重复加热对肝癌HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨连续10d加热后残留的HepG2细胞的凋亡率改变及Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达变化。方法HepG2细胞经43℃加热,每次80m in,2次/d,共10个循环后,检测其细胞凋亡率、Bc l-2和Bax基因/蛋白的表达。结果热处理前、后HepG2细胞的凋亡率分别为(9.0%±0.8%)、(5.8%±1.3%)(P<0.05);热处理后HepG2细胞的Bax基因/蛋白的表达无明显变化,但Bc l-2基因/蛋白的表达增强,且Bc l-2/Bax比值的增加。结论热处理后HepG2细胞的凋亡率降低与其Bc l-2基因/蛋白的强表达及Bc l-2/Bax比值的增加有关。     

二氯乙腈对HepG2细胞凋亡的影响

目的探讨饮水消毒副产物二氯乙腈(dichloroacetonitrile,DCAN)对Hep G2细胞凋亡的影响及相关调控机制。方法二甲基亚砜(DMSO)溶解DCAN,以DMSO处理人肝癌细胞(Hep G2细胞)为对照组,分别以50μmol/L、100μmol/L、200μmol/L、400μmol/L DCAN染毒Hep G2细胞为处理组,培养24 h后通过Annexin V/PI流式细胞分析法检测细胞凋亡情况,用荧光测定法观察Caspase 3酶活性,蛋白质印迹法(Western blotting)技术检测Hep G2细胞pro-caspase 3和P53蛋白的表达情况。结果与对照组相比,400μmol/L DCAN处理组可诱导Hep G2细胞凋亡(P<0.05),各处理组细胞内Caspase 3酶活性随着染毒剂量的增加而显著升高(P<0.05)。DCAN作用于Hep G2细胞后pro-Caspase 3和P53蛋白含量呈下降趋势,当染毒浓度达到200μmol/L以上时,pro-Caspase 3和P53蛋白表达明显低于对照组(P<0.05)。结论高浓度的DCAN可通过激活Caspase 3诱导Hep G2细胞凋亡。     

NS-398对肝癌细胞系HepG2环氧合酶-2表达的影响

目的 研究环氧合酶-2(COX-2)抑制剂氮-2,环己氧-4,硝基苯-甲基磺胺(NS-398)对肝癌细胞株HepG2细胞体外抗肿瘤作用,探讨其抗癌作用的分子机理.方法 分别用100、200、300、400μmol/L NS-398处理HepG2细胞,以四甲基偶氮唑蓝(MTT)法测定肿瘤细胞增殖抑制率,流式细胞仪(FCM)检测细胞周期的改变及凋亡百分比的变化,用Westen blotting检测COX-2蛋白的表达,用放射免疫测定法检测NS-398对HepG2细胞前列腺素E2(PGE2)释放水平.结果 NS-398呈剂量依赖性的方式抑制HepG2细胞增殖,并诱导其凋亡,细胞周期分析表明,随着浓度增大,S期细胞明显减少,有G1期细胞累积现象,24 h时半数有效剂量(IC50)为300μmo/L.NS-398明显抑制COX-2的活性和表达.随着浓度的增加,其COX-2蛋白表达逐渐降低,100、200、300、400μmol/L NS-398组灰度值分别为1515.1±127.2、1023.5±108.4、691±94.3和493.6±86.6,与对照组1822±157.4相比差异有统计学意义(t值分别为3.736、1.623、1.810、2.587,P<0.01).NS-398可明显抑制HepG细胞PGE2释放水平,其吸光度值(A值)分别为0.70±0.02、0.48±0.02、0.29±0.01和0.18±0.01,与对照组比较0.03±0.01差异有统计学意义.结论 NS-398对肝癌细胞增殖有抑制作用并诱导其凋亡,可能与细胞G1期阻滞以及通过抑制COX-2活性,抑制COX-2下游产物PGE2表达有关.     

赛莱西布对肝癌HepG2细胞增殖与凋亡影响

目的探讨选择性环氧合酶-2（cox-2）抑制剂赛莱西布（celecoxib）对人肝癌细胞株HepG2细胞增殖、凋亡的影响及其可能的作用机制。方法用不同浓度的赛来西布处理HepG2细胞，分别应用四甲基偶氮噻唑蓝试验、DNA梯度电泳法、放射免疫法检测赛亚西布对HepG2细胞增殖和凋亡及其COX-2活性的影响；应用免疫印迹法和比色法检测赛莱西布对HepG2细胞胱氨酸蛋白酶3（clasepase-3）蛋白质的表达及活性的影响。结果12．5，25，50μmol／L的赛莱西布作用于HepG2细胞后，HepG2细胞增殖受抑制，与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布干预组HepG2细胞DNA明显降解，可见细胞凋亡特征性梯状DNA条带；干预组HepG2细胞caspase3蛋白表达及活性均明显升高。与对照组比较，差异均有统计学意义（P〈0．01）；赛莱西布明显抑制HepG2细胞cox-2活性。与对照组比较，差异有统计学意义（P〈0．01）。结论赛莱西布可通过cox-2通路和easpase3通路抑制HepG2细胞增殖并诱导其凋亡。     

Caspase 3在土荆皮酸诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用

目的:探讨Caspase 3在土荆皮酸(PAB)诱导卵巢癌SKOV3细胞凋亡中的作用。方法:使用不同浓度的PAB处理SKOV3细胞,应用流式细胞仪检测细胞周期的分布,采用Western Blot法检测SKOV3细胞经PAB作用前后Bcl-2和Caspase 3蛋白的表达变化。结果:经PAB作用后,SKOV3细胞出现剂量依赖性G2/M期阻滞伴随细胞凋亡,随药物浓度增加,Bcl-2蛋白表达逐渐下降,Caspase 3蛋白表达上调,Caspase 3活化百分率增高。结论:PAB能通过调节Bcl-2蛋白的表达激活Caspase 3,从而诱导SKOV3细胞发生凋亡。     

丙型肝炎病毒F蛋白上调肝癌细胞HepG2中Bcl-2和Bax表达

目的 研究丙型肝炎病毒(hepatitis C virus,HCV)基因1b型F蛋白对HepG2细胞中Bcl-2、Bax表达的影响.方法 应用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术扩增HCV 1b型的F基因,构建pEGFP-C3-F、pEGFP-C3-C真核表达载体,分别将pEGFP-C3-F、pEGFP-C3-C、pEGFP-C3(阴性对照)瞬时转染HepG2细胞,48h后抽细胞总蛋白质,蛋白质印迹法(Western blot)检测Bcl-2、Bax表达的变化.结果 转染F基因的HepG2中Bcl-2表达水平略高于未转染的细胞,但Bax表达水平显著高于未转染的细胞.结论 HCV F蛋白具有调节原癌基因Bcl-2和抑癌基因Bax的特性,可能与肝癌的形成有关.     

二甲基乙酰胺对人胚肺细胞凋亡及Bcl-2和Caspase-3表达的影响

目的探讨二甲基乙酰胺(DMAC)诱导人胚肺成纤维细胞(HELF凋亡)的可能机制。方法用MTT法检测细胞生长抑制率,用Hoechst染色法检测细胞凋亡,用Western blot法检测Bcl-2、Caspase-3蛋白表达。结果DMAC处理HELF细胞24 h均可诱导细胞发生凋亡,并呈现明显的剂量-效应关系;DMAC诱导HELF细胞凋亡过程中伴随着Bcl-2蛋白表达下降、Caspase-3蛋白表达增加。结论 DMAC可诱导HELF细胞凋亡,其机制可能与Bcl-2蛋白表达下降从而激活Caspase-3的表达有关。     

不同周龄小鼠卵巢中Nrf2蛋白的表达和定位

目的研究Nrf2蛋白随小鼠卵巢增龄性改变后的表达和定位差异,探索Nrf2蛋白与卵巢储备功能的关系。方法采用免疫组织化学方法检测Nrf2蛋白在不同周龄小鼠卵巢组织中的定位情况;采用蛋白免疫印迹方法检测不同周龄小鼠卵巢组织中Nrf2蛋白的表达变化,同时检测凋亡相关蛋白Caspase3、Bcl-2的表达情况。结果 Nrf2蛋白主要表达在次级卵泡和窦卵泡的颗粒细胞和卵母细胞中,其在生育期的表达量显著高于幼龄期和近绝育/绝育期,差异有统计学意义(P0.01)。凋亡蛋白Caspase3在育龄期小鼠卵巢组织中的表达显著高于幼龄期和老龄期,抗凋亡蛋白Bcl-2在幼龄期小鼠卵巢组织中的表达显著高于其他周龄小鼠,差异有统计学意义(P0.01)。结论 Nrf2蛋白可能参与了卵巢储备功能的调节,其机制可能与细胞凋亡有关。     

鸟苷酸二钠通过抑制Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡通路保护LPS/D-GalN致小鼠急性肝损伤

目的 观察鸟苷酸二钠（Disodium guanylate, GMP-Na2）对脂多糖（LPS）/D-氨基半乳糖（D-GalN）致小鼠急性肝损伤致小鼠肝损伤的保护作用,并探讨其Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路机制。方法 60只小鼠随机分为:正常对照组、模型组、阳性对照组（联苯双酯200mg/kg）及鸟苷酸二钠高（250mg/kg）、中（125mg/kg）、低（62.5mg/kg）剂量组,每组10只。各组小鼠每天给药1次,连续14d。末次给药后4h,除正常对照组腹腔注射生理盐水外,其余各组小鼠均腹腔注射LPS 10μg/kg + D-GalN 700mg/kg复制急性肝损伤模型。造模后24h,采用比色法检测小鼠血清AST、ALT、ALP和T-BIL水平;采用生化法测定肝组织SOD、MDA及GSH-Px水平;采用ELISA法测定肝组织TNF-α、IL- 1β及IL- 6含量;H&E染色进行肝组织病理学观察;采用RT-PCR和western blot法检测肝组织 Caspase 3、Bax和Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平。结果 与模型组比较,鸟苷酸二钠250、125mg/kg组小鼠血清ALT、AST、ALP及T-BIL水平明显下降;肝组织SOD、GSH-Px活性升高, MDA、TNF-α、IL- 1β及IL- 6含量降低;肝组织病理形态学损伤显著改善;肝组织Caspase 3、Bax mRNA和蛋白表达水平下调, Bcl-2 mRNA和蛋白表达水平上调。结论 鸟苷酸二钠对LPS/D-GalN致小鼠急性肝损伤肝功能具有保护作用,且可抑制其诱发的肝脏炎症反应和过氧化应激反应,其作用机制与下调Caspase 3/Bax/Bcl-2凋亡信号通路有关。     

人口腔白斑及鳞状细胞癌中COX-2和Bcl-2表达的研究

目的探讨COX-2和Bcl-2在正常口腔粘膜、不典型增生性口腔白斑、口腔鳞癌组织中的表达及意义。方法应用免疫组织化学法检测12例正常口腔粘膜组织、15例单纯性增生性口腔白斑，33例不典型增生性口腔白斑、42例鳞癌中COX-2和Bcl-2的表达。结果COX-2在正常组和单纯增生性白斑组表达基本一致（P〉0．05），在不典型增生性白斑组、鳞癌组的阳性表达率明显高于正常组和单纯增生性白斑组（P〈0．05）。Bcl-2在正常组、单纯增生组白斑、不典型增生性白斑组中不表达或弱表达，在鳞癌组中呈阳性表达，鳞癌组织中Bcl-2的阳性表达率明显高于其他组（P〈0．01）。COX-2和Bcl-2的表达有相关性（P〈0．01）。结论：COX-2参与肿瘤的发生发展，可能成为口腔鳞癌早期诊断的分子指标之一。Bcl-2在肿瘤形成的早期阶段可能并不发挥主要作用，但对临床监测非典型性增生的转归有一定的意义。     

子宫内膜息肉中Bcl-2、Bax和Caspase3表达及其意义

组显著低于对照组(P<0.05).增生期研究组和对照组中Caspase3均有一定程度的表达,但两组相比无显著性差异(P>0.05),分泌期研究组和对照组中Caspase3的表达均增强,但研究组中Caspase3的表达显著低于对照组(P<0.05).结论:增生期Bel-2的高表达及分泌期Bax的低表达可能参与子宫内膜息肉的形成.分泌期子宫内膜息肉中Caspase3的表达增高,但明显少于正常子宫内膜,提示Caspase3可能参与子宫内膜息肉的发生、发展.     

Nimesulide诱导胰腺癌细胞凋亡机制的研究

目的：探讨选择性COX-2抑制剂Nimesulide对人胰腺癌PANC-1细胞增殖和凋亡的影响及其可能分子机制。方法：应用四甲基偶氮唑蓝（MTT）法观察不同浓度Nimesulide对PANC-1细胞增殖的影响;流式细胞术（FACS）及DNA梯状电泳（DNA ladder）检测PANC-1细胞凋亡的改变;Western blotting法检测Nimesulide不同浓度作用下PANC-1细胞COX-2蛋白水平的改变,RT-PCR法检测COX-2 mRNA水平的变化。结果：MTT、流式细胞术及DNA ladder显示Nimesulide呈剂量依赖性地抑制PANC-1细胞的增殖,并诱导其凋亡;Western blotting和RT-PCR法显示随着药物浓度的增加,COX-2蛋白及mRNA表达降低。结论：Nimesulide可能通过对COX-2表达的下调而诱导凋亡,从而抑制人胰腺癌PANC-1细胞生长。     

植酸通过线粒体途径诱导人肝癌细胞凋亡

目的 探讨植酸（IP₆）如何通过线粒体途径诱导人肝癌HepG2细胞凋亡,为研究IP₆的抗肿瘤作用提供理论依据。方法 应用Hoechst 33258荧光染色法和流式细胞仪Annexin-FITC/PI双染法观察不同浓度IP₆作用HepG2细胞后的凋亡情况;流式细胞仪检测IP₆作用HepG₂细胞后线粒体膜电位（ΔΨm）的变化;RT-PCR法检测HepG2细胞内caspase-3mRNA的表达变化;Western blot法检测IP₆作用HepG2细胞后Cyt-c的表达变化。结果 荧光显微镜下可观察到IP₆作用后细胞出现明显的凋亡形态;与对照组相比,IP₆可升高细胞凋亡率（F=342.15,q=2.9～28.53,P<0.05）,且随着浓度增加,凋亡率逐渐升高（P<0.05）;IP₆可降低线粒体膜电位（F=14802.610,q=101.531～209.237,P<0.05）,且随着浓度增加,膜电位逐渐降低（P<0.05）;IP₆可增加caspase-3 mRNA的表达（F=30.474,q=3.406～9.103,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐增加（P<0.05）;IP₆可上调细胞色素C（Cyt-c）的表达（F=87.194,q=5.246～15.218,P<0.05）,且随着浓度增加,表达逐渐上调（P<0.05）。结论 IP₆可通过降低线粒体膜电位,上调细胞色素C水平,激活caspase-3途径,促进人肝癌HepG2细胞发生凋亡。     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 1 2 5、2 5 0、50 0、1 0 0 0及 2 0 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALadder)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果发现 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;γ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景     

Bcl-2和Bax蛋白及基因在铝致神经细胞毒性作用中的表达

目的 通过研究Bcl-2和Bax蛋白及基因在铝致神经细胞毒性作用中的表达,以探讨铝对体外培养大鼠神经元细胞的神经毒性作用.方法 用不同浓度氯化铝体外培养大鼠神经元细胞染毒,用原位缺口末端标记（TUNEL）法和扫描电镜观察检测细胞凋亡,免疫组化法测定Bcl-2和Bax蛋白含量,RT-PCR法测定Bcl-2和Bax基因表达量.结果 （1）TUNEL法检测DNA碎片随染铝剂量的加大而增加,扫描电镜观察到了凋亡细胞典型的出芽现象和细胞裂解及凋亡小体的释放.（2）免疫组化和RT-PCR法检测Bcl-2蛋白含量及基因表达量随染铝剂量的加大而减少（P＜0.01,r=-0.695;P＜0.05,r=-0.647）,反之,Bax蛋白含量及基因表达量随染铝剂量的加大而增加（P＜0.01,r=0.676;P＜0.01,r=0.794）.Bcl-2/Bax与铝的作用剂量有关（P＜0.01,r=-0.655;P＜0.01,r=-0.777）.结论 低剂量铝暴露能够诱导神经元凋亡,Bcl-2和Bax蛋白及基因表达在铝致神经细胞凋亡的过程中发挥了重要的调控作用.     

阴道超声辐照后人胚绒毛滋养细胞凋亡及Bcl-2蛋白和Caspase-3蛋白表达的研究

目的:探讨阴道超声辐照对人胚绒毛滋养细胞凋亡的影响及其可逆性,同时探索Bcl-2蛋白及活化Caspase-3蛋白在滋养细胞凋亡中的作用。方法:选取符合条件的患者50例,随机分为5组,每组10例。4组实验组患者经阴道超声持续辐照10 min后分别于第1、3、5、7天行人工流产收集绒毛标本,第5组为对照组。采用TUNEL法检测各组绒毛滋养细胞的凋亡指数;同时采用免疫组化SABC法检测相应绒毛滋养细胞中Bcl-2蛋白及活化Caspase-3蛋白的表达水平。结果:阴道超声辐照对滋养细胞凋亡有影响。经阴道超声辐照10 min后,1天人胚绒毛滋养细胞的凋亡指数最高、Bcl-2蛋白的表达量最少、Caspase-3蛋白的表达量最多;随着取胚时间延长,凋亡指数逐渐下降、Bcl-2蛋白表达量逐渐增加、Caspase-3蛋白表达量逐渐减少;凋亡指数、Bcl-2蛋白及Caspase-3蛋白表达量分别于辐照后第5天、第3天、第5天开始与对照组比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论:阴道超声辐照10 min可致人胚绒毛滋养细胞凋亡增加,但该改变呈近期可逆性。Bcl-2蛋白和活化Caspase-3蛋白在滋养细胞凋亡中起着重要作用。     

维生素E同系化合物诱导人肝癌细胞凋亡的作用

为探讨α 生育酚 (α T)、γ 生育酚 (γ T)、δ 生育酚 (δ T)及维生素E琥珀酸酯 (VES) 4种维生素E同系化合物对肝癌细胞凋亡影响 ,在体外培养的人肝癌细胞 (HepG2 )培养液中分别加入 12 5、2 5 0、5 0 0、10 0 0及 2 0 0mg L的 4种维生素E同系化合物培养 48h后 ,采用流式细胞仪技术 (FCM)和DNA梯度电泳 (DNALad der)定量分析HepG2细胞凋亡及DNA降解片段情况。结果显示 ,FCM凋亡检测发现δ T和VES培养的HepG2细胞凋亡率增加 ,并呈现剂量依赖关系 ,即随着δ T、VES剂量增加HepG2细胞凋亡亦增加 ,其中δ T诱导HepG2细胞凋亡作用强于VES ;δ T处理的HepG2细胞只在 2 0 0mg L剂量时出现轻度的凋亡增加 ;未见α T有诱导HepG2细胞凋亡的作用。DNA梯度电泳检测发现δ T和VES处理HepG2细胞的DNA出现明显的排列成梯状的分子条带 ,α T、γ T处理组则未见明显的条带。结果提示 ,维生素E同系化合物诱导肝癌细胞凋亡作用不同 ,效应排序为δ T >VES >γ T >α T ,δ T和VES具有潜在抗肝癌临床应用前景     

重度子痫前期胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及意义

目的:探讨重度子痫前期患者胎盘组织中Bcl-2和Caspase-3的表达及其与重度子痫前期发生、发展的关系。方法:采用免疫组织化学染色方法检测20例正常晚期妊娠孕妇(对照组)、40例重度子痫前期患者(重度子痫前期组,其中早发型20例,晚发型20例)的胎盘组织进行Bcl-2和Caspase-3的定位,并用计算机图像分析系统进行定量分析。结果:与对照组比较,重度子痫前期组Bcl-2的表达显著降低和Caspase-3的表达显著升高,且两者呈负相关(r=-0.334,P=0.009),早发型重度子痫前期与晚发型重度子痫前期比较,差异无统计学意义(P>0.05)。结论:在胎盘组织中Bcl-2低表达和Caspase-3的高表达,可能与重度子痫前期的发生有关。     

Bcl-2 and Bax are involved in experimental cryptorchidism-induced testicular germ cell apoptosis in rhesus monkey

Apoptosis occurs spontaneously during spermatogenesis. However, little is known about its regulation in primate. Using an experimental cryptorchidism model in rhesus monkey, we have investigated the relationship between apoptosis and the Bcl-2 family members, Bcl-2 and Bax. Apoptotic cells were identified by in situ end labeling of fragmented DNA. The expressions of Bcl-2 and Bax in the testes during the heat stress-induced testicular germ cell apoptosis were detected by immunohistochemistry and Western blot techniques. The results showed that the apoptotic signals increased after heat treatment and the most susceptible cell types were spermatocytes and spermatids. A redistribution of Bax from the cytoplasmic to nuclear localization in some germ cells was observed. However, its total expression levels in the cells remained unchanged in the cryptorchid testes as determined by Western blot analysis; on the other hand, Bcl-2 levels increased significantly in response to heat stress. The subcellular redistribution of Bax and the increase in Bcl-2 expression in the cryptorchid testis suggest an involvement of Bcl-2 family members in heat stress-induced germ-cell apoptosis.