Apoptin基因活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡

为研究肿瘤细胞凋亡基因（apoptingene）诱导人黑素瘤细胞系A375凋亡时是否通过活化easpase-3发挥作用，用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人黑素瘤细胞A375；采用RT-PER、DNA凝胶电泳、流式细胞术检测A375细胞的凋亡；以比色法检测easpase-3的相对活性。结果表明，apoptin基因短时转染的A375细胞可出现典型的细胞凋亡所具有的DNA梯状带；流式细胞术显示实验组细胞凋亡率明显高于其它各组（P〈0．01）；转染后24h实验组caspase-3的活性开始升高，72h达高峰，明显高于其它各组（P〈0．01）。结论：apoptin基因可活化caspase-3诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。     

肿瘤特异性凋亡基因对人淋巴瘤细胞U937的凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因（apoptin gene）对人淋巴瘤细胞U937的调亡诱导作用，用含有apoptin基因的真核表达载体短时转染体外培养的人淋巴瘤细胞U937；采用台盼蓝染色法、RT-PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人淋巴瘤细胞U937诱导凋亡的作用。结果表明，apoptin基因短时转染的人淋巴瘤细胞U937可出现明显的细胞凋亡；而且凋亡细胞的数量与apoptin的转染时间有关。结论：apoptin基因具有诱导人淋巴瘤细胞U937凋亡的作用。     

肿瘤特异性凋亡基因对人黑色素瘤细胞A375凋亡诱导作用

为观察肿瘤特异性凋亡基因(apoptingene)对人黑色素瘤细胞A375的凋亡诱导作用，用含有凋亡基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑色素瘤细胞A375，采用台盼蓝染色法、RT—PCR及DNA凝胶电泳等方法研究其在不同时间条件下对人黑色素瘤细胞A375诱导凋亡的作用。结果表明，凋亡基因瞬间转染的人黑色素瘤细胞A375可出现明显的细胞凋亡；而且滴亡细胞的数量与转染时间有关。结论：凋亡基因具有诱导人黑色素瘤细胞A375凋亡的作用。     

肿瘤特异性凋亡基因诱导A375细胞凋亡信号转导机制研究

为研究肿瘤特异性凋亡基因(apoptin)在诱导人黑素瘤细胞A375凋亡中的信号转导机制,用含有apoptin基因的真核表达载体瞬间转染体外培养的人黑素瘤细胞A375;采用流式细胞术检测A375细胞的凋亡;以比色法检测caspase-8和caspase-3的相对活性;Western印迹检测凋亡细胞中细胞色素C的表达量。结果表明,Apoptin基因瞬间转染的A375细胞凋亡率明显高于其他各组(P<0·01);caspase-3的活性升高,但caspase-8活性没有明显变化;细胞色素C释放量明显增多。结论:Apoptin基因可能通过促进线粒体释放细胞色素C激活caspase-3,进而诱导人黑素瘤细胞A375凋亡。     

肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体诱导人脑胶质瘤细胞凋亡作用的研究

目的研究肿瘤坏死因子相关凋亡诱导配体（TRAIL）受体在不同级别胶质瘤中的表达及TRAIL对原代培养的胶质瘤细胞凋亡的诱导作用。方法应用原位杂交的方法检测TRAIL受体在45例胶质瘤和5例正常脑组织中的转录表达；分别对其中22例和3例进行原代培养，用流式细胞仪检测TRAIL作用后细胞的凋亡率。结果在45例胶质瘤中，DR4、DR5、DcR1、DcR2的mRNA的表达例数分别为38例、41例、40例、2例。成功培养出18例胶质瘤细胞和3例正常胶质细胞，TRAIL作用后凋亡率在80％以上、50％～80％、50％以下的例数分别为5例、9例、4例，正常胶质细胞无明显凋亡发生。结论TRAIL受体的表达与肿瘤的恶性程度无关；TRAIL能有效地选择性杀死胶质瘤细胞。     

三七总皂苷对缺氧诱导下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的 探究三七总皂苷对缺氧状态下视网膜神经节细胞凋亡的作用机制.方法 将细胞分为5组:对照组(细胞未处理组)、模型组(400μmol·L-1氯化钴作用24 h建立缺氧模型)和低、中、高3个剂量实验组(2,10,50μg·mL-1三七总皂苷预处理6 h后,加入400μmol·L-1氯化钴作用24 h).实时荧光定量聚合酶...     

藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其机制研究

目的 研究藁本内酯对帕金森病细胞模型的保护作用及其作用机制。方法 取对数生长期的SK-N-SH细胞使用200μmol·L^-1的MPP⁺处理48 h,构建帕金森病细胞模型;以正常培养基培养的细胞作为对照组。藁本内酯组加入终浓度为30.0μmol·L^-1藁本内酯进行培养;P79350组加入30.0μmol·L^-1的藁本内酯后,实验结束前1 h加入50μmol·L^-1的P79350处理细胞;对照组和MPP⁺组加入不含药物的培养基培养。用细胞计数试剂盒-8(CCK-8)检测细胞活力;以流式细胞术检测细胞周期情况和细胞凋亡率;以蛋白质印迹法检测p38丝裂原活化蛋白激酶/c-Jun氨基末端激酶(p38 MAPK/JNK)信号通路和增殖、凋亡相关蛋白的表达水平。结果 对照组、MPP⁺组和10.0、20.0、30.0、50.0、100.0和200.0μmol·L^-1藁本内酯组的细胞存活率分别为(100.00±1.91)%、(35...     

吗啡对急性心肌缺血大鼠的作用及机制研究北大核心CSCD

目的研究吗啡对急性心肌缺血大鼠心肌损伤的影响及其机制。方法按照体重将SD大鼠随机分为3组:假手术组、模型组、实验组,每组20只。以诱导局部心肌缺血再灌注法建立大鼠急性心肌损伤模型。在大鼠心肌缺血模型再灌注后,实验组大鼠静脉注射吗啡3 mg·kg^(-1),每天1次,连续5 d;假手术组和模型组静脉注射等量生理盐水。通过超声心动图确定射血分数和左心室缩短分数,氯化三苯基四氮唑(TTC)法检测心肌梗死面积,酶联免疫吸附实验检测大鼠血清中乳酸盐脱氢酶(LDH)、超氧化物歧化酶(SOD)和丙二醛(MDA)的含量,末端标记(TUNEL)染色法检测心肌细胞凋亡,蛋白质印迹法检测心肌组织中磷酸化的JNK(p-JNK)、磷酸化的p38(p-p38)的蛋白表达。结果假手术组、模型组、实验组大鼠心肌射血分数分别为(81.21±2.14)%,(42.56±3.84)%和(61.43±4.89)%;这3组大鼠左心室缩短分数分别为(67.51±5.14)%,(40.11±3.55)%和(50.18±4.78)%;这3组大鼠心肌梗死面积分别为(5.01±0.18)%,(57.34±3.64)%和(23.78±1.98)%;这3组大鼠血清中LDH的含量分别为(5.34±0.26),(28.79±1.67)和(15.64±1.24)nmol·mL^(-1);这3组大鼠血清中MDA的含量分别为(0.78±0.04),(1.89±0.14)和(1.13±0.10)nmol·mL^(-1);这3组大鼠血清中SOD的含量分别为(10.59±0.98),(3.85±0.27)和(6.52±0.43)U·mL^(-1);这3组细胞凋亡率分别为(10.21±0.98)%,(34.65±2.89)%和(26.46±2.34)%;这3组p-JNK蛋白水平分别为0.26±0.02,0.68±0.06和0.35±0.03;这3组p-p38蛋白水平分别为0.31±0.03,0.79±0.07和0.42±0.04。上述指标:模型组与假手术组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05);实验组与模型组比较,差异均有统计学意义(均P<0.05)。结论吗啡可减轻急性缺血大鼠的心肌损伤,其机制与抑制JNK/p38信号通路相关。     

穗花牡荆成熟果实提取物对人正常及肿瘤细胞的细胞毒活性和诱导细胞凋亡的作用

作者研究了穗花牡荆Vitex agnus-castus果实乙醇提取物对2种人非肿瘤细胞株(子宫颈成纤维细胞HCF和人胎儿成纤维细胞HE-21)及6种人癌细胞株(MCF-7、SKG-3a、SKOV-3、KATO-Ⅲ、COLO 201和Lu-134-A-H)的细胞毒活性。以XTT染料还原试验研究提取物对对数生长期及停滞期细胞的毒性;用琼脂糖凝胶电泳法分析DNA断裂;用蛋白质印迹法     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨苦马豆素(swainsonine,SW)体外诱导人胃癌细胞株SGC-7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC-7901细胞的作用浓度;通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53,c-myc,Bcl-2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC-7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式;同时利用激光共聚焦显微镜监测细胞内Ca~(2+)浓度,研究SW与细胞内Ca~(2+)超载的关系。结果:SW体外抗SGC-7901细胞的完全致死浓度为6．2μg·mL~(-1),高于0．05μg·mL~(-1)时抑制作用明显(P＜0．05),其IC_(50)为0．84μg·mL～(-1);经SW 0．5,1．5,4．5μg·mL~(-1)处理24h可引起凋亡抑制基因p53和Bcl-2的明显下降,凋亡促进基因c-myc明显升高以及肿瘤细胞内Ca~(2+)超载,最终诱导SGC-7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。     

苦马豆素诱导人胃癌细胞SGC-7901凋亡作用机制的实验研究

目的:探讨SW体外诱导人胃癌细胞株SGC7901凋亡的机制。方法:应用MTT法确定SW对体外培养的SGC7901细胞的作用剂量,通过流式细胞术及凋亡相关调控基因p53、cmyc、Bcl2的检测对细胞凋亡及细胞周期的测定,观察SW对胃癌细胞SGC7901增殖周期的影响以及抑制肿瘤细胞增殖的方式,同时利用激光共聚焦显微镜对细胞内Ca2 浓度的监测,研究SW与细胞内Ca2 超载的关系。结果:SW体外抗SGC7901细胞的完全致死剂量为6.2μg·ml-l,高于0.05μg·ml-l时抑制作用明显(P<0.05),其LC50为0.84μg·ml-l;经SW0.5～1.5μg·ml-l处理24h可引起凋亡抑制基因p53、Bcl2的明显下降、凋亡促进基因cmyc的明显升高以及肿瘤细胞内Ca2 超载,最终诱导SGC7901细胞凋亡。实验还证实SW主要作用于肿瘤细胞的S期,使瘤细胞主要积聚在S期。结论:SW通过多种途径诱导细胞凋亡可能是其发挥抗癌作用的重要机制。     

丹酚酸 A对脂多糖诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制研究

目的探究丹酚酸 A对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)诱导人肾小球系膜细胞凋亡的作用机制。方法该研究起止时间为 2018年 5月至 2019年 5月。购买华拓生物生产的 HGMC人肾小球系膜细胞,分为 A组、 B组、 C组、 D组、 E组五组, A组细胞不添加任何药物, B组、 C组、 D组、 E组细胞均加入 10 mg/L LPS培养, 1h后 C组、 D组、 E组分别加入低剂量丹酚酸 A(10 mg/L)、中剂量丹酚酸 A(20 mg/L)、高剂量丹酚酸 A(40 mg/L)处理 24 h后做后续试验。检测细胞增殖、凋亡、细胞周期分布以及磷脂酰肌醇 3激酶(PI3K)/蛋白激酶 B(protein kinase,AKT)/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路指标表达量。结果与 A组相比, B组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率降低, S期、 G2/M期细胞分布率升高;与 B组相比, C组、 D组、 E组 G0/G1期细胞分布率、细胞凋亡率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低;与 C组相比, D组、 E组细胞凋亡率、 G0/G1期细胞分布率升高, S期、 G2/M期细胞分布率降低(均 P<0.05);与 D组相比, E组细胞凋亡率(37.59±4.62)%、G0/G1期细胞分布率(86.95±11.62)%升高, S期、 G2/M期细胞分布率分别为     

小檗碱对高糖诱导足细胞凋亡的干预作用及其相关调控机制研究

目的研究高糖对小鼠肾小球足细胞凋亡的影响及其特点,探讨小檗碱对高糖诱导足细胞凋亡的干预作用及可能机制。方法体外培养小鼠肾小球足细胞,观察足细胞在不同浓度高糖和不同培养时间的形态学变化,CCK-8法测定足细胞的活性,Hoechst染色、Annexin V-FITC/PI双染法检测足细胞的凋亡水平,激光共聚焦显微镜观察caspase-3的表达,Western blot法检测caspase-3、6、7、8、9与Bcl-2的表达。结果高糖(15、20、25、30 mmol·L~(-1))培养分别在72、48、36、24 h时诱发足细胞凋亡;小檗碱能增加高糖培养的足细胞活力,明显减少高糖诱导的足细胞凋亡,不同程度的下调高糖诱导的caspase-3、6、7、8和9的表达,提高Bcl-2表达。结论研究不同高糖环境在不同时间诱发足细胞凋亡的特点,为进行足细胞凋亡与肾脏损伤的干预治疗提供重要的时间参考;小檗碱缓解高糖诱发的足细胞凋亡,其作用机制可能与caspase-8/caspase-3和Bcl-2/caspase-9/caspase-3凋亡通路相关。     

川芎嗪注射液对高眼压大鼠视网膜神经节细胞凋亡的作用机制研究

目的 观察川芎嗪注射液通过磷脂酰肌醇-3激酶/丝氨酸-苏氨酸蛋白激酶/哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(PI3K/Akt/mTOR)通路对高眼压大鼠模型视网膜神经节细胞凋亡的影响.方法 用前房注射羟丙基甲基纤维素的方法建立高眼压大鼠模型.按照体重将造模成功大鼠随机分为4组:模型组、川芎嗪组、激动剂组和抑制剂组;另取10只正常大鼠...     

铁树提取物对人肺腺癌细胞凋亡的诱导及相关机制的初步研究

目的探讨中药铁树提取物(Cvcas revolute Thunb extracts,CTE)对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响及其相关机制.方法应用四氮唑盐(MTT)法观察CTE对A549细胞增殖的影响,采用Gimsa染色和吖啶橙(AO)/澳化乙锭(EB)荧光染色观察细胞凋亡形态学变化;流式细胞术和琼脂糖凝胶电泳方法检测A549细胞凋亡、细胞周期变化;逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测凋亡基因Bcl-2,Bax和Caspase-3 mRNA水平表达的变化.结果CTE可以抑制A549细胞增殖.经CTE作用后,A549细胞出现明显的细胞凋亡形态学变化;细胞DNA琼脂糖凝胶电泳呈现特征性的DNA降解梯形条带;A549细胞被阻滞在G2-M期,细胞凋亡率可达34.37％.CTE可抑制A549细胞Bcl-2和Caspase-3mRNA的表达,促进Bax mRNA的表达.结论CTE能明显诱导A549细胞凋亡,其机制之一可能是改变与凋亡相关基因的表达.     

核因子-κB抑制剂联合核因子E2相关因子2抑制剂对人结肠癌HCT116细胞凋亡的作用机制研究

目的探究核因子κB（NF-κB）抑制剂（BAY11-7082）联合核因子E2相关因子2（Nrf2）抑制剂（ML385）对人结肠癌细胞HCT116的作用机制。方法体外培养人结肠癌细胞HCT116,将细胞分为4组:空白对照组、NF-κB抑制剂组、Nrf2抑制剂和联合组。空白对照组以RPMI-1640培养基进行培养,NF-κB抑制剂组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082干预,Nrf2抑制剂组以5μmol·L^-1 ML385干预,联合组以10μmol·L^-1 BAY 11-7082+5μmol·L^-1 ML385干预,干预时间为24 h。MTT法检测人结肠癌细胞HCT116增殖抑制率,以流式细胞术和Hoechst 33342染色法检测细胞凋亡状况,以蛋白质印迹法检测凋亡相关蛋白及Nrf2、NF-κB通路相关蛋白表达水平。结果 ML385、BAY 11-7082均能显著抑制人结肠癌细胞HCT116增殖（均P<0.05）;干预24 h,空白对照组、Nrf2抑制剂组、NF-κB抑制剂组和联合组的细...     

肾气丸对缺血再灌注损伤小鼠肾细胞凋亡的作用及机制研究

目的探讨肾气丸在小鼠肾缺血再灌注( I/R)诱导的急性肾损伤中的作用及机制。方法研究时间为 2018年 4—7月。健康雄性 C57BL6小鼠 40只,利用随机数字表法分为 4组(每组 10只):①假手术组; ②肾缺血再灌注组(肾 I/R组); ③肾气丸低剂量组; ④肾气丸高剂量组。分组后肾气丸低剂量组每天给予 10.5 g/kg的肾气丸灌胃,肾气丸高剂量组每天给予 21.0 g/kg的肾气丸灌胃,持续 2周;假手术组和肾 I/R组每天给予等量生理盐水灌胃。 2周后构建肾 I/R损伤模型, 24 h处死小鼠并取材。检测血清肌酐( Scr)、尿素氮( BUN)及肾脏组织中丙二醛( MDA)含量和超氧化物歧化酶( SOD)的活性; HE染色及 TUNEL染色检测肾组织损伤及凋亡水平; PCR及免疫组化检测 B淋巴细胞瘤 ?2(Bcl?2)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase?3)表达水平;蛋白质印迹法检测 PI3K和 AKT蛋白表达水平。结果 HE及 TUNEL染色表明,与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量和高剂量组小鼠肾细胞组织损伤程度减轻,肾小管的上皮细胞肿胀、脱落及凝固坏死等病变损伤减轻,高剂量组较低剂量组损伤程度更轻,明肾气丸可抑制细胞损伤及凋亡。与假手术组中 Scr(135.65±11.21)μmol/L、BUN(8.37±1.80)mmol/L、MDA(3.75±0.33)mmol/L、说SOD(175.69±16.29)U/mL、Caspase?3(0.45±0.06)、 Bcl?2(1.96±0.18)、 PI3K(0.81±0.09)和 AKT(0.86±0.11)蛋白相对表达水平检测指标比较,肾 I/R组 Scr(413.47±36.68)μmol/L、BUN(67.45±8.40)mmol/L、MDA含量( 13.21±1.39)mmol/L、Caspase?3水平(1.76±0.19)均升高( P＜0.05),SOD活性( 79.36±7.04)U/mL、Bcl?2水平( 0.61±0.09)、 PI3K(0.09±0.01)和 AKT(0.11±0.01)蛋白相对表达水平明显下降( P＜0.05);与肾 I/R组比较,肾气丸低剂量组 Scr(308.32±17.36)μmol/L、BUN(43.32±4.82)mmol/L和 MDA(11.37±1.02)mmol/L、Caspase?3水平( 1.35±0.16)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 95.61±9.71)U/mL、Bcl?2(0.94±0.11)、 PI3K(0.23±0.02)和 AKT(0.27±0.03)蛋白相对表达水平明显升高( P＜0.05);肾气丸高剂量组 Scr(225.59±21.05)μmol/L、BUN(20.63±2.77)mmol/L和 MDA(5.57±1.04)mmol/L、Caspase?3水平( 0.89±0.11)均降低( P＜0.05),而 SOD活性( 145.72±14.68)U/ mL、Bcl?2(1.52±0.16)、 PI3K(0.45±0.05)和 AKT(0.53±0.06)蛋白相对表达水平也明显升高( P＜0.05);与肾气丸低剂量组比较,肾气丸组高剂量组 Scr、BUN和 MDA含量、 Caspase?3水平均降低( P＜0.05)SOD活性、 Bcl?2水平、 PI3K和 AKT蛋白表达均升高(P＜0.05)。结论肾气丸可通过激活 PI3K/AKT信号通路对小鼠 I/R诱导的急性肾损伤起保护作用。     

5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞应激损伤的保护作用

目的探究5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导转染人APP695基因的SH-SY5Y细胞(APPsw细胞)氧化应激损伤的保护作用。方法将APPsw细胞传代培养24 h后,加入不同浓度(0.01,0.1,1.0和10μmol·L~(-1))的A7预处理24 h,再加入200μmol·L~(-1)过氧化氢(H_2O_2)继续培养24 h,用MTT法检测细胞活性,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。结果 5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7可剂量依赖性地增加过氧化氢处理后的细胞活力,经不同浓度的A7预处理后,加过氧化氢处理组的细胞活性明显低于对应单独A7处理组的细胞活性,但均高于单独过氧化氢处理组的细胞活性,差异具有统计学意义(P<0.05)。经不同浓度A7预处理后,加过氧化氢处理组与过氧化氢组比较细胞核中荧光显著变暗。过氧化氢组细胞早凋率为42.4%,A7(0.01,0.1,1.0和10μmol·L~(-1))预处理24 h后加过氧化氢处理组细胞早凋率分别为22.7%,19.9%,16.4%和15.9%,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论 5-取代-1-氮杂蒽醌类衍生物A7对过氧化氢诱导APPsw细胞的氧化应激损伤具有保护作用,可抑制细胞凋亡。