湖北蕲春产凹叶厚朴质量研究(Ⅰ)

目的:研究湖北蕲春产凹叶厚朴的质量.方法:采用高效液相色谱法测定湖北蕲春产凹叶厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量,并与其它不同产地、品种厚朴样品进行比较.结果:蕲春凹叶厚朴的厚朴酚与和厚朴酚含量较低,但符合药典规定.结论:本研究为湖北蕲春产凹叶厚朴药材的品质鉴定提供了依据.     

基于核磁共振技术比较厚朴与凹叶厚朴醇提物的化学成分

目的:运用核磁共振手段研究并比较厚朴与凹叶厚朴醇提物的化学成分.方法:采用Bruker AVANCE 500Ⅲ型超导脉冲傅里叶变换核磁共振波谱仪,测试两者1H-NMR、13C-qNMR、DOSY谱.1H-NMR的工作频率为500.13 MHz,谱宽为50000.50 Hz.13C-qNMR采集条件:反转门控去耦脉冲序列zgig,扫描次数NS=8192,谱宽SW=230 ppm.DOSY采用标准脉冲程序LEDBPG2S采集,采样温度为298 K,时域点数为4096,采样延迟时间为1.5 s,扫描次数为8,空扫次数为4,梯度持续时间为1.6 ms,线性梯度变化区间为2％～95％.测试溶剂:氘代甲醇.结果:厚朴醇提物的主要成分是厚朴酚,根据氢信号积分值估测含量在90％以上.微量的次要成分为和厚朴酚.凹叶厚朴醇提物的主要成分是和厚朴酚与厚朴酚,前者占比稍多,根据氢信号积分值,估测它们的相对含量约为60％:40％.需要特别指出的是,与厚朴醇提物有所不同,凹叶厚朴醇提物的核磁图谱中还可见微量的酚苷类成分.结论:厚朴、凹叶厚朴主要成分存在显著差异.可以对厚朴、凹叶厚朴进行鉴别和区分.     

不同树龄三种厚朴中厚朴酚与和厚朴酚含量的研究

在依据树皮年轮鉴定厚朴年龄的基础上,应用高效薄层扫描法,对不同生长年限的厚朴、凹叶厚朴、大叶木兰中所含厚朴酚、和厚朴酚的动态分布进行了含量测定,为道地药材的质量评价及合理采收提供了参考。     

种源、产地及采收树龄对厚朴药材质量的影响

目的:以厚朴酚类和挥发油类成分为指标,对影响厚朴药材质量的因素进行分析.方法:以厚朴和凹叶厚朴主产区所产的不同树龄厚朴/凹叶厚朴为研究对象,用水蒸汽蒸馏法提取样品中的挥发油,以气相色谱-质谱联用技术对挥发油进行指纹图谱定性和β-桉叶醇含量测定;采用高效液相色谱技术,对厚朴酚类成分进行指纹图谱定性和含量测定.结果:厚朴和凹叶厚朴的液相色谱指纹图谱有7个相同的特征峰,气相色谱-质谱图谱中有20个相同的特征峰.厚朴样品中厚朴总酚的含量均达到药典要求.同产地不同树龄厚朴/凹叶厚朴样品中厚朴总酚的含量差别不大.湖北恩施产厚朴中厚朴总酚的含量较其他产地厚朴样品高,浙江丽水产凹叶厚朴中厚朴总酚的含量较其他产地凹叶厚朴样品低.厚朴中和厚朴酚与厚朴酚的比例基本上大于0.7,凹叶厚朴基本上小于0.7.厚朴中和厚朴酚质量分数(平均值2.89%)明显比凹叶厚朴(平均值0.78%)高.在挥发油方面,树龄小的厚朴和凹叶厚朴样品中β-桉叶醇含量较树龄高者少.结论:产地和生长年限的不同对厚朴质量影响不大,种源是影响厚朴药材质量的主要因素.     

厚朴道地性研究进展

中药厚朴临床应用广泛,以其为原料的中成药配方达200种以上。厚朴的基原植物厚朴Magnolia officinalis与凹叶厚朴M. officinalis var. biloba分布在西起四川东至浙江,北起陕西南至广西的广大地区。该文从厚朴道地药材本草考证、药材原植物和性状、分子遗传变异、化学成分、药理作用等方面,对厚朴道地性研究的现状进行了综述,形成了如下观点:①根据原植物叶形特点和遗传研究结果,建议将厚朴原植物分为3个地理宗;②各产地厚朴中厚朴酚、和厚朴酚、木兰苷A、木兰苷B、木兰花碱、β-桉叶醇的含量存在差异;③产于湖北、四川的厚朴商品习称"川厚朴",传统上被认为是厚朴的道地药材,其中,湖北恩施厚朴在遗传上具有的纯化单倍型可能是厚朴道地性的一个遗传标志。     

施肥、修剪等措施对凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量累积的影响△

目的：提高凹叶厚朴的品质,缩短生产周期,为凹叶厚朴种植提供科学参考依据。方法：本次实验通过采用施肥、修枝、环割、铁丝环扎对凹叶厚朴进行处理,采用HPLC测定两年后厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量,计算总酚含量增长率。结果：凹叶厚朴中总酚含量累积增长（Y）与肥料中的氮肥、磷肥正相关,与钾肥负相关,回归方程为:Y=1.804+2.470N+2.746P-15.616K（r=0.982）。修枝处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增长了310%,环割处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了125.65%,铁丝环扎处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了343.2%,而同期的空白组中凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了84.62%。实验结果显示不同栽培措施的效果由大到小的顺序是：铁丝环扎>修枝>环割。结论：凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量的积累可以通过改变土壤的肥力、环割、修枝等栽培措施得以提高。     

厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生态适宜性研究＊

通过实地调查和文献研究，了解厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的种植状况；采集45个野生分布点的海拔、经纬度数据，应用地理信息系统（GIS）提取各样点生境适宜度值，分析厚朴与凹叶厚朴在湖北地区的生长适宜性，为确定湖北区域内厚朴的适宜种植地提供科学依据。本研究结果表明，湖北西南部位于武陵山区的恩施地区及其周边适宜厚朴生长，适宜度值0.4~0.9；湖北东部位于大别山区的黄冈地区适宜凹叶厚朴生长，适宜度值0.8以上；湖北西北部位于武当山区的十堰地区，厚朴与凹叶厚朴均不适宜生长。     

凹叶厚朴细胞悬浮培养的研究

目的研究凹叶厚朴MagnoliaofficinalisRehd.etils.Subsp.biloba（Rehd.etwils.）Law的细胞悬浮培养。方法以凹叶厚朴茎段诱导的愈伤组织为材料,应用L9（34）正交设计研究植物生长调节剂对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响,通过单因素试验,考察初始接种量、蔗糖浓度、pH值对凹叶厚朴悬浮细胞生长的影响。结果植物生长调节剂6-BA是影响凹叶厚朴悬浮细胞生长的主要因素;最佳初始接种量为8ml;最佳蔗糖浓度为30g/L;最佳pH值为6.5时。结论初步建立了适合凹叶厚朴悬浮细胞培养的体系。     

施肥、修剪等措施对凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量累积的影响

目的：提高凹叶厚朴的品质,缩短生产周期,为凹叶厚朴种植提供科学参考依据。方法：本次实验通过采用施肥、修枝、环割、铁丝环扎对凹叶厚朴进行处理,采用HPLC测定两年后厚朴中厚朴酚、和厚朴酚的含量,计算总酚含量增长率。结果：凹叶厚朴中总酚含量累积增长（1,）与肥料中的氮肥、磷肥正相关,与钾肥负相关,回归方程为：Y=1．804＋2．470N＋2．746P-15．616K（r=0．982）。修枝处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增长了310％,环割处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了125．65％,铁丝环扎处理的凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了343．2％,而同期的空白组中凹叶厚朴中总酚的含量较前期增加了84．62％。实验结果显示不同栽培措施的效果由大到小的顺序是：铁丝环扎〉修枝〉环割。结论：凹叶厚朴中厚朴酚、和厚朴酚含量的积累可以通过改变土壤的肥力、环割、修枝等栽培措施得以提高。     

中药材厚朴的X射线衍射Fourier指纹图谱分析

目的:建立中药材厚朴的鉴定分析新方法.方法:采用粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法.结果:通过对3个中药材厚朴、3个凹叶厚朴、14个厚朴的代用品和习用品、1个伪品厚朴进行实验、分析,获得了中药材厚朴和凹叶厚朴的对照X射线衍射Fourier指纹图谱.结论:粉末X射线衍射Fourier指纹图谱鉴定法可用于中药材厚朴和凹叶厚朴的鉴定和识别.     

厚朴及姜厚朴乙酸乙酯提取部位对小鼠胃肠运动功能的影响

目的: 比较厚朴与姜厚朴乙酸乙酯提取部位对促进胃肠运动功能的药效. 方法: SPF级昆明种小鼠随机分为阴性(或模型)对照组、阳性药多潘立酮35 mg·kg^-1或雷尼替丁45.5 mg·kg^-1组和厚朴高、中、低剂量(0.678,0.452,0.226 g·kg^-1),姜厚朴高、中、低剂量(0.708,0.472,0.236 g·kg^-1)给药组,各组小鼠均连续ig 3 d,比较小肠推进率、盐酸性溃疡率、血清胃泌素含量. 结果: 厚朴和姜厚朴乙酸乙酯提取部位均能不同程度促进胃肠动力功能,在促进小肠推进率上,各给药组与阴性组有显著差异(P<0.05),与阳性药组无显著差异.在抑制溃疡上各给药组与模型组有显著差异(P<0.05).胃泌素含量厚朴低、中剂量与姜厚朴中剂量组血清胃泌素升高与阴性组存在显著差异(P<0.05). 结论: 姜厚朴与厚朴乙酸乙酯提取部位具有促进胃肠运动功能保护胃黏膜的作用,姜厚朴药效优于厚朴.     

厚朴酚类物质含量层次变异规律研究

目的:揭示厚朴种源间、家系间及家系内个体间酚类物质含量的变化规律,为厚朴良种选育提供依据。方法:以广西资源、湖北五峰及浙江景宁等3个厚朴主要产区种源的半同胞家系子代为材料,采用HPLC测定厚朴酚与和厚朴酚含量。结果:厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量种源间均存在极显著差异,均为湖北五峰种源最高,浙江景宁种源最低;种源内家系间、半同胞家系内单株间厚朴酚含量、和厚朴酚含量、酚类物质总量也存在显著差异,含量高的种源家系间、家系内变异也大,但厚朴酚含量与和厚朴酚的比值差异不显著。结论:厚朴酚类物质含量不仅在种源间存在显著差异,种源内家系间及家系内单株间也存在显著差异,且质量好的种源家系间变异更大,因此,根据厚朴种内酚类物质含量层次变异规律,厚朴良种选育应将种源选择赋于重要地位,建立种源、单株配合选择的遗传改良方法与程序。     

厚朴和凹叶厚朴对实验性胃肠动力障碍的药效作用差异研究

目的:比较厚朴和凹叶厚朴缓解实验性胃肠动力障碍的药效。方法:采用左旋精氨酸和硫酸阿托品诱导的鼠胃肠动力障碍模型。观察给予厚朴和凹叶厚朴水煎剂后炭末排出时间?胃内残留率、小肠推进率、血清D-木糖含量、血清胃动素(MTL)和胃泌素(GAS)含量的改变。同时应用Bliss法计算ED50。结果:厚朴和凹叶厚朴均能不同程度的缓解实验性胃肠动力障碍,降低胃内残留率、促进小肠推进率、增加血清D-木糖含量及血清MTL和GAS水平;并且按上述指标计算出2种药物的ED50,发现厚朴凹叶厚朴。结论:同凹叶厚朴相比,厚朴缓解胃肠运动功能障碍的作用较优。     

道地产区不同产地厚朴种子的电泳指纹图谱研究

目的:研究道地产区湖北恩施5个不同产地厚朴种子的十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)电泳图谱,以探索厚朴种子不同产地的鉴别方法,从而为厚朴的良种选育及种子质量评价提供依据.方法:应用SDS-PAGE方法比较不同产地厚朴种子的蛋白电泳图谱在谱带数目、谱带强度和相对分子质量等方面的差异.结果:5个产地的厚朴种子的电泳图谱存在明显产地差异.结论:该电泳方法可为厚朴种子的产地鉴别提供依据.     

厚朴叶质量双分子评价候选基因的筛选

该文将双分子标记法用于厚朴与凹叶厚朴木质素类成分的评价中,首先通过比较厚朴和凹叶厚朴化学成分,发现二者叶片中magnolignanⅠ的含量存在显著差异;然后进行厚朴与凹叶厚朴转录组测序,并选择与厚朴木质素类成分结构最相似的p-hydroxyphenyl lignin,进行生物合成关键酶基因挖掘。通过比较厚朴木质素类成分相关同源基因在厚朴和凹叶厚朴中的表达水平和结构变异,筛选获得1个编码肉桂醇脱氢酶基因片段作为厚朴木质素类成分双分子评价的候选标记,为进一步建立厚朴优劣双分子评价方法提供技术支撑。     

黔产宽叶缬草叶绿体trnL-F,matK基因遗传关系的分析

目的:探讨贵州省宽叶缬草在叶绿体基因trn L-F,mat K上的遗传关系。方法:利用trn L-F,mat K序列对宽叶缬草进行序列分析,运用Bioedit,MEGA 5.0软件计算贵州省宽叶缬草居群遗传距离,并进行聚类分析建立系统发育树。结果:不同居群宽叶缬草trn L-F序列长度为947~985 bp,鸟嘌呤和胞嘧啶质量分数为35.92%~36.55%,其中差异位点8个,变异位点5个,居群间的遗传距离为0.000 0~0.005 4,最小进化法(minimum-evolution,ME),最大似然法(maximum likelihood,ML),邻接法(neighbor-joining,NJ),非加权配对算数平均法(unweighted pair group method with arithmetic mean,UPGMA)4种聚类构树结果显示15(江口县官和乡泗渡村寨上组),18(江口县凯德镇育苗基地)号样品明显与大部分的宽叶缬草样品区分出来;不同居群宽叶缬草mat K序列长度为1 080~1 088 bp,鸟嘌呤和胞嘧啶质量分数为35.19%~36.64%,差异位点2个,变异位点1个,简约信息位点1个,居群间的遗传距离为0.000 0~0.000 9,ML,NJ,ME,UPGMA 4种聚类构树结果显示2(剑河县太拥乡太平村),5(剑河县岑松镇稿旁村),6(剑河县关么乡苗岭村),20(江口县闵孝镇渔凉溪村)号样品聚为一类,其余19份样品聚为一类。结论:贵州省宽叶缬草居群内trn L-F,mat K序列具有高度保守性。     

巴戟天的组织培养和多倍体诱导

目的:建立巴戟天组织培养再生体系,诱导培育出巴戟天多倍体.方法:以巴戟天的幼胚为外植体诱导出愈伤组织,再用不同浓度的秋水仙素处理愈伤组织,流式细胞仪检测染色体数.结果:以秋水仙素质量浓度为500 mg·L-1处理5d效果最好,多倍体诱导率可达18.4％,诱导培育出的巴戟天多倍体根肥大增粗.结论:以巴戟天的幼胚为外植体具有消毒容易、诱导率高、分化程度低的优点;诱导出的多倍体具有一定的推广应用价值.     

濒危植物厚朴种子萌发特性研究

目的:找出厚朴种子发芽的最佳基本适宜条件,从而为厚朴的规范化栽培提供一定的依据.方法:通过室内模拟试验,采用光照、温度、土壤含水量、不同水温浸种处理研究了不同处理对厚朴种子发芽率的影响.结果与结论:光照和黑暗处理的种子发芽率有显著差异,种子萌发表现为光敏性.在20～35℃,厚朴种子都能萌发,但萌发适宜温度为25,30℃,在此温度下的发芽率分别为59.2%,54.6%,最适温度为30/20℃变温,最大发芽率为65%.种子萌发最适宜土壤含水量为25%,发芽率为66.7%,萌发的适宜含水量在20%～25%.为改善种皮透水性,分别用40,60,80,90℃的温水浸种10 min,60℃温水浸种效果最好,并能有效地降低硬实率.水温过高会使种子发芽率受抑制.不同发芽基质对种子的发芽率有显著影响.     

巴戟天不同炮制品补肾壮阳作用的比较研究

为了比较巴戟天不同炮制品补肾壮阳药理作用,采用腺嘌呤灌胃给药的方法建立小鼠肾阳虚模型,分别给予巴戟天、巴戟肉、盐巴戟、制巴戟4种炮制品,以桂附地黄丸为对照,以小鼠体征、体重、睾丸系数、精囊腺系数、血清睾酮(T)、血清皮质醇(cortisol)、血清肌酐(Cr)、组织病理学检查等为评价指标。结果表明,各炮制品均可以改善肾阳虚小鼠的症状,其中盐巴戟组治疗效果最为显著,其次是制巴戟、巴戟肉、巴戟天。该实验结果可为阐明巴戟天炮制原理和补肾壮阳机制提供实验数据。