芬吗通在克罗米芬促排卵患者中改善子宫内膜厚度提高临床妊娠率的研究

目的:探讨芬吗通在克罗米芬(CC)促排卵患者中改善子宫内膜厚度提高临床妊娠率的作用。方法:选取我院2014年5月至2016年5月收治的不明原因排卵障碍的不孕患者200例,随机将这些患者分为芬吗通联合CC治疗组(芬吗通组,n=100)和补佳乐联合CC治疗组(补佳乐组,n=100)两组,芬吗通组患者接受芬吗通联合CC治疗,补佳乐组患者接受补佳乐联合CC治疗,然后对两组患者HCG日与排卵后1周的子宫内膜发育情况、排卵情况、排卵后1周P水平值、生化妊娠及临床妊娠情况进行统计分析。结果:芬吗通组患者HCG日A型内膜比例显著低于补佳乐组(P0.05),临床妊娠率显著高于补佳乐组(P0.05)。结论:芬吗通较补佳乐更能有效改善CC促排卵患者的子宫内膜发育,提高患者的临床妊娠率。     

Wnt信号转导通路蛋白在尖锐湿疣皮损中的表达

目的: 检测Wnt基因信号转导通路相关蛋白在尖锐湿疣(CA)皮损中的表达,探讨Wnt信号转导通路在CA皮损上皮细胞过度增殖中的意义.方法: 应用免疫组织化学方法检测Wnt信号转导通路相关蛋白Wnt-1、β-连环素(β-catenin)及E-钙黏蛋白(E-cadherin)在CA皮损中的表达.结果: Wnt-1蛋白在CA皮损中的表达水平显著高于对照组;β-catenin 蛋白呈异常表达,且异常表达率显著高于对照组;E-cadherin蛋白在CA皮损中的表达则显著低于对照组.结论: Wnt信号转导通路可能在尖锐湿疣皮损上皮细胞过度增殖中起着重要作用,且与HPV的分型有关.     

复方黄柏液辅助治疗早期梅毒的效果及对RPR滴度、Wnt信号通路的影响

目的 探讨复方黄柏液辅助治疗早期梅毒的效果及对快速血浆反应素环状卡片试验(RPR)滴度、Wnt信号通路的影响。方法 选取2018年1月至2021年6月南通市中医院收治的86例早期梅毒患者作为研究对象。根据随机数字表法分为对照组和观察组,各43例。对照组给予常规西医治疗,观察组给予复方黄柏液辅助常规西医治疗。比较两组治疗效果、甲苯胺红不加热血清试验(TRUST)转阴率、临床症状改善情况、治疗前后RPR滴度分布情况、Wnt信号通路相关因子[Wnt1、β-catenin、Dickkopf相关蛋白1(DKK1)]及不良反应发生率。结果 观察组总有效率、TRUST转阴率高于对照组(P<0.05);观察组皮损改善时间、皮损痊愈时间、四肢关节疼痛消失时间短于对照组(P<0.05);治疗8周后,两组RPR滴度分布情况较治疗前显著改善,观察组改善情况优于对照组(P<0.05);治疗8周后,两组血清Wnt1、DKK1高于治疗前且观察组高于对照组,β-catenin低于治疗前且观察组低于对照组(P<0.05);两组不良反应发生率比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论 复方...     

益肾活血方改善肾虚血瘀型不孕症患者子宫内膜容受性临床研究

目的:观察益肾活血方改善肾虚血瘀型不孕症子宫内膜容受性的临床疗效。方法:选择2014年6月至2016年6月于我院不孕不育科门诊就诊的患者60例,采用随机数字表法分为两组各30例,观察组服用益肾活血方,对照组服用戊酸雌二醇。通过B超监测排卵,于排卵后6~8d B超监测子宫内膜情况,计算Salle评分值等进行非劣效研究,评价临床疗效。结果:治疗后分析发现两组患者治疗前后,Salle评分、PI评分与内膜厚度具有统计学差异(P<0.05),观察组非劣效于对照组。观察组与对照组受孕率分别为40%(12/30)和20%(6/30),观察组的受孕率明显优于对照组,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论:益肾活血方可以改善肾虚血瘀型不孕症患者子宫内膜容受性,增加受孕率。     

脂肪间充质干细胞对硬皮病小鼠的疗效及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响

目的:探讨脂肪间充质干细胞(ADSCs)对硬皮病(SD)小鼠的治疗效果及其对Wnt/β-catenin信号通路的影响。方法:将40只C57BL/6J雌性小鼠随机平均分为空白组、PBS组、模型组及治疗组。模型组与治疗组通过背部皮下注射博来霉素(BLM)制备SD小鼠模型,空白组不予任何处理,PBS组注射同体积PBS溶液。造模成功后采用100μL ADSCs细胞悬液(2×1010个/L)皮下注射至治疗组小鼠背部局部皮下,每日1次,连续4周。观察各组小鼠皮肤组织病理改变,并检测其皮肤组织中羟脯氨酸含量、脾细胞中辅助性T细胞(Th)17和调节性T细胞(Treg)比例以及血清炎性因子水平。采用western blot检测皮肤组织中Wnt/β-catenin信号通路相关蛋白表达水平。结果:与空白组和PBS组相比,模型组Th17和Treg比例、血清白细胞介素(IL)-6、IL-17、Wnt2、Wnt3a及β-catenin蛋白水平均显著升高(P0.05),但IL-10水平显著降低(P0.05)。经ADSCs治疗后SD小鼠皮损组织硬化和炎症均得到明显改善,且羟脯氨酸含量显著降低(P0.05)。与模型组相比,治疗组Th17比例、血清IL-6及IL-17水平、Wnt2、Wnt3a及β-catenin蛋白表达均降低(P0.05),而Treg比例及血清IL-10水平均显著升高(P0.05)。结论:ADSCs能够通过调节T淋巴细胞和相关炎性因子分泌,改善SD小鼠机体炎症反应和皮肤组织纤维化,且该过程可能与Wnt/β-catenin信号通路有关。     

皮肤科学基础

20141251β-连珠蛋白及其信号通路和靶基因调控细胞衰老的研究进展（综述）/田黎明（华中科技大学武汉市第一医院皮肤科）,谢红付,李吉//临床皮肤科杂志.-2014,43（1）.-62～64 β-连珠蛋白（β-catenin）是经典的Wnt信号通路关键性的下游效应器,它在许多器官组织的发育和成人体内平衡等方面发挥重要作用。国外学者研究发现β-catenin在调控细胞衰老方面有着非常重要的作用,β-catenin介导不同的靶基因,表现出既参与抗细胞衰老,又促进细胞衰老的双向调控机制。     

雌二醇对黑素细胞Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响

目的:明确雌二醇对体外培养的黑素细胞非经典Wnt5A/ROR2通路中Wnt5A、ROR2及β-catenin表达的影响.方法:将体外黑素细胞随机分为2组(n=6):DMEM培养液组(A组)和50 nM雌二醇组(B组).孵育6h后采用Western blotting检测Wnt5A、ROR2及α-catenin的表达.结果:与A组相比,B组Wnt5A及ROR2的表达均明显上调(P＜0.05),而α-catenin的表达无显著性差异(P＞0.05).结论:雌二醇诱导黄褐斑形成可能与激活非经典Wnt5A/ROR2通路有关.     

盆底肌按摩对行冻融胚胎移植周期薄型子宫内膜患者妊娠结局的影响

目的:观察盆底肌按摩联合人工周期对行冻融胚胎移植周期(FET)薄型子宫内膜厚度、类型、血流以及妊娠率的影响。方法:将准备行FET的薄型子宫内膜患者60名,随机分为两组,每组30例。两组患者均给予人工周期(月经第3天起服用戊酸雌二醇片(补佳乐,拜耳医药有限公司)早晚各3毫克,连用12天后添加黄体支持)。观察组经净后,每天配合盆底肌按摩,时间为15min,频率为50Hz,选穴为会阴、长强、八髎穴,直至添加黄体酮日;对照组则单纯人工周期。比较两组患者黄体酮日内膜厚度、类型、血流和临床妊娠率。结果:治疗后:(1)经过盆底肌按摩治疗后,观察组比对照组黄体酮日内膜Ⅰ型血流明显减少,Ⅱ+Ⅲ型血流明显增加,差异具有统计学意义(P <0. 05);(2)盆底肌按摩器治疗后,添加黄体酮日观察组内膜厚度明显高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05);(3)经盆底肌按摩后,添加黄体酮日观察组A型内膜例数高于对照组,但差异无统计学意义(P> 0. 05);(4)临床妊娠率观察组明显高于对照组,差异具有统计学意义(P <0. 05)。结论:雌孕激素联合下人工周期配合盆底肌按摩能够改善行FET周期的薄型子宫内膜患者的内膜厚度及血流,提高患者的妊娠率。     

PI3K/AKT信号转导通路和VEGF在子宫内膜异位症中的表达

目的:探讨子宫内膜异位症(EMs)患者中磷脂酰肌醇-3激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)和血管内皮生长因子(VEGF)表达水平。方法:采用EMs患者32例,取在位子宫内膜和异位内膜,无EMs患者34例,取子宫内膜,作为对照组。采用半定量RT-PCR法检测PI3K/AKT与VEGFmRNA表达,ELISA法检测PI3K/AKT蛋白和VEGF蛋白表达。结果:正常子宫内膜、异位子宫内膜和在位子宫内膜PI3K、AKT和VEGF mRNA和蛋白表达水平差异有统计学意义(P0.01)。异位内膜PI3K、AKT和VEGF的mRNA和蛋白的表达均高于在位内膜及正常内膜(P0.01)。EMs中,Ⅰ、Ⅱ期PI3K、AKT和VEGF mRNA和蛋白的表达与Ⅲ、Ⅳ期异位内膜相比,均无显著性差异(P0.05)。结论:PI3K/AKT信号转导通路和VEGF共同参与EMs的发生和发展。     

消瘤方对子宫内膜异位症盆腔粘连大鼠粘连组织中TLR4/NF-κB/TNF-α信号通路表达的影响

目的 探究消瘤方对子宫内膜异位症(EMs)盆腔粘连大鼠粘连组织中TOLL样受体4(TLR4)/核因子-κB(NF-κB)/肿瘤坏死因子-α(TNF-α)信号通路表达的影响.方法 30只SD大鼠随机分为对照组、模型组、米非司酮组、消瘤方低剂量组、消瘤方高剂量组,每组6只.除对照组外,其余各组大鼠均构建EMs盆腔粘连模型,...     

慢性难愈性皮肤溃疡β-catenin,c-myc,K6蛋白的表达及意义

目的通过检测慢性难愈性皮肤溃疡创面Wnt信号通路关键蛋白β-catenin,c-myc与K6蛋白的表达,探讨该通路与皮肤溃疡难愈性的关系。方法以正常组织为对照,采用免疫组化及图像定量分析相结合的方法,检测β-catenin,c-myc与K6蛋白在慢性难愈性创面组织中的表达。结果慢性难愈性创面处β-catenin,c-myc与K6蛋白在表皮中的表达均明显增强,β-catenin在创缘呈现异常核表达;K6,c-myc全层表达,且在颗粒层表达增强,与正常组织相比差异具有统计学意义(P0.01)。结论慢性难愈性溃疡创面Wnt信号通路相关蛋白β-catenin,c-myc与K6表达增强,提示Wnt信号通路异常可能与创面迁延不愈密切相关。     

Wnt/β-catenin pathway forms a negative feedback loop during TGF-β1 induced human normal skin fibroblast-to-myofibroblast transition

Background

Fibroblast-to-myofibroblast transition is a key event during wound healing and hypertrophic scar formation. Previous studies suggested Wnt/β-catenin signaling might be involved in the wound healing. However, its specific role in skin fibroblast-to-myofibroblast transition remains unclear.

Objective

To investigate the specific role of β-catenin during the transforming growth factor-β1 induced normal skin myofibroblasts transition.

Methods

By real-time quantitative polymerase chain reaction, Western-blot and immunocytochemistry, the activation of Wnt/β-catenin pathway in cultured human normal skin fibroblasts during TGF-β1 induced fibroblast-to-myofibroblast transition was investigated. The effects of β-catenin on myofibroblasts transition were also investigated when SB-216763, over-expression and siRNA of β-catenin were utilized. In addition, fibroblasts populated collagen lattices contraction assays were conducted to examine the effects of β-catenin on the contractility of the fibroblasts induced by TGF-β1. Furthermore, the effects of β-catenin on the expression of α-smooth muscle actin and collagen types I and III in hypertrophic scar derived fibroblasts were studied.

Results

The expression of Wnts mRNA and β-catenin protein was up-regulated by TGF-β1 stimulation during the myofibroblasts transition. Both of SB-216763 and β-catenin over-expression was paralleled with decreased expression of α-smooth muscle actin, collagen types I and III, while siRNA targeting β-catenin leads to up-regulation of α-smooth muscle actin, collagen types I and III. The increased contractility and α-smooth muscle actin expression of the fibroblasts in the collagen lattices induced by TGF-β1 was inhibited by SB-216763. In addition, the expression levels of α-smooth muscle actin, collagen types I and III in hypertrophic scar derived fibroblasts were also down-regulated by SB-216763.

Conclusion

Specifically in normal skin fibroblasts, β-catenin might be involved in the myofibroblasts transition and negatively regulate the TGF-β1-induced myofibroblast transition.     

尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin的表达

目的探讨β-catenin与尖锐湿疣皮损角质形成细胞增生的关系。方法采用聚合酶链反应(PCR)方法检测尖锐湿疣皮损感染的HPV分型,将HPV16/18型皮损分为高危型组(CA1),HPV6/11型皮损分为低危型组(CA2),每组30例;分别应用免疫组织化学及逆转录聚合酶链(RT-PCR)方法检测β-catenin蛋白及β-catenin mRNA在CA1组和CA2组角质形成细胞中的表达。结果在正常皮肤组织中β-catenin蛋白阳性物质均表达于胞膜;CA1组和CA2组中主要表达于胞核和胞质,CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin蛋白均呈异常表达,异常表达率(分别为86.70%,40.00%)均显著高于正常对照组(0);CA1组和CA2组角质形成细胞中β-catenin mRNA的表达水平(阳性分别为23例,18例)亦均显著高于正常对照组(阳性10例)。结论尖锐湿疣皮损角质形成细胞中β-catenin表达异常,在胞膜、胞浆及胞核的分布与正常角质形成细胞不同,可能与细胞过度增殖有关。     

Wnt5A基因过表达对黑素细胞骨架蛋白的影响

目的 探讨携带Wnt5A全基因序列的质粒转染原代黑素细胞后,Wnt5A表达升高对黑素细胞骨架蛋白的影响.方法 培养原代人表皮黑素细胞,并分为3组:①空白对照组:除细胞外不加任何试剂;②阴性对照组:加入空白的去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000;③Wnt5A质粒组:加入Wnt5A去内毒素pcDNA3.1(+)质粒、Opti-MEM培养基及Lipo3000.Wnt5A质粒转染黑素细胞,采用qPCR法检测各组Wnt5A、Ras相关C3肉毒素底物1(Rac1)、丝状肌动蛋白(F肌动蛋白)和β微管蛋白基因表达,Western印迹法测定Wnt5A、酪氨酸激酶受体2(ROR2)、Rac1、F肌动蛋白和β微管蛋白表达,并通过细胞免疫荧光试验观察细胞骨架蛋白表达情况.结果 qPCR法显示,Wnt5A质粒组、阴性对照组和空白对照组Wnt5A mRNA及其下游基因Rac1和F肌动蛋白rnRNA表达量3组间差异均有统计学意义(F=1374.179、112.576、66.458,均P＜0.01),但β微管蛋白mRNA表达差异无统计学意义(P＞0.05).Wnt5A质粒组Wnt5A、Rac1和F肌动蛋白mRNA表达量均显著高于空白对照组及阴性对照组(P＜0.05).Western印迹法显示,Wnt5A质粒组Wnt5A蛋白表达较空白对照及阴性对照明显升高,差异均有统计学意义(P＜0.05).Wnt5A质粒组Rac1、ROR2、F肌动蛋白表达均明显低于空白对照组和阴性对照组(P＜0.05),但β微管蛋白表达在3组间差异无统计学意义(P＞0.05).细胞免疫荧光实验显示,Wnt5A质粒组绿色(β微管蛋白)、红色(F肌动蛋白)荧光强度与两个对照组相比均无明显差别,但黑素细胞体积明显增大,树突数目明显增多,细胞骨架显著改变,表现为F肌动蛋白强弱不一,纹理模糊,张力丝断裂,局部呈团块状.结论 黑素细胞Wnt5A基因表达升高可调控细胞骨架相关基因及蛋白表达,使黑素细胞体积增大、树突增多、骨架改变,可能有利于黑素小体的输送传递,参与色素沉着性疾病的发病.     

Wnt10b诱导再生毛囊的表达特性研究

目的 研究Wnt10b诱导再生毛囊的表达特性及诱导作用机制。 方法 HEK-293细胞内扩增并用氯化铯梯度离心纯化Wnt10b过表达腺病毒及对照腺病毒,皮内注射至C57BL/6J小鼠背部皮肤,在处理后2.5、5、7、9、14、28 d时取材,HE染色及免疫组化染色观察毛囊结构特征、信号通路表达特征及增殖特性。 结果 HE染色发现,AdWnt10b处理组从第5天开始出现新生毛囊结构,正常生长,第28天左右进入退化期。免疫组化染色发现,AdWnt10b处理组从处理后5 d开始新生毛囊具有AE15表达,随着毛囊生长而增加,至处理后28 d开始减少。在AdWnt10b处理后5 d,观察到β连环素的核表达,Lef1特异性表达于毛芽和毛母质部位,且全为核表达。在AdWnt10b处理后28 d,Lef1表达减弱。AdWnt10b处理后2.5 d即可见Ki67表达于表皮和毛囊外根鞘。处理后2.5、7、9、14 d均在隆突区见到Ki67的表达;从处理后7 d开始,Ki67表达于毛母质细胞。 结论 Wnt10b诱导的再生毛囊具有正常的毛囊结构,Wnt10b激活了经典Wnt信号通路,其作用的靶细胞是毛囊干细胞及其子代细胞。     

Patterning skin pigmentation via dickkopf

One of the striking regional variations in skin is its pigmentation. Yamaguchi et al. further dissect the mechanism of regional pigmentation by assessing the effects of dickkopf 1 (DKK1), an antagonist of the Wnt pathway produced in lightly pigmented skin, on melanocyte gene expression. The results provide a plethora of candidate genes that may mediate DKK1's inhibitory effects on melanocyte function.     

紫外线和人乳头状瘤病毒16 E6协同诱导、促进裸鼠皮肤鳞状细胞癌的机制研究

【摘要】 目的 构建裸鼠皮肤鳞状细胞癌（CSCC）移植瘤模型,探讨紫外线（UV）损伤及人乳头瘤病毒（HPV）感染诱导、促进CSCC的协同作用机制。方法 将人CSCC细胞A431分成3组,即用 HPV16 E6腺病毒转染的HPV16 E6 过表达组,空白腺病毒转染的空白载体组（简称空载组）,未进行腺病毒转染的空白对照组。使用无血清DMEM培养基将空载组及HPV16 E6过表达组（LV-OE-HPV16 E6组）A431细胞制成单细胞悬液,分别接种于SKH-1裸鼠左侧臀部皮下作为空载组（n = 16）和LV-OE-HPV16 E6组（n = 16）。每3天观察并记录小鼠肿瘤生长情况,当瘤体达到150 mm3时,视为建模成功。建模成功后,每组取8只小鼠进行UV照射,分为4组,即空载组、空载 + UV组、LV-OE-HPV16 E6组、LV-OE-HPV16 E6 + UV组,UV照射剂量为1 440 mJ/（cm2·d）,每次12 min,持续4周后处死裸鼠,测量瘤重及体积,绘制肿瘤生长曲线,免疫组化、Western印迹和qRT-PCR检测验证Wnt1、β联蛋白mRNA及蛋白在裸鼠CSCC中的表达。数据若符合正态分布,多组间比较采用方差分析,组间两两比较采用LSD-t检验;数据若不符合正态分布,采用秩和检验对数据进行统计分析。结果 空载 + UV组瘤重为（2.90 ± 0.36） g,LV-OE-HPV16 E6组（3.19 ± 0.32） g,LV-OE-HPV16 E6 + UV组（4.41 ± 0.18） g,与空载组（2.20 ± 0.24） g比较,差异均有统计学意义（t值分别为4.39、6.77、20.11,均P＜0.001）;空载 + UV组瘤体积为（1 033.12 ± 400.15） mm3,LV-OE-HPV16 E6组（1 119.21 ± 447.57） mm3,LV-OE-HPV16 E6 + UV组（1 464.29 ± 409.98） mm3,与空载组（688.94 ± 319.31） mm3比较差异均有统计学意义（t值分别为1.90、2.21、4.22,均P＜0.001）。免疫组化显示,4组间Wnt1、β联蛋白表达水平差异无统计学意义（F值分别为0.76、0.71,均P > 0.05）;Western印迹显示,4组间Wnt1、β联蛋白水平差异有统计学意义（F值分别为16.74、49.90,均P＜0.05）,且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1、β联蛋白水平高于空载组、空载 + UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均P＜0.05）。mRNA水平分析显示,4组间组织中Wnt1、β联蛋白mRNA水平差异均有统计学意义（F值分别为7.77、8.38,均P＜0.05）,且LV-OE-HPV16 E6 + UV组Wnt1 mRNA水平高于空载组、空载 + UV组和LV-OE-HPV16 E6组（均P＜0.05）。结论 UV和HPV感染在诱导、促进CSCC中具有协同作用。     

β-连环蛋白与皮肤肿瘤

β-连环蛋白作为一种重要的信号转导分子和细胞间黏附分子,是近年来蛋白质研究的热点之一.它是Wnt信号转导通路的关键调控点,是构成黏附连接的E-cd/cat复合体的胞内重要组分,并参与肿瘤的发生发展、增殖分化、侵袭转移等生物学过程.目前在皮肤肿瘤的研究中,通过免疫组化的方法检测3-连环蛋白的膜染色水平及非常规定位(细胞核/细胞浆)的存在,对了解肿瘤的生物学特征、分型、预后有着一定的意义.阻断β-连环蛋白信号通路的异常激活有望成为治疗肿瘤的新手段.