着色性干皮病基因B对白介素-6介导的血管平滑肌细胞增殖及凋亡的影响

目的 探讨着色性干皮病基因B(xeroderma pigmentosum B,XPB)对白介素-6(IL-6)介导人血管平滑肌细胞( VSMC)增殖及凋亡的影响.方法 用脂质体转染法将重组质粒pcDNA3.1-XPB和空载质粒pcDNA3.1稳定转染VSMC,然后给予100 U/ml的IL-6孵育48 h.实验分为6组:(1)空白对照组;(2) pcDNA3.1组;(3) pcDNA3.1-XPB组;(4)IL-6组;(5) IL-6+ pcDNA3.1组;(6)IL-6+ pcDNA3.1-XPB组.用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)和蛋白质免疫印迹法(Western blotting)检测XPB、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化;用比色法(MTT)观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率.结果 重组质粒pcDNA3.1-XPB转染使细胞XPB表达增高(P＜0.05或P＜0.01),同时Bcl-2表达降低、Bax和wt-p53表达增高(P＜0.05或P＜0.01),抑制IL-6促进VSMC的Bcl-2高表达、Bax和wt-p53降表达(P＜0.05或P＜0.01);XPB高表达抑制了细胞增殖活力(q=2.95,P＜0.05),并抑制IL-6促进VSMC增殖,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组VSMC存活率分别为(102.6±6.2)％和(124.5+7.9)％(q=3.49,P＜0.05);流式细胞仪检测结果显示,XPB高表达引起细胞G0/G1期增加、S期减少、凋亡率增加(q值分别为2.99、5.39、3.05,P＜0.05或P＜0.01),并抑制IL-6促进VSMC G0/G1期减少、S期增加、凋亡率降低的作用,IL-6+ pcDNA3.1-XPB组和IL-6 +pcDNA3.1组分别为(70.9±6.7)％与(54.8±2.9)％、(20.2±3.6)％与(36.4±7.2)％、(5.9±2.1)％与(0.3±0.1)％(q值分别为6.91、8.54、7.53,均P＜0.01).结论 XPB基因能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点.     

SOCS1对氧化低密度脂蛋白促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)过度增殖是促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,氧化型低密度脂蛋白(oxidative low-density lipoprotein,oxLDL)起到了刺激VSMC过度增殖的作用。有研究发现,细胞因子信号转导抑制因子-1(suppressor of cytokine signaling-1,SOCS1)表达下调能促进某些类型细胞的凋亡。然而,SOCS1对VSMC的增殖和凋亡是否有影响目前未见相关报道。为此,本研究探讨SOCS1对oxLDL促进人VSMC增殖作用的影响及其与AS之间的关系。方法用脂质体转染法将靶向人SOCS1基因的siRNA(SOCS1-siRNA)和阴性对照siRNA(NC-siRNA)转染VSMC,然后给予100μg/mL的oxLDL孵育48 h。实验分为6组:空白对照组;NCsiRNA组;SOCS1-siRNA组;oxLDL组;oxLDL+NC-siRNA组;oxLDL+SOCS1-siRNA组。用RT-PCR和Western blot法检测SOCS1、Bcl-2、Bax和野生型p53(wt-p53)表达量的变化;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率。结果 RT-PCR和Western blot检测发现,SOCS1-siRNA的转染使得细胞SOCS1表达降低(P<0.01)。结论 SOCS1表达下调能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制oxLDL促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的作用靶点。     

盐酸地尔硫(艹卓)对血管平滑肌细胞增殖与凋亡的影响

目的 探讨合贝爽对血管平滑肌细胞(VSMC)增殖和凋亡的影响及其作用机制.方法 将VSMC随机分为五组,分别为空白组、模型组(AngⅡ10<'-7>mol/L)和模型+合贝爽1、2、3组(剂量分别为10<'-5>、10<'-6>、10<'-7>mol/L),应用MTT法检测VSMC的生长率,TUNEL法检测凋亡率,RT-PCR检测Bcl-2、Bax、Fas和P53 mRNA的表达.结果 合贝爽抑制VSMC增殖,促进VSMC凋亡,抑制抗凋亡基因Bcl-2的表达,促进促凋亡基因Bax、Fas和P53的表达.结论 合贝爽使VSMC增殖减少,凋亡增加,其机制可能与抑制抗凋亡基因Bcl-2表达、促进促凋亡基因Bax、Fas和P53表达有关.     

着色性干皮病基因D对白介素-6促进人血管平滑肌细胞增殖作用的影响

目的血管平滑肌细胞(vascular smooth musclecell,VSMC)过度增殖是促进动脉粥样硬化(atherosclerosis,AS)发生发展的一个关键因素。而且在AS损伤中,白介素-6(interleukin-6,IL-6)起到了刺激VSMC过度增殖的作用。有研究发现,着色性干皮病基因D(xeroderma pig-mentosum D,XPD)表达上调能促进某些类型细胞的凋亡。然而,XPD对VSMC的增殖和凋亡是否有影响目前未见相关报道。为此,本研究探讨XPD对IL-6促进人VSMC增殖作用的影响及其与AS之间的关系。方法用脂质体转染法将重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2稳定转染VSMC,然后给予100 U/mL的IL-6孵育48h。实验分为6组:(1)空白对照组;(2)pEGFP-N2组;(3)pEGFP-N2/XPD组;(4)IL-6组;(5)IL-6+pEGFP-N2组;(6)IL-6+pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况;用MTT法观察细胞增殖活力;用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡率;用RT-PCR和Western blotting检测XPD、Bcl-2、Bax和野生型P53(wild type P53,wtP53)表达量的变化。结果在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空载质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制了细胞增殖活力(P<0.01)。结论 XPD能抑制VSMC增殖并促进其凋亡,并能抑制IL-6促进VSMC增殖和降低其凋亡的作用,有望成为治疗动脉粥样硬化的靶点。     

Dickkopf-1克隆及其抗结肠癌作用

目的:探讨Dkk1 cDNA抗结肠癌的机制.方法:利用脂质体介导pcDNA3.1( )Dkk1进行瞬时转染结肠癌细胞CT26和表达Dkk1的肝癌细胞HEPA1-6, 转染后的细胞为实验组, 转染空载体pcDNA3.1( )的细胞和未转染的细胞分别为空载体组和未转染组, 用MTT法检测CT26增殖、免疫印迹法检测细胞Dkk1, p53, Bcl-2和Bax的表达量.结果: MTT实验显示在570 nm的吸光度均值CT26实验组明显低于其空载体组和未转染组(0.779±0.025 vs 0.968±0.016, 0.973±0.016), P<0.05); 与CT26空载体组和未转染组相比, 实验组p53, Bcl-2的表达量降低、而Dkk1、Bax表达增高.结论:外源Dkk1可反馈抑制突变型p53的生成, 下调Bcl-2, 增加Bax因子表达而抑制结肠癌的增殖.     

节律基因Per2对胶质瘤细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨节律基因Per2对胶质瘤细胞的影响及其作用机制。方法将Per2表达质粒pcDNA3.1-Per2及空载对照质粒pcDNA3.1分别经阳离子脂质体介导转染CHG-5细胞,用G418筛选出Per2稳定表达细胞株;分别用MTT法、流式细胞仪、RT-PCR技术,检测CHG-5细胞增殖、细胞周期和凋亡,以及该细胞株中增殖、凋亡相关基因p53和c-myc表达。结果筛选到稳定表达Per2基因的细胞株CHG-5/Per2细胞,Per2有抑制肿瘤细胞增殖能力;与对照组（pcDNA 3.1-CHG-5）和未处理组（CHG-5）比较,转染组CHG-5/Per2细胞在G1期阻滞,细胞凋亡明显增加（P均〈0.05）;Per2可明显上调p53基因表达,抑制c-myc基因表达。结论节律基因Per2可促进胶质瘤细胞凋亡,抑制细胞增殖,是胶质瘤中的肿瘤抑制因子。     

替莫唑胺抑制大鼠C6胶质瘤增殖及对P53、caspase-3蛋白表达的影响

目的研究替莫唑胺(TMZ)抑制大鼠C6胶质瘤增殖及对p53、caspase3蛋白表达的影响。方法 120只SD雄性大鼠,构建C6胶质瘤模型。荷瘤大鼠随机平均分为模型组、生理盐水组、替莫唑胺组。处理15 d后检测脑胶质瘤的体积和重量;ELISA检测白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)及血管内皮生长因子(VEGF)表达水平;分离脑胶质瘤细胞,用流式细胞仪检测各组细胞凋亡情况;Western-blot检测脑胶质瘤中p53、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达情况。结果生理盐水组与模型组各项检测均无明显差异(P0.05)。与模型组相比,替莫唑胺处理后脑胶质瘤体积明显减少(P0.01),脑胶质瘤的重量也明显降低(P0.05),IL-6、TNF-α、VEGF表达显著降低(P0.05),胶质瘤细胞的凋亡率明显升高(P0.01),p53、Cleaved-caspase-3、Bax蛋白表达明显上升(P0.01)。结论替莫唑胺可能通过活化凋亡信号途径p53/Bax/caspase-9/caspase-3促进胶质瘤细胞凋亡,抑制大鼠C6胶质瘤细胞增殖。     

辛伐他汀通过抑制TLR4信号通路调节血管平滑肌细胞炎症因子的表达

目的通过检测血管平滑肌细胞（VSMC）炎症因子白细胞介素6（IL-6）和肿瘤坏死因子α（TNF-α）及相关炎症信号分子的表达,探讨辛伐他汀在氧化型低密度脂蛋白（ox-LDL）诱导VSMC炎症反应中的作用和机制。方法体外培养大鼠VSMC,经Toll样受体4（TLR4）阻断剂抗TLR4抗体及辛伐他汀预处理,使用ox-LDL进行干预,用逆转录聚合酶链反应检测TLR4mRNA的表达,通过酶联免疫吸附法检测细胞培养上清液中炎症因子IL-6及TNF-α的水平。结果ox-LDL可以增加VSMC对IL-6及TNF-α的表达,预先经TLR4阻断剂干预后,IL-6及TNF-α的表达明显下调,与未阻断剂组相比,差异皆有统计学意义（P<0.01）;不同浓度的辛伐他汀可以剂量依赖性的抑制TLR4mRNA的表达（P<0.01）,同时也可以剂量依赖性的抑制IL-6及TNF-α的表达（P<0.05）;预先经TLR4阻断剂干预后,辛伐他汀可以显著地抑制TLR4mRNA、IL-6及TNF-α的表达,与辛伐他汀组比较,差异有统计学意义（P<0.01）。结论辛伐他汀对ox-LDL诱导的VSMC炎症因子的表达具有抑制作用,可以通过抑制TLR4的表达,进而抑制ox-LDL-TLR4信号通路而发挥作用。     

miR-127-5p靶向IRAK4对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响

目的探究miR-127-5p靶向白细胞介素1受体相关激酶4(IRAK4)对肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子表达的影响方法首先分为对照组和感染组,感染组用肺炎链球菌感染A549细胞,感染组细胞分别转染miR-127-5p mimic、si-IRAK4及阴性对照质粒,qRT-PCR检测A549细胞中miR-127-5p的表达水平,western blot检测IRAK4、Bax、Bcl-2蛋白水平,流式细胞仪检测细胞凋亡情况,ELISA检测白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)水平,双荧光素酶报告基因检测miR-127-5p与IRAK4的靶向关系。结果与对照组比较,肺炎链球菌感染后A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著降低,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高(P<0.05);与感染+miR-NC组比较,过表达miR-127-5p后,A549细胞中miR-127-5p、Bcl-2、IL-10水平显著升高,细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6显著降低;与感染+si-NC组比较,抑制IRAK4表达后,A549细胞中细胞凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著降低,Bcl-2、IL-10水平显著升高;双荧光素酶报告基因及Western blot结果显示,miR-127-5p可通过与IRAK4特异性结合负向调控IRAK4的表达;与感染+miR-127-5p+pcDNA组比较,感染+miR-127-5p+pcDNA-IRAK4组A549细胞中凋亡率、IRAK4、Bax、IL-6水平显著升高,Bcl-2、IL-10水平显著降低(P<0.05)。结论miR-127-5p靶向IRAK4调控肺炎链球菌诱导的肺泡上皮细胞凋亡及炎症因子IL-10、IL-6的表达。     

二苯乙烯苷对血管内皮细胞凋亡及Bcl-2、Bax表达的影响

目的观察二苯乙烯苷干预过氧化氢致人脐静脉内皮细胞凋亡及对凋亡调控蛋白Bcl-2和Bax表达的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,实验分为对照组、300μmol/L过氧化氢组及二苯乙烯苷预处理组,采用MTT法、形态学观察、流式细胞仪检测内皮细胞凋亡情况,Western blot检测二苯乙烯苷对Bcl-2和Bax表达的影响。结果内皮细胞经过氧化氢处理后,其增殖明显受到抑制,凋亡率显著升高,Bcl-2蛋白表达减少,Bax蛋白表达显著增加,Bcl-2/Bax比值降低,差异均有显著性(P<0.01);经二苯乙烯苷预处理后,细胞增殖率显著提高,凋亡率显著降低;Bcl-2蛋白表达增加,Bax蛋白表达减少,Bcl-2/Bax比值明显提高,差异均有显著性(P<0.01)。结论二苯乙烯苷可通过调节Bcl-2/Bax表达而抑制过氧化氢诱导的人脐静脉内皮细胞凋亡,减少内皮细胞损伤。     

螺内酯和缬沙坦对高血压大鼠心肌细胞凋亡相关蛋白的影响

目的探讨螺内酯和缬沙坦对肾血管性高血压大鼠左心室细胞凋亡调控相关蛋白P53、Bax及Bcl-2表达的影响。方法选取SD大鼠46只制成肾血管性高血压大鼠模型后,随机分为高血压组(N组,12只)、缬沙坦组(V组,11只)、螺内酯组(S组,12只)、螺内酯加缬沙坦组(S+V组,11只),另选10只未造模大鼠为假手术组(C组),各组治疗10周后行超声心动图检查,测定大鼠颈动脉压,应用免疫组织化学法检测P53、Bax及Bcl-2蛋白的表达。结果治疗10周后,与C组比较,N组大鼠收缩压明显升高(P0.01);与N组比较,V组、S+V组大鼠收缩压明显降低(P0.05);与C组比较,N组大鼠Bax、Bcl-2和Bax/Bcl-2明显升高,S组大鼠Bax和Bax/Bcl-2明显升高(P0.05,P0.01);与N组比较,S组大鼠Bax、Bax/Bcl-2和V组、S+V组大鼠Bax、Bcl-2、Bax/Bcl-2均明显下降(P0.05,P0.01);与S组比较,V组、S+V组大鼠Bax、Bax/Bcl-2明显下降(P0.05,P0.01)。结论两肾一夹肾血管性高血压大鼠左心室肥厚形成过程中,Bax过表达不完全依赖P53调节。缬沙坦可以通过与血管紧张素Ⅱ1型受体结合,抑制心肌细胞凋亡相关蛋白P53、Bax及Bcl-2的表达及左心室肥厚的发生。螺内酯可以通过与醛固酮受体结合明显降低P53及Bax的表达,降低Bax/Bcl-2比值,部分地逆转左心室肥厚。     

人剪切修复基因着色性干皮病基因D对人脐静脉内皮细胞的促凋亡作用

目的探讨人剪切修复基因着色性干皮病基因D(XPD)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的促凋亡作用。方法用脂质体转染法瞬时转染HUVEC,转染重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2,并用未转染的与重组质粒pEGFP-N2/XPD和空载质粒pEGFP-N2具有相同遗传背景和代数的HUVEC作为空白对照。实验分为3组:正常对照组、pEGFP-N2组和pEGFP-N2/XPD组。用荧光显微镜观察绿色荧光蛋白报告基因表达情况,用流式细胞仪检测细胞凋亡情况,用RT-PCR和Western Blot检测XPD、Bcl-2、Bax和wt-p53表达量的变化,用MTT法观察细胞增殖活力。结果在荧光显微镜下,可在转染了重组质粒pEGFP-N2/XPD或空载质粒pEGFP-N2的细胞中观察到绿色荧光,即转染成功;流式细胞仪结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染引起细胞凋亡增加(P<0.05或P<0.01);RT-PCR和Western Blot检测发现,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染使得XPD表达增高(P<0.05),同时使得Bcl-2表达降低,Bax和wt-p53表达增高(P<0.05或P<0.01);MTT结果显示,重组质粒pEGFP-N2/XPD的转染抑制细胞增殖活力(P<0.05)。结论 XPD能促进HUVEC凋亡,下调XPD的表达,有望成为治疗动脉粥样硬化的一个新靶点。     

丙型肝炎病毒1b基因型核心蛋白对HepG2细胞Bax与Bcl-2基因表达的影响

目的研究丙型肝炎病毒（HCV）1b基因型核心蛋白（C）对HepG2细胞B细胞淋巴瘤-2基因（Bcl-2）与Bcl-2相关X蛋白（Bax）表达的影响,以探索1b型HCV C蛋白与HepG2细胞凋亡的关系。方法利用RT-PCR扩增出HCV-1b-C基因,经双酶切后连接pcDNA3.1（-）,成功构建真核表达载体pcDNA3.1（-）/HCV-1b-C。利用脂质体转染HepG2细胞,RT-PCR及Western Blot检测其mRNA及蛋白的表达,RT-PCR及Western Blot检测转染成功后HCV-1b-C对HepG2细胞Bax与Bcl-2表达的影响,并设转染空质粒组及未处理组作对照。结果成功构建真核表达载体pcDNA3.1（-）/HCV-1b-C;瞬时转染HepG2细胞,成功表达HCV C mRNA及蛋白;转染C基因组的Bax的mRNA及蛋白相对表达量减少,与转染空质粒组及未处理组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）;转染C基因组的Bcl-2的mRNA及蛋白相对表达量增多,与转染空质粒组及未处理组比较差异均有统计学意义（P〈0.01）。结论 1b基因型HCV C蛋白转染HepG2细胞会导致Bax表达减少及Bcl-2表达增多,降低Bax/Bcl-2比值,可能是抑制HepG2细胞凋亡的机制之一。     

雷帕霉素对肺癌SPC-A-1细胞增殖和凋亡的影响

目的 分析不同浓度的雷帕霉素体外处理人肺癌SPC-A-1细胞后，对细胞的增殖及凋亡的影响，并探讨其可能的作用机制。方法 采用CCK-8法测定雷帕霉素(5 ng/mL,10 ng/mL,15 ng/mL)处理人肺癌SPC-A-1细胞48 h后对细胞增殖的影响。运用FITC-Annexin V/PI双染色法，测定雷帕霉素处理SPC-A-1细胞48 h后对细胞凋亡的影响。使用Western Blot技术测定雷帕霉素作用SPC-A-1细胞48h后的p53、Bcl-2和Bax等凋亡蛋白表达情况。结果 雷帕霉素可以抑制SPC-A-1细胞增殖并可诱导其发生凋亡，其增殖抑制率与凋亡率变化存在剂量依赖性关系(P<0.05)。与对照组(雷帕霉素，0 ng/mL)比较，各浓度(5 ng/mL,10ng/mL,15 ng/mL)雷帕霉素处理对SPC-A-1细胞的凋亡率上升(P<0.05),且p53与Bax蛋白水平增加(P<0.05),而Bcl-2蛋白水平下降(P<0.05)。15 ng/mL雷帕霉素处理组细胞p53、Bax蛋白表达水平均与细胞凋亡率呈正相关(r=0.906,P<0...     

放射性PDGFR-β反义寡核苷酸对血管平滑肌细胞增殖和凋亡的影响

目的研究32P标记血小板衍化生长因子β受体（PDGFR-β）的反义寡核苷酸（AON）对血管平滑肌细胞（VSMC）增殖的影响,为抑制血管术后再狭窄的形成提供可能的干预。方法体外进行大鼠VSMC的培养,以510代细胞为实验对象,人工合成PDGFR-βAON,并进行32P标记,按实验目的分组。MTT法分析细胞增殖活力,以流式细胞仪测定细胞周期,用末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记法（TUNEL）检测细胞凋亡。结果32P标记PDGFR-βAON作用后,VSMC的增殖强度明显弱于空白对照组（P<0.01）,而处于DNA合成前期（G0/G1）细胞百分比高于空白对照组（P<0.01）;32P标记AON组细胞凋亡率明显高于空白组（P<0.01）。结论32P-PDGFR-βAON可以诱导VSMC凋亡,抑制其增殖。     

过表达Krüppel样因子9对脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤的影响及机制

目的:探讨Krüppel样因子9(KLF9)对脂多糖(LPS)诱导的人肺泡上皮细胞A549增殖、凋亡和炎症的影响及机制。方法:A549细胞随机分为四组:NC组、LPS组、LPS+pcDNA-con组和LPS+pcDNA-KLF9组。qRT-PCR检测KLF9、IL-6、IL-1β和TNF-αmRNA的表达,MTT法检测细胞活力,流式细胞术检测细胞凋亡情况,Western blot检测KLF9、CyclinD1、Bax、Bcl-2、β-catenin和GSK-3β蛋白的表达。结果:与NC组相比,LPS组的细胞存活率显著降低,细胞凋亡率显著增加,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著降低,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著升高;与LPS+pcDNA-con组相比,LPS+pcDNA-KLF9组细胞存活率显著升高,细胞凋亡率显著降低,KLF9、CyclinD1和Bcl-2蛋白的表达显著升高,Bax蛋白和炎症因子IL-6、IL-1β和TNF-α的表达显著降低(P<0.05)。过表达KLF9可抑制LPS诱导的A549细胞中Wnt/β-catenin信号通路的激活。结论:过表达KLF9可减轻脂多糖诱导的肺泡上皮细胞损伤,这可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。     

非诺贝特和吡格列酮对血管紧张素Ⅱ介导的心肌细胞肥大和凋亡的干预作用

目的探讨过氧化物酶体增殖物激活型受体α和γ(PPARα和PPARγ)的配体非诺贝特、吡格列酮对血管紧张素Ⅱ(AngⅡ)诱导的心肌细胞肥大、凋亡的干预作用,并观察其对凋亡相关基因Bcl-2/Bax表达变化的影响。方法分别以非诺贝特和/或吡格列酮预处理体外原代培养的新生大鼠心肌细胞24h后,再加用AngⅡ作用24h。采用软件分析细胞表面积,用流式细胞仪检测细胞凋亡率,用Western-blot法观察凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达变化,逆转录聚合酶链反应检测PPARα和PPARγ的mRNA水平。结果与AngⅡ组比较,非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组的心肌细胞表面积、细胞凋亡率及Bax蛋白的表达明显降低(P<0.05),而Bax蛋白的表达和Bcl-2/Bax蛋白水平比值显著增加(P<0.05),非诺贝特组、吡格列酮组及非诺贝特和吡格列酮组间的上述指标差异无显著性(P>0.05),非诺贝特组的PPARαmRNA和吡格列酮组的PPARγmRNA表达增高。结论PPARα和γ激活可逆转心肌细胞肥大,抑制心肌细胞凋亡,并能改变凋亡相关基因Bcl-2/Bax的表达,但PPARα、γ配体合用无叠加效应。     

重构型天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3表达载体诱导人肺腺癌细胞凋亡的意义

目的构建天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶3(Caspase3)表达载体,观察Caspase3表达载体对人肺腺癌A549细胞凋亡的影响。方法应用基因重组方法,建立重构型Caspase3基因的真核表达系统pcDNA3.1revCaspase3质粒和野生型pcDNA3.1Caspase3质粒。将实验细胞分为3组转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组,转染pcDNA3.1Caspase3质粒组,转染pcDNA3.1质粒空白对照组。前2组用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预。应用Caspase3酶活性分析、流式细胞仪及甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测A549细胞Caspase3酶活性变化及细胞凋亡和增殖情况。结果(1)pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组的A549细胞Caspase3酶活性分别是(11.87±0.92)%、(5.34±0.38)%(t=16.02,P<0.01);用Caspase3抑制剂DEVDfmk干预后,pcDNA3.1revCaspase3质粒组酶活性为(7.04±0.48)%,仍明显高于野生型pcDNA3.1Caspase3质粒组的(4.51±0.20)%(t=11.86,P<0.01)。(2)流式细胞分析结果显示,pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞凋亡率分别是(20.1±3.5)%、(7.8±2.8)%、(1.4±0.3)%,3组差异有统计学意义(F=44.01,P<0.01)。(3)MTT比色检测显示pcDNA3.1revCaspase3质粒组、pcDNA3.1Caspase3质粒组和pcDNA3.1质粒组的A549细胞生存率分别是(35.7±1.1)%、(72.8±2.9)%、(85.4±4.8)%,转染pcDNA3.1revCaspase3质粒组生存率明显低于其他两组(F=375.07,P<0.01)。结论pcDNA3.1revCaspase3在A549细胞内有较强的自身活化能力,对Caspase3抑制剂抵抗作用较强,可明显诱导A549细胞凋亡并抑制A549细胞生长。     

TFP5抑制高糖诱发的细胞周期依赖性激酶5过度激活、减少胰岛β细胞凋亡

目的：探讨TFP5对高糖诱发的细胞周期素依赖性激酶5（Cdk5）活性的抑制作用及其对胰岛β细胞的保护作用。方法体外培养小鼠胰岛细胞株Min6。将TFP5转染Min6细胞,分别用免疫印迹和免疫荧光观察其表达。实验分3组：低糖（5mmol/L）组,高糖（25mmol/L）＋空病毒载体（EV）组和高糖（25mmol/L）＋TFP5组,分别用同位素标记法测定3组细胞内Cdk5激酶活性;用酶联免疫吸附法测定3组细胞胰岛素分泌水平;用免疫印迹法测定胰岛β细胞凋亡。结果（1）表明TFP5来源和它的分子序列;（2）TFP5在Min6细胞内表达良好;（3）在高糖＋TFP5组Cdk5的活性明显低于高糖＋EV组（ P＜0.01）,而且在高糖＋TFP5组胰岛素分泌明显高于高糖＋EV组（P＜0.01）;（4）在高糖组Min6细胞的Bax表达增加,Bcl-2表达减少,Bax/Bcl-2比值升高,细胞凋亡增加（P＜0.01,vs 低糖组）,而加入TFP5后,Bax表达减少,Bcl-2表达增加,Bax/Bcl-2的比值减低（P＜0.01,vs 高糖组）,细胞的凋亡减少。结论 TFP5可抑制高糖诱发的Cdk5激酶的过度活性、减少高糖刺激下胰岛细胞凋亡,从而恢复胰岛素分泌,具有潜在的以Cdk5为靶点治疗2型糖尿病的前景。     

抑癌基因p53、凋亡抑制基因Bcl-2、促凋亡基因Bax在胃癌及癌前病变中的表达

目的研究抑癌基因p53、凋亡抑制基因Bcl-2、促凋亡基因Bax在胃癌及癌前病变中的表达,探讨三种基因在胃癌发生、发展中的作用。方法采用免疫组化(IHC)方法对90例慢性萎缩性胃炎患者、79例并发肠上皮化生患者、90例异型增生患者、113例胃癌患者的p53、Bcl-2和Bax的表达情况进行分析。结果胃癌组p53阳性表达率显著高于其他三组,差异有统计学意义(P0.01);胃癌组Bcl-2阳性表达率显著高于慢性萎缩性胃炎组和伴肠上皮化生组(P0.01);胃癌组Bax阳性表达率低于慢性萎缩性胃炎组,差异有统计学意义(P0.05)。p53、Bcl-2、Bax基因蛋白表达在患者的性别、年龄、组织学类型、肿瘤体积、淋巴结转移、发病部位及临床分期等方面差异均无相关性(P0.05)。结论 p53的过度表达是胃癌发生过程较早期事件,Bcl-2的表达逐渐增加,而Bax的表达逐渐下降,在胃癌发生过程中可能存在凋亡抑制。