尼古丁对人牙周韧带成纤维细胞增殖和细胞周期的影响

目的：研究尼古丁（nicotine）对人牙周韧带成纤维细胞（periodontal ligament fibroblasts,PDLFs）增殖和细胞周期的影响.方法：用不同浓度尼古丁分别在不同时间作用于PDLFs,用MTF比色法及流式细胞仪（flow cytometry,FCM）检测细胞增殖和细胞周期.结果：尼古丁能明显抑制PDLFs增殖,呈剂量依赖性和时间依赖性;FCM结果表明,经尼古丁作用后,PDLFsG0-G1期细胞百分比显著增加（P＜0.01）,G2-M期细胞、S期细胞百分比显著下降（P＜0.01）,反映细胞增殖和性的增殖指数PI值（S＋G2M）随着浓度的递增而下降.结论：尼古丁可抑制PDLFs增殖并减少细胞DNA合成.     

平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其机制的实验研究

目的：探讨平阳霉素对人脐静脉内皮细胞系ECV304的抑制作用及其相关机制。方法：用不同浓度的平阳霉素作用ECV304细胞不同时间,以MTT法比较平阳霉素作用24、48及72h后的细胞抑制率,应用DNA电泳实验、流式细胞术分析细胞凋亡、坏死情况、细胞周期及Fas、Bcl-2蛋白的表达。结果：MTT法显示随平阳霉素浓度升高和作用时间的延长,细胞生长抑制越明显DNA电泳证实合适浓度平阳霉素作用下细胞发生凋亡,过高浓度细胞则发生坏死;流式细胞术显示细胞凋亡率和坏死率随药物浓度和作用时间增加而增高,过高浓度细胞坏死占主导;平阳霉素各浓度作用24h后,G2—M期百分率增高,S期百分率降低,G0—G1期百分率无明显变化;Fas表达随药物浓度增加而递减,Bcl-2表达随药物浓度增加而升高。结论：平阳霉素能明显抑制ECV304细胞生长,并具有浓度和时间依赖性;平阳霉素可能通过诱导凋亡和坏死作用以抑制ECV304细胞的体外生长和增殖;细胞凋亡发生在G2—M期,是通过上调Fas蛋白并下调Bcl-2蛋白的表达来实现的。     

曲古抑菌素A对舌鳞癌SCC-6细胞生物学行为的影响

目的:观察曲古抑菌素A(TSA)对舌鳞癌细胞生物学行为的影响,探讨其体外抗癌活性。方法:不同浓度、时间梯度TSA处理人舌鳞癌SCC-6细胞后,MTT法检测细胞增殖活性;流式细胞仪定量检测细胞周期和凋亡变化;Transwell法测定细胞体外侵袭性改变。结果:①TSA对SCC-6细胞的增殖有明显抑制作用,并呈剂量和时间依赖性;②随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞G1期的细胞数目逐渐减少,而S期和G2/M期的细胞数目增加,提示TSA将细胞周期抑制在S期和G2/M期,同时随着TSA浓度的增加,SCC-6细胞的凋亡率与对照组相比明显增加(P<0.05),提示TSA能促进SCC-6细胞的凋亡;③经不同浓度TSA处理24 h后,SCC-6细胞穿透人工基质膜的细胞数随着TSA浓度上升而逐渐减小,提示TSA能显著抑制SCC-6细胞的侵袭性。结论:体外条件下,TSA能明显抑制SCC-6细胞的增殖和侵袭能力,诱导其凋亡。而其所介导的细胞凋亡很可能与S期和G2/M期细胞周期的阻滞有关。     

烟草对牙周成纤维细胞影响的实验观察

目的 观察尼古丁和烟草浸提液(smokeless tobacco extract，ST)对牙周膜成纤维细胞(periodontal ligament fibroblasts，PDLFs)的形态、超微结构及增殖贴附的影响。方法 用不同浓度的尼古丁和ST作用于人PDLFs，细胞爬片作HE染色，光学显微镜观察细胞的形态；透射电镜作超微结构观察；MTT法分别于第5天和2h测细胞的增殖和贴附情况。结果 随着尼古丁和ST浓度的增加，细胞排列的极性消失，细胞变小并由长梭形变成椭圆形或圆形；超微结构显示，细胞器成分减少，尤其是粗面内质网和高尔基体减少，含胶原蛋白的分泌小泡减少，波形丝、微管分解消失。细胞核有程度不同的减小或核畸变；细胞的增殖和贴附能力呈浓度依赖性抑制。结论 尼古丁和ST可改变PDLFs的形态和结构，抑制细胞的胶原合成，改变细胞的支架结构，从而改变细胞的贴附和增殖，提示烟草在牙周病的发病中有重要作用。     

幽门螺杆菌对人牙周膜成纤维细胞的增殖和细胞周期的影响

目的:观察幽门螺杆菌(H.pylori)对人牙周膜成纤维细胞(PDLFs)的增殖和细胞周期的影响。方法:体外分别培养PDLFs细胞株(hPDLF100)和H.pylori)国际标准产毒株NCTC11637,将不同浓度(1×108、2×107、4×106、8×105cfu/mL)H.pylori分别与PDLFs共同培养,采用四甲基偶氮唑盐比色法(Methylthiazolyl tetraxolium,MTT)和流式细胞术(Flow cytometry,FCM),观察不同浓度H.pylori对PDLFs的生长增殖和细胞周期的影响。结果:各浓度H.pylori作用于PDLFs 6、12、24 h后,与对照组相比,OD值均明显减小(P<0.05),说明不同浓度的H.pylori均能抑制PDLFs的生长;并且随着H.pylori浓度的增加,OD值逐渐减小;相同浓度时,时间越长,OD值也逐渐减小。H.pylori作用于PDLFs 12 h后,随着H.pylori浓度的增加,细胞周期中GoG1期比例逐渐增高,而S期和G2M期的比例则呈下降趋势(P<0.05)。结论:H.pylori能抑制PDLFs的增殖并阻遏其分裂和DNA合成。     

钾离子通道阻滞剂4-AP 对人舌鳞癌 Tca8113细胞增殖的影响

目的：检测4-氨基啶（4-AP）对 Tca8113细胞株增殖的影响。方法：采用 CCK-8法检测不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株12、24、48 h 后对细胞的增殖抑制率;流式细胞术（FCM）检测各组细胞周期变化。采用 SPSS19．0软件对数据进行统计学分析。结果：随着4-AP 浓度的增加和干预时间的延长,Tca8113细胞形态发生改变。在浓度5～100 mmol／L 范围内作用于细胞12～48 h,4-AP 浓度和时间依赖性地抑制了 Tca8113细胞的增殖（P ＜0．01）。不同浓度4-AP 作用于 Tca8113细胞株24 h后,G0／G1期的细胞所占的比例显著升高（P ＜0．01）;S 期细胞所占的比例显著降低（P ＜0．01）;4-AP 阻滞 Tca8113细胞株于G0／G1期。结论：4-AP 可能通过调控细胞周期抑制 Tca8113细胞株的增殖对细胞株分布有影响。     

小干扰RNA沉默YAP基因对人牙周膜干细胞增殖凋亡的影响

目的 本研究通过小干扰RNA（siRNA）沉默人牙周膜干细胞（hPDLSCs）YAP基因,观察YAP基因沉默后对细胞增殖凋亡的影响。方法 将化学合成siRNA序列以脂质体LipofectamineTM 2000介导瞬时转染hPDLSCs,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、Western blot检测转染后YAP表达水平,细胞增殖活性检测试剂盒（CCK-8）检测siRNA在体外对hPDLSCs增殖能力的影响,流式细胞仪检测细胞周期及凋亡率的变化。采用SPSS 19.0软件对数据进行处理,设P<0.05为差异有统计学意义。结果 在转染48 h后hPDLSCs的YAP mRNA和蛋白水平明显降低（P<0.001）,YAP蛋白表达水平在细胞被转染48、72 h后无显著差异,表明siRNA可以持续有效地抑制YAP的表达;CCK-8增殖活性实验结果显示细胞增殖活性受到抑制;沉默YAP基因后细胞早期及晚期凋亡率均增加。细胞周期检测结果显示细胞周期发生改变,G1及S期细胞比例增多（P<0.01）,G2期细胞比例明显减少（P<0.05）。结论 siRNA沉默YAP基因后hPDLSCs增殖活性降低,细胞凋亡率明显增加,细胞的周期分布发生改变;YAP基因可以调控hPDLSCs的增殖与凋亡。     

紫杉醇诱导ACC细胞凋亡及与G2/M期阻滞关系研究

目的 研究紫杉醇能否诱导ACC－2细胞凋亡,以及凋亡诱导与G2／M期的关系。方法 紫杉醇不同浓度、不同作用时间分别处理ACC－2细胞,通过流式细胞仪、荧光显微镜、透射电镜和DNA凝胶电泳,研究紫醇诱导ACC－2细胞的凋亡及其与G2／M期阻滞的关系。结果 荧光染色观察到凋亡细胞形态,电镜观察到不同时期凋亡超微结构的典型形态。流式细胞仪DNA含量：紫杉醇在50mmol/L作用48h,72h,亚G1峰分别是17．13％、16．26％。延长药物作用时间、增加药物浓度均会增强细胞G2／M期阻滞,但只有出现G2／M期明显阻滞后,经过一定时间才出现凋亡。结论 紫杉醇能够诱导ACC－2细胞产生凋亡;G2／M期阻滞能诱导ACC－2细胞凋亡。     

尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响

目的：体外研究尼古丁对人牙周膜成纤维细胞增殖能力的影响。方法：用不同浓度的尼古丁与体外培养的人牙周膜成纤维细胞作用不同时间,用MTT比色法测定细胞的生长情况,流式细胞分析法测定尼古丁对细胞周期的影响。结果：各浓度的尼古丁组均能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,但不同浓度尼古丁对牙周膜细胞的抑制作用无明显差异;各浓度组尼古丁均能降低G1的比例,高浓度尼古丁（5×10^-1g/L）组G1期比例降至84.62%,G2/M期升高至12.83%。结论：尼古丁能抑制人牙周膜成纤维细胞的生长,并影响其细胞周期的进程。     

高温诱导BcaCD885颊癌细胞凋亡及检测

目的　探讨热诱导 Bca CD885颊癌细胞凋亡的动力学改变及热杀伤肿瘤细胞的机理。方法　水浴加温诱导Bca CD885细胞产生凋亡。通过细胞形态观察、原位末端标记、DNA电泳及流式细胞术 DNA测定 ,从形态学、生物化学、分子生物学以及细胞学水平确定凋亡细胞特征。结果　Bca CD885细胞经 43°C40 min加热 ,呈现细胞凋亡形态改变 ,TUNEL标记见明显的凋亡小体 ,DNA电泳呈现有一定间隔的梯状条带。同时细胞周期发生了明显的特异性改变 :G0 / G1 期百分比增加 ,S期百分比下降 ,G2 / M期百分比在加热后 3 h时也发生了明显的下降。 45°C 40 min加热则出现明显的坏死改变。结论　高温杀伤 Bca CD885细胞存在细胞坏死和细胞凋亡两种方式 ,治癌温度是通过诱导细胞凋亡发挥作用。高温诱导 Bca CD885细胞的凋亡具细胞周期特异性     

尼古丁诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡的实验研究

目的：了解在体外培养环境中,尼古丁对人牙周膜成纤维细胞凋亡的影响。方法：将尼古丁作用于培养至第6代的人牙周膜成纤维细胞后,通过四唑盐比色法、流式细胞仪研究尼古丁能否诱导人牙周膜成纤维细胞凋亡。结果：四唑盐比色法证实当尼古丁浓度在0.05～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的抑制呈浓度依赖性,流式细胞仪分析提示,当尼古丁浓度在0.5～4mg/L之间时,对牙周膜成纤维细胞的凋亡率呈浓度依赖性。结论：尼古丁对人牙周膜成纤维细胞有一定的毒性作用,通过抑制牙周膜成纤维细胞增殖和诱导凋亡加重对周膜的破坏。     

可利霉素对口腔鳞癌细胞生物学活性的影响

目的: 体外评价可利霉素对口腔鳞状细胞癌的抗肿瘤活性。方法: 梯度浓度可利霉素分别处理口腔鳞状细胞癌细胞（HN6/HB96细胞系）,采用CCK-8试剂盒检测细胞增殖,绘制生长曲线;采用划痕实验分析细胞迁移能力;采用平板克隆形成实验分析细胞克隆形成能力;采用流式细胞术分析细胞周期和细胞凋亡。采用 SPSS 18.0 软件包对数据进行统计学分析。结果: 可利霉素浓度依赖性抑制HN6/HB96的体外增殖,随着药物浓度增加,细胞迁移和克隆形成能力显著下降（P<0.05）;可利霉素使处理过的口腔鳞状细胞癌细胞G1期比例显著升高,S期和G2/M期比例显著下降,细胞周期阻滞于G1期（P<0.001）。可利霉素诱导口腔鳞状细胞癌细胞凋亡,随着药物浓度增加,细胞凋亡率显著上升（P<0.01）。结论: 可利霉素体外抑制口腔鳞状细胞癌细胞的生物学活性,为可利霉素用于口腔鳞状细胞癌的治疗提供了实验依据。     

Mechanisms of cytotoxicity of nicotine in human periodontal ligament fibroblast cultures in vitro

The use of tobacco products significantly contributes to the progression of periodontal disease and poor response to healing following periodontal therapy. The purpose of this study was to determine the effects of nicotine, a major component of cigarette smoking, on human periodontal ligament fibroblast (PDLF) growth, proliferation, and protein synthesis to elucidate its role in periodontal destruction associated with its use. Human PDLFs were derived from three healthy individuals undergoing extraction for orthodontic reasons. At a concentration higher than 2.5 mM, nicotine was found to be cytotoxic to human PDLFs (P < 0.05). Nicotine also significantly inhibited cell proliferation and decreased protein synthesis in a dose-dependent manner. At concentrations of 50 and 200 microM, nicotine suppressed the growth of PDLFs by 48% and 86% (P < 0.05), respectively. A 10-mM concentration level of nicotine significantly inhibited the protein synthesis to only 44% of these in the untreated control (P < 0.05). Furthermore, the effects of antioxidants (superoxide dismutase (SOD); catalase and 2-oxothiazolidine-4-carboxylic acid (OTZ) and buthionine sulfoximine (BSO) were added to search for the possible mechanism of action, as well as a method for the prevention, of cigarette smoking-associated periodontal diseases. The addition of OTZ, a precursor of cysteine that metabolically promotes GSH synthesis, acted as a protective effect on the nicotine-induced cytotoxicity. However, SOD and catalase did not decrease the nicotine-induced cytotoxicity. In contrast, the addition of BSO, a cellular GSH synthesis inhibitor, enhanced the nicotine-induced cytotoxicity. These results indicate that thiol depletion could be the mechanism for nicotine cytotoxicity. The levels of nicotine tested inhibited cell growth, proliferation, and protein synthesis on human PDLFs. This suggests that nicotine itself might augment the destruction of periodontium associated with cigarette smoking. In addition, these inhibitory effects were associated with intracellular thiol levels. Factors that induce glutathione synthesis of human PDLF may be used for further chemoprevention of cigarette smoking-related periodontal diseases.     

槲皮素对人腺样囊性癌ACC-M细胞增殖和凋亡的影响及机制研究

目的 观察槲皮素对人腺样囊性癌细胞系ACC-M增殖和凋亡的作用,探讨槲皮素影响ACC-M细胞凋亡的可能机制。方法 采用CCK-8 法检测不同浓度的槲皮素对ACC-M细胞增殖的抑制作用并计算抑制率,计算IC₅₀;流式细胞术检测 ACC-M细胞凋亡率和细胞周期分布;实时荧光定量RT-PCR检测 ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达。采用SPSS 20.0软件包对数据进行统计学分析。结果 槲皮素抑制 ACC-M细胞增殖的作用明显,且呈浓度依赖性,IC₅₀为151.12 μmol/L（P<0.05）;Annexin V/PI 双染法检测显示,槲皮素能够诱导ACC-M细胞凋亡,且与剂量、时间呈正相关（P<0.05）;PI染色法检测显示,槲皮素主要作用于 G2/M 节点,能将细胞特异性地阻滞于 G2/M 期;RT-PCR检测显示,随着药物浓度增加,ACC-M细胞中Survivin mRNA的表达水平均呈不同程度的降低,200 μmol/L 槲皮素可显著抑制Survivin mRNA的表达。结论 槲皮素能够抑制ACC-M细胞增殖,诱导其凋亡,且呈时间-剂量依赖性。槲皮素可能通过下调Survivin的表达水平而发挥抗腺样囊性癌的作用。     

熊果酸对ACC-83增殖抑制和诱导凋亡的观察

目的:探讨熊果酸(ursolic acid,UA)对人腺样囊性癌ACC-83细胞增殖及凋亡的影响。方法:MTT检测UA对ACC-83细胞体外生长的抑制作用;流式细胞仪测定细胞的周期和凋亡;瑞氏-吉姆萨染色,显示凋亡细胞形态;Western印迹法检测Bcl-2、Bax两个重要的细胞凋亡相关基因和细胞凋亡相关特殊蛋白COX-2表达的变化。结果:UA以剂量和时间依赖的方式抑制ACC-83细胞生长,以剂量依赖的方式使ACC-83细胞周期阻滞在S期,诱导细胞凋亡;染色可见细胞呈明显的凋亡特征;Western印迹法测得UA下调ACC-83细胞的Bcl-2和COX2的蛋白表达,随着药物浓度增加逐渐减少,对Bax的表达并无明显改变。结论:UA能够抑制ACC-83细胞的增殖,并使细胞大量累积于S期,UA可能通过减少COX2和Bcl-2的表达、降低Bcl-2/Bax比例来诱导细胞凋亡。     

β-catenin表达下调对舌鳞状细胞癌Tca8113细胞周期、细胞凋亡和细胞迁移的影响

目的：探讨β-catenin表达下调对Tca8113细胞增殖、周期、凋亡和迁移的影响。方法：用脂质体2000将β-catenin siRNA转染舌鳞状细胞癌Tca8113细胞,Western blotting技术检测转染后Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,CCK-8试剂分析转染后对细胞增殖能力的影响;流式细胞术检测下调β-catenin表达对Tca8113细胞周期及细胞凋亡的影响;Boyden chamber实验分析β-catenin表达下调对Tca8113细胞迁移能力的影响。结果：β-catenin siRNA能明显下调Tca8113细胞中β-catenin蛋白的表达,显著抑制Tca8113细胞的增殖。β-catenin siRNA组中的G0/G1期的细胞百分比明显高于未处理组和对照siRNA组。此外,β-catenin siRNA组中细胞凋亡的比率明显高于未处理组和对照siRNA组,其凋亡变化与caspase-3和bax蛋白表达的上调和bcl-2表达的下降密切相关。与未处理组和对照siRNA组相比,β-catenin siRNA组中Tca8113细胞的迁移能力显著下降,组间具有统计学意义。结论：β-catenin在舌鳞状细胞癌的发生发展中可能具有重要的作用。