养瓶8瓶,按11比例传代,并将准备好的陶瓷样异种骨置入培养瓶内,每瓶置5块,共置5瓶,作为实验组,另3瓶(不置陶瓷样异种骨)作为对照组.2周后终止培养,取部分置人材料用于相差显微镜和扫描电镜观察.主要观察指标相差显微镜和扫描电镜观察陶瓷样异种骨对骨髓基质细胞的形态特征、生长、附着及增殖的影响.结果①兔骨髓基质细胞活体相差显微观察结果原代培养接种后10～14 d细胞增殖连接成单层网状结构.传代培养24 h后完全贴壁,实验组与对照组的细胞皆生长良好.实验组陶瓷样异种骨周围的成纤维样细胞排列更密集.②兔骨髓基质细胞扫描电镜观察结果实验组传代培养2周后可见一些连接呈网状的成纤维样细胞附于陶瓷样异种骨网状孔隙的内壁、孔底及骨小梁表面,细胞多呈梭形、三角形或多角形细胞.结论陶瓷样异种骨主要成分为羟基磷灰石,且有原骨组织的网状孔隙结构系统,对骨髓基质细胞的形态、生长、附着及增殖均无不良影响,可望与骨髓复合移植修复骨缺损.     

Placenta-derived MSCs are partially immunogenic and less immunomodulatory than bone marrow-derived MSCs

Over the past few years, mesenchymal stem cells (MSCs) have become of increasing interest for use in the field of regenerative medicine. To date, bone marrow (BM) has been the main source of MSCs (BM-MSCs) for both experimental and clinical studies. However, the use of MSCs derived from BM can be problematic, due to the low number of MSCs found in bone marrow aspirates and the invasive procedure associated with obtaining them. We aimed to develop a method of obtaining high numbers of purified MSCs from placental tissue with minimal expansion and to characterize their phenotype and function relative to BM-MSCs. We show here that placenta-derived MSCs (PD-MSCs) can be isolated with high numbers from whole placental tissue. However, PD-MSCs isolated from whole tissue were often found to be a mixed population of both maternal and neonatal cells. The immunological properties of PD-MSCs and BM-MSCs were compared. PD-MSCs were found to express lower levels of HLA class I and higher levels of PDL-1 and CD1a, compared to BM-MSCs. HLA-DR became upregulated in PD-MSCs following treatment with IFNγ, whereas BM-MSCs expressed constitutively low levels of HLA-DR. Whilst untreated or IFNγ-treated BM-MSCs were incapable of stimulating T cells, we observed a small T cell proliferation in response to the highest concentration of PD-MSCs when treated with IFNγ. It was noted that BM-MSCs were more immunomodulatory than PD-MSCs in this study. We therefore suggest that BM-MSCs may be better candidates for use in commercial regenerative or transplantation medicine.     

Osteoinduction by ex vivo adenovirus-mediated BMP2 delivery is independent of cell type

The objective of the study was to analyze and compare the abilities of various human cell types with inherently dissimilar osteogenic potentials to induce heterotopic bone formation following ex vivo transduction with two distinct adenoviral vectors encoding bone morphogenetic protein type 2 (BMP2). The cells comprised primary human bone marrow mesenchymal stem cells (BM-MSCs), primary human skin fibroblasts (SFs), and a human diploid fetal lung cell line (MRC-5). The vectors included adenovirus type 5 or a chimeric adenovirus type 5 with the fiber gene of adenovirus type 35 (Ad5F35-BMP2), both demonstrating significantly different expression of BMP2 in vitro. The experimental groups consisted of the three human cell types transduced with each of the two adenoviral vectors. Using nonobese diabetic severe combined immunodeficiency (NOD/SCID) mice, the transduced cells were injected intramuscularly following ex vivo adenoviral transduction. The nature and extent of heterotopic bone formation were analyzed radiographically and histologically. At 14 days postinjection, abundant, highly mineralized bone was formed in mice injected with Ad5F35-BMP2-transduced cells irrespective of the cell type. There was no statistically significant difference in the amount of bone formed between BM-MSCs, SFs, and MRC-5 cells transduced with Ad5F35-BMP2, as assessed from bone surface area on biplanar plain radiography. Substantially lesser amounts or no bone could be detected in mice injected with cells transduced with Ad5-BMP2. Immunohistochemical analysis confirmed the presence of human cells in muscle as early as 2 days postdelivery; however, at 6-7 days after injection, the transduced cells could not be detected in surrounding muscle, or in the heterotopic bone, indicating the host origin of the newly formed bone. The results of the study demonstrate no significant difference in osteoinductive properties between BM-MSCs, SFs, and MRC-5 cells transduced ex vivo with the same type of adenovirus encoding BMP2. The level of BMP2 expression appears to be a crucial factor determining the extent of heterotopic bone formation and was significantly affected by the type of adenovirus used. In the cell types studied, Ad5F35-BMP2 was more efficacious than Ad5-BMP2 in providing adequate levels of BMP2 for efficient osteoinduction.     

小鼠骨髓内皮细胞系的建立(英文)

对来源于正常小鼠的骨髓内皮细胞经连续传代培养18个月以上。这一培养是在加入经短期培养而获得的内皮细胞条件培养液及GM-CSF,在纤连蛋白覆盖的培养皿上种入低浓度的骨髓基质细胞完成的。在内皮细胞条件培养液和GM-CSF存在的条件下,细胞平均倍增时间为49小时。快速增殖时,细胞先为圆形,以后可变为立方形或梭形。所有培养的细胞与vWF,VCAM-1抗体染色阳性,UEA-1反应阳性,并产生细胞因子。这一骨髓内皮细胞系的建立可用于研究骨髓内皮细胞在造血过程中的作用。