皮肌炎皮损和受累肌肉中细胞凋亡的研究

目的 探讨皮肌炎皮损、肌细胞及浸润淋巴细胞凋亡的表达及皮质类固醇激素的影响。方法 对22个标本用TUNEL原位末端标记法检测角质形成细胞,肌细胞及淋巴细胞凋亡。10例用皮质激素者为A组,12例未用者为B组。结果 A组角质形成细胞、肌细胞及淋巴细胞有较多的凋亡,凋亡指数（AI）明显大于B组（P＜0．05）。皮质类固醇激素使用时间在2周以内者,凋亡细胞较少,在观察中未发现凋亡与皮肤、肌肉病理损害程度有关。结论 皮质类固醇激素可能具有诱导角质形成细胞、肌细胞及淋巴细胞凋亡的作用,这可能是皮质类固醇激素的治疗机理之一。激素使用时间的长短似与细胞凋亡程度有关。     

体外联合培养条件下小鼠睾丸足细胞诱导成熟T淋巴细胞凋亡

目的 :探讨体外联合培养条件下睾丸足细胞能否诱导 T淋巴细胞凋亡。方法 :用 TU NEL 标记、核酸电泳、电镜、流式细胞术检测对照组 (T淋巴细胞 )、A组 (T淋巴细胞 +培养睾丸足细胞 2 4h培养基上清 )、B组 (T淋巴细胞 +睾丸足细胞 )等 3组中小鼠成熟 T淋巴细胞的凋亡及其数量的变化。结果 :3组 T淋巴细胞在电镜下均可见细胞染色质浓集 ,核固缩裂解 ,凋亡小体形成 ;TUNEL 标记见部分细胞核染色呈深蓝色 ;核酸电泳出现典型 DNA梯状带 ;流式细胞术检测 A,B两组 T淋巴细胞凋亡量均明显高于对照组 (P<0 .0 1) ,B组 T淋巴细胞凋亡数量显著高于 A组 (P<0 .0 1)。 结论 :体外培养条件下小鼠睾丸足细胞能够诱导成熟 T淋巴细胞凋亡。     

Toll样受体2在类固醇性痤疮中的表达

目的 研究Toll样受体2(TLR2)在类固醇痤疮发病过程中的作用.方法 收集62例类固醇激索性痤疮患者皮肤组织,免疫组织化学法检测TLR2的表达水平;体外培养皮肤角质形成细胞系Hacat细胞,实时定量PCR及Western blot法检测地塞米松对TLR2表达的影响.结果 类固醇痤疮患者的痤疮样皮损TLR2的表达较正常组明显增高.地塞米松能显著上调静止Hacat细胞TLR2的表达;也能进一步增强痤疮丙酸杆菌刺激的Hacat细胞中TLR2的表达.结论 皮质类固醇激素对TLR2表达的增强作用可能参与了类固醇激素性痤疮的发生发展.     

兔角膜准分子激光切除术皮质类固醇激素治疗后病理学及超微结构观察

目的：对近期准分子激光切除术（PRK）应用皮质类固醇激素治疗后角膜伤口变化进行组织病理学及透射电镜观察。方法：在12只日本大白兔中设立对照3只，其余9只应用轰炸式准分子激光行光学角膜切除术（PRK），术后每只兔1眼用单纯抗生素，另1眼用抗生素加皮质类固醇激素治疗。分别于术后4d,1个月及2个月随机处死3只兔取角膜，1／2用于光镜检查，另1／2用于透射电镜观察。结果：应用抗生素加皮质类固醇激素治疗的兔眼，角膜上皮愈合较未用者延迟（P＜0．01）；但角膜上皮下混浊（Haze)的程度较轻且消失快（P＜0．05）。光镜下可见角膜基质细胞增生较单纯用抗生素者轻，角膜前基质层胶原增生不明显。电镜下，纤维母细胞的增殖活性较单纯用抗生素者低，新生的胶纤维排列较整齐。结论：准分子激光角膜切除术后皮质类固醇激素的应用可抑制角膜基质细胞及胶原纤维增生，减少Haze的形成。     

阿维A酸抗银屑病作用机制的相关性研究

目的探讨阿维A酸能否诱导原代人皮肤角质形成细胞凋亡及阿维A酸抗银屑病的作用机制。方法采用酶联免疫分析法、流式细胞术双标记法及透射电镜等方法观察药物作用细胞前后凋亡的诱导情况。结果阿维A酸可诱导原代人皮肤角质形成细胞凋亡,细胞凋亡程度呈现明显的浓度及时间依赖性。结论阿维A酸可诱导原代人皮肤角质形成细胞凋亡,阿维A酸治疗银屑病临床疗效肯定。     

皮质类固醇类药物对创伤前房出血疗效的影响

目的探讨皮质类固醇类药物对于创伤性前房出血疗效的影响。方法我院近年来收治98例创伤性前房出血患者,其中应用联合皮质类固醇类药物治疗49例(A组),未加用皮质类固醇类药物治疗49例(B组),观察2组临床疗效。结果经过应用皮质类固醇类药物和手术治疗,前房出血患者全部于1 d~18 d吸收。共发生继发性青光眼23例(A组14例,B组9例),高眼压44例(A组33例,B组11例),白内障6例(A组5例,B组1例)。结论皮质类固醇类药物具有抗炎、消肿作用,及早应用可减轻虹膜睫状体的炎性反应;减少小梁网的水肿,对房水的循环有积极的作用[彭穗英.挫伤性前房出血的临床分析[J].眼外伤职业眼病杂志,2002,24(5):565.]。但是皮质类固醇类药物的使用反而会延迟凝血块的吸收和增加再出血的可能,长期使用还有可能导致高眼压继发性青光眼。     

UVA对人角质形成细胞的氧化损伤作用

①目的　探讨紫外线A(UVA)对人角质形成细胞氧化损伤的机制。②方法　用 5J/cm2 UVA照射角质形成细胞 ,酶生化法检测活性氧 (ROS)的含量及超氧化物歧化酶 (SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶 (GSH PX)活性的变化 ,流式细胞仪测定紫外线对角质形成细胞凋亡的影响 ,原位杂交技术观察 p2 1mRNA的变化 ,并与非照射组比较。③结果　与对照组比较 ,UVA照射组ROS含量升高 (t =113.6 8,P <0 .0 0 1) ,SOD、GSH PX活性下降 (t =5 7.2 3、19.0 4 ,P <0 .0 0 1) ,细胞凋亡率升高 (t=5 3.2 8,P <0 .0 0 1) ,p2 1mRNA表达增强。④结论　UVA对人角质形成细胞的损伤与氧自由基生成增多及细胞抗氧化能力抑制有关     

Sertoli细胞诱导异基因T淋巴细胞凋亡的研究

目的 探讨大鼠睾丸支持细胞(Sertoli细胞)在体外与同种异体来源T淋巴细胞共同培养能否诱导T淋巴细胞凋亡.方法 用SABC法检测T淋巴细胞Fas和Sertoli细胞FasL的表达率.Sertoli细胞和异基因T淋巴细胞共同培养实验分为,A组(对照组)只有T淋巴细胞培养,B组为T淋巴细胞与经过FasL单克隆抗体处理过的等量Sertoli细胞共同培养;C组T淋巴细胞与培养Sertoli细胞24 h的培养液上清共同培养;D组为T淋巴细胞与等量Sertoli细胞共同培养;用TUNEL法检测各组淋巴细胞的凋亡指数.结果 T淋巴细胞Fas的表达率为(91.67±2.08)%;Sertoli细胞FasL的表达率为(90.43±3.52.)%.C组和D组淋巴细胞的凋亡指数显著大于A组和B组(P＜0.01);D组T淋巴细胞的凋亡指数显著大于C组(P＜0.01).结论 T淋巴细胞高表达Fas,Sertoli细胞高表达FasL;在体外共同培养的条件下,Sertoli细胞能够诱导异基因T淋巴细胞的凋亡,T淋巴细胞凋亡原因可能与Sertoli细胞产生FasL有关.     

准分子激光角膜切削术后角膜细胞的增生及激素的治疗作用

目的 探讨PRK激光角膜切削术后(PRK)角膜细胞的增生情况及皮质类固醇的治疗作用。方法 通过对准分子后角膜上皮及基质细胞的转化生长因子—β1(TGF—β1)和增生细胞核抗原(PCNA)的免疫组化观察，在24只日本大白兔中设立对照6只，其余18只应用轰炸式准分子激光行光学角膜切除术，术后每只兔一眼用单纯抗生素治疗，另一眼用抗生素加皮质类固醇激素治疗，皮质类固醉眼药水按每日3、2、1次逐月递减。术后用裂隙灯显微镜观察眼前段情况，检查角膜上皮下混浊的形成情况并按照Rai的分级标准进行记录。分别于4天、1个月及2个月随机处死3只兔取角膜，1／2用于普通光镜及免疫组化染色，另1／2用于透射电镜观察。用免疫组化方法观察TGF—β1、PCNA在兔角膜上皮细胞及基质细胞中的表达状况。结果 应用抗生素加皮质类固醇治疗的兔眼，角膜上皮愈合较单纯抗生素组延迟(P＜0．01)；但角膜上皮下混浊(Haze)的程度较轻且消失快(P＜0．05)。免疫组化结果表明：术后第4天，行PRK手术治疗的兔眼虽然仅有单层角膜上皮细胞覆盖，角膜上皮细胞及基质细胞TGFpl和PCNA的表达水平均较对照组高(P＜0．05)；至1月时，行PRK治疗的两组上皮细胞层数增多且TGFKβl和PCNA的表达水平仍高，激素应用组略有下降；术后2月时，激素应用组角膜上皮细胞及基质细胞TGFβl和PCNA表达水平下降接近对照组，而单纯抗生素组的表达水平仍较对照组高(P＜0．05)。结论 准分子激光屈光性角膜切除术后角膜上皮细胞及基质细胞均存在增生改变，且TGFβ1和PCNA的表达均增加。皮质类固醇激素的应用可降低角膜细胞增生，抑制胶原纤维增生，减轻角膜上皮下混浊的发生程度。     

新型维A酸CD437对表皮样癌A431细胞的致凋亡作用

目的 研究一种新合成的维A酸CD437及全反式维A酸(ATRA)对体外培养的人表皮样癌细胞系(A431)及正常人类表皮角质形成细胞的增殖抑制及诱导凋亡作用.方法 MTT法测定CD437及ATRA对A431细胞系及正常人类表皮角质形成细胞的增殖抑制作用,光镜观察两种药物对细胞形态的影响,用流式细胞术研究两种药物对细胞凋亡及细胞周期的影响.结果 维A酸CD437较传统ATRA更显著抑制A431细胞系的生长,并具有时间、浓度依赖性;显微镜观察可见细胞有细胞毒性、凋亡特征性改变;CD437可促进A431细胞的快速凋亡及正常人类表皮角质形成细胞Gl期抑制;与CD437相比,ATRA对A431细胞的促凋亡作用相对无效;CD437不能诱导正常人类表皮角质形成细胞发生显著凋亡.结论 与传统维A酸ATRAS相比较,CD437更有效抑制表皮样癌细胞的增殖并显著诱导其凋亡:相对于正常表皮角质形成细胞,CD437对A431细胞具有选择性诱导凋亡作用,从而为临床治疗或预防皮肤癌提供实验依据.     

大鼠急性胰腺炎凋亡相关蛋白Fas、FasL、Bcl-2的表达及意义

目的 :探讨凋亡调控基因Fas、FasL、Bcl 2在大鼠急性胰腺炎中的表达情况及其与胰腺炎严重程度的关系。方法 :通过胰胆管逆行注射不同浓度的脱氧胆酸钠 ,制作急性水肿性胰腺炎 (AEP)和急性坏死性胰腺炎(ANP)模型。用免疫组化法检测Fas、FasL、Bcl 2蛋白的表达。结果 :急性胰腺炎时 ,Fas蛋白主要表达在胰腺腺泡细胞胞膜 ,AEP组和ANP组均明显高于对照组 (P <0 .0 5 ) ,且AEP组高于ANP组 (P <0 .0 5 ) ;FasL在各组腺泡细胞胞浆中均有不同程度表达 ;Bcl 2蛋白表达在胰腺导管细胞胞浆 ,对照组Bcl 2蛋白表达弱 ,AEP组和ANP组表达明显增强 ,ANP组高于AEP组 ,统计学处理两组间无明显差异 ,但均显著高于对照组 (P <0 .0 5 )。结论 :Fas/FasL系统在大鼠的急性胰腺炎过程中可能参与诱导胰腺腺泡细胞凋亡 ,减轻胰腺炎症反应程度 ;而Bcl 2基因可能参与防止导管细胞凋亡而促进其增生并且形成导管管状复合体     

新型气体信号分子硫化氢对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的影响

目的:探讨新型气体信号分子硫化氢(H2S)对低氧大鼠肺动脉平滑肌细胞凋亡的调节作用.方法:24只Wistar大鼠,随机分为对照组(8只)、低氧组(8只)和低氧 NaHS组(8只).以化学分光光度法测定血浆H2S含量;采用原位缺口末端标记方法(TUNEL)检测大鼠肺动脉平滑肌细胞的凋亡,并行图像分析计算单位面积细胞凋亡率;采用免疫组织化学方法检测肺动脉平滑肌细胞凋亡蛋白Bcl-2、Fas和caspase-3表达,并进行定位和半定量分析.结果:低氧组与对照组比较,低氧组大鼠血浆中H2S含量下降36%,应用TUNEL检测肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率减少52.9%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达增高123.9%,Fas蛋白表达减弱45%,caspase-3表达与对照组差异无显著性;低氧组与低氧 NaHS组比较,低氧 NaHS组大鼠血浆中H2S含量升高65%,应用TUNEL检测到肺动脉平滑肌细胞单位面积凋亡率较低氧组增高62.5%,肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达减弱36.4%,Fas和caspase-3蛋白表达分别增高84.8%、34.5%;结论:低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡减少,H2S可能通过抑制肺动脉平滑肌细胞Bcl-2蛋白表达、增加Fas和caspase-3蛋白表达,促进低氧时肺动脉平滑肌细胞凋亡.     

大鼠实验性肾缺血/再灌注引起肾小管上皮细胞凋亡及其与Bcl-2,Fas/FasL表达变化的关系

目的：探讨大鼠实验性肾缺血再灌注引起肾脏损伤、肾小管上皮细胞凋亡情况及其与Bcl—2，Fas／FasL表达变化的关系．方法：建立大鼠肾缺血再灌注损伤模型，在不同时间点处死动物取肾组织石蜡包埋切片，HE染色分析肾组织病理损伤程度，用TUNEL法标记检测肾小管上皮细胞凋亡的变化，SABC免疫组化方法检测Bcl—2，Fas与FasL蛋白表达的变化．结果：缺血再灌注后肾组织的病理损伤主要发生在肾小管，肾小管上皮细胞凋亡指数增加，且随缺血再灌注时间延长而进一步上升，48h达高峰(P＜0．05).Bcl—2蛋白在对照组呈弱阳性表达，缺血30min，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，48h达高峰(P＜0.05)，并以远曲小管为主．Fas，FasL蛋白在对照组呈阴性表达，缺血30，60min后再灌注0h有少量表达，再灌注24，48及72h呈阳性表达，以72h时达高峰(P＜0.05)，多表达在远曲小管．HE染色可见肾缺血再灌注后各组均有不同程度的肾小管上皮组织片状坏死灶，以近曲小管为主，坏死灶周围有炎性细胞浸润．结论：肾缺血再灌注可诱导肾小管上皮细胞凋亡，Bcl—2，Fas／FasL系统可能在肾小管上皮细胞凋亡过程中发生着重要的调控作用．     

术前腹腔动脉插管化疗对中晚期胃癌细胞凋亡和增殖的影响

目的　探讨术前腹腔动脉插管化疗对中晚期胃癌细胞凋亡和增殖的影响。　方法　采用切口末端标记法 (TUNEL)、增殖细胞核抗原 (PCNA)和凋亡抑制基因蛋白 (Bcl 2 )免疫组织化学检测技术 ,观察比较术前腹腔动脉插管化疗组 (治疗组 )和术前未化疗组 (对照组 )中晚期胃癌细胞的凋亡指数、增殖指数和Bcl 2蛋白表达强度的差异。　结果　治疗组与对照组凋亡指数分别为 5 .71± 0 .12和 2 .37± 0 .15(t=97.39,P <0 .0 1) ,增殖指数分别为 4 1.5 0± 0 .14和 5 8.11± 0 .13(t =4 8.8,P <0 .0 1) ,Bcl 2分值为1.5 0± 0 .6 4和 2 .38± 0 .4 9(t=4 2 .8,P <0 .0 1)。凋亡指数与Bcl 2分值呈显著负相关 (rs=- 0 .74 3,P <0 .0 1) ,凋亡指数与增殖指数呈中度正相关 (rs=0 .4 0 0 ,P <0 .0 5 )。治疗组治愈性切除率、3年生存率明显高于对照组 (χ2 =8.5 8,P <0 .0 1;χ2 =4 .0 9,P <0 .0 5 )。　结论　术前腹腔动脉插管化疗可诱导中晚期胃癌细胞凋亡 ,降低肿瘤细胞的增殖活力 ,提高治愈性切除率和患者生存率。诱导胃癌细胞凋亡可能与化疗药物降低Bcl 2基因蛋白的表达有关     

食道鳞癌凋亡相关基因表达及原位凋亡的同步检测

用免疫组织化学染色法对食道鳞癌标本进行凋亡相关基因Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２和Ｂａｘ表达的检测,同时采用ＴＵＮＥＬ方法原位探测细胞凋亡。检测结果显示：①５２例食道鳞癌标本中,Ｐ５３、Ｆａｓ、Ｂｃｌ ２、Ｂａｘ和细胞凋亡的阳性率分别是６１．５％、６１．５％、６９．２％、９８．１％和２８．８％。②１８例对照标本中相应指标的阳性率分别为１６．７％、１００％、３８．９％、１００％和６１．１％。③比较２组标本,肿瘤组Ｐ５３和Ｂｃｌ ２的阳性率显著高于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）,肿瘤组Ｆａｓ与ＴＵＮＥＬ的阳性率显著低于对照组（Ｐ＜０．０１及Ｐ＜０．０５）。④以上４种蛋白与细胞凋亡存在与否无独立相关性。上述结果表明,在食道癌变中,不仅存在细胞凋亡功能的减低,同时伴有多种凋亡相关基因的表达异常。凋亡功能的异常,可能是多基因共同调控的结果。     

金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤后Fas和Bcl-2蛋白表达的影响

目的：研究金纳多对大鼠全脑缺血再灌注损伤的保护作用及对Fas、Bcl-2表达的影响。 方法：建立大鼠全脑缺血再灌注模型,应用免疫组织化学方法观察不同再灌注时间脑组织fas、bcl-2的表达,以及金纳多给药后的变化。 结果：单纯缺血及再灌注3 h均有Fas蛋白表达,再灌注6 h Fas蛋白表达达高峰,再灌注24 h Fas蛋白表达减少。Bcl-2表达于再灌注3 h达高峰,再灌注6 h呈下降趋势,24 h表达明显减少。金纳多给药组相应时间点Fas蛋白表达减少,Bcl-2蛋白表达增多。 结论：金纳多对脑缺血再灌注后的细胞凋亡有抑制作用,对脑缺血再灌注损伤起到保护作用。     

尖锐湿疣Fas、bcl—2、Ki—67的表达与细胞凋亡的关系

OBJECTIVE: This study inquired into the significance and relationship of apoptosis to the regulation and proliferation of condyloma acuminatum(CA). METHODS: Apoptotic cells were detected in situ by terminal deoxynucleotidyl transferase-mediated-dUTP nick end labeling (TUNEL). The detection of Fas, bcl-2 and Ki-67 expression was performed using immunohistochemical staining in 28 specimens of CA. RESULTS: Apoptotic cells were found in 24 cases (85.7%) in keratinocytes. All of the in 28 cases(100%) had Fas and Ki-67 positive expressions, but only 8 cases (28.6%) had bcl-2 mild or moderate expression. The disease severity (serious, moderate and mild) groups did not significantly differ in apoptotic index (AI), Fas, bcl-2 and Ki-67 positive expression (P > 0.05). There was positive correlation between AI and Fas(r = 0.866, P = 0.000). bcl-2 and Ki-67 were negatively correlated with AI (r = -0.416, P = 0.018; r = -0.475, P = 0.006). CONCLUSION: It is suggested that apoptosis in keratinocytes may play an important role in inhibiting the proliferation of virus, that Fas may be an upregulative factor and bcl-2 may be an inhibition factor to apoptosis, and that excessive Ki-67 expression may be associated with the acceleration of cell cycle.     

孟鲁司特对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的作用及其机制

目的：观察孟鲁司特（MK）对哮喘大鼠淋巴细胞凋亡的影响并探讨其分子机制。方法：40只大鼠随机分为正常组、哮喘组、MK和地塞米松（DXM）组。采用卵蛋白（OVA）腹腔注射致敏并反复雾化吸入刺激建立大鼠哮喘模型，药物干预组管喂MK或腹腔注射DXM。采用双标记双染色的方法先标记CD4^ /CD8^ T淋巴细胞，然后用原位末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡，采用免疫组化的方法检测淋巴细胞Fas的表达。结果：哮喘大鼠外周血及肺组织中T淋巴细胞的凋亡率低于正常组大鼠，MK、DXM处理后，CD4^ /CD8^ T淋巴细胞凋亡率均明显升高，与哮喘组及正常组比较差异均具显著性（P＜0．01）。体外培养时MK呈剂量和时间依赖性促进OVA抗原刺激的外周血淋巴细胞Fas表达水平及凋亡，其中以CD4^ T淋巴细胞凋亡率和Fas表达的增加更为明显，与CD8^ T淋巴细胞比较差异具显著性（P＜0．05）。10^-6mol/L的MK可明显促进10^-4mol/L DXM对淋巴细胞凋亡的诱导作用。结论：MK可促进哮喘大鼠外周血及肺组织中CD4^ T淋巴细胞凋亡，该作用可能通过Fas途径介导。MK对DXM促淋巴细胞凋亡具有协同作用。     

口腔鳞癌肿瘤浸润淋巴细胞的Fas/FasL表达

目的研究口腔鳞状细胞癌肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)Fas/FasL的表达及其临床病理学意义。方法采用免疫组织化学方法和脱氧核糖核酸末端转移酶(TDT)介导的原位末端标记(TUNEL)技术,对38例口腔鳞癌TIL的Fas/FasL表达及TIL和癌细胞的凋亡进行检测,观察TIL的Fas/FasL表达与TIL和癌细胞凋亡的关系。结果TIL的Fas和FasL均有广泛的表达,TILFas表达阳性组的TIL凋亡指数(AI)明显高于Fas表达阴性组(P<0.05),TILFasL表达阳性组的癌细胞凋亡指数与FasL表达阴性组差异无显著性(P>0.05)。结论口腔鳞癌TIL的Fas阳性表达与其凋亡有密切关系,而FasL的阳性表达则与癌细胞凋亡无关。癌细胞可能通过Fas凋亡系统诱导TIL的凋亡并通过某种机制逃避TIL的杀伤。