槐耳清膏对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的作用及机制

目的 研究槐耳清膏对三阴性乳腺癌细胞增殖和迁移的作用及其可能的机制.方法 采用CCK-8法及小鼠移植瘤模型检测槐耳清膏对乳腺癌细胞增殖的影响,细胞划痕实验检测槐耳浸膏对乳腺癌细胞迁移的影响.Western blot检测细胞蛋白表达的水平.结果 CCK-8结果表明,采用4.16、6.48、10.37 mg/mL的槐耳清膏...     

槐耳清膏对乳腺癌细胞系SUM-159细胞干性特征的影响

目的 探讨槐耳清膏对源自人乳腺癌细胞系SUM-159的干细胞是否具有抑制或者杀伤作用.方法 以人乳腺癌细胞系SUM-159为细胞模型,以0、1、10、100 mg/mL的槐耳清膏溶液处理细胞,观察槐耳清膏给药前后细胞形态学的变化;应用CCK-8法检测IC50值,观察给药前后细胞克隆形成能力和成球能力的变化;流式细胞术检测给药前后ALDH1high细胞比例的变化.结果 CCK-8检测结果显示:槐耳清膏对SUM-159细胞系的IC50值约为10 mg/mL.以浓度为0、1、10 mg,/mL的槐耳清膏作用于SUM-159细胞,发现随着浓度的增加,克隆形成的菌落数目逐渐减少(P＜0.05),成球数目和体积也逐渐降低(P＜0.05).10 mg/mL槐耳清膏作用该细胞后,流式细胞术检测结果显示,ALDH1 high细胞的比例由给药前的2.8％降到1.5％;1μg/mL紫杉醇作用该细胞后,ALDH1high细胞的比例由给药前的2.8％升到9.1％.结论 槐耳清膏对人乳腺癌细胞系SUM-159细胞的克隆形成和成球能力具有明显的抑制作用,同时能够降低SUM-159细胞中ALDH1 high细胞的比例,提示槐耳清膏可能对乳腺癌干细胞具有一定的抑制或杀伤作用.     

槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制。方法用终浓度为0、0．5、1、2、4、6mg／mL的槐耳清膏和10μg／mL的5-氟尿嘧啶（5-Fu）作用于SGC-7901细胞,分别于24h和48h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达。结果MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系（P〈0．05）;槐耳清膏6mg／mL组的抑制率48h后达到（77．9±2．3）％,5-Fu组为（53．4±1．6）％,差异有统计学意义（P〈0．05）。流式细胞术检测显示,槐耳清膏4mg／mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33．2％;6mg／mL组早期凋亡细胞6．3％,而晚期凋亡细胞为19．9％。RT—PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调。结论槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关。     

槐耳清膏诱导胃癌SGC-7901细胞凋亡的实验研究

目的 研究槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞增殖抑制和凋亡诱导的作用,并探讨其作用机制.方法 用终浓度为0、0.5、1、2、4、6 mg/mL的槐耳清膏和10 μg/mL的5-氟尿嘧啶(5-Fu)作用于SGC-7901细胞,分别于24 h和48 h后采用MTT法检测细胞增殖抑制率;48 h后收集各组胃癌SGC-7901细胞,琼脂糖凝胶电泳检测DNA,流式细胞术检测细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA表达.结果 MTT法检测显示,槐耳清膏对胃癌SGC-7901细胞有增殖抑制作用,并存在浓度和时间依赖关系(P＜0.05);槐耳清膏6 mg/mL组的抑制率48 h后达到(77.9±2.3)%,5-Fu组为(53.4±1.6)%,差异有统计学意义(P＜0.05).流式细胞术检测显示,槐耳清膏4 mg/mL组的细胞凋亡率最高,早期凋亡细胞达33.2%;6 mg/mL组早期凋亡细胞6.3%,而晚期凋亡细胞为19.9%.RT-PCR结果显示,槐耳清膏组胃癌SGC-7901细胞survivin mRNA表达下调.结论 槐耳清膏在体外对胃癌SGC-7901细胞有明显的增殖抑制和凋亡诱导作用,初步推断槐耳清膏诱发胃癌细胞凋亡与其对survivin基因表达的抑制有关.     

槐耳清膏对荷瘤小鼠瘤细胞Bcl-2、Bax表达的影响

目的探讨槐耳清膏治疗肿瘤的作用机制。方法将雄性昆明小鼠分为对照组、5-Fu组、槐耳清膏组和槐耳清膏＋5-Fu组。用H22细胞给小鼠皮下注射,复制皮下瘤模型。观察各组移植瘤质量和抑瘤率,采用免疫组织化学法检测各组瘤组织Bcl-2、Bax蛋白表达。结果3个用药组小鼠的移植瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著低于对照组（P〈0．05）;与5-Fu组和槐耳清膏组比较,槐耳清膏＋5-Fu组小鼠瘤质量和瘤组织Bcl-2阳性率显著降低,Bax阳性率显著升高（P〈0．05）。结论槐耳清膏有明显的抑制肿瘤生长的作用,其机制可能是通过下调Bcl-2蛋白表达和上调Bax蛋白表达,促进肿瘤细胞凋亡。     

加味二陈汤对ApoE-/-小鼠炎症标志物IL-6和TNF-α的调节作用

目的　研究加味二陈汤对ApoE^-/-小鼠血清、主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α表达的影响。方法　40只ApoE^-/-小鼠中10只为空白对照组,30只以高脂饲喂养4周构建动脉粥样硬化（As）小鼠模型,均分成模型组、辛伐他汀组、加味二陈汤组,分别用生理盐水、辛伐他汀及加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,Elisa法检测血清中IL-6、TNF-α的含量;免疫组化法检测IL-6、TNF-α在主动脉壁及瓣膜的表达。结果　辛伐他汀组血清IL-6和TNF-α分别为392.06±37.70　pg/mL、189.1±50.4　pg/mL,与模型组相比表达下降（P<0.05）;加味二陈汤组血清IL-6、TNF-α分别为442.41±172.26　pg/mL、47.2±13.3　pg/mL,与模型组相比表达下降（P<0.05）,与辛伐他汀组相比,表达下降（P<0.05）;免疫组化结果显示加味二陈汤可降低IL-6、TNF-α在主动脉壁内的表达。结论　加味二陈汤可降低血清和主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α的表达。     

加味二陈汤对ApoE~(-/-)小鼠炎症标志物IL-6和TNF-α的调节作用

目的研究加味二陈汤对Apo E-/-小鼠血清、主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α表达的影响。方法40只Apo E-/-小鼠中10只为空白对照组,30只以高脂饲喂养4周构建动脉粥样硬化(As)小鼠模型,均分成模型组、辛伐他汀组、加味二陈汤组,分别用生理盐水、辛伐他汀及加味二陈汤对小鼠灌胃给药,8周后处死小鼠,Elisa法检测血清中IL-6、TNF-α的含量;免疫组化法检测IL-6、TNF-α在主动脉壁及瓣膜的表达。结果辛伐他汀组血清IL-6和TNF-α分别为392.06±37.70 pg/m L、189.1±50.4 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05);加味二陈汤组血清IL-6、TNF-α分别为442.41±172.26 pg/m L、47.2±13.3 pg/m L,与模型组相比表达下降(P<0.05),与辛伐他汀组相比,表达下降(P<0.05);免疫组化结果显示加味二陈汤可降低IL-6、TNF-α在主动脉壁内的表达。结论加味二陈汤可降低血清和主动脉壁及瓣膜的IL-6、TNF-α的表达。     

槐耳清膏联合顺铂改变胃癌SGC7901细胞周期分布的实验研究

目的观察槐耳清膏联合顺铂（DDP）作用于人胃腺癌SGC7901细胞后细胞周期的变化,并探讨其可能的作用机制。方法通过细胞流式实验,观察不同浓度槐耳清膏、DDP及两药联合作用于胃癌SGC7901细胞24h后细胞周期的变化情况,并通过Westernblot检测不同浓度的槐耳清膏、DDP及两药联合作用于胃癌SGC7901细胞后,细胞周期相关蛋白ATM、H2AX、cdc-2、CyclinB1等的表达情况。结果细胞流式实验结果显示,槐耳清膏能够阻滞SGC7901细胞于G2/M期,DDP能够阻滞SGC7901细胞于S期,而两药联用后S期和G2/M期都有阻滞。Westernblot实验结果显示,槐耳清膏、DDP均可上调p-ATM、γ-H2AX蛋白表达,同时下调CyclinB1蛋白表达,且两药联用后效果更加明显。结论槐耳清膏、DDP能够通过调节细胞周期相关蛋白的表达改变细胞周期,抑制细胞增殖,与槐耳清膏联用可提高DDP对胃癌的疗效。     

槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞表达NF-κB的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65、TNF-α表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、槐定碱预处理对照组、LPS模型组、槐定碱预处理+LPS组。各组处理完毕后5、30、60、120min,分别获取细胞与细胞培养液。Western Blot和RT-PCR分别检测细胞NF-κB p65蛋白与mRNA表达,放免法检测细胞培养液TNF-α含量。结果单独槐定碱对NF-κB p65以及TNF-α表达无影响;LPS模型组各时间点NF-κB p65 mRNA与蛋白以及TNF-α表达均显著高于空白对照组(P<0.01),且随LPS刺激时间延长而持续升高,至120min未见下降;槐定碱预处理+LPS组NF-κB p65mRNA与蛋白及其下游TNF-α表达均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义(P<0.01)。结论槐定碱预处理可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB p65表达及TNF-α分泌发挥抗炎作用。     

槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞表达NF-κB的影响

目的观察槐定碱预处理对LPS诱导RAW264.7细胞NF-κB p65、TNF-α表达的影响,探讨槐定碱抗内毒素机制。方法培养RAW264.7细胞,分为空白对照组、槐定碱预处理对照组、LPS模型组、槐定碱预处理＋LPS组。各组处理完毕后5、30、60、120min,分别获取细胞与细胞培养液。Western Blot和RT-PCR分别检测细胞NF-κB p65蛋白与mRNA表达,放免法检测细胞培养液TNF-α含量。结果单独槐定碱对NF-κB p65以及TNF-α表达无影响;LPS模型组各时间点NF-κB p65 mRNA与蛋白以及TNF-α表达均显著高于空白对照组（P〈0.01）,且随LPS刺激时间延长而持续升高,至120min未见下降;槐定碱预处理＋LPS组NF-κB p65mRNA与蛋白及其下游TNF-α表达均较同时间点LPS模型组降低,差异有统计学意义（P〈0.01）。结论槐定碱预处理可通过抑制LPS诱导的RAW264.7细胞的NF-κB p65表达及TNF-α分泌发挥抗炎作用。     

酵母多糖致全身炎症反应综合征大鼠模型的制备

目的:建立全身炎症反应综合征(systemic inflammatory response syndrome,SIRS)大鼠模型,为进一步探讨SIRS的机理及其治疗做充足的准备.方法:采用腹腔注射酵母多糖-石蜡混悬液制备模型,按照不同注射剂量分为4组,观察各组大鼠的一般情况、体温、白细胞计数、外周血中肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素10( interleukin- 10,IL-10)水平,以及主要脏器的病理切片改变.结果:注射剂量750 mg/kg和1 000mg/kg酵母多糖混悬液组大鼠符合SIRS动物模型的标准,其中,1 000 mg/kg组的大鼠病死率较高,48 h可达66.7％,而750 mg/kg组生存周期较长.结论:成功建立了稳定的SIRS大鼠模型,750mg/kg组SIRS存活时间较长,适宜于SIRS的发生机制和疗效研究,1 000 mg/kg组病死率高,存活时间短,适宜于病死率干预实验.     

曲伐沙星经抑制NF-κB的激活调控LPS诱导的炎症反应

目的探讨曲伐沙星抗炎作用的分子机制。方法将分离的单核细胞预先用TVF孵育2h，随后用LPS刺激，ELISA检测TNF-α和IL-6的诱生情况，并用RT-PCR检测其mRNA的表达；提取核蛋白，Westem blot分析NF—κB激活情况。结果TVF能以剂量依赖方式抑制单核细胞产生TNF-α和IL-6，并抑制其mRNA的表达；同时TVF能抑制NF—κB的激活。结论TVF能抑制单核细胞产生TNF-α和IL-6，这可能是其抗炎症作用的方式之一，该效应可能与其抑制NF—κB的激活有关。     

槐耳颗粒对乳腺癌患者术后免疫功能调节作用的观察

目的:观察槐耳颗粒(金克)对乳腺癌患者术后免疫功能的调节作用。方法:50例乳腺癌改良根治术患者,随机分为金克组和对照组,金克组在术后第2~5天开始服用金克20g,3/d,30d为1疗程,对照组服用安慰剂,其余治疗同金克组。两组于术后第2天晨及1个疗程结束后第1~4天测定血中IgA、IgG、IgM、淋巴细胞计数、T淋巴细胞亚群分类。结果:金克组淋巴细胞计数和IgA,IgG,IgM,均比对照组提高显著。金克组和对照组的CD3、CD4、CD8、CD4/CD8研究后与研究前比较,金克组CD3研究后高于研究前(P<0.05),而对照组无明显区别;口服金克30d后,金克组的CD3、CD4/CD8高于对照组。结论:槐耳颗粒有助于乳腺癌患者术后体液免疫功能和细胞免疫功能的恢复。     

AG490对缺血性脑损伤后炎症反应的影响

目的：研究AG490对大鼠缺血性脑损伤（ ischemic brain injury ）后TNF-α,IL-6表达的影响。方法健康雄性SD大鼠120只,随机分为假手术组、IBI-isotonic saline 组和IBI-AG490干预组,各组依次分为6h,12h,24h,72h 4个亚组;采用线栓法制作MCAO动物模型,AG490干预组于伤后1h腹腔注射AG490（5mg/kg）,假手术组、IBI-isotonic saline组腹腔注射等渗盐水（5ml/kg）;Real time PCR法测定TNF-αmRNA,IL-6mRNA,ELISA法测定TNF-α,IL-6含量。结果 TNF-αmRNA,IL-6 mRNA在缺血发生后表达程度均增高,给予AG490干预可降低其表达水平,与假手术组相比差异具有统计学意义（P＜0．05）,TNF-α,IL-6检测显示相似结果。结论缺血性脑损伤后给予AG490能降低受伤脑组织的炎症反应,其机制可能与JAK/STAT途径有关。     

内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL的变化及其对LPS致炎效应的影响

目的探讨内毒素血症小鼠血浆氧化型低密度脂蛋白(Ox-LDL)的变化规律及其对内毒素(LPS)作用的影响.方法静脉分别注射LPS 1、2.5、5 mg/kg,复制小鼠内毒素血症模型, ELISA法检测血浆Ox-LDL含量;Ox-LDL 0.35、1.4 mg/kg静脉注射预处理小鼠,30 min后注射LPS 1 mg /kg,ELISA法测定血浆TNF-α含量;观察Ox-LDL预处理对内毒素血症小鼠24 h死亡率的影响.结果内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL明显升高,LPS注射后0.5～8 h ,各剂量组血浆Ox-LDL水平均显著高于正常对照(P<0.01);不同剂量Ox-LDL预处理小鼠血浆TNF-α水平均显著高于LPS单纯注射组同时相点(P<0.01),且24 h死亡率增加.结论内毒素血症小鼠血浆Ox-LDL水平明显增高,与LPS呈明显的量效关系;Ox-LDL能增强LPS的致炎效应,这可能与其部分封闭清道夫受体(SR),导致LP S清除减少有关.     

肠毒清颗粒对肝硬变内毒素血症大鼠模型内毒素及炎症因子的干预作用

目的：探讨肠毒清颗粒对大鼠肝硬变内毒素血症的干预作用。方法：70只大鼠分为正常对照组10只,余60只制作大鼠肝硬变模型组。模型制作成功后,分为模型组、肠毒清高剂量组、肠毒清低剂量组、乳果糖治疗组。观察各组大鼠的内毒素、TNF-α、IL-6及NO水平。结果：模型组与正常组比较,血浆内毒素、肝匀浆TNF-α、IL-6及NO水平明显升高（ P<0.05）;与模型组比较,肠毒清高剂量组、肠毒清低剂量组、乳果糖组大鼠血浆内毒素、肝匀浆TNF-α、IL-6及NO水平明显降低（ P<0.05）。肠毒清高剂量组与乳果糖组比较,内毒素、TNF-α、IL-6差异显著（ P<0.05）;与肠毒清低剂量组比较,血浆内毒素、IL-6差异有统计学意义。乳果糖组TNF-α、NO与肠毒清低剂量组比较,有显著性差异（ P<0.05）。结论：肠毒清颗粒能够防治肝硬变内毒素血症。     

LPS介导的炎症反应过程及作用机制

LPS是革兰氏阴性菌的细胞壁主要组成成分,细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来。其毒性成分主要为类脂质A,能够引起哺乳动物细胞发生免疫反应,从而导致促炎因子的释放。通过细胞表面的先天免疫分子受体识别LPS是感染性休克的重要过程。严重感染,如肺炎、脓毒血症等是进入重症监护室的主要原因。LPS受体的识别、信号转导机制的研究是解决感染引起的炎症反应的重要环节,理解类脂A的生化修饰过程及其在发病机理过程中的作用可为这类疾病的治疗提供新的治疗方法。     

TRAF 6在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用研究

目的 研究肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)在肿瘤恶病质骨骼肌炎症反应中的作用.方法 小鼠结肠腺癌细胞接种BALB/c小鼠诱导肿瘤恶病质模型,每天监测各组小鼠体质量,于第7、13和19天检测左侧腓肠肌组织的质量、纤维横切面积,PCR和Western blotting检测TNF-α、IL-6、TRAF6 mRNA和蛋白表达水平.结果 与对照组比较,随着接种细胞时间的延长,荷瘤小鼠体质量和去瘤体质量减轻(P＜0.05);腓肠肌组织的质量减轻(P＜0.05),纤维横切面积减小(P＜0.05),TNF-α、IL-6和TRAF6的mRNA和蛋白水平均显著升高(P＜0.05),且TRAF6的水平与腓肠肌的消耗呈正相关(P＜0.05),与TNF-α和IL-6的水平正相关(P＜0.05).结论 TRAF6可能在肿瘤恶病质骨骼肌组织的炎症反应过程中起到重要的作用.     

丹参多酚酸B对动脉粥样硬化大鼠炎症细胞因子的影响

目的:研究丹参多酚酸B对动脉粥样硬化大鼠炎症反应相关细胞因子的影响。方法:8周龄雄性SD大鼠60只,随机分成6组(正常组,模型组,丹参多酚酸B低剂量组、中剂量组、高剂量组,辛伐他汀组),并给予相应的处理。电镜下观察心肌超微结构,并取心肌组织用酶联免疫吸附法(ELISA)检测肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1α(IL-1α)、白细胞介素6(IL-6)相关炎性因子。结果:各用药组线粒体肿胀以及线粒体嵴排列紊乱等情况较模型组都有明显好转。模型组心肌TNF-α、IL-1α、IL-6浓度均明显高于正常组(P<0.05);丹参多酚酸B不同浓度组以及辛伐他汀组心肌TNF-α浓度显著低于模型组(P<0.05);丹参多酚酸B不同浓度组以及辛伐他汀组心肌IL-1α浓度均有下降,但其差异无统计学意义(P>0.05);丹参多酚酸B中剂量和高剂量组以及辛伐他汀组心肌IL-6浓度显著低于模型组(P<0.05)。结论:丹参多酚酸B具有降低TNF-α、IL-6分泌的作用,从而抑制动脉粥样硬化的炎症反应。