甲状腺乳头状癌组织中钠碘转运体基因启动子甲基化的研究

用甲基化特异性PCR检测34例甲状腺乳头状癌及癌旁组织中钠碘转运体(NIS)基因启动子的甲基化.结果显示癌组织中NIS基因启动子甲基化显著高于癌旁组织(P＜0.05),淋巴结转移组中NIS基因启动子的甲基化显著高于无淋巴结转移组(P＜0.05),提示NIS基因启动子异常甲基化是甲状腺乳头状癌发展过程中常见的分子事件,可能影响了甲状腺乳头状癌细胞的摄碘功能.     

肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化状态观察

目的观察肺癌组织中Raf激酶抑制蛋白（RKIP）基因启动子区甲基化状态变化,探讨其与肺癌临床病理特征的关系。方法采用RT-PCR和甲基化特异性PCR法（MSP）分析肺癌及相应癌旁肺组织中RKIP基因表达情况及其启动子区甲基化状态。结果肺癌组织中RKIP基因启动子区甲基化率为45．8％（27／56）,明显高于癌旁肺组织的13．3％（2／56）,P〈0．05。所有甲基化的肺癌组织中RKIP基因均无表达。有淋巴结转移的43例肺癌组织中,27例RKIP基因启动子甲基化;无淋巴结转移的40例中,11例RKIP基因启动子甲基化（P〈0．05）。结论肺癌组织中RKIP基因失表达与其启动子区甲基化有关,这可能是肺癌发生发展以及转移的原因之一。     

BRCA1基因启动子异常甲基化与散发性乳腺癌的关系

目的 探讨散发性乳腺癌BRCA1基因启动子异常甲基化状况及其与散发性乳腺癌关系。方法 用甲基化特异PCR（MSP）法对散发性乳腺癌病人癌组织、癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织进行BRCAl异常甲基化检测。结果 在58例散发性乳腺癌中有17例癌组织检出了BRCAl基因启动子异常甲基化，甲基化频率为29．3％（17／58），相应的癌旁组织及乳腺纤维腺瘤组织均只检出未甲基化的BRCAl。在组织分型中，浸润性导管癌与浸润性小叶癌无显著差异（P〉0．05），二者各自与髓样癌＋黏液腺癌有显著差异（P〈0．05）。有淋巴结转移的BRCA1基因启动子甲基化率高于无淋巴结转移组（P〈0．005）。BRCA1甲基化与散发性乳腺癌的肿瘤分级及病人绝经与否均无显著差异（P〉0．05）。结论 在散发性乳腺癌中，BRCA1基因启动子具有很高的甲基化率，并与散发性乳腺癌的组织分型、恶性转移等方面有一定的关系。     

LMXlA基因启动子甲基化以及在胃癌发展中的临床意义

目的通过检测胃癌癌旁距离原发灶不同距离组织及胃癌原发灶LMXlA基因启动子区甲基化状态的差异,分析正常胃组织、癌前病变及癌组织中该基因甲基化的动态变化以及LMXlA基因甲基化与胃癌原发灶病理学的关系,探讨LMXlA基因启动子区甲基化在胃癌阶段性发生及进展中的作用及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR法（MSP）检测距胃癌癌灶边缘1、3、5cm组织及胃癌原发灶组织中LMXlA基因甲基化状态。结果LMXlA基因启动子区甲基化发生率在胃癌组织及距胃癌灶边缘1、3、5cm组织中分别为46．0％（23／50）、22．O％（11／50）、8．0％（4／50）和4．0％（2／50）,从距癌灶边缘5cm胃组织至胃癌原发灶组织中的表达中随距癌灶边缘距离的减少呈上升趋势,原发灶中甲基化阳性率显著高于距原发灶边缘3cm和5cm组织（x^2=15．42,P〈0．05;x^2=12．63,P〈0．01）。LMXlA基因启动子区甲基化发生率在正常胃组织、癌前病变组织及胃癌原发灶中分别为O％（0／25）、16．0％（4／25）和46．O％（23／50）,三者之间的差异具有统计学意义（×^2=24．85,P〈0．01）。LMXlA基因甲基化发生率在胃癌患者透浆膜组57．6％（19／33）显著高于未透浆膜组14．8％（4／27）（X^2=16．50,P〈0．05）;在转移淋巴结数大于7枚以上组52．9％（9／17）显著高于小于7枚组37．5％（6／16）（X^2=12．74,P〈0．05）。LMXlA基因甲基化在性别、年龄、不同大体类型、生长方式及分化程度上胃癌患者间差异无统计学意义。结论LMXlA基因启动子区异常甲基化可能与胃癌的临床进展有一定的相关性。     

CXCR4及其配体SDF-1在甲状腺乳头状癌颈淋巴结转移中的作用

目的探讨趋化因子受体4（CXCR4）及其配体基质细胞衍生因子-1（SDF-1）在甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移中的作用。方法采用免疫组化SP法检测53例甲状腺乳头状癌患者癌组织中CXCR4蛋白和颈部转移淋巴结组织中SDF-1蛋白表达情况。结果癌组织中CXCR4蛋白呈高表达水平,与癌旁正常组织比较,P〈0．05;CXCR4蛋白表达与甲状腺乳头状癌临床分期及淋巴结转移有关;癌细胞转移者颈部淋巴结组织中SDF-1蛋白呈高表达,显著高于无转移者,SDF-1蛋白表达仅与淋巴结转移有关（P〈0．05）;癌组织中CXCR4蛋白表达与淋巴结组织中SDF-1蛋白表达水平呈负相关（r=-0．3207,P=-0．0171）。结论CXCRd及其配体SDF-1在甲状腺乳头状癌中相互协调,共同促进甲状腺乳头状癌细胞向颈部淋巴转移。     

血浆Runx3基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌的临床价值

目的探讨血浆Runt相关转录因子3（Runx3）基因启动子甲基化检测诊断早期肝细胞癌（HCC）的临床价值。方法采用DNA甲基化特异性PCR方法,检测81例HCC患者的癌组织、癌旁正常组织及血浆Runx3基因启动子异常甲基化情况。结果癌旁正常组织未发现Runx3异常甲基化现象;癌组织Runx3异常甲基化率43．2％（35／81）,血浆39．5％（32／81）;血浆Runx3甲基化改变与癌组织甲基化改变显著相关（P〈0．05）。Runx3基因异常甲基化与HCC患者的临床病理参数无显著相关性（P〉0．05）。结论血浆Runx3基因启动子甲基化检测对早期诊断HCC有一定参考价值。     

胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态观察

目的观察胃癌组织中E—cadherin基因启动子异常甲基化状态。方法采用甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）技术检测54例胃癌及其癌旁正常组织中的E—cadherin基因启动子异常甲基化状态,并分析E-cadherin基因启动子异常甲基化状态与胃癌临床病理参数的关系。结果胃癌组织中的E-cadherin基因启动子异常甲基化发生频率为48．10％（26／54）,明显高于癌旁正常组织中的11．11％（6／54）。E—cadherin基因启动子异常甲基化频率与胃癌分化程度、病理类型、浸润深度以及淋巴结转移、临床分期有关（P均〈0．05）。结论胃癌组织中E-cadherin基因启动子异常甲基化频率较高,并与胃癌浸润、转移有关。     

乳头状甲状腺癌抑癌基因TSHR、P16和RAS启动子甲基化研究

目的 研究促甲状腺激素受体(TSHR)、P16和RAS 3个抑癌基因在乳头状甲状腺癌的表达,分析其启动子甲基化与肿瘤发生的关系.方法 对50例乳头状甲状腺癌组织和32例对照组织(20例结节性甲状腺肿,12例甲状腺腺瘤)提取RNA后,以RT-PCR检测3个抑癌基因mRNA的表达情况,采用甲基化PCR(MSP)检测上述组织中3个抑癌基因启动子区甲基化的情况,并对3个抑癌基因甲基化和未甲基化的组织随机进行测序.结果 50例乳头状甲状腺癌组织中,有34例(68.0%)TSHR基因、27例(54.0%)P16基因、30例(60.0%)RAS基因启动子发生了甲基化;32例对照组织中,有7例(21.9%)TSHR基因、5例(15.6%)P16基因、10例(31.3%)RAS基因启动子发生了甲基化;乳头状甲状腺癌组TSHR、P16、RAS基因启动子甲基化率均显著高于对照组(均P<0.05).TSHR、P16和RAS mRNA在乳头状甲状腺癌中的表达量明显低于对照组织(0.41±0.11对0.63±0.08,0.51±0.17对0.72±0.22,0.56±0.10对0.67±0.16,均P<0.05).经DNA测序证实,3个抑癌基因启动子发生甲基化的其CpG岛碱基未发生改变,仍为CG;未发生甲基化的碱基由CG变为TG.结论 3个抑癌基因启动子甲基化与乳头状甲状腺癌的发生和发展均相关.     

多灶性甲状腺乳头状癌生物学行为分析

目的探讨多灶性甲状腺乳头状癌临床病理特征及其生物学行为。方法收集92例多灶性甲状腺乳头状癌（多灶组）和224例单灶性甲状腺乳头状癌（单灶组）标本,比较两组临床病理因素以及肿瘤生物学行为的差异。结果①多灶性甲状腺乳头状癌的发病与淋巴结转移、腺外浸润、肿瘤复发有关（P〈0．05）,与性别、年龄、是否是微小癌等临床病理学因素无关（P〉0．05）;②多灶性甲状腺乳头状癌颈部淋巴结转移率为58．7％,其中中央区与颈侧区淋巴结转移呈显著相关性（r=0．425,P〈0．01）;③多灶性甲状腺乳头状癌转移与癌灶大小、部位无关（P〉0．05）;④甲状腺乳头状癌复发与淋巴结转移呈正相关（r=0．397,P〈0．01）。结论多灶性甲状腺乳头状癌易转移、复发,中央区为较早发生淋巴转移的区域,中央区与颈侧区淋巴结转移呈正相关,淋巴结转移的研究有助于确定选择性颈淋巴结清扫术的范围。     

胃癌组织Runx3基因甲基化的检测及意义

目的探讨胃癌组织中Runx3基因甲基化情况及其意义。方法采用DNA甲基化特异性PCR技术（MSP）对35例胃癌患者手术切除的肿瘤组织及癌旁组织Runx3基因启动子区域甲基化进行检测,同时采用RT—PCR检测Runx3mRNA的表达。结果胃癌及癌旁组织Runx3基因的甲基化发生率分别为40．0％和8．5％;胃癌组织Runx3mRNA表达较癌旁正常组织下调（P〈0．05）;Runx3mRNA的表达与胃癌分化程度及淋巴结转移有关。结论Runx3基因甲基化是导致Runx3基因失活的主要原因之一,与胃癌的发生发展密切相关。     

甲状腺乳头状癌组织中COX-2、MMP-9的表达及意义

目的检测甲状腺乳头状癌组织中环氧化酶（COX）-2、基质金属蛋白酶（MMP）-9的表达,并探讨其临床意义。方法采用免疫组织化学SP法检测74例甲状腺乳头状癌（有淋巴结转移者39例,无淋巴结转移者35例）患者肿瘤组织及15例癌旁正常甲状腺组织中的COX-2和MMP-9蛋白。结果COX-2和MMP-9蛋白在有淋巴结转移组甲状腺乳头状癌细胞中阳性表达率分别为86．0％和89．7％,在无淋巴结转移组甲状腺乳头状癌细胞中的阳性表达率分别为57．1％和60．0％,二组阳性表达率相比P均〈0．05。结论甲状腺乳头状癌中COX-2和MMP-9蛋白表达上升,且其表达与肿瘤淋巴道转移相关;检测这两种蛋白表达将有助于判断甲状腺乳头状癌的转移潜能及预后。     

上皮型钙黏素基因启动子甲基化与胃肠腺癌的关系及意义

目的探讨上皮型钙黏素（E—cad）基因启动子CpG岛甲基化与胃腺癌（GAC）和大肠腺癌（CRAC）的关系及意义。方法用甲基化特异性PCR技术检测82例GAC组织（GAC组）、30例十二指肠球部溃疡胃窦黏膜组织（对照组）、30例慢性胃炎伴肠上皮化生或异型增生胃黏膜组织（胃炎组）、94例CRAC组织（CARC组）及其癌旁非肿瘤组织中的E—cad基因启动子CpG岛甲基化状况。结果GAC组E—cad甲基化率显著高于对照组和胃炎组（P〈0．01,〈0．05）,低分化者显著高于高、中分化者（P〈0．05）,Ⅲ～Ⅳ期肿瘤显著高于Ⅰ～Ⅱ期（P〈0．05）CRAC组显著高于癌旁非肿瘤组织（P〈0．01）。结论E—cad基因启动子CpG岛甲基化可能参与胃肠腺癌发生。     

APC基因异常甲基化在上皮性卵巢癌中的检测及临床意义

目的探讨结肠腺瘤性息、肉病基因（APC）异常甲基化在上皮性卵巢癌发生、发展中的作用及临床意义。方法采用甲基化特异性PCR法检测63例上皮性卵巢癌组织原发灶、41例相应的盆腹腔转移灶、10例癌旁卵巢组织及20例正常卵巢组织中APC基因启动子区甲基化状态。结果上皮性卵巢癌组织原发灶及相应的盆腹腔转移灶中APC基因启动子区异常甲基化发生率分别显著高于正常卵巢组织（P〈0．05）。APC基因启动子区甲基化与上皮性卵巢癌临床分期、分化程度及病理类型无关。结论APC基因启动子区异常甲基化与上皮性卵巢癌发生、发展密切相关。     

胃癌组织p21基因表达及基因改变的研究

目的研究胃癌组织P21蛋白表达和p21基因改变的意义．方法32例胃癌石蜡标本，其中乳头状腺癌6例，管状腺癌9例，粘液腺癌8例，低分化腺癌7例，未分化癌2例，存在淋巴结转移的标本23例，32例癌旁正常胃粘膜组织作对照．应用ABC免疫组化方法检测P21蛋白表达，单链构象多态性分析（SSCP）检测p21基因改变．参照文献确定p21蛋白表达的阳性标准及SSCCP检测p21基因异常标准，并对结果进行统计学分析．结果胃癌组织P21蛋白表达阳性率56．3％（18／32），其中管状腺癌77．8％（7／9），乳头状腺癌83．3％（5／6），粘液腺癌37．5％（3／8），低分化腺癌42．9％（3／7），未分化癌0％（0／2），存在淋巴结转移组为43．5％（10／23），无淋巴结转移组为88．9％（8／9），癌旁组织为90．6％（29／32）．P21蛋白表达阳性率胃癌组织较癌旁组织明显降低（P＜0．05），与胃癌伴淋巴结转移呈负相关（P＜0．05），不同病理类型间未见差异显著（P＞0．05）．PCR－SSCR分析18．8％（6／32）胃癌组织存在p21基因改变．结论p21基因以异常表达及基因改变的方式参与胃癌发生、发展．     

乳腺癌组织中p16基因甲基化与p16、ER蛋白表达的相关性及意义

目的探讨p16基因甲基化在乳腺癌发生、发展中的作用。方法应用甲基化特异性PCR（MSP）联合测序检测58份乳腺癌及其癌旁组织中p16基因甲基化状态,应用免疫组化sP法检测p16及ER蛋白表达情况,对各指标间关系行Spearman相关分析。结果p16基因在乳腺癌中甲基化率为29,3％（17／58）,有淋巴结及远处转移者显著高于无转移者（P〈0．05）;p16甲基化及非甲基化者p16蛋白表达阻性（失表达）率分别为82．4％（14／17）、43．9％（18／41）,ER蛋白失表达率分别为76．5％（13／17）、24．4％（10／41）,P均〈0．05。结论p16基因甲基化在乳腺癌发生、发展中具有重要作用,机制可能与调节p16和ER蛋白表达有关。     

hMLH1基因高甲基化在胃癌发生、发展中的作用

基因启动子区CpG岛甲基化使许多基因失活，从而导致恶性肿瘤的发生和发展。目的：检测hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化水平，探讨其胃癌发生、发展中的作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测41例胃癌、40例癌前病变和38例对照组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化状态，并分析其与胃癌患者临床病理特征的关系。结果：胃癌组织中hMLHl基因启动子区CpG岛甲基化阳性率为34．1％，显著高于癌前病变组的5．0％和对照组的0％（P〈0．05）。hMLHl基因甲基化阳性率与胃癌患者的年龄和肿瘤浸润深度有关（阳性率分别为46．4％对7．7％和55．0％对14.3％，P〈0．05），与性别、肿瘤分化程度和淋巴结转移无关（阳性率分别为34．8％对33．3％、28．0％对43．8％和38．1％对30．0％）。结论：胃癌组织中存在hMLHl基因启动子区CpG岛高甲基化，可能与胃癌的发生、发展有关．且可能在老年胃癌患者的肿瘤发生过程中起重要作用。     

结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化及意义

目的观察结肠癌组织中RAS相关区域家族1A（RASSF1A）基因启动子甲基化状态、mRNA表达变化,并探讨其意义。方法分别采用甲基化特异性PCR（MSPCR）和RT-PCR技术检测80例结肠癌及癌旁正常结肠组织中RASSF1A基因启动子甲基化、mRNA。结果 80例正常结肠组织中RASSF1A基因启动子未见甲基化,80例结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化者58例,两者相比,P〈0.05。正常结肠组织均可检测到RASSF1A基因mRNA,结肠癌组织中RASSF1A基因启动子甲基化者未检测到RASSF1A基因mRNA、未甲基化者可检测到RASSF1A基因mRNA。RASSF1A基因启动子甲基化与结肠癌病理分型、淋巴结转移、远处转移和Dukes分期有关（P均〈0.05）。RASSF1A基因mRNA的表达与结肠癌Dukes分期有关（P〈0.05）。结论结肠癌组织中RASSF1A基因启动子出现甲基化,RASSF1A基因启动子甲基化者RASSF1A基因mRNA表达缺失,这可能与结肠癌的发生发展及转移有关。     

胃癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化检测

Ras相关结构域家族1A（RASSF1A）基因是近年发现的新型抑癌基因，其启动子区甲基化可能与胃肠道肿瘤的发生、发展密切相关。目的：检测胃癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化情况，探讨其在胃癌早期诊断和预后评估中的可能作用。方法：以甲基化特异性聚合酶链反应（MSP）检测47例胃腺癌患者、30例胃良性病变患者和30名健康对照者的血清RASSF1A基因启动子区甲基化情况，其中16例胃腺癌患者同时留取手术切除癌组织、癌旁组织标本以及术前、术后血标本行对照研究。结果：胃腺癌患者血清RASSF1A基因启动子区甲基化率为34．0％（16／47），显著高于胃良性病变患者（3.3％，1／30）和健康对照者（0％）（P〈0．01）。16例胃腺癌组织中5例（31．2％）检测到RASSF1A基因启动子区甲基化，其中4例（80．0％）术前、术后血清标本均检测到RASSF1A基因启动子区甲基化。血清RASSF1A基因启动子区甲基化与胃癌患者性别、年龄、肿瘤分化程度、有无转移以及血清癌胚抗原（CEA）水平均无相关性。结论：血清RASSF1A基因启动子区甲基化检测可望为胃癌的早期诊断和预后判断提供依据。     

散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子甲基化状态观察

目的观察散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子CpG岛甲基化的状态。方法用特异性甲基化PCR法检测66例散发性乳腺癌和32例正常乳腺组织中EMSY基因启动子区甲基化情况。结果乳腺癌组织有11例（16．7％）、正常乳腺组织有12例（37．5％）EMSY基因启动子发生甲基化,两者相比,P〈0．05。结论散发性乳腺癌组织中EMSY基因启动子区呈低甲基化状态,可能与散发性乳腺癌的发生发展有关。     

Rap1GAP蛋白在甲状腺乳头状癌中的表达及其甲基化水平

应用免疫组织化学方法,检测Rap1GAP蛋白在甲状腺乳头状癌肿瘤组织及其癌旁组织中的表达情况,并运用甲基化特异性PCR方法进行Rap1GAP基因启动子区甲基化水平检测.结果显示,在69例检测样本中,有54例(78％)甲状腺乳头状癌患者的肿瘤组织Rap1GAP蛋白表达较癌旁组织下调;Rap1GAP蛋白的下调与患者的美国癌症联合委员会(AJCC)分期T值密切相关(P=0.043).甲基化分析发现,54例Rap1GAP表达下调的甲状腺乳头状癌中46例出现甲基化(66.7％),15例表达水平无明显变化的甲状腺乳头状癌中1例出现甲基化(6.67％),二者对比差异有统计学意义(P＜0.01);同时69例癌旁正常组织未检测到甲基化.提示基因启动子区的甲基化改变可能是Rap1GAP蛋白表达下调的重要机制之一.