免疫毒素与顺铂协同杀伤肿瘤细胞机制的探讨

背景与目的:免疫毒素HELβ-PE38KDEL(HeregulinEGFlikedomainβ1-PsedomonasAeurginosa38KDEL,本文简称ITH)已经被证实是一种具有特异性杀伤erbB2、3、4阳性乳腺癌细胞的新的生物学制剂,然而它与化疗药物的联合作用效果目前尚未有报道。本文探讨ITH与化疗药物顺铂(DDP)的协同抗肿瘤作用。方法:采用AnnexinV结合实验和Westernblot检测乳腺癌细胞MDA-MB-453、2LMP和胃癌细胞N87分别在ITH和DDP单独及联合用药前后的细胞凋亡变化。结果:在高表达erbB-2、3、4的MDA-MB-453和N87中,联合用药组和单药组相比,凋亡细胞成倍增加(P<0.01);而在低表达erbB-2、3、4的2LMP,联合用药组和单药组相比,凋亡细胞无明显增加(P>0.05)。MDA-MB-453和N87细胞在联合用药组中PARP、caspase-3降解增加,bcl-2、mp53过度表达受抑制;而2LMP细胞中PARP、caspase-3降解无增加,bcl-2、mp53过度表达未受抑制。结论:ITH和DDP联合后可促进高表达erbB-2、3、4的乳腺癌细胞凋亡,这可能是两者协同作用的机制之一。     

下调SMAD1表达诱导胃癌细胞周期进展及促进细胞增殖抑制细胞凋亡的作用

目的:探讨下调SMAD1表达对胃癌细胞周期、增殖及凋亡的影响。方法:将胃癌BGC-823细胞分为三组,以转染SMAD1 siRNA的细胞为SMAD1 siRNA组,转染SMAD1 control细胞为SMAD1 NC组,对照组不做任何处理。采用Western blot检测细胞的转染效果及PTEN、Bcl-xL 和p21蛋白的表达情况,CCK-8法检测细胞的增殖情况,流式细胞仪检测细胞周期变化和细胞凋亡率。结果:转染48 h后,SMAD1 siRNA组细胞中SMAD1蛋白的相对表达量显著降低（P＜0.05）;细胞在G0/G1期所占比例显著降低,S期所占比例显著升高;SMAD1 siRNA组细胞的OD值、Bcl-xL蛋白的相对表达量显著升高,而细胞凋亡率及PTEN、p21蛋白的相对表达量显著降低,差异均有统计学意义（P＜0.05）。结论:下调SMAD1表达能够诱导BGC-823细胞从G0/G1期进入S期,促进细胞增殖并抑制细胞凋亡,其作用机制可能与下调PTEN、p21蛋白表达及上调Bcl-xL蛋白表达有关。     

重组TRAIL腺病毒抑制肺癌细胞生长和诱导凋亡的作用

目的：研究重组TRAIL腺病毒（Ad-TRAIL）对人非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460抑制生长和诱导凋亡的作用,探讨Ad-TRAIL用于非小细胞肺癌基因治疗的可能性。方法：培养肿瘤细胞,分别加入Ad-TRAIL、sTRAIL,并设Ad、PBS作对照。倒置显微镜、吖啶橙染色后荧光显微镜、电镜进行细胞形态结构观察;肿瘤细胞生长抑制实验检测细胞存活率,绘制肿瘤细胞生长抑制曲线;DNA凝胶电泳、PI染色、TUNEL染色和流式细胞术检测肿瘤细胞的凋亡;集落形成实验观察肿瘤细胞集落形成能力。结果：Ad-TRAIL组、sTRAIL组与空腺病毒Ad组、PBS阴性对照组相比均明显抑制非小细胞肺癌细胞株YTMLC、A549、H460的增殖。DNA凝胶电泳出现DNA梯形条带;形态学观察发现Ad-TRAIL组的肿瘤细胞具有细胞凋亡的形态;Ad-TRAIL作用的YTMLC细胞有较高比例（8.55%）的亚二倍体凋亡峰,而Ad和PBS组分别为1.08%和0.47%;Ad-TRAIL组被TUNEL标记的细胞比例为10.6%,高于Ad组的1.13%。Ad-TRAIL组的集落数为28±7,而PBS和Ad对照组分别为257±18,193±12。结论：Ad-TRAIL对非小细胞肺癌细胞具有抑制生长和诱导凋亡的作用,Ad-TRAIL有可能用于非小细胞肺癌的基因治疗。     

干扰NBS1表达抑制肝癌HepG2细胞增殖并促进凋亡

目的:探讨干扰NBS1基因表达对肝癌细胞HepG2增殖及凋亡的影响。方法:应用Lipofectamine 2000将NBS1特异性小干扰RNA（siNBS1）转染至肝癌细胞HepG2中,以空载脂质体作为对照组。采用RT-PCR及Western blot法检测NBS1基因表达情况,采用CCK-8法检测转染质粒后siNBS1对HepG2细胞增殖能力的影响,采用流式细胞术检测siNBS1对HepG2细胞凋亡的影响。结果:不同浓度siNBS1（10 nmol/L、20 nmol/L、50 nmol/L）均能抑制HepG2细胞中的NBS1基因在mRNA水平上的表达（P＜0.05或P＜0.01）。最高浓度siNBS1（50 nmol/L）能抑制NSB1蛋白产物的表达水平（P＜0.05）。CCK-8实验显示,转染不同浓度siNBS1的HepG2细胞与对照组相比,细胞活力明显减弱（P＜0.05或P＜0.01）,转染48 h后增殖率下降最为显著;流式细胞检测结果显示,细胞凋亡的比率在转染后明显升高（P＜0.05或P＜0.01）,并随浓度增加而更为显著。结论:干扰NBS1基因的表达可以明显抑制HepG2细胞的增殖,并促进癌细胞凋亡。     

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的:探讨mda7/IL24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制。方法：构建携带mda7基因的重组腺病毒载体Admda7。以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予AdGFP、Admda7和ALLN（毒胡萝卜素,NAcLLnorleucinal）+Admda7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase3活化、细胞增殖相关抗原ki67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase12、caspase3和Bax的表达。结果： Ad.mda7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为（312.6±30.2）mm3和（520.6±30.0）mm3（P<0.01）,两组的肿瘤质量分别为（0.321±0.031）g和（0.534±0.030）g（P<001）;Ad.mda7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组（P<0.01）;Ad.mda7可抑制肝癌组织ki67表达、微血管密度和促进caspase3的表达。 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda7对肝癌细胞的致凋亡作用（P<0.05）,并且下调Ad.mda7诱导的caspase12、caspase3和Bax的表达。结论： Ad.mda7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡。     

mda-7/IL-24对裸鼠肝癌移植瘤的生长抑制和促凋亡作用

目的: 探讨mda-7/IL-24对裸鼠肝癌细胞移植瘤的生长抑制和促凋亡作用及其相关机制.方法:构建携带mda-7基因的重组腺病毒载体Ad.mda-7.以HepG2细胞皮下接种建立裸鼠肝癌移植瘤模型,采用瘤内单点注射的方法分别给予Ad.GFP、Ad.mda-7和ALLN(毒胡萝卜素,N-Ac-L-L-norleucinal)+Ad.mda-7,观察瘤质量和瘤体积的变化,通过免疫组化和TUNEL法检测肿瘤组织内凋亡相关蛋白caspase-3活化、细胞增殖相关抗原ki-67和微血管密度、细胞凋亡率,并通过Western blotting检测caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结果:Ad.mda-7治疗组和Ad.GFP对照组肿瘤体积分别为(312.6±30.2)mm3和(520.6±30.0)mm3(P<0.01),两组的肿瘤质量分别为(0.321±0.031)g和(0.534±0.030)g(P<0.01);Ad.mda-7治疗后瘤细胞的凋亡率显著高于对照组(P<0.01);Ad.mda-7可抑制肝癌组织ki-67表达、微血管密度和促进caspase-3的表达. 经 ALLN 处理的裸鼠,明显抑制Ad.mda-7对肝癌细胞的致凋亡作用(P<0.05),并且下调Ad.mda-7诱导的caspase-12、caspase-3和Bax的表达.结论:Ad.mda-7可显著抑制裸鼠肝癌移植瘤的生长和新生血管的形成,并通过内质网应激通路显著诱导肿瘤细胞的凋亡.     

miR-15b-5p靶向HDGF抑制胃癌细胞增殖并促进凋亡

目的:研究miR-15b-5p和HDGF对胃癌细胞增殖和凋亡的影响,并探讨其作用机制。方法:采用qRT-PCR法检测胃癌细胞中miR-15b-5p的表达;通过软件预测miR-15b-5p的下游靶基因;将对数生长期AGS细胞随机分为miR-15b-5p组（转染miR-15b-5p模拟物）、miR-NC组(转染阴性对照)、Scramled 组(转染阴性对照)、shHDGF组(转染质粒pcDNA3.1-shHDGF)、Vector+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和pcDNA3.1载体共转染)、HDGF+miR-15b-5p组(miR-15b-5p模拟物和HDGF共转染),均以脂质体法转染;MTT法和流式细胞术检测各组细胞的增殖和凋亡变化;Western blot法和双荧光素酶报告基因实验分析miR-15b-5p对HDGF的靶向调控作用。结果:与正常胃黏膜上皮细胞GES-1相比,胃癌细胞SGC-7901和AGS中miR-15b-5p低表达,且过表达miR-15b-5p可抑制AGS细胞的增殖并促进凋亡。HDGF是miR-15b-5p的潜在靶标,miR-15b-5p能够抑制HDGF表达。而回补HDGF可逆转miR-15b-5p抑制胃癌细胞增殖与促进凋亡的作用。结论:miR-15b-5p可抑制胃癌细胞的增殖并促进凋亡,其作用机制可能与靶向抑制HDGF有关,提示miR-15b-5p可能成为胃癌诊断与治疗的潜在靶点。     

白花丹醌通过CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路抑制结肠癌细胞增殖、促进凋亡

目的:观察白花丹醌对结肠癌细胞Caco-2增殖、凋亡的影响,探究其潜在的作用机制。方法:运用CCK8法、流式细胞术检测不同浓度白花丹醌（4、8、12 μmol/L）处理的Caco-2细胞的增殖抑制率、凋亡率。不做任何处理的Caco-2细胞设为Control;脂质体法将si-NC组（转染si-NC）、si-CXCL8组（转染si-CXCL8）转染至Caco-2细胞;8 μmol/L的白花丹醌与0.5%DMSO处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+DMSO组;8 μmol/L的白花丹醌分别与z-VAD-FMK、740Y-P处理的Caco-2细胞设为8 μmol/L+z-VAD-FMK组、8 μmol/L+740Y-P组。RT-qPCR、Western blot实验检测细胞中CXCL8的mRNA、蛋白表达,CXCL8、M2-型丙酮酸激酶（M2 pyruvate kinase, PKM2）、L-乳酸脱氢酶A（lactate dehydrogenase A,LDHA）、人α-烯醇化酶(apha-enolase,ENO1)、葡萄糖磷酸异构酶（glucose phosphate isomerase,GPI）、磷酸化磷脂酰肌醇3激酶（phosphorylated phosphatidylinositol 3 kinase,p-PI3K）、磷酸化蛋白激酶B（phosphorylated protein kinase B,p-AKT）的蛋白表达。结果:与Control组相比,白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性促进Caco-2细胞增殖抑制率、凋亡率升高,抑制CXCL8的mRNA和蛋白表达。与8 μmol/L+DMSO组相比,8 μmol/L+z-VAD-FMK组细胞的增殖抑制率、凋亡率明显降低,CXCL8的mRNA和蛋白表达明显升高（P＜0.05）。白花丹醌（4、8、12 μmol/L）呈浓度依赖性抑制PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达。si-CXCL8组PKM2、LDHA、p-PI3K、p-AKT的蛋白表达明显低于si-NC组。740Y-P明显减弱白花丹醌对Caco-2细胞增殖抑制率和凋亡率的促进作用。结论:白花丹醌抑制结肠癌细胞增殖,促进凋亡,其潜在的作用机制与CXCL8/PI3K/AKT糖酵解通路有关。     

Lidocaine inhibits the proliferation and migration of endometrial cancer cells,and promotes apoptosis by inducing autophagy

As a gynecological malignancy, endometrial cancer (EC) has a high incidence and mortality rate in women. The aim of the present study was to investigate the mechanism of EC and to identify novel effective treatment methods for this disease. The viability and proliferation of the RL95-2 human endometrial cancer cell line were assessed using Cell Counting Kit-8 assays. Colony formation, wound healing, Transwell, TUNEL and immunofluorescence assays were used to assess the effects of 5, 10 and 15 mM lidocaine on the colony formation, migration, invasiveness, apoptosis and Beclin 1 protein expression of RL95-2 cells, respectively. Furthermore, western blotting was used to analyze the protein expression levels of apoptosis- and autophagy-related proteins. The results demonstrated that lidocaine inhibited the viability, proliferation and migration of EC cells, and promoted apoptosis. Furthermore, lidocaine was demonstrated to induce autophagy and Beclin 1 protein expression in EC cells. In conclusion, lidocaine inhibited the proliferation and migration of EC cells, and promoted apoptosis via autophagy induction, which indicated that lidocaine may be a potential therapeutic drug for the treatment of EC.     

敲减USP39基因抑制人膀胱癌细胞增殖、促进细胞凋亡

目的:探讨慢病毒介导的RNA干扰敲减泛素特异性肽酶39(ubiquitin specific peptidase 39,USP39)对人膀胱癌细胞生长和细胞凋亡的影响,为膀胱癌的治疗提供新思路.方法:RT-qPCR确定5637和T24细胞系中USP39 mRNA的表达;设计合成针对USP39的特异性shRNA,利用脂质...     

FAK/IL-8 axis promotes the proliferation and migration of gastric cancer cells

Gastric Cancer - Gastric cancer (GC) is one of the most common malignancies in China and is associated with high mortality. The occurrence and development of gastric cancer are related to genetic...     

CD155通过Ras/Erk通路促进肺腺癌细胞增殖及抑制其凋亡的分子机制

目的:研究CD155通过调控Ras/Erk通路对肺腺癌细胞活性、增殖、凋亡的影响,并探讨其作用的分子机制。方法:通过慢病毒转染法构建过表达或敲低CD155的人肺腺癌H23和H522细胞株,qRT-PCR检测肺腺癌细胞中CD155 mRNA表达水平,CCK-8法检测细胞活力,免疫荧光法测定细胞增殖和凋亡水平;Western blot检测PCNA、caspase-3、Ras、Erk1蛋白的表达及活化水平;小分子药物FTI 277或FR 180204处理过表达CD155的H23和H522细胞抑制Ras及Erk通路,检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响;采用慢病毒共转染的方法构建CD155与SPRY2共同过表达的H23细胞系,免疫共沉淀法检测细胞中SPRY2、CD155蛋白间的结合关系,以同样的方法检测对细胞活性、增殖、凋亡的影响。结果:慢病毒转染肺腺癌H23和H522细胞可上调或下调细胞中CD155的表达,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可促进肺腺癌细胞活性、增殖及PCNA蛋白的表达,抑制细胞凋亡及caspase-3的活化,敲低CD155则表现出相反的作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）;CD155过表达可激活Ras和Erk1,敲低CD155则抑制Ras和Erk1的激活,差异具有统计学意义（P＜0.05）;抑制Ras和Erk通路可抑制过表达CD155引起的细胞增殖及活性的促进作用,缓解过表达CD155诱导的细胞凋亡,差异具有统计学意义（P＜0.05）;SPRY2过表达逆转CD155过表达对H23细胞增殖及活性的促进作用,抑制对Ras/Erk通路激活的促进作用,差异具有统计学意义（P＜0.05）。结论:CD155可通过提高Ras/Erk通路的激活程度,促进肺腺癌细胞在体外的增殖及活性,其作用机制可能是部分由CD155与SPRY2蛋白发生相互作用,降低了SPRY2蛋白对Ras/Erk通路的抑制作用引起的。     

雷公藤红素上调lncRNA MEG3表达抑制肝癌细胞增殖及促进细胞凋亡

目的:探讨MEG3在雷公藤红素诱导的肝癌HepG2细胞凋亡和细胞增殖抑制过程中的作用。方法:采用CCK-8法检测HepG2细胞增殖情况,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,Western blot检测cleaved caspase-3、Bax和Bcl-2蛋白的表达,real-time PCR检测MEG3的表达。结果:雷公藤红素抑制HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡并上调MEG3的表达;敲低MEG3的表达后显著逆转了雷公藤红素诱导的HepG2细胞增殖抑制和细胞凋亡。结论:雷公藤红素通过上调MEG3的表达抑制HepG2细胞增殖、促进细胞凋亡。     

基因重组毒素HELβ1-PE38KDEL与顺铂杀伤乳腺癌细胞系的协同作用

目的：研究HELβ1－PE38KDEL与常规化疗药物面铂杀伤乳腺癌细胞系的协同作用。方法：采用细胞增殖、软琼脂集落形成等实验，测定HELβ1－PE38KDEL和顺铂对高表达erbB2、3、4的乳腺癌细胞MDA－MB－453，胃癌细胞N87的协同作用，并以低表达erbB2、3、4的乳腺癌细胞2LMP为对照。结果：HELβ1－PE38KDEL和顺铂联用对MDA－MB－453和N87具有协同杀伤作用（CI＜1）。对2LMP无协同作用（CI＞1）。结论：对高表达erbB-2、3、4的乳腺癌细胞，基因重组毒素HELβ1－PE38KDEL与顺铂联用具有协同杀伤作用。     

Arsenic trioxide inhibits proliferation and induces apoptosis in pancreatic cancer cells

Because of the poor therapeutic responsiveness of pancreatic cancer patients, new chemotherapeutic agents for pancreatic cancer would be extremely beneficial. The effects of arsenic trioxide in pancreatic cancer have not been explored. To evaluate the anti-pancreatic cancer effects of arsenic trioxide, three human pancreatic cell lines, HPAF, MiaPaCa-2 and PANC-1, were tested. Arsenic trioxide caused dose- and time dependent inhibition of pancreatic cancer cell proliferation. In parallel with inhibition of cell proliferation, arsenic trioxide induced significant morphological changes, including shrunken cytoplasm, membrane blebbing, and nuclear condensation consistent with apoptosis. Propidium iodide DNA staining showed an increase of the sub-G0/G1 cell population. The DNA fragmentation induced by arsenic trioxide in these three cell lines was confirmed by the TUNEL assay. Furthermore, Western blotting analysis indicated that caspase-3 was activated following arsenic trioxide as measured by procaspase-3 cleavage and PARP cleavage. These findings show that arsenic trioxide has potent anti-proliferative effects on human pancreatic cancer cells with induction of apoptosis in vitro.     

FHOD1 is upregulated in gastric cancer and promotes the proliferation and invasion of gastric cancer cells

Gastric cancer (GC) is one of the main causes of cancer-associated morbidity and mortality worldwide. The present study aimed to investigate the role of the gene encoding formin homology 2 domain containing 1 (FHOD1) protein in GC development. Data from The Cancer Genome Atlas were firstly analyzed, and immunohistochemistry was conducted on GC tissues. The results demonstrated that FHOD1 expression in GC tissues was significantly increased compared with adjacent non-tumor tissues. Furthermore, the expression level of FHOD1 was negatively associated with the overall survival of patients with GC. For the functional studies, lentivirus-mediated short hairpin RNA against FHOD1 and FHOD1-overexpression vectors were constructed to knockdown and overexpress the expression level of FHOD1 in human GC cell lines, respectively. The results indicated that FHOD1 knockdown inhibited the proliferation, colony formation and migratory and invasive abilities of GC cells. Conversely, overexpression of FHOD1 in GC cells promoted soft-agar colony formation and migratory and invasive abilities. In addition, it was demonstrated that genes of which expression levels were correlated with FHOD1 were enriched in the Gene Ontology term of ‘extracellular matrix (ECM) structural constituent’, suggesting that FHOD1 may serve an important role in the regulation of ECM. In conclusion, the present study demonstrated that FHOD1 may exert an oncogenic role in cultured GC cells and be inversely associated with the overall survival of patients with GC.     

棕榈酸在体外通过促进凋亡作用抑制宫颈癌Hela细胞增殖的研究

目的 探讨体外棕榈酸(Palmitic acid,PA)抑制人宫颈癌HeLa细胞增殖、迁移、侵袭和诱导凋亡作用及其部分机制。方法 体外培养的宫颈癌HeLa细胞分为对照组(不加药)、PA处理组(分别加入PA 25、50、100μg/mL处理),CCK-8法检测各组HeLa细胞增殖情况,Transwell试验检测细胞的迁移和侵袭能力,qRT-PCR检测不同浓度PA处理后细胞凋亡相关基因Bcl-2、Bax及Cleaved-caspase-3的表达,PA处理后的HaLa细胞用膜联蛋白V/碘化丙啶双标,随后用流式细胞仪检测其凋亡情况。结果 与对照组比较,PA处理HeLa细胞后增殖抑制率逐渐增高(P＜0.05);PA处理后,HaLa细胞的迁移与侵袭能力显著下降(P＜0.05);同时,PA处理HeLa细胞后,随着PA浓度增高,Bcl-2基因表达逐渐降低,而Bax和Cleaved-caspase-3基因表达逐渐增强与流式细胞仪检测结果相符合,HeLa细胞的凋亡率随着PA浓度增高逐渐增高(P＜0.05)。结论 PA体外可抑制HeLa细胞增殖,减少其迁移与侵袭水平,并诱导其凋亡,其机制可能与调节HeLa细胞Bcl-2家族有关。