线粒体钙离子单向转运体对脑胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响

目的 研究线粒体钙离子单向转运体(MCU)对脑胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响,探讨MCU作为治疗胶质瘤新靶点的可能性。方法 Western印迹法和实时荧光定量PCR(RT-qPCR)检测脑胶质瘤干细胞(T456,T4121,T387和T3832)和胶质瘤细胞(U87和U251)中MCU蛋白和mRNA表达水平。构建短发夹RNA干涉阴性对照(shNT)、shMCU#1和shMCU#2质粒,利用磷酸钙转染法包装病毒,转染上述4种胶质瘤干细胞,分别获得该4种细胞的shNT、shMCU#1和shMCU#2细胞,并用RT-qPCR检测MCU敲低效果。将上述转染的细胞接种到96孔板中,于培养第0,2,4和6天用CellTiter-Glo?Luminescent细胞活力检测试剂盒检测细胞活力;第6天用成像显微镜观察每孔形成肿瘤球的大小并计数。用MCU抑制剂DS16570511 25和50μmol·L^-1处理脑胶质瘤干细胞(T456和T4121)、人神经干细胞(16157)和人星形胶质细胞(NHA),同时设溶剂对照(0.1%DMSO)组,于培养第0,2,4和6天检测细胞活力,第6...     

白消安对U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响

目的探究白消安对 U87胶质瘤干细胞增殖和自我更新的影响。方法培养 U87胶质瘤干细胞,分为四组, A组加入 200 μL含 5%胎牛血清的 DMEM/F12培养基, B、C、D三组分别加入 200 μL含 20、50、100 μmol/L白消安的 DMEM/F12培养基。比较四组细胞增殖情况［四甲基偶氮唑盐微量酶反应比色法( MTT法)］、细胞凋亡情况［即 B细胞淋巴瘤 /白血病 -2(Bcl-2)、Bcl-2相关 X蛋白( Bax)、半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶 3(Caspase-3)表达水平］,以及细胞周期。结果培养 24 h后,四组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度低于 A组( P＜0.05);培养 48 h、72 h后, B、C、D组 U87胶质瘤干细胞吸光度比较差异无统计学意义( P＞0.05)。 C组 U87胶质瘤干细胞 Bax、Caspase-3、 Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: CBax(0.38±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); CCaspase-3(0.45±0.02)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); CBax/Bcl-2(1.19±0.04)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: CBax(47.53±1.34)%比 ABax(39.81±4.02)%、BBax(39.51±1.37)%;CCaspase-3(65.17±2.34)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;CBax/Bcl-2(60.24±4.10)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］; D组 U87胶质瘤干细胞 Caspase-3、Bax/Bcl-2的吸光度值、阳性细胞表达率高于 A、B组,比较差异有统计学意义［吸光度值: DBax(0.37±0.01)比 ABax(0.46±0.04)、 BBax(0.41±0.01); DCaspase-3(0.28±0.01)比 ACaspase-3(0.54±0.01)、 BCaspase-3(0.47±0.02); DBax/Bcl-2(0.97±0.02)比 ABax/Bcl-2(1.36±0.01)、 BBax/Bcl-2(1.22±0.04);阳性细胞表达率: DCaspase-3(68.06±1.09)%比 ACaspase-3(54.42±1.34)%、BCaspase-3(49.16±2.31)%;DBax/Bcl-2(65.10±2.15)%比 ABax/Bcl-2(35.47±1.20)%、BBax/Bcl-2(37.41±4.12)%;P＜0.05］。 A组、 D组处于 G1期细胞分别占8.20%、3.22%,处于 G2 /M期细胞分别占 16.07%、12.18%,两组比较差异有统计学意义( P＜0.05); A组、 D组处于 G0/G1期细胞分别占 52.27%、58.85%,处于 S期细胞分别占 23.36%、35.75%,两组比较差异无统计学意义( P＞0.05)。结论白消安可抑制 U87胶质瘤干细胞的增殖,促进其凋亡,并且呈现一定量效关系;机制可能与白消安上调 Bcl-2、Bax、Caspase-3表达有关。     

微小RNA-301b-3p靶向第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源物对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响

目的 探讨微小RNA-301b-3p(miR-301b-3p)对骨肉瘤细胞增殖、凋亡的影响及其作用机制.方法 本研究起止时间为2019年3—9月.人成骨细胞(hFOB)和骨肉瘤细胞U2OS、MG63购自美国菌种保藏中心.U2OS细胞分为miRNA抑制物阴性对照(anti-miR-NC)组、miR-301b-3p抑制物(...     

血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白、胎球蛋白 A、白细胞介素 -6与腹膜透析相关感染程度的关联性及对预后的影响

目的探讨血清中性粒细胞明胶酶相关脂质运载蛋白( NGAL)、胎球蛋白 A(Fetuin A)、白细胞介素 -6(IL-6)与腹膜透析相关感染程度的关联性及对预后影响。方法选取社旗县妇幼保健院 2016年 8月至 2019年 4月腹膜透析相关感染病人 74例作为研究对象,根据 30 d预后情况分预后良好组( 43例)、预后不良组( 31例)。检测两组治疗前、治疗 7d后血清 NGAL、Fe. tuin A、IL-6水平、感染可能性( IPS)评分,动态观察上述血清指标与 IPS评分相关性, logistic回归分析腹膜透析相关感染预后影响因素,受试者工作特征( ROC)曲线分析血清 NGAL、Fetuin A、IL-6对预后不良预测价值,并以 Kaplan-Meier曲线分析生存情况。结果治疗 7d后,预后良好组血清 NGAL(542.06±95.34)μg/L、IL-6水平( 13.06±3.80)ng/L、IPS评分( 10.14±1.03)分低于预后不良组( 640.78±104.90)μg/L、(17.18±4.73)ng/L、(13.65±1.18)分, Fetuin A水平( 0.68±0.28)g/L高于预后不良组( 0.48±0.16)g/ L(P<0.05); IPS评分与血清 NGAL、IL-6呈正相关,与血清 Fetuin A呈负相关( P<0.05);透析龄、 NGAL、IL-6、IPS评分是腹膜透析相关感染预后的独立危险因素, Fetuin A是腹膜透析相关感染预后的保护因素( P<0.05); NGAL预测预后不良的曲线下面积(AUC)值为 0.809,大于 IL-6、Fetuin A;Kaplan-Meier曲线显示,血清 NGAL、IL-6、Fetuin A高危组、低危组生存曲线对比,差异有统计学意义( P<0.05)。结论腹膜透析病人血清 NGAL、IL-6水平变化与腹膜透析相关感染严重程度呈正相关, Fetuin A与感染程度呈负相关,动态监测 NGAL、Fetuin A、IL-6水平变化有助于预后评估及治疗。     

活血化瘀方对血清中 γ-干扰素诱导蛋白 -10、单核细胞趋化蛋白 -1、转化生长因子 -β1水平的影响及结核性胸膜炎疗效的研究

目的观察活血化瘀方治疗结核性胸膜炎对病人胸膜厚度及血清中 γ-干扰素诱导蛋白 -10(IP-10)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、转化生长因子 -β1(TGF-β1)水平的影响。方法收集新乡医学院第一附属医院 2017年 4月至 2019年 12月收治的结核性胸膜炎病人 104例,采用随机数字表法分为常规组及中医组,每组 52例。常规组给予胸腔穿刺抽液术 +抗结核药物治疗,中医组在常规组基础上加用活血化瘀方(血府逐瘀汤加减)治疗。治疗 8周后,比较两组治疗前后血清中细胞因子水平及胸膜厚度的变化,两组胸膜腔穿刺抽液次数、治疗总有效率和治疗期间不良反应情况。结果治疗 8周后,中医组总有效率     

Interactions of organophosphorus pesticides with solute carrier (SLC) drug transporters

1.?Organophosphorus pesticides (OPs) are known to interact with human ATP-binding cassette drug efflux pumps. The present study was designed to determine whether they can also target activities of human solute carrier (SLC) drug transporters.

2.?The interactions of 13 OPs with SLC transporters involved in drug disposition, such as organic cation transporters (OCTs), multidrug and toxin extrusion proteins (MATEs), organic anion transporters (OATs) and organic anion transporting polypeptides (OATPs), were mainly investigated using transporter-overexpressing cell clones and fluorescent or radiolabeled reference substrates.

3.?With a cut-off value of at least 50% modulation of transporter activity by 100?µM OPs, OAT1 and MATE2-K were not impacted, whereas OATP1B1 and MATE1 were inhibited by two and three OPs, respectively. OAT3 activity was similarly blocked by three OPs, and was additionally stimulated by one OP. Five OPs cis-stimulated OATP2B1 activity. Both OCT1 and OCT2 were inhibited by the same eight OPs, including fenamiphos and phosmet, with IC₅₀ values however in the 3–30?µM range, likely not relevant to environmental exposure.

4.?These data demonstrated that various OPs inhibit SLC drug transporter activities, especially those of OCT1 and OCT2, but only when used at high concentrations not expected to occur in environmentally-exposed humans.     

莱菔硫烷经由miR-124抑制胶质瘤干细胞的增殖

摘要：目的 研究莱菔硫烷对SWO-38胶质瘤干细胞增殖的影响及其机制。方法 细胞增殖实验检测莱菔硫烷对SWO-38细胞增殖的影响;克隆形成实验、肿瘤球形成实验、蛋白印迹法等检测并比较莱菔硫烷处理前后SWO-38细胞克隆形成能力、肿瘤球形成能力及干性相关基因（如β-catenin、Oct4、Sox-2、c-Myc）表达水平等改变,比较莱菔硫烷和（或）miR-124抑制物处理对干性相关基因表达水平的影响。实时荧光定量PCR检测莱菔硫烷对miRNA-9、21、221、124、128、181等转录水平的影响。结果 莱菔硫烷有效抑制SWO-38细胞增殖,其半数抑制浓度为（26.41±2.13）μmol/L。莱菔硫烷呈现剂量依赖性地削弱SWO-38细胞克隆和肿瘤球形成的能力。莱菔硫烷下调β-catenin、Oct4、Sox-2和c-Myc等干性相关基因的表达。同时,莱菔硫烷还影响miR-9、21、221、124、128、181等miRNA的转录水平, 其中miR-124转录水平增高约5.9倍,miR-128增高约2.6倍。miR-124抑制物组β-catenin、Oct4、Sox-2等基因表达较空白对照组显著增高,而miR-124抑制物与莱菔硫烷联合组上述基因表达水平高于空白对照组,但低于miR-124抑制物组。结论 莱菔硫烷有效抑制SWO-38胶质瘤干细胞的增殖,其机制可能与miR-124/ (β-catenin/ Sox-2/Oct4)通路有关。     

线粒体溶质载体蛋白SLC25A26诱导肝癌细胞衰老作用及分子机制

目的探究线粒体溶质载体蛋白SLC25A26通过蛋氨酸循环代谢诱导肝癌细胞衰老的调控作用。方法体外培养HepG2细胞系,用阳性药Etoposide(2μmol·L-1)诱导HepG2细胞衰老后,蛋氨酸循环代谢物SAM (0.1 mmol·L-1)处理,Western blot、Real-time PCR检测细胞衰老指标(p16、p21、HMGA1),流式细胞仪检测细胞周期;转染SLC25A26过表达质粒,Western blot、免疫荧光检测过表达SLC25A26对HepG2细胞衰老指标的影响;HPLC法检测过表达SLC25A26对蛋氨酸循环代谢指标SAM、SAH的影响,Real-time PCR检测过表达SLC25A26对SAM处理后HepG 2细胞衰老指标的影响。结果 Western blot和Real-time PCR检测表明,蛋氨酸循环代谢可以削弱Etoposide诱导的HepG 2细胞衰老水平,流式检测表明细胞周期阻滞在G1期;过表达SLC25A26降低了胞质中蛋氨酸循环代谢物SAM、SAH水平,补充外源性SAM部分抵消了过表达SLC25A26诱导的HepG 2细胞衰老作用。结论促进蛋氨酸循环代谢可以抑制肝癌细胞衰老,过表达SLC25A26可以诱导肝癌细胞衰老,SLC25A26通过调控蛋氨酸循环代谢诱导肝癌细胞衰老。     

The solute carrier family SLC10: more than a family of bile acid transporters regarding function and phylogenetic relationships

The solute carrier family 10 (SLC10) comprises two sodium-dependent bile acid transporters, i.e. the Na(+)/taurocholate cotransporting polypeptide (NTCP; SLC10A1) and the apical sodium-dependent bile acid transporter (ASBT; SLC10A2). These carriers are essentially involved in the maintenance of the enterohepatic circulation of bile acids mediating the first step of active bile acid transport through the membrane barriers in the liver (NTCP) and intestine (ASBT). Recently, four new members of the SLC10 family were described and referred to as P3 (SLC10A3), P4 (SLC10A4), P5 (SLC10A5) and sodium-dependent organic anion transporter (SOAT; SLC10A6). Experimental data supporting carrier function of P3, P4, and P5 is currently not available. However, as demonstrated for SOAT, not all members of the SLC10 family are bile acid transporters. SOAT specifically transports steroid sulfates such as oestrone-3-sulfate and dehydroepiandrosterone sulfate in a sodium-dependent manner, and is considered to play an important role for the cellular delivery of these prohormones in testes, placenta, adrenal gland and probably other peripheral tissues. ASBT and SOAT are the most homologous members of the SLC10 family, with high sequence similarity ( approximately 70%) and almost identical gene structures. Phylogenetic analyses of the SLC10 family revealed that ASBT and SOAT genes emerged from a common ancestor gene. Structure-activity relationships of NTCP, ASBT and SOAT are discussed at the amino acid sequence level. Based on the high structural homology between ASBT and SOAT, pharmacological inhibitors of the ASBT, which are currently being tested in clinical trials for cholesterol-lowering therapy, should be evaluated for their cross-reactivity with SOAT.     

毛冬青甲素对大鼠骨髓间充质干细胞增殖及迁移的影响

目的观察毛冬青甲素(ilexonin A,IA)对大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)增殖的影响,并探讨IA是否通过上调CXCR4的表达促进大鼠BMSCs迁移。方法采用MTT比色法检测IA(3.125、6.25、12.5、25、50、100、200、400、800 mg·L^-1)预处理BMSCs 24、48、72 h,观察对BMSCs增殖的影响,确定最佳药物浓度和最佳作用时间。用最佳浓度的IA干预第3代BMSCs 48 h,Transwell检测BMSCs迁移能力,Western blot法检测CXCR4的表达水平。结果 MTT结果显示,IA孵育BMSCs 24、48 h,与对照组相比,100~800 mg·L^-1组的细胞增殖明显减少(P<0.05);IA孵育BMSCs 48h,与对照组相比,6.25、3.125 mg·L^-1组细胞增殖明显增加(P<0.05);IA孵育BMSCs 72 h,与对照组相比,12.5~800mg·L^-1组细胞增殖明显减少(P<0.05),提示IA 6.25、3.125 mg·L^-1剂量组于48 h预处理BMSCs是最优选择。Transwell细胞迁移实验表明,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h明显增强BMSCs运动迁移能力(P<0.05),且迁移与IA浓度无关,CXCR4拮抗剂AMD3100可完全阻断其促迁移效应。Western blot显示,IA(6.25、3.125 mg·L^-1)预处理BMSCs 48 h,上调CXCR4蛋白表达(P<0.05)。结论 IA可以促进BMSCs的增殖,并通过上调CXCR4的表达,提高BMSCs的迁移能力。     

香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞的增殖作用

目的 研究香丹注射液对大鼠骨髓间充质干细胞(MSC)增殖的影响.方法 肌注香丹注射液和5-溴尿嘧啶核苷(Brdu);体外培养MSC,用四甲基偶氮唑法检测香丹注射液促进大鼠MSC的增殖作用,免疫组化检测MSC细胞的Brdu标记阳性率.结果 3种高浓度的药液对MSC的增殖与对照组比较有显著性差异;停药后3-7 d,香丹组Brdu标记阳性细胞率与生理盐水组比较有显著性差异.结论 香丹注射液有促进MSC增殖的作用.     

miR-124靶向趋化素样因子超家族成员6对胶质瘤细胞的影响

目的　探究微小RNA（miR）-124靶向调控趋化素样因子超家族成员6（CMTM6）对胶质瘤细胞的侵袭、迁移的影响。方法　实时荧光定量PCR（qPCR）法检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;蛋白免疫印迹实验检测OLN93、SHG-44、U87、U251、A172细胞中CMTM6蛋白表达水平。miRTarBase预测miR-124与CMTM6的结合位点,实验设mimic NC组、miR-124 mimic组、miR-124 mimic+pcDNA组、miR-124 mimic+CMTM6组,分别转染miR-124 mimic NC、miR-124 mimic、pcDNA、pcDNA+CMTM6于各组细胞中。qPCR法检测各组细胞中miR-124、CMTM6 mRNA表达水平;CCK-8检测细胞增殖情况;Transwell检测细胞侵袭、迁移情况;划痕实验检测细胞迁移情况;蛋白免疫印迹实验检测细胞中CMTM6、细胞表面程序性死亡蛋白配体1（PD-L1）蛋白表达水平。结果　与OLN93相比,SHG-44、U87、U251、A172细胞中miR-124表达水平降低（P＜0.05）,CMTM6 mRNA和蛋白表达水平升高（P＜0.05）,选择U251细胞进行后续实验。miRTarBase预测发现miR-124与CMTM6存在结合位点,并经双荧光素酶报告基因实验验证。与mimic NC组和miR-124 mimic+CMTM6组相比,miR-124 mimic组和miR-124 mimic+pcDNA组细胞中miR-124表达水平升高（P＜0.05）,CMTM6 mRNA表达水平降低。培养24、48、72、96 h时细胞OD450降低,侵袭、迁移细胞数量减少,CMTM6、PD-L1蛋白表达水平降低（P＜0.05）。结论　上调miR-124表达可靶向下调CMTM6的表达,从而抑制胶质瘤细胞的侵袭、迁移。     

SLC34A2通过JAK-STAT信号通路调节肺癌肿瘤干细胞侵袭和增殖作用研究

目的 探讨SLC34A2对肺癌肿瘤干细胞(carcinoma-initiating cells,CICs)侵袭和增殖作用的影响及机制.方法 采用流式细胞仪分选技术从肺癌细胞株H1650中分选出CD44 +/CD133+的CICs;LV3-SLC34A2组沉默SLC34A2基因,LV3-NC组为对照.使用绿色荧光蛋白及免疫印迹法检测SLC34A2沉默效率及沉默效果;沉默SLC34A2后,免疫印迹法检测SLC34A2编码蛋白NaPi-Ⅱb的表达,使用Transwell侵袭实验检测对CICs侵袭能力的影响,肿瘤细胞成球实验检测对CICs增殖能力的影响,免疫印迹法检测JAK/STAT信号通路相关蛋白的表达情况.结果 与LV3-NC组比较,LV3-SLC34A2组中NaPi-Ⅱb蛋白的表达水平下降(P＜0.05).沉默SLC34A2可以有效抑制肺癌CICs的侵袭和增殖能力(P＜0.05),并使JAK/STAT信号通路中的P-JAK和P-STAT蛋白表达相应降低(P＜0.05).结论 沉默SLC34A2基因可能通过调控JAK/STAT信号通路来抑制肺癌CICs的侵袭和增殖作用.     

瑞舒伐他汀对人胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨瑞舒伐他汀对人神经胶质瘤U251细胞增殖和凋亡的影响。方法体外培养人神经胶质细胞瘤U251细胞,分别采用5、10、20μmol/L瑞舒伐他汀进行干预,培养24、48、72、96 h,采用MTT比色法检测细胞增殖活性,流式细胞仪检测U251细胞周期的变化。结果处理96 h后,570 nm处吸光度(A570 nm)值变化最明显,瑞舒伐他汀每个浓度组A570 nm值与对照组比较均显著下降(P0.01)。瑞舒伐他汀处理细胞48 h后,与对照组比较,G0/G1期细胞增多,S期和G2/M期细胞减少,且瑞舒伐他汀浓度越大,该作用越强。使用不同浓度瑞舒伐他汀处理48~72 h能诱导U25l细胞凋亡。随着瑞舒伐他汀浓度的增加、作用时间的延长,凋亡峰更加明显,并呈浓度–效应和浓度–时间相关性。结论瑞舒伐他汀对胶质瘤U251细胞增殖具有一定的抑制作用,可以诱导胶质瘤U251细胞凋亡。     

异基因造血干细胞-间充质干细胞协同移植治疗急性粒细胞白血病(附2例报道)

目的探讨急性粒细胞白血病异基因造血干细胞—间充质干细胞协同移植的效果。方法培养扩增供者骨髓间充质细胞,经形态学及细胞表面分子加以鉴定,并与外周血造血干细胞协同移植给患者。结果输注供者的MSC总数分别为2×106/kg和7.7×106/kg,中性粒细胞>0.5×109/L以及血小板>20×109/L的中位时间分别是12d和14d。例1出现了Ⅰ度aGVHD,Ⅱ度cGVHD,已存活11个月;例2未出现急、慢性GVHD,现已存活6个月余。结论异基因造血干细胞-间充质干细胞协同移植可加速造血功能恢复,对GVHD的发生及严重程度有一定抑制作用,但还需加大病例数进一步观察。