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1.
背景: 现有治疗手段不足以补充梗死心肌,研究表明干细胞移植有可能促使心肌和血管再生,改善心功能和预后。 目的:观察急性心肌梗死区中心和周边移植胚胎干细胞后心肌组织形态学及血液动力学的变化。 设计、时间及地点:随机对照动物观察,于2007-03/2008-10在中南大学湘雅医学院人体解剖学与神经生物学系神经生物学实验室完成。 材料:SPF级Wistar大鼠40只,随机分为4组:正常对照组、梗死模型组、中心移植组、周边移植组,10只/组。胚胎干细胞-D3株(embryonic stem cells-D3, ES-D3)、布法罗大鼠肝细胞均由中国科学院上海细胞所提供。 方法:ES-D3细胞复苏后,以(2.0~5.0)× 107 L-1种植于培养瓶中,加入含布法罗大鼠肝细胞的条件培养基体外培养分化。除正常对照组外,余3组结扎冠状动脉左前降支建立急性心肌梗死模型。造模后1周接受细胞移植,ES-D3细胞于移植前1 d进行BrdU标记,以胚胎干细胞培养基调整密度至1×109 L-1。中心移植组在梗死区选3个点,每点注入10 μL细胞悬液(含104个细胞)至心室壁内;周边移植组在梗死区周边选3个点同法注入等量细胞悬液。 主要观察指标:免疫组化及血流动力学指标检测结果。 结果:布法罗大鼠肝细胞条件培养基体外培养的ES-D3细胞,呈相对规则的巢状集落样生长,分化8 d即可见部分拟胚体出现自发的节律性收缩活动,心肌肌钙蛋白T免疫染色呈阳性,电镜下可见肌管、肌纤维等肌性结构,证实已分化为心肌细胞。周边移植组BrdU免疫荧光染色呈阳性,而中心移植组呈阴性,进一步对BrdU免疫荧光染色阳性细胞行双抗染色,可见心肌肌钙蛋白T呈阳性表达。移植后4周与正常对照组比较,梗死模型组左室收缩、dp/dtmax均减小(P < 0.01),左室舒张末期压上升(P < 0.01),左室质量、左室质量指数均升高(P < 0.01)。与梗死模型组比较,中心移植组各项血流动力学指标无明显变化(P > 0.05);周边移植组左室收缩压、±dp/dtmax均显著升高(P < 0.01),左室舒张末期压显著减小(P < 0.01),左室质量、左室质量指数、梗死面积均显著减小(P < 0.01)。 结论:急性心肌梗死后于梗死周边区移植胚胎干细胞可以阻止心室重构、减少瘢痕面积、改善心功能。  相似文献   

2.
胚胎干细胞在神经移植治疗中的研究进展   总被引:3,自引:0,他引:3  
胚胎干细胞(embryonic stem cells,ESCs)是一种高度未分化的全能性细胞,具有极强的增殖能力和发育分化为三个胚层组织细胞的潜能[1]。ESCs可以从哺乳动物着床前胚胎的内细胞团(inner cell mass,ICM)中分离,并能在体外培养。利用ESCs分化潜能可以为组织工程和细胞移植治疗提供良  相似文献   

3.
目的 将Wistar大鼠神经干细胞移植入C6胶质瘤模型,观察其生物学特性,为神经干细胞转染目的基因移植治疗颅内肿瘤提供可靠的依据.方法 建立25只C6载瘤模型和35只神经干细胞移植治疗模型;待肿瘤生长至3周和4周时,两组分别随机抽取5只大鼠行MRI检测;分不同时间段大鼠灌注取材,分别做HE染色、GFAP及BrdU免疫组化染色.结果 神经干细胞移植组模型平均生存时间为4.28周;对照组平均生存时间为3.88周;且其平均肿瘤体积比对照组小.BrdU染色显示沿针道及与C6胶质瘤交界的部位有大量BrdU标记阳性的神经干细胞.结论 神经干细胞对胶质瘤有定向靶向作用,能够"追踪"渗透到周围正常组织的肿瘤细胞,可以作为生物载体转染目的基因治疗胶质瘤;神经干细胞对胶质瘤细胞的生长有抑制作用,能够延长大鼠模型的生存期.  相似文献   

4.
胚胎干细胞(embryonic stem cell,ESC)是由早期胚胎内细胞团或原始生殖细胞经体外分离、抑制分化培养获得的多潜能细胞,具有发育分化的多潜能性和无限的自我更新能力,在一定条件下可定向诱导分化为某种类型细胞。ESC在体外培养扩增6个月以上仍能保持其多能性,可诱导分化为  相似文献   

5.
背景:胚胎胰腺组织具有来源广泛,细胞增殖分化能力强,低免疫排斥性等优点。目的:探索小鼠胚胎胰腺组织的分离技术,观察其对糖尿病模型小鼠的血糖调节作用。方法:体视显微镜下分离E11.5~E16.5 C57BL/6小鼠胰腺组织。链唑霉素诱导雄性C57BL/6小鼠建立糖尿病模型,随机分为2组:移植组模型小鼠肾被膜下移植5个E16.5胰腺组织,假手术组模型小鼠肾被膜下注入0.05 mL RPMI1640培养液。移植组小鼠血糖水平≤11.2 mmol/L后,利用IPGTT和IPITT方法检测移植后胚胎胰腺组织的内分泌功能,并摘除移植物观察血糖变化。结果与结论:体视显微镜下可分离出较完整的E11.5~E16.5小鼠胰腺组织,≤ E12.5 d小鼠胚胎胰腺组织的形态和颜色均难以与周围组织分辨,需根据其与毗邻脏器的关系仔细辨别;> E12.5 d的小鼠胚胎胰腺已初具形态,颜色略发白。组织学和ELISA分别显示胚胎胰腺组织可表达并分泌胰岛素,其表达强度随发育时间逐渐增加。E16.5小鼠胰腺组织移植能有效地控制受体的血糖水平,使受体的体质量和糖耐量恢复正常;胚胎胰腺在受体的肾被膜下可生长发育,摘除的移植物胰岛素和胰高血糖素的表达均较移植前增强。说明胚胎胰腺组织可能成为治疗糖尿病的种子来源。  相似文献   

6.
目的:目前对应用神经干细胞和骨髓基质干细胞移植治疗帕金森病效果进行对比的研究很少,实验观察比较同种异体来源的中脑神经干细胞和骨髓基质干细胞对帕金森大鼠行为学及损伤脑组织形态学的影响。 方法:实验于2006-03/2007-09在河北医科大学第一医院脑老化与认知神经科学实验室完成。SD大鼠麻醉后建立右侧帕金森病模型,随机分为神经干细胞组14只、骨髓基质干细胞组10只、空白对照组10只。选取右侧纹状体2个坐标点(in mm: A +0.6;R +4.0;V -5.0)、(in mm: A -0.7;R +3.0;V -5.0),前两组每个坐标点分别注入经Brd-U标记的神经干细胞悬液、骨髓基质干细胞悬液5 μL,约1×106个细胞,空白对照组注射等量磷酸盐缓冲液。细胞移植后各组大鼠腹腔注射阿朴吗啡诱导旋转。 结果:①行为学改变:与空白对照组比较,移植2~8周神经干细胞组和骨髓基质干细胞组大鼠的旋转次数均明显减少(P < 0.01)。②纹状体切片免疫组织化学荧光染色鉴定:移植8周后,神经干细胞组和骨髓基质干细胞组均可见一定数量双标的神经元、星形胶质细胞和酪氨酸羟化酶阳性细胞,且后者的双标细胞相对多于前者。空白对照组未发现Brd-U阳性细胞、微管相关蛋白2阳性细胞及酪氨酸羟化酶阳性细胞的表达。各组损毁侧黑质酪氨酸羟化酶阳性细胞残存率基本相似(P > 0.05)。 结论:神经干细胞和骨髓基质干细胞移植均可改善帕金森病大鼠的旋转行为,且至少在脑内存活8周,并可分化成神经元、星形胶质细胞和多巴胺能神经元。  相似文献   

7.
目的探讨胚胎多巴胺神经元移植对帕金森病大鼠的治疗作用。方法立体定向注射6-羟多巴胺建立帕金森病大鼠模型,随机分为对照组(n=12)和细胞移植组(n=12)。细胞移植组将荧光染料CM-DiI标记的大鼠胚胎多巴胺神经元立体定向注入帕金森病大鼠纹状体区,对照组于相同部位注入生理盐水。用阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠旋转行为评估细胞移植的治疗作用。细胞移植8周后取大脑标本行冷冻切片,荧光显微镜下观察移植细胞在脑内存活情况。结果与对照组比较,移植多巴胺神经元能显著改善阿扑吗啡诱导帕金森病大鼠的异常旋转行为(P0.01)。移植8周后,仅少量多巴胺神经元存活。结论多巴胺神经元移植可短期内改善帕金森病大鼠的运动障碍,但长期疗效不佳,可能与移植多巴胺神经元长期存活率较低有关。  相似文献   

8.
目的 观察来源于小鼠胚胎干细胞的神经前体细胞移植PD大鼠纹状体后的存活、分化以及细胞移植对PD大鼠的治疗作用。方法 采用无血清方法将小鼠胚胎干细胞定向诱导为神经前体细胞,免疫组化技术观察移植细胞的存活、分化。结果 胚胎体在N2选择性培养基选择生长5d后,85%以上的小鼠胚胎干细胞分化为nestin阳性的神经前体细胞。移植到PD大鼠纹状体后大部分神经前体细胞存活良好,移植细胞分别保持为未分化的nestin阳性的神经前体细胞和TH阳性的神经元。移植后3周,PD大鼠的旋转次数明显减少。结论 胚胎干细胞来源的神经前体细胞移植PD大鼠纹状体后能分化为TH阳性的神经细胞,对PD有治疗作用。  相似文献   

9.
大鼠胚胎神经干细胞移植治疗脑出血的实验研究   总被引:61,自引:7,他引:54  
目的 研究大鼠胚胎神经干细胞移植治疗脑出血的可行性。方法 从孕龄16天的大鼠胚胎脑组织中分离、培养神经干细胞并诱导其分化,通过免疫组化学技术研究其特性。制作大鼠脑出血模型,3天后将未分化的神经干细胞注入血肿同侧或对侧的尾状核内,记录损伤和移植后的大鼠运动功能。不同时间杀死大鼠,研究移植后的干细胞在体内分化和迁徙的情况。结果 实验中分离、培养的神经干细胞体外能够被诱导分化成神经元、光突胶质细胞和星形胶质细胞,血肿同侧移植干细胞的大鼠运动功能的改善显著好于血肿对侧移植干细胞组及未移植干细胞的对照组。免疫组化方法证实移植后的干细胞在体内可分化成神经元和胶质细胞,并向损伤区域迁徙。结论 大鼠胚胎神经干细胞体内、体外均具有多向分化潜能,其分化成各种类型神经细胞的比例与所处的外界环境有关,在脑内靠近损伤部位移植胚胎神经干细胞后能够有效改善脑出血动物的运动功能。  相似文献   

10.
背景:利用原始生殖细胞技术可以方便地将各种外源基因转入鸡体内,以较快的速度获得转基因鸡,但到目前为止原始生殖细胞的转染效率仍然很低,且很难进行较大基因片段的转染。 目的:拟实现大分子BAC载体对鸡胚原始生殖细胞的转染。 设计、时间及地点:基因水平的细胞学体外观察,于2006-08/2008-07在广东省佛山大学完成。 材料:种蛋来自华南农业大学鸡场粤黄鸡群,受精蛋在37.5 ℃、相对湿度为65%的条件下孵化68~72 h。BAC-TDN-GID载体由佛山大学分子生物学实验室保存。 方法:以rRNA基因及其间隔序列作为同源重组引导序列,构建含GFP基因和hIFN基因的大分子BAC基因打靶载体,将鉴定为阳性的载体进行扩增培养并大量抽提。取课题组孵化至第19期的粤黄鸡胚,挑取其生殖嵴或性腺,胰酶消化法获得原始生殖细胞,并辅以饲养层和生长因子进行培养。采用脂质体介导法在原始生殖细胞内进行基因转移,对存活的细胞进行目的基因DNA水平和RNA水平鉴定。 结果:第19期鸡胚性腺原始生殖细胞体外培养48 h呈桑椹状或者椭圆状,72 h形成细胞集落,过碘酸染色呈紫红色。分子量达30 kb的大分子转基因载体BAC-TDN-GID转染鸡胚原始生殖细胞48 h可见荧光细胞,表明转染成功。经PCR和RT-PCR鉴定,证实扩增的产物大小与预期结果大致相吻合,目的基因hIFN已经整合进入原始生殖细胞基因组,并已开始表达。 结论:实验成功将大分子BAC载体上的外源基因转染入体外分离培养的鸡胚原始生殖细胞。  相似文献   

11.
目的将骨髓来源和脑来源神经干细胞(NSCs)移植入大鼠脑损伤模型,比较两种细胞移植治疗脑外伤的效果和临床应用价值。方法分别在体外培养骨髓来源和脑来源的NSCs,待两种细胞多次传代并分别以nestin、神经元特异性烯醇化酶(NSE)、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)鉴定,BrdU标记后,移植入已经建立好的大鼠脑损伤模型损伤部位,观察记录大鼠行为能力变化。于移植后10d和20d取鼠脑进行免疫组化分析,比较两种细胞在脑内的存活和迁移情况,及脑组织的修复情况。结果两种来源NSCs均可在移植区存活并向周围脑组织迁移,两组大鼠行为能力均有一定程度恢复,且两组之间差别无显著性意义(P>0.05),而与对照组差别有显著性意义(P<0.05)。结论骨髓来源NSCs与脑来源NSCs移植后有相似的存活和迁移能力,两种细胞均可帮助大鼠脑损伤后运动及感觉功能恢复。  相似文献   

12.
13.
Stem cell therapy offers exciting potential for ambitious cellular replacement to treat human (h) disease, such as Parkinson's disease, Alzheimer's disease or even replacement of the cell death that follows thromboembolic stroke. The realisation of these treatments requires cellular resources possessing three essential characteristics: (i) self-renewal, (ii) the ability to differentiate to physiologically normal cell types and (iii) lack of tumourigenicity. Here, we describe work on human embryonic germ cells (hEGCs), a population of cells alongside human embryonic stem cells (hESCs) with the potential to address these issues.  相似文献   

14.
Previous studies have shown that transplantation of human bone marrow mesenchymal stem cells promotes neural functional recovery after stroke, but the neurorestorative mechanisms remain largely unknown. We hypothesized that functional recovery of myelinated axons may be one of underlying mechanisms. In this study, an ischemia/reperfusion rat model was established using the middle cerebral artery occlusion method. Rats were used to test the hypothesis that intravenous transplantation of human bone marrow mesenchyrnal stem cells through the femoral vein could exert neuroprotective effects against cerebral ischemia via a mechanism associated with the ability to attenuate axonal injury. The results of behavioral tests, infarction volume analysis and immunohistochemistry showed that cerebral ischemia caused severe damage to the myelin sheath and axons. After rats were intravenously transplanted with human bone marrow mesenchymal stem cells, the levels of axon and myelin sheath-related proteins, including microtubule-associated protein 2, myelin basic protein, and growth-associated protein 43, were elevated, infarct volume was decreased and neural function was improved in cerebral ischemic rats. These findings suggest that intravenously transplanted human bone marrow mesenchymal stem cells promote neural function. Possible mechanisms underlying these beneficial effects include resistance to demyelination after cerebral ischemia, prevention of axonal degeneration, and promotion of axonal regeneration.  相似文献   

15.
背景:目前对于移植后的骨髓间充质干细胞在肝组织中的分化途径以及能够在多大程度上修复损伤的肝细胞等问题,尚未达成统一共识。 目的:观察经尾静脉移植的骨髓间充质干细胞在急性肝损伤大鼠肝组织中的定植分化情况。 设计、时间及地点:细胞学体内对照观察,于2007-12/2008-06在兰州大学中心实验室地点完成。 材料:清洁级6~8周龄雄性SD大鼠47只,取5只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余42只随机分为3组:肝正常细胞移植组15只、肝损伤细胞移植组14只、肝损伤盐水对照组13只。 方法:肝损伤细胞移植组、肝损伤盐水对照组大鼠通过腹腔注射D-氨基半乳糖建立急性肝损伤模型。造模后24 h,肝损伤细胞移植组、肝正常细胞移植组经尾静脉注入BrdU标记的第3代大鼠骨髓间充质干细胞悬液1 mL,含(1.5~2.0)×106个细胞;肝损伤盐水对照组大鼠同法注入等量生理盐水。 主要观察指标:移植后肝功能恢复情况,肝脏免疫组织化学检测结果。 结果:与造模后24 h比较,移植后2,3周肝正常细胞移植组、肝损伤盐水对照组血清谷丙转氨酶活性无明显变化(P > 0.05);肝损伤细胞移植组血清谷丙转氨酶活性明显降低(P < 0.05),肝功能恢复较好。与肝正常细胞移植组比较,肝损伤细胞移植组Brdu+细胞数明显增多(P < 0.01),多分布在汇管区及中央静脉周围,但随着时间延长BrdU+细胞数逐渐减少。 结论:经尾静脉移植的骨髓间充质干细胞可促进急性肝损伤大鼠的肝功能恢复,并能够在受损肝脏及正常肝脏中定植分化,且定植与分化的程度可能与肝脏损伤程度有关。  相似文献   

16.
目的: 肝移植术后并发症不仅包括肝脏本身的损害,亦能导致肝外多个器官功能衰竭,其中肺脏是较易且较早受累的器官。文章通过建立大鼠自体原位肝移植模型,观察肝移植术后肺部急性损伤情况及碱性磷酸酶的干预作用。 方法:①实验于2007-05/10在南方医科大学附属南方医院实验动物中心、消化内科实验室完成,动物实验方法符合动物伦理学要求。②选用SD大鼠24只,按随机数字表法分为对照组、自体原位肝移植组和碱性磷酸酶组,每组8只。后两组建立大鼠自体原位肝移植模型,对照组开腹后游离肝叶后即关腹,碱性磷酸酶组于肝脏恢复血供前5 min自舌静脉注入碱性磷酸酶。③手术结束后2 h检测肺组织髓过氧化物酶活性、丙二醛含量、肺组织表面活性蛋白A含量及肺组织干湿重比值,并行肝脏、肺脏病理检查。 结果:大鼠24只全部进入结果分析。①自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均高于对照组(P﹤0.01),碱性磷酸酶组肺组织中髓过氧化物酶活性、丙二醛含量均低于自体原位肝移植组(P﹤0.01)。②碱性磷酸酶组、自体原位肝移植组肺组织表面活性蛋白A含量较对照组低,而碱性磷酸酶组较自体原位肝移植组有所升高。③自体原位肝移植组、碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值均低于对照组(P﹤0.01),碱性磷酸酶组肺组织干湿重比值高于自体原位肝移植组(P﹤0.05)。④病理结果显示,肝移植后大鼠肝、肺组织受到明显损害,而碱性磷酸酶能减轻损伤程度。 结论:肝移植术后肺部确实存在急性损伤,而碱性磷酸酶对其具有保护作用。  相似文献   

17.
神经干细胞不牵涉伦理学纠纷,但体外分离纯化技术要求严格,费用昂贵,使得神经干细胞在脊髓损伤修复中的应用研究进展缓慢。胚胎干细胞最早用于治疗脊髓损伤,移植后胚胎干细胞能够存活并且向脊髓损伤部位迁移分化成神经元,但由于取材来源的限制以及难以回避的伦理学问题成为其临床应用的障碍,此外未分化的胚胎干细胞具有潜在的致瘤性。骨髓干细胞除具备干细胞的基本特点外,还具有可塑性,表现为骨髓干细胞在某些信号的影响下,锚靠一类组织并分化成该组织细胞,同时骨髓干细胞能够分泌一些营养物质促进内源性细胞的增殖和生长。与其他移植细胞相比,骨髓干细胞易于提取分离,可行自体移植且组织相容性好,因此便于临床应用。对于干细胞治疗脊髓损伤的移植方式,目前大体有3种:局部种植、经腰穿途径、经静脉途径,但尚不清楚何种方式更合适。  相似文献   

18.
骨髓间充质干细胞移植治疗大鼠肾脏辐射损伤   总被引:1,自引:0,他引:1  
背景:研究发现骨髓间充质干细胞可向包括肾脏系膜细胞在内的肾实质细胞分化,且肾损伤后骨髓间充质干细胞具有修复肾脏结构和功能的作用。 目的:观察肾脏辐射损伤大鼠模型接受骨髓间充质干细胞移植后肾脏组织学及功能学变化。 设计、时间及地点:细胞学体外实验,于2009-01/10在珠江医院血液科实验室完成。 材料:清洁级雄性SD大鼠35只,20只用于制备骨髓间充质干细胞,剩余15只随机分为正常对照组、模型组、细胞移植组,5只/组。 方法:全骨髓法分离培养大鼠骨髓间充质干细胞,细胞达90%融合时胰酶消化传代。模型组、细胞移植组大鼠建立辐射损伤模型,接受X射线全身照射,剂量率为500 cGy/min,距靶源100 cm,每次剂量6 Gy,1次/周,连续3周。接受照射完毕后24 h,取处于对数生长期的第3代骨髓间充质干细胞,细胞移植组大鼠经尾静脉注射1 mL细胞悬液,含3×106个细胞,共3次;正常对照组、模型组大鼠尾静脉注射同等体积的生理盐水。 主要观察指标:肾脏组织学苏木精-伊红染色结果,血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶及丙二醛的表达,血清中肌酐和尿素氮的表达。 结果:①肾脏组织病理显示,模型组肾皮质变薄,间质增多;肾小体分布不均匀;肾小球结构紊乱,肾小球血管及出、入球血管变窄,肾小囊腔部分消失;可见部分肾小球变性硬化表现。细胞移植组肾皮质较模型组明显增厚,结构较清晰,间质充血水肿明显减轻;可见较多完整的肾小体;部分肾小球仍存在变性、硬化表现,可见明显的肾小囊腔。②氧自由基检测结果显示,与模型组比较,细胞移植组大鼠血清和肾脏组织中超氧化物歧化酶的活性均明显升高(P < 0.05),丙二醛水平均明显降低(P < 0.05)。③肾功能检测结果显示与模型组比较,细胞移植组大鼠血清中肌酐和尿素氮浓度明显降低(P < 0.05)。 结论:骨髓间充质干细胞移植具有对抗和修复辐射损伤大鼠肾脏的作用,能够有效改善肾脏功能。  相似文献   

19.
通过回顾分析重庆医科大学附属第一医院肝胆外科于2007-08/2008-08完成的26例肝移植患者临床资料来探讨肝移植后早期急性肺损伤的相关危险因素。26例患者中,男22例、女4例;活体右半肝移植4例,尸肝移植22例。移植后18例出现急性肺损伤,1例尸体肝移植后7 d死于多器官功能衰竭。18例急性肺损伤患者中,原发性肝癌2例,肝硬化失代偿13例,慢性重症肝炎3例;肝功能Child B级9例、Child C 级9例;移植前凝血功能障碍8例;移植中出血/输血> 6 000 mL 15例;无肝期/低血压时间> 103 min 6例;移植中新肝血流恢复后30 min谷丙转氨酶> 10 μkat/L 12例。从以上得出结论:肝硬化失代偿,慢性重症肝炎,移植前凝血功能障碍,移植中出血/输血> 6 000 mL,移植中新肝血流恢复后 30 min谷丙转氨酶> 10 μkat/L 均是肝移植后发生急性肺损伤的重要影响因素,应高度警惕急性肺损伤的发生。  相似文献   

20.
近年来,随着成年个体神经系统内神经干细胞的发现以及对其研究的不断深入,应用干细胞治疗缺血性脑卒中受到各国学者的广泛关注。大量的实验研究表明,干细胞可从不同程度上改善脑卒中后的神经功能,具有良好的临床应用前景。目前此类研究主要集中于2种途径,其一是利用内源性神经干细胞的激活治疗脑卒中,其二是利用外源性干细胞移植治疗脑卒中。文章就近年来应用各种干细胞治疗缺血性脑卒中的动物及临床实验研究现状进行综述,并对其存在的问题进行了分析和展望。  相似文献   

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