JAK2V617F点突变与BCR-ABL阴性骨髓增殖性疾病临床关系研究

目的 研究JAK2V617F点突变与BCR-ABL阴性的骨髓增殖性疾病(MPD)患者临床特征的关系.方法 选择62例BCR-ABL阴性MPD患者为研究组,包括真性红细胞增多症(PV)26例、原发性血小板增多症(ET)26例、原发性骨髓纤维化(IMF)9例、慢性中性粒细胞白血病(CNL)1例;同时选择慢性粒细胞白血病(CML)20例、急性白血病(AL)10例、健康志愿者15例为对照组.用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)方法 结合基因测序检测各组患者JAK2V617F的突变情况,分析JAK2V617F点突变与BCR-ABL阴性的MPD患者临床特征的关系.结果62例BCR-ABL阴性的MPD患者中,44例JAK2V617F突变阳性,其中PV 23例(88.5%,23/26),ET 15倒(57.7%,15/26),IMF 5例(55.6%,5/9),CNL 1例;对照组均阴性.JAK2V617F突变阳性的MPD患者和突变阴性的MPD相比较,两组在发病年龄方面差异无统计学意义;在血象方面,两组PV患者的白细胞[(18.2±8.0)×109/Lvs(7.6±1.4)×109/L,P=0.035]、血小板计数[(479±141)×109/L vs(277±102)×109/L,P=0.025]及两组ET患者的血红蛋白[(146±16)g/L vs(122±17)g/L,P=0.001]、白细胞计数[(14.6±5.1)× 109/L vs(10.9±3.4)×109/L,P=0.044]差异均有统计学意义.另外,与JAK2V617F突变阴性的ET相比,突变阳性的ET患者出血,血栓、转白等并发症的发生率高(P=0.034).结论 应用AS-PCR法筛选JAK2V617F突变准确率高,可在临床上推广使用.与JAK2V617F突变阴性的ET患者相比较,突变阳性的ET患者的临床过程更具有侵袭性.     

骨髓增殖性疾病MPLW515L点突变研究

为了探讨MPLW515L和JAK2V617F点突变在南京地区骨髓增殖性疾病（MPD）中的突变情况，采用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）及基因测序方法检测190例MPD患者的MPLW515L和JAK2V617F点突变。结果表明：102例原发性血小板增多症（ET）患者有1例存在MPLW515L点突变，突变率为1．0％；43例存在JAK2V617F点突变，突变率为42．2％。13例特发性骨髓纤维化（IMF）患者未检测到MPLW515L点突变；5例存在JAK2V617F点突变，突变率为38．5％。32例真性红细胞增多症（PV）患者未检测到MPLW515L点突变；20例存在JAK2V617F点突变，突变率为62．5％。43例慢性髓系白血病（CML）患者未检测到MPLW515L和JAK2V617F点突变。结论：AS—PCR检测MPLW515L和JAK2V617F点突变简便可靠。ET患者中可存在MPLW515L点突变，JAK2V617F点突变存在于PV、ET、IMF中，而CML患者不存在JAK2V617F点突变。     

真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、原发性骨髓纤维化患者骨髓病理特点及JAK2突变

目的：探讨真性红细胞增多症（PV）、原发性血小板增多症（ET）、原发性骨髓纤维化（IMF）患者的骨髓病理特点并且检测JAK2V617F突变的发生率，分析骨髓中纤维增生程度以及JAK2V617F突变对PV、ET患者白细胞数的影响。方法：69例初诊患者的骨髓切片经HGF染色以及Gomori染色后进行形态学研究，并利用real-time PCR法测38例患者的骨髓或者外周血的JAK2V617F突变：分析骨髓切片中纤维组织增生程度以及JAK2突变对患者白细胞数的影响。结果：15例PV和15例ET患者的骨髓切片中可以观察到不同程度的纤维组织增生，所有PV、ET、IMF患者骨髓中可见到巨核细胞增多、巨核细胞多形性改变以及巨核细胞定位于骨小梁旁：12例PV、4例ET、4例IMF中检测到JAK2V617F突变；有突变和无突变患者发病时白细胞数均值分别为20．4×10^9／L和11．4×10^9／L，不同纤维增生程度的PV、ET患者的白细胞数均值差异无显著性（P=0．367）。结论：69例PV、ET、IMF患者骨髓切片中均有巨核细胞的形态以及定位变化，PV、ET、IMF患者中JAK2V617F突变的发生率分别为80％、27％、50％；有突变患者的白细胞数均值高于无突变患者，初诊的PV、ET患者骨髓中不同纤维增生程度患者的白细胞均值无明显差异     

BCR/ABL阴性的骨髓增殖性疾病患者JAK2V617F点突变的研究

目的 分析BCR/ABL阴性的骨髓增殖性疾病（MPD）患者JAK2V617F点突变的突变率及其外周血细胞水平,为其分子诊断及靶向治疗提供理论依据.方法 应用等位基因特异性聚合酶链反应（AS-PCR）,对158例初诊患者JAK2基因的V617F位点进行扩增,并对其发病年龄和临床血液学指标进行统计分析.结果 158例患者JAK2V617F总突变率为72.15％,其中真性红细胞增多症（PV） 78.46％,原发性血小板增多症（ET） 69.05％和特发性骨髓纤维化（PMF）55.56％.血液学指标显示PV患者中JAK2V617F突变型组的外周血血红蛋白水平和白细胞计数分别为（200.26±19.72）g/L,（17.57±10.96）×109/L,显著高于野生型组（t=1.636-2.406,P值均＜0.05）.ET患者中JAK2V617F突变型组的年龄、红细胞计数和白细胞计数分别为（60.41±18.52）岁,（4.72±1.51）×1012/L,（14.78±12.21）×109/L,显著高于野生型组（t=1.634-3.284,P值均＜0.05）.PMF患者中JAK2V617F点突变型组的红细胞计数和血红蛋白含量分别为（4.51±1.42）×1012/L和（135.58±34.76） g/L,显著高于野生型组（t=2.274-2.810,P值均＜0.05）.结论 JAK2V617F有助于BCR/ABL阴性的不同类型MPD的诊断.     

骨髓增殖性疾病中JAK2V617F基因突变及与临床特征的关系

本研究旨在检测JAK2V617F基因突变在BCR-ABL阴性的骨髓增殖性疾病(myeloproliferative disorder,MPD)患者中的发生率,探讨其与MPD患者临床特征间的关系,建立敏感特异的JAK2V617F基因点突变的临床检测方法,提高骨髓增殖性疾病的临床诊断水平。选择兰州大学第一医院确诊的47例BCR-ABL阴性的MPD患者及12例健康正常人,抽提外周血细胞全血DNA,采用等位基因特异性聚合酶链反应(AS-PCR)技术检测各组JAK2V617F基因突变情况及突变基因序列,并结合临床资料作进一步分析。结果表明,BCR-ABL阴性的MPD患者JAK2V617F基因突变阳性率为74.5%(35/47),其中真性红细胞增多症(PV)阳性突变率为83.9%(26/31),原发性血小板增多症(ET)阳性突变率为60%(9/15),特发性骨髓纤维化(IMF)阳性患者只有1例。突变阳性的PV患者白细胞和血小板计数较突变阴性者高,突变阳性的ET患者白细胞计数和血红蛋白含量较突变阴性者高,且突变阳性的ET患者更易发生肝脾肿大、出血、血栓形成等并发症。结论:JAK2V617F突变在BCR-ABL阴性的MPD患者中有较高的检出率,AS-PCR技术对该突变有较好的敏感特异性,可以成功地应用于临床检测。     

真性红细胞增多症和原发性血小板增多症患者中JAK2V617F突变负荷与临床特征相关性

为分析真性红细胞增多症（polycythemiavera,PV）和原发性血小板增多症（essentialthrombocythemia,ET）患者JAK2V617F突变负荷和患者临床特征的相关性,利用荧光实时定量PCR方法检测90例初诊骨髓增殖性疾病（myeloproliferativedisorder,MPD）患者（包括47例PV和43例ET）外周血标本中JAK2V617F突变基因负荷,统计分析JAK2V617F负荷和患者外周血中血红蛋白、红细胞压积、白细胞计数和血小板计数的相关性。结果表明：突变阳性的ET患者中JAK2V617F负荷（0．209±0．192）较PV患者中（0．441±0．270）低（P=0．028）。在PV和ET患者中JAK2V617F负荷和患者外周血中血红蛋白（PV：R=0．518,P〈0．001;ET：R：0．528,P=0．005）、红细胞压积（PV：R：0．510,P〈0．001;ET：R=0．524,P=0．005）和白细胞计数（PV：R=0．584,P=〈0．001;ET：R：0．471,P=0．013）都呈正相关。在PV患者中,JAK2V617F突变负荷和血小板计数呈负相关（R=-0．354,P=0．020）;但在ET患者中,JAK2V617F负荷和血小板计数无明显相关性（R=0．233,P=0．242）。结论：在PV患者和ET患者中,JAK2V617F突变负荷和患者外周血中血红蛋白、红细胞压积和白细胞计数都呈正相关。在PV患者中,JAK2V617F负荷和血小板计数呈负相关,而在ET患者中JAK2V617F负荷和血小板计数无明显相关性。     

骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变频率、磷酸化JAK/STAT蛋白表达水平及临床意义

目的 探讨145例骨髓增殖件疾病患者JAK2基因V617F突变率;并分析JAK2基因V617F突变阳性患者的临床特点及意义.方法 应用PCR产物直接测序和等位基因特异性PCR技术检测145例骨髓增殖性疾病患者JAK2基因V617F突变.并应用Western blot方法测定JAK2基因V617F突变阳性患者JAK2蛋白、磷酸化JAK2蛋白及磷酸化STAT5蛋白表达;对JAK2基因V617F突变阳性与突变阴性的骨髓增殖性疾病患者临床资料进行比较,评价JAK2基因V617F突变阳性的临床意义.结果 ①本组病例真性红细胞增多症(PV)、特发性骨髓纤维化(ET)、原发性血小板增多症(IMF)患者JAK2基因V617F突变率分别为92%(64例中59例)、58%(43例中25例)和50%(38例中19例),等位基因特异性PCR检测较PCR产物直接测序有更高的JAK2基因V617F检出率[PV84%(64例中53例)、MIF 44%(43例中19例)、ET 39%(38例中15例)].②JAK2基因V617F突变阳性患者外周血单个核细胞磷酸化JAK2及磷酸化STAT5蛋白表达较突变阴性者明显增高(P<0.05).③JAK2基因V617F突变阳性骨髓增殖性疾病患者发病平均年龄偏大;平均白细胞计数高于突变阴性患者;血小板计数小于突变阴性患者;脾脏较突变阴性患者小;JAK2基因V617F突变阳性PV、ET和IMF患者血栓性事什发生率分别为17%、32%和16%;而突变阴性PV、ET和IMF患者血栓性事件发生率分别为0、16%和5%.结论 骨髓增殖性疾病患者有较高的JAK2基因V617F突变发生率,且JAK2基因V617F突变阳性患者易发生血栓事件.     

JAK2V617F 基因突变的定量测定及在慢性骨髓增殖性疾病中的应用

目的：探讨荧光定量 PCR 的方法检测 JAK2V617F 基因突变并分析其在慢性骨髓增殖性疾病（CMPD）中的诊断价值。方法采用荧光定量聚合酶链反应（PCR）检测68例确诊 CMPD 患者骨髓标本中 JAK2V617F 基因突变的阳性率和相对定量,分析其在 CMPD 中的诊断价值以及和临床资料之间的联系。结果68例确诊患者的骨髓标本均成功扩增 JAK2V617F 野生型和突变型。JAK2V617F 基因突变的总阳性率为66．2％（45/68）,其中真性红细胞增多症（PV）患者阳性率75．0％（21/28）,原发性血小板增多症（ET）阳性率60．6％（20/33）,特发性骨髓纤维化（IMF）阳性率57．1％（4/7）。PV 患者 JAK2V617F 突变阳性率明显高于 ET 和 IMF 患者。PV 患者 JAK2V617F 的相对定量和血红蛋白数和白细胞数呈正相关。ET 患者中 JAK2V617F 的相对定量和患者的血小板计数呈正相关。结论荧光定量 PCR 的方法能够快速准确的检测 JAK2V617F 基因突变及其突变比例,为临床诊断 CMPD 提供有效的实验室指标,JAK2V617F 的相对定量和患者的临床血液学指标存在一定关系。     

骨髓增殖性疾病JAK2V617F点突变研究

本研究旨在对bcr／abl融合基因阴性的骨髓增殖性疾病（MPD）病人进行JAK2V617F点突变检测,探讨该突变在此类病人中的发生率和临床意义。采用逆转录聚合酶链反应（RT—PCR）检测70例典型MPD病人bcr／abl融合基因,用等位基因特异性聚合酶链反应（As—PCR）检测样本JAK2V617F点突变,对有突变的病例进行测序验证。结果表明,慢性髓系白血病（CML）病人bcr／abl融合基因均为阳性,JAK2V617F突变为阴性;余bcr／abl融合基因均为阴性,JAK2V617F阳性率在真性红细胞增多症（PV）病人为75％,在原发性血小板增多症（ET）病人为30％,在特发性骨髓纤维化（IMF）病人为50％。JAK2V617F在CML和bcr／abl阴性MPD病人中的分布有显著性差异（P〈0．05）。结论：JAK2V617F可能为真性红细胞增多症、原发性血小板增多症、特发性骨髓纤维化的特征性     

JAK2V617F点突变与真性红细胞增多症的临床相关性研究

为探讨真性红细胞增多症（polycythemia vera,PV）JAK2V617F点突变的临床意义,应用等位基因特异性-聚合酶链反应（AS—PCR）检测50例患者的JAK2V617F点突变,并分析比较JAK2V617F点突变阳性与阴性两组患者的临床特征及实验室指标。结果显示：50例PV患者中31例存在JAK2V617F点突变,突变率为62．0％。12例（24．0％）患者发生血栓及微血管障碍,3例存在核型异常。JAK2V617F点突变阳性和阴性两组患者初诊时的年龄（57．5±10．0 vs 45．6±14．9,P〈0．05）和白细胞计数（16．2±6．7 vs 9．0±5．2,p〈0．05）有统计学差异。结论：PV患者的JAK2V617F点突变阳性率为62．0％,JAK2V617F点突变阳性患者的年龄和白细胞计数高于阴性患者。     

30例早期骨髓增殖性疾病疑似患者JAK2V617F和MPLW515L/K突变基因的表达

目的 探讨BPC及Hb水平轻微升高,但未达真性红细胞增多症(PV)或原发性血小板增多症(ET)诊断标准的患者JAK2V617F及MPLW515L的表达情况与某些临床特征的相关性在早期骨髓增殖性疾病(MPD)中的诊断价值.方法 采用等位基因特异性PCR方法,检测30例BPC或Hb值偏高的早期MPD疑似患者JAK2V617F和MPLW515L/K基因表达,并定期随访其病情进展.结果 30例患者中有14例(46.7%)存在JAK2V617F突变,且此14例患者中有5例(35.7%)曾有血栓史;30例患者中无一例存在MPLW515L表达;有效随访22例,JAK2V617F阳性12例,阴性10例,12例阳性患者经过6至24个月后均发展为典型的MPD,而10例阴性患者只有2例发展成MPD.结论 JAK2V617F阳性表达有可能作为诊断早期MPD的重要依据.     

骨髓增殖性肿瘤患者外周血细胞中JAK2V617F突变和p-STAT5蛋白表达及其与临床特征的相关性

本研究旨在探讨骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者外周血细胞中JAK2V617F突变和p-STAT5蛋白表达的情况及二者与疾病临床特征之间的相关性,为临床实践及靶向治疗研究提供理论依据。选择山东大学附属省立医院血液科确诊的45名BCR-ABL阴性的MPN患者及15例健康成年人为研究对象,提取外周血单个核细胞的DNA及蛋白质,分别采用实时荧光定量聚合酶链反应和免疫蛋白印迹法定量检测研究对象的朋K2V617F突变比例及p-STAT5蛋白表达量,并结合收集的临床病例资料进行相关性分析。结果表明,MPN患者JAK2V617F突变总体阳性率为73．3％（33／45）,其中真性红细胞增多症（PV）的以K2V617F突变阳性率为83．3％（20／24）,原发性血小板增多症（ET）的阳性率为68．8％（11／16）,特发性骨髓纤维化（IMF）患者的阳性率为40．0％（2／5）;PV、ET、IMF患者的J14K2V617F突变比例分别为0．472±0．245,0．216±0．162,0．435±0．239;p-STAT5蛋白表达灰度值分别为1．396±0．758,0．760±0．623,0．792±0．612;JAK2V617F突变负荷与p-STAT5蛋白表达灰度值呈线性相关（P〈0．05）;在PV患者中,JAK2V617F突变负荷越高,白细胞计数、血红蛋白水平及红细胞压积越高,血小板水平越低;ET患者中JAK2V617F突变负荷越高者,年龄越大,白细胞计数、血红蛋白水平及红细胞压积越高,与血小板水平无明显相关性;IMF患者中JAK2V617F突变负荷越高者白细胞、血小板计数、血红蛋白水平及红细胞压积均较低。JAK2V617F突变阳性者更易发生脾肿大、出血及血栓事件。结论：JAK2V617F突变在BCR-ABL阴性的MPN患者中阳性率较高,突变负荷越高者其下游p-STAT5蛋白的表达量越大,发生脾肿大、血栓事件的几率越高。     

98例原发性血小板增多症Jak2基因突变的定量分析及其临床意义

为研究JAK2V617F在原发性血小板增多症（ET）患者中的发生率和突变类型,定量分析突变转录本水平并初步探讨其临床意义,采用ARMS（amplification—refractorymutationsequencing）PCR法检测JAK2V617F突变的发生率及其突变类型,采用毛细管电泳法定量分析JAK2V617F突变转录本水平。结果显示：98例ET患者中59例JAK2V617F为阳性,其中纯合突变18例。纯合突变及杂合突变患者的平均年龄均较野生型为高（P值均〈0．05）;18例纯合突变患者的白细胞计数高于41例杂合突变者,且二者均高于野生型（P值均〈0．05）。毛细管电泳定量分析显示,纯合突变患者JAK2V617F突变转录本水平为（89．9±6．7）％,高于杂合突变患者的（57．1±6．7）％（P〈0．05）;年龄小于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为（62．3±16．5）％,低于年龄大于60岁患者的JAK2V617F突变转录本水平为（72．4±15．8）％（P〈0．05）。JAK2V617F阳性组中血栓的发生率高于阴性组,其中纯合突变者高于杂合突变者,发生血栓者的JAK2V617FF转录本水平高于无血栓者（P值均〈0．05）。结论：JAK2V617F阳性与阴性ET患者有着不同的临床特征,分析其突变类型及检测其转录本水平对明确疾病状态、观察疾病进展及指导治疗有重要意义。     

骨髓增殖性肿瘤中JAK2V617F突变和TNF-α的表达及两者的相关性研究

本研究旨在探讨骨髓增殖性肿瘤（MPN）患者外周血单个核细胞中JAK2V617F突变和TNF-α因子的表达情况及两者之间的相关性,为临床诊断及治疗提供理论依据.选取山东大学附属省立医院血液科确诊的62名BCR-ABL阴性的MPN患者（35例ET患者,19例PV患者,8例MF患者）及15例健康成年人为研究对象,将患者及正常对照者的外周血单个核细胞分为两部分,分别提取细胞中的DNA及mRNA,并将mRNA反转录为cDNA.采用SYBR Green Ⅰ实时荧光定量PCR分别检测JAK2V617F突变及TNF-α的表达量,并分析两者的相关性.结果表明,MPN患者JAK2V617F基因突变总体阳性率为64.52％ （40/62）,其中ET患者的JAK2V617F突变阳性率为54.28％ （19/35）,PV患者的JAK2V617F突变阳性率为94.74％（18/19）,MF患者的JAK2V617F突变阳性率为37.50％（3/8）;ET、PV、MF患者的JAK2V617F突变比例分别为0.838±0.419、4.417±0.658、2.746±2.009;ET、PV、MF患者TNF-α的表达分别是正常对照的1.7、7.0、8.2倍（P＜0.05）;且JAK2V617F突变负荷与TNF-α的表达水平呈线性相关（Pearson r =0.610,R2 =0.372,P=0.005）.结论：TNF-α在BCR-ABL阴性的MPN发病机制中有重要作用,在ET、PV、MF中表达升高且表达量不同,且与JAK2V617F突变呈线性相关.