己烯雌酚对小鼠睾丸引带中LGR8表达的影响

目的:通过体内实验研究己烯雌酚(DES)对小鼠睾丸引带中胰岛素样因子3受体LGR8的影响,从而探讨外源性雌激素对小鼠睾丸下降的影响。方法:8～10周龄KM孕鼠随机分为正常组、空白对照组和实验组(0.1、1.0、10、100μg/kg DES 4个剂量组),共6组,每组20只。于孕9～17 d每天分别给予实验组妊娠小鼠不同剂量的DES(0.1、1、10、100μg/kg),空白对照组给予等体积DMSO+生理盐水,正常组不给药。应用免疫组化和RT-PCR分别检测胎鼠和幼鼠睾丸引带中LGR8蛋白和mRNA的表达。结果:HE染色可见胎鼠正常组、对照组睾丸引带发育良好,中间的间叶组织和外周的肌源细胞之间分界清楚;实验组可见睾丸引带发育不良,间叶组织和肌源细胞之间无明显分界,组织结构紊乱。幼鼠正常组和实验组睾丸引带发育未见明显不同。LGR8表达于睾丸引带肌源细胞和间叶组织细胞,以肌源细胞表达为主。实验组LGR8阳性表达较正常组弱,胎鼠各实验组和幼鼠DES 1、10、100μg组与同发育阶段的正常组相比均有统计学意义(P<0.05)。DES高剂量(10、100μg)组与同发育阶段的正常组相比LGR8 mRNA表达增加(P<0.05)。各实验组PCR产物测序均未见明显突变。结论:DES可影响小鼠睾丸引带LGR8 mRNA和蛋白的表达,DES可能通过影响INSL3-LGR8信号系统干扰睾丸引带的发育,进而影响睾丸正常下降。     

己烯雌酚影响新生小鼠睾丸引带相关基因表达的初步研究

目的:通过不同剂量己烯雌酚(DES)孕期染毒,了解其对新生仔鼠睾丸引带中雄激素受体(AR)、雌激素受体α(ERα)、增殖细胞核抗原(PCNA)和肌动蛋白α1(ACTα1)mRNA表达的影响,以期窥探DES影响睾丸引带的作用途径。方法:将发现雌性昆明小鼠阴道栓当天记为孕第0天(GD0),在GD9~GD17分别给予不同剂量DES[0.02、0.1、0.5、10、50μg/(kg·d)]作为实验组,给予等体积二甲基亚砜及生理盐水分别作为溶剂和空白对照组。生后第1天处死雄性仔鼠获取睾丸引带,通过RT-PCR检测AR、ERα、PCNA和ACTα1 mRNA的表达量。结果:随着DES浓度的增加,ERαmRNA的表达逐渐增加,各实验组与溶剂对照组比较差异有统计学意义(RE~2=0.825,P0.05);AR、PCNA和ACTα1 mRNA的表达都呈下降趋势,高剂量组[10、50μg/(kg·d)DES组]与溶剂对照组比较差异有统计学意义(RA~2=0.713,RP~2=0.946,RT2=0.960,P0.01)。结论:正常新生昆明小鼠睾丸引带中存在ERα、AR、PCNA及ACTα1 mRNA的表达。孕期不同剂量DES染毒对新生小鼠睾丸引带细胞受体蛋白(ERα和AR)及功能蛋白(PCNA和ACTα1)mRNA表达的影响不同。外源性雌激素可能通过影响ER和或AR的代谢而影响睾丸引带细胞的增殖和收缩等功能,从而影响睾丸甚至整个雄性生殖系统的正常发育。     

小鼠睾丸引带细胞的培养及己烯雌酚对培养睾丸引带细胞的影响

目的:探讨小鼠睾丸引带细胞体外培养的有效方法,并进行形态学观察。研究经典的外源性雌激素己烯雌酚(DES)体外对小鼠睾丸引带发育的影响。方法:手术放大镜解剖出3日龄雄性昆明小鼠的睾丸引带组织并进行细胞培养。台盼蓝染色检测细胞存活率,HE染色观察细胞形态。传代培养并随机分为空白对照组、溶剂对照组(DMSO组)和实验组(DES 1~4组)共6组。溶剂对照组加入DMSO,实验组分别加入0.01、0.10、1.00以及10.00μg/ml DES。分别于培养12、24、48 h后进行细胞形态学观察,CCK-8法检测睾丸引带细胞的生长情况。结果:培养睾丸引带细胞大部分为成纤维细胞型,有少数的上皮样细胞。原代细胞的存活率为85%~90%。在不同剂量DES作用后的3个不同时间段里,细胞增殖性的检测结果存在时间-剂量效应的显著差异(P<0.01)。结论:睾丸引带细胞可经一定的方法进行体外培养,外源性雌激素对睾丸引带细胞的生长有抑制作用,且呈现一定的时间-剂量效应。对培养睾丸引带细胞影响的研究是外源性雌激素影响生殖系统发育研究的一条有效的睾丸外途径。     

邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯对小鼠胎鼠睾丸及睾丸引带的影响

目的:研究邻苯二甲酸二(2-乙基)己酯(DEHP)对小鼠胎鼠睾丸与睾丸引带形态结构及功能的影响,探讨隐睾发生的可能机制。方法:30只健康KM孕鼠随机均分为3组:空白对照组、玉米油对照组、DEHP组。DEHP组以剂量500mg/(kg.d)的DEHP灌胃作用于怀孕12～19d(GD12～GD19)的KM母鼠,观察DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重、睾丸重量、睾丸引带形态结构、位置、睾丸到膀胱颈之间的相对距离(TBD)、颅侧悬韧带残留情况、引带内雄激素受体(AR)、雌激素受体(ER)、肌动蛋白、增殖细胞核抗原(PCNA)表达水平的影响。结果:DEHP对每胎胎鼠数、雌雄性胎鼠比例、雄性胎鼠体重无明显影响;DEHP可影响胎鼠睾丸重量及TBD;DEHP组睾丸均有一定程度的下降不全,睾丸引带形态结构无明显差异;光镜下见DEHP组睾丸生精小管、支持细胞存在明显的发育障碍,睾丸Leydig细胞明显增生;DEHP组睾丸引带AR阳性表达率降低(P<0.01)。结论:DEHP可通过抗雄激素效应导致睾丸引带功能障碍,使睾丸下降发生异常而诱导小鼠隐睾;同时造成睾丸Ser-toli细胞、睾丸Leydig细胞和生精细胞的发育障碍和功能改变。     

新生小鼠睾丸引带形态结构及其异常的显微连续研究

目的:应用新生小鼠生殖系统整体原位固定、横断面连续组织切片显微观察的研究方法,整体展现正常及异常状态下新生小鼠睾丸引带的形态结构,以探讨应用整块组织固定、连续切片显微研究的方法在判定生殖系统形态异常中的适用性。方法:正常及孕期(9~17d)接触不同剂量外源性雌激素己烯雌酚(DES)的新生雄性昆明小鼠,切取其腹部(自膈下)固定、包埋,作连续切片、染色。显微镜下顺序摄像,分析睾丸引带的形态结构,并测算其相应位置和大小。结果:显微连续观察显示新生小鼠睾丸引带的结构清晰,形态结构各段变化较大且左右不对称,DES对睾丸引带形态结构发育的影响各段不尽相同,而且明显影响整个引带的长度。结论:孕期接触DES对新生小鼠睾丸引带的发育有明显影响,其影响是整体性的。整块组织切片显微连续研究对睾丸引带或及其它相关生殖系统器官的形态结构评价能够比较全面和精确。     

多次低剂量X线照射对小鼠睾丸组织形态及生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响

目的探讨多次低剂量X线照射对小鼠睾丸组织形态及生精细胞P53和bcl-2蛋白表达的影响.方法采用0、0.025、0.075及0.1Gy X线多次照射小鼠,以HE染色观察睾丸生精小管形态结构,免疫组织化学法测定生精细胞中P53及bcl-2蛋白的表达水平.结果随着单次低剂量X线照射剂量增加,HE染色结果显示照射组小鼠睾丸出现生精小管各级生精细胞数目逐渐减少,结构排列紊乱等不同程度的组织病理改变;免疫组织化学可见生精细胞中P53蛋白表达水平逐渐增加,而bcl-2蛋白表达水平则逐渐下降.结论低剂量X线多次全身照射可引起小鼠睾丸组织病理改变,并上调生精细胞P53蛋白、下调bcl-2蛋白表达水平,从而诱导凋亡.     

青春期前己烯雌酚暴露对大鼠性成熟后生精细胞凋亡的影响及其机制初探

目的:研究青春期前己烯雌酚(d iethylstilbestrol,DES)暴露对SD大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响并初步探讨其机制。方法:30只21日龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/(kg.d)4个实验组和1个对照组(编码为ADa、ADb、AD c、ADd和AC组,每组6只)。于青春期前[出生后第22 d(postnatal day 22,PND22)至35 d(PND35)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bc l-2和Bax在生精细胞中的表达。结果:与对照组相比,ADa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,ADb、AD c和ADd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有增加趋势。AC、ADa组生精细胞Bax相对弱表达而Bc l-2强表达,伴随DES暴露剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bc l-2表达逐渐减弱,ADd组Bax强表达而Bc l-2弱表达。结论:青春期前较大剂量DES暴露可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES暴露剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bc l-2参与青春期前DES暴露所致的生精细胞凋亡过程。     

己烯雌酚摄入对大鼠生精细胞凋亡及Bax和Bcl-2蛋白表达的影响

目的研究青春期己烯雌酚(diethylstilbestrol,DES)摄入对SD(Sprague-Dawley)大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡的影响,并初步探讨其机制。方法30只35d龄雄性SD大鼠,随机分为DES 0.01、0.1、1.0、10.0μg/kg·d~(-1)4个实验组和1个对照组(编码为BDa、BDb、BDc、BDd和BC组,每组n=6)。于青春期[出生后第36天(postnatal day 36,PND 36)至49d(PND 49)],实验组每日皮下注射相应剂量的DES,对照组仅注射溶媒。于大鼠性成熟后(PND 64)处死各组大鼠切取双侧睾丸,采用TUNEL法检测大鼠睾丸生精细胞凋亡,用免疫组化方法检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax在生精细胞中的表达。结果与对照组相比,BDa组大鼠性成熟后生精细胞凋亡无明显变化,BDb、BDc和BDd 3组生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有增加趋势。BC、BDa组生精细胞Bax相对弱表达而Bcl-2强表达,伴随DES摄入剂量增加,Bax表达逐渐增强而Bcl-2表达逐渐减弱,BDd组Bax强表达而Bcl-2弱表达。结论青春期较大剂量DES摄入可使大鼠性成熟后睾丸生精细胞凋亡增加,且随DES摄入剂量增加而有加强趋势。凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2参与青春期DES摄入所致的生精细胞凋亡过程。     

补肾活血方通过VEGF/VEGFR2相关通路促进生精障碍模型小鼠睾丸微循环的研究

目的探索补肾活血方养精胶囊促进生精障碍模型小鼠睾丸微循环的作用及其机制。方法成年小鼠分为空白组、环磷酰胺(CP)模型组、养精胶囊(YC)治疗组(低、中、高剂量)。以石蜡切片HE染色观察小鼠睾丸组织形态;以石蜡切片免疫组化及Western-blotting检测小鼠睾丸CD34表达;RT-qPCR与Western-blotting分别检测组织VEGFR2、SRC、AKT1的mRNA与蛋白表达。结果模型组CD34染色深度与蛋白表达均明显低于空白组,虽然YC低、中、高剂量组CD34的染色深度逐步加深,但只有YC高剂量组CD34蛋白表达明显高于模型组;模型组小鼠睾丸Vegfr2的mRNA表达明显高于空白组,而模型组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白表达较空白组明显下降,YC高剂量组小鼠睾丸VEGFR2的蛋白水平较模型组明显上升。各组小鼠睾丸在Src与Akt1的mRNA表达上无统计差异,但在蛋白表达上,模型组小鼠睾丸SRC表达较空白组明显降低,而YC高剂量组小鼠睾丸SRC蛋白水平较模型组明显提高;模型组AKT1蛋白表达较空白组明显下降,YC治疗组小鼠睾丸AKT1蛋白表达与模型组比较无统计学差异。结论补肾活血方能够通过上调小鼠睾丸VEGF/VEGFR2通路中VEGFR2与SRC的蛋白表达进而改善CP模型小鼠睾丸微循环。     

SPAG6/SPINK2蛋白复合物在小鼠精子顶体形成中的作用初探

目的:初步探讨精子相关抗原6(SPAG6)在小鼠精子发生过程中顶体形成阶段的表达及其调控作用。方法:采用Western印迹检测出生后小鼠睾丸发育不同阶段(第8、12、16、20、24、28、30、35天)中SPAG6的表达;免疫荧光观察SPAG6在生精细胞中的定位;分别构建SPAG6和SPINK2蛋白表达质粒,以AH109和CHO细胞为对象,采用酵母双杂交及细胞内共定位实验检测SPAG6与SPINK2蛋白间相互作用;免疫荧光检测SPINK2在SPAG6基因敲除(KO)小鼠的睾丸生精细胞中的表达与定位。结果:小鼠出生后第16～28天,SPAG6表达显著升高,且定位于圆形精子细胞的顶体;酵母双杂交实验显示SPAG6/SPINK2组能在选择性培养基(SD/-Leu/-Trp/-His)中生长;CHO细胞共转染SPAG6和SPINK2表达质粒时,SPAG6与SPINK2共定位在细胞核周围;SPAG6 KO小鼠睾丸生精细胞中未检测到SPINK2表达及定位于精子顶体。结论:SPAG6与SPINK2形成蛋白复合体,并可能通过调控SPINK2的稳定表达参与精子顶体形成。     

雌二醇通过雌激素受体α介导调控Cyclin D1在小鼠前列腺平滑肌细胞中的表达

目的 观察雌激素受体α(ERα)在17β-雌二醇(E2)促进小鼠前列腺平滑肌细胞(PSMC)增殖中的作用,探讨E2对PSMC的作用机制.方法 构建pGSadeno-ERα腺病毒载体,体外转染原代培养的小鼠前列腺平滑肌细胞(PSMC),将实验细胞分组:实验组;ERα基因下调组,细胞转染ERα干扰序列腺病毒;阴性对照组,细胞转染无义序列腺病毒;正常对照组,正常的小鼠PSMC.各组分别加入1×10-8mol/L E2,72 h后流式细胞仪检测细胞增殖,Western blot检测细胞内Cyclin D1基因表达.结果 E2作用细胞72 h后,实验组细胞G0/G1期的比率(71.76±1.78)%显著高于阴性对照组(51.73±1.86)%和正常对照组(47.90±0.79)%,差异有统计学意义(P＜0.05);相对应的PI值:实验组(28.24±1.78)显著低于阴性对照组(47.27±1.86)和正常对照组(52.10±0.79)比较,差异有统计学意义(P＜0.05);实验组细胞内Cyclin D1基因表达水平显著低于对照组.结论 雌激素在对前列腺平滑肌细胞的生物学效应中,通过雌激素受体α的介导调控了细胞周期素Cyclin D1的表达,从而促进细胞的增殖.

Abstract：

Objective To investigate the role of estrogen receptor alpha (Erα) in estradiol-induced proliferation of mouse prostatic smooth muscle cells (PSMCs) and explore a new target for benign prostazic hyperplasia (BPH). Methods Adenoviral vectors with Erα-shRNA or Ctrl-shRNA were transfected into mouse PSMCs. The cells were divided into 3 groups: experimental group ( cells transfected with pGSadeno-Erα), negative control group (cells transfected with pGSadeno-Ctrl) and normal control group (normal mouse PSMCs). The expression of Cyclin DI was detecrted by Western blotting. Cell cycle was analyzed by using flow cytometry. Results After treatment in the presence of 1 10-8 mol/L 17β-estradiol (E2) for 72 h, the percentage of cells in the G0/G1 phase was (71.76 1.78)％ in experimental group, which was significantly higher than in negative control group (51.73 ± 1.86)％ and normal control group (47.90±0.79)％, and PI in experimental group (28.24±1.78) was prominently lower than in negative control group (47.27±1.86) and normal control group (52.10±0.79). The expression level of Cyclin D1 in experimental group was conspicuously lower than in control groups. Conclusion E2 regulates the expression of Cyclin D1 via Erα in PSMCs, which promotes cell proliferation.     

MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响

目的:探讨长链非编码RNA(lncRNA)MTUS2-AS2在膀胱癌组织中的表达及其对膀胱癌细胞增殖和侵袭的影响。方法:荧光实时定量PCR(qRT-PCR)检测63例膀胱癌组织和癌旁组织、膀胱癌细胞系(BIU-87、J82、T24、5637)和正常膀胱上皮细胞系SV-HUC-1中的MTUS2-AS2表达。以MTUS2-...     

Mutations in the Insulin‐Like Factor 3 Receptor Are Associated With Osteoporosis

Introduction : Insulin‐like factor 3 (INSL3) is produced primarily by testicular Leydig cells. It acts by binding to its specific G protein–coupled receptor RXFP2 (relaxin family peptide 2) and is involved in testicular descent during fetal development. The physiological role of INSL3 in adults is not known, although substantial INSL3 circulating levels are present. The aim of this study was to verify whether reduced INSL3 activity could cause or contribute to some signs of hypogonadism, such as reduced BMD, currently attributed to testosterone deficiency. Materials and Methods : Extensive clinical, biochemical, and hormonal study, including bone densitometry by DXA, was performed on 25 young men (age, 27–41 yr) with the well‐characterized T222P mutation in the RXFP2 gene. Expression analysis of INSL3 and RXFP2 on human bone biopsy and human and mouse osteoblast cell cultures was performed by RT‐PCR, quantitative RT‐PCR, and immunohistochemistry. Real‐time cAMP imaging analysis and proliferation assay under the stimulus of INSL3 was performed on these cells. Lumbar spine and femoral bone of Rxfp2‐deficient mice were studied by static and dynamic histomorphometry and μCT, respectively. Results : Sixteen of 25 (64%) young men with RXFP2 mutations had significantly reduced BMD. No other apparent cause of osteoporosis was evident in these subjects, whose testosterone levels and gonadal function were normal. Expression analyses showed the presence of RXFP2 in human and mouse osteoblasts. Stimulation of these cells with INSL3 produced a dose‐ and time‐dependent increase in cAMP and cell proliferation, confirming the functionality of the RXFP2/INSL3 receptor–ligand complex. Consistent with the human phenotype, bone histomorphometric and μCT analyses of Rxfp2^?/? mice showed decreased bone mass, mineralizing surface, bone formation, and osteoclast surface compared with wildtype littermates. Conclusions : This study suggests for the first time a role for INSL3/RXFP2 signaling in bone metabolism and links RXFP2 gene mutations with human osteoporosis.     

不同剂量己烯雌酚对新生小鼠睾丸表皮生长因子及受体的影响

目的 观察不同剂量己烯雌酚(DES)对新生小鼠睾丸组织中表皮生长因子(EGF)及其受体(EGFR)的影响,探讨DES对睾丸发育影响的机制.方法 建立小鼠DES模型.将72只怀孕的雌性昆明小鼠随机分成3组:正常组、对照组及实验组1～4(DES 10、25、50、100 μg/kg).采用免疫组织化学方法检测各组新生小鼠睾丸组织中EGF、EGFR的表达.结果 EGF和EGFR主要表达在新生小鼠睾丸的间质细胞.实验组1～4中EGF阳性细胞的累积吸光度值(IA)分别为75.43±1. 42、52.22±5.67、13.75±3.14、6.38±3.20,显著低于正常组及对照组中阳性细胞的IA值433.88±11.64、23.44±4.70;实验组EGFR阳性细胞的IA值分别为198.16±34.35、138.00±12.04、46.03±6.74、27.22±5.52,显著低于正常组及对照组中阳性细胞的IA值804.74±22.52、800.03±21.96.两者在正常、不同剂量DES实验组的两两比较差异有统计学意义(P＜0.05).随DES剂量增加,EGF和EGFR表达减弱,各组间差异有统计学意义(P＜0.05).EGF与EGFR呈强正线性相关(r=0.750,P＜0.01).结论 不同剂量DES对新生小鼠睾丸组织中EGF和EGFR表达强度均有影响,可能是影响睾丸发育机制之一.

Abstract：

Objective To investigate the effects of prenatal exposure to diethylstilbestrol (DES)with different dosages on epidermal growth factor (EGF) and epidermal growth factor receptor (EGFR) in offspring mice testis, and the possible mechanism. Methods DES model was induced in mice by DES.Female Kungmiag mice were randomly divided into normal group, control group and experimental groups 1-4 ( DES 10, 25, 50, 100 μg/kg). Immunohistochemistry was applied to detect the expression of EGF and EGFR in the testicular tissue in each group. Results EGF and EGFR were expressed mainly in sffspring mice testis Leydig cells. The cumulative absorbance ( IA ) values of EGF positive cells in experimental groups 1-4 were 75. 43 ± 1.42, 52. 22 ± 5.67, 13.75 ± 3. 14, and 6. 38 ± 3.20 respectively, which were significantly lower than in normal and control groups (433.88 ± 11.64,423.44 ±4. 70 respectively).The IA values of EGFR positive cells in experimental groups 1-4 were 198. 16 ± 34. 35, 138.00 ± 12.04,46.03 ± 6. 74, 27.22 ± 5.52 respectively, which were significantly lower than in normal and control groups (804. 74 ± 22. 52,800. 03 ± 21.96 respectively). The expression levels of EGF and EGFR could be detected in each subgroup and statistically significant differences existed in the expression of EGF and EGFR between any two groups ( P ＜ 0. 05 ). With the increase of DES dosage, the expression of EGF and EGFR was decreased, with the difference being significant amond the groups ( P ＜ 0. 05 ). Conclusion DES can influence the expression of EGF and EGFR in mice testis, which might be one of possible mechanisms effecting the development of testis.     

mRNA DC疫苗对肝癌细胞增殖周期影响的实验研究

目的 探讨mRNA DC疫苗对肝癌细胞增殖周期的影响,为mRNA疫苗免疫治疗肝癌提供新的实验依据和理论基础.方法 采用粒/巨噬细胞集落刺激因子(GM-CSF)和白介素-4(IL-4)联合培养、扩增鼠骨髓来源DC,以阳离子脂质体转染Hepal-6mRNA入DC,制备mRNA DC疫苗,流式细胞术检测疫苗对体外培养的肝癌细胞周期以及体内种植瘤组织细胞周期的影响;免疫组织化学检测肿瘤细胞增殖核抗原(PCNA).结果 mRNA DC疫苗处理后的肝癌细胞周期比例为G0/G1间期(75.09±3.41)%,S间期(16.93±1.57)%,GO/M间期(7.98±1.83)%,与对照组比较,差别有显著性意义(P＜0.05);荷瘤鼠疫苗组肿瘤细胞增殖指数为(24.91±3.41),与对照组比较,差别有统计学意义(P＜0.05);PCNA实验组阳性表达率为(27.7±10.3)%,与对照组比较,差异有显著性意义(P＜0.05).结论 mRNA DC疫苗可影响肿瘤细胞的分裂周期,减缓细胞的生长,显著抑制肿瘤细胞增殖.     

体外调节Th1/Th2平衡治疗脑胶质瘤

目的 观察外源性细胞因子白细胞介素( IL)-2、干扰素(IFN)-γ和IL-4单克隆抗体(McAb)、IL-10 McAb在体外能否促使Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转,抑制胶质瘤细胞生长。方法 体外培养大鼠C6胶质瘤细胞,加入外源性细胞因子共同孵育,光学显微镜观察细胞形态学变化,噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞增殖抑制率,逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测Th1/Th2类细胞因子表达变化。结果 实验组较对照组细胞体积变小,生长密度低,细胞数目少;实验组与对照组比较细胞增殖抑制率分别为(26.41 ±3.60)％,其A值与对照组比较差异有统计学意义(P＜0.05)。对照组细胞只表达Th2类细胞因子,Th1类细胞因子表达缺如,实验组IFN-γ表达增加,IL-4和IL-10表达减弱,但是未见IL-2表达。结论 外源性细胞因子能够抑制脑胶质瘤细胞的生长,促进Th2型细胞因子分泌优势向Th1型逆转。     

三磷酸腺苷促进肌源性干细胞增殖的作用及机制研究

目的 研究三磷酸腺苷(ATP)促进肌源性干细胞(MDSCs)增殖的作用机制.方法 采用差速贴壁法分离出小鼠MDSCs,将细胞分为两组:实验组(100 μmol/L ATP)和对照组,观察MDSCs的生长情况,用流式细胞仪检测细胞周期,RT-PCR检测MDSCs中ATP受体的表达.结果 ATP作用3d后,实验组的细胞数显著多于对照组.与对照组相比,实验组的G1％(处于G1期的细胞百分率)降低,S％(处于S期的细胞百分率)和PrI值(增殖指数)升高.实验组MDSCs各亚周期(G1期、S期和G2M期)时间分别为21.5 h、4.4h和10.8 h,对照组MDSCs各亚周期时间分别为27.1h、9.6h和13.5 h.与对照组相比,实验组细胞G1期和S期明显缩短.ATP作用后,小鼠MDSCs中P2Y1受体表达显著升高,在3d时达到最高水平,之后开始下降,但仍然维持高水平.结论 ATP上调MSCs中P2Y1受体的表达,缩短G1期和S期,促使细胞从G1期进入S期,从而刺激MDSCs增殖.     

血管内皮细胞生长因子促进肝内胆管细胞癌生长的机制研究

目的探究血管内皮细胞生长因子（VEGF）及其受体对肝内胆管细胞癌（ICC）细胞生长调控的作用机制。 方法Western blotting检测VEGF在12例ICC患者肿瘤组织和癌旁正常组织中的表达水平。采用外源性重组人源VEGF（rhVEGF）处理ICC细胞株Huh28后,采用细胞计数检测细胞生长情况,5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU）实验检测细胞增殖,流式细胞术检测细胞凋亡。Western blotting检测rhVEGF处理后Huh28细胞中VEGF受体VEGFR1及VEGFR2的表达情况。使用特异性抗体分别阻断VEGFR1及VEGFR2,通过ELISA法检测细胞的凋亡水平。采用慢病毒shRNA构建稳定敲低VEGFR2的ICC细胞株Huh28-shVEGFR2（实验组）和对照细胞株Huh28-shNC（对照组）。采用Huh28-shVEGFR2及Huh28-shNC细胞在10只裸鼠中构建皮下瘤模型,观察肿瘤的生长情况。 结果VEGF在ICC肿瘤组织中蛋白表达水平上调,显著高于癌旁正常组织（P<0.01）。外源性rhVEGF可以促进Huh28细胞生长,抑制细胞凋亡,而对细胞增殖能力无明显影响。rhVEGF处理后Huh28细胞中磷酸化的VEGFR1及VEGFR2表达水平升高（P<0.05）。VEGFR2抗体可以显著逆转rhVEGF介导的抗凋亡作用（P<0.05）,而VEGFR1抗体则无明显效果。皮下瘤模型结果显示,与对照组相比,肿瘤生长在实验组中受到显著抑制,差异有统计学意义（P<0.05）。 结论VEGF是通过VEGFR2依赖的信号通路抑制ICC细胞凋亡,从而促进ICC细胞生长。