不同蛋白糖基化终产物对大鼠动脉平滑肌细胞增殖的影响

探讨大鼠Ⅰ型胶原及牛血清白蛋白的糖基化终产物对大鼠血管平滑肌细胞增殖的影响。用贴块法培养SD大鼠主动脉平滑肌细胞至3-4代，分别用体外合成的大鼠Ⅰ型胶原糖基化终产物和牛血清白蛋白糖基化终产物刺激，并以大鼠Ⅰ型胶原和牛血清白蛋白处理的细胞作为对照，与此同时加入大鼠抗血管内皮生长因子抗体，采用氚标胸腺嘧啶脱氧核苷掺入法测定细胞增殖情况。结果发现，大鼠Ⅰ型胶原糖基化终产物能够显著地促进主动脉平滑肌细胞增殖，抗血管内皮生长因子抗体则能有效地抑制上述作用；牛血清白蛋白糖基化终产物对血管平滑肌细胞的增殖有明显的抑制作用，加入抗血管内皮生长因子抗体后未见明显影响。结果提示，不同蛋白的糖基化终产物对血管平滑肌细胞增殖的影响不同，对细胞因子分泌作用的影响也不相同。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白1基因表达的影响

为探讨糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞表达单核细胞趋化蛋白 1基因的影响 ,体外分离培养大鼠主动脉平滑肌细胞 ,然后用不同浓度葡萄糖 (0、5、2 0、5 0和 80mmol L)制备的糖基化终产物 BSA(2 0 0mg L)干预 2 4h和用葡萄糖浓度为 5 0mmol L孵育的糖基化终产物 BSA干预 0、12、2 4和 36h ,逆转录聚合酶链反应检测细胞中单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达水平。结果发现 ,葡萄糖浓度 2 0mmol L、5 0mmol L和 80mmol L孵育的糖基化终产物都增加单核细胞趋化蛋白 1mRNA的表达 ,其中 5 0mmol L组作用最明显 (P <0 .0 0 5 ) ,干预 12h、2 4h、36h后单核细胞趋化蛋白 1mRNA表达均较未干预组明显增加 (P <0 .0 0 1)。结果提示 ,糖基化终产物促进大鼠主动脉平滑肌细胞单核细胞趋化蛋白 1基因的表达     

1-磷酸鞘氨醇受体1参与晚期糖基化终产物引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移

目的观察1-磷酸鞘氨醇受体1(S1PR1)在晚期糖基化终产物(AGE)引起的血管平滑肌细胞增殖和迁移中的作用。方法培养人脐动脉平滑肌细胞(HUASMC),葡萄糖与牛血清白蛋白(BSA)孵育法获得AGE-BSA,分为对照组、BSA组和AGE-BSA组,采用CCK-8实验检测平滑肌细胞增殖能力,采用细胞划痕和Transwell实验检测平滑肌细胞迁移能力,并进一步观察BSA和AGE-BSA在有或无S1PR1拮抗剂VPC23019/激动剂SEW2871预处理后的细胞增殖和迁移。结果与对照组比较,BSA和AGE-BSA均能诱导HUASMC增殖和迁移,AGE-BSA的作用比BSA更加显著(P0.05);S1PR1拮抗剂VPC23019可以明显抑制BSA和AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移;S1PR1激动剂SEW2871本身就可以促进HUASMC增殖和迁移,并且进一步促进BSA诱导的HUASMC增殖和迁移,而对AGE-BSA诱导的HUASMC增殖和迁移没有进一步的促进作用。结论血浆白蛋白本身对平滑肌细胞的增殖具有促进作用,糖基化修饰的白蛋白这一作用更加明显;S1PR1的激活参与了BSA和AGE-BSA促进平滑肌细胞增殖和迁移,AGE-BSA对S1PR1的激活作用更加显著。     

维生素E对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导物甘 …

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导的影响及其机制，应用薄层层析、放射自显影和放射酶标记分离来检测平滑肌细胞中甘油二酯含量；采用检测糖基化终产物的荧光值判断糖基化终产物的形成量。结果发现，维生素Ｅ与葡萄糖、牛血清白蛋白共同孵育后糖基化终产物荧光值明显降低，其刺激细胞产生甘油二酯的能力随之减弱。而维生素Ｅ预先处理平滑肌细胞中，糖基化终产物刺激细胞产生二酯的水平也显著降     

糖基化终产物对平滑肌细胞增殖及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响

目的探讨糖基化终产物对大鼠平滑肌细胞增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达的影响。方法体外分离培养大鼠平滑肌细胞,以不同浓度(50、100、200和400mg/L)糖基化终产物作用于平滑肌细胞不同时间(0、4、8、16、24、48、72和96h),MTT法观察糖基化终产物对平滑肌细胞增殖的影响,逆转录聚合酶链反应测定纤溶酶原激活物抑制剂1基因的表达。结果不同浓度的糖基化终产物作用8h均对平滑肌细胞增殖无影响,以后各时间点不同浓度的糖基化终产物均导致平滑肌细胞增殖,与对照组比较差异有显著性(P<0.05)。糖基化终产物作用不同时间均可使平滑肌细胞表达纤溶酶原激活物抑制剂1基因水平升高,且随着浓度升高而增加(分别为0.85±0.05、0.97±0.05、1.08±0.12和1.41±0.05),与对照组(0.80±0.03)比较差异有显著性(P<0.05)。结论糖基化终产物诱导血管平滑肌细胞增殖并增加纤溶酶原激活物抑制剂1基因表达是糖尿病患者易患动脉粥样硬化的可能原因。     

过氧化物酶体增殖物激活受体γ对糖基化终产物诱导大鼠血管平滑肌细胞增殖的作用

目的观察吡格列酮对糖基化终产物（AGEs）刺激下大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖的作用及对过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）基因及蛋白表达水平的影响,探讨PPARγ在AGEs诱导VSMCs增殖中的作用。方法（1）MTY法观察不同浓度、不同时间的AGEs对VSMCs增殖的影响及吡格列酮（1．0、10、100μmol／L）与AGEs共孵育对VSMCs增殖的干预作用。（2）用半定量逆转录聚合酶链反应测定VSMCs中PPARγ mRNA的表达。（3）用Western blot法检测PPARγ的蛋白表达。结果AGEs作用导致VSMCs增殖,AGEs抑制PPARγ mRNA和蛋白表达水平,这种抑制作用随着AGEs干预的时间延长和浓度的增加而增强（P〈0．05）。PPARγ激活剂吡格列酮通过增加PPARγ的表达,抑制AGEs诱导的VSMCs增殖。结论PPARγ表达的下降可能是糖尿病易患动脉粥样硬化的重要原因之一。     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化。方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)剌激VSMC内贮Ca2 释放入胞浆,用3H亮氨酸及3H胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响。结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P<0.05或0.01)。RY剌激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P<0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaMPK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY剌激组相比差异显著(P<0.01)。结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2 、PKC、MAPK来介导。钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖。     

细胞内钙信号的变化调节血管平滑肌细胞增殖

目的探讨细胞内钙信号的变化对大鼠血管平滑肌细胞(VSMC)增殖作用的影响及其对细胞内信号转导机制的变化.方法以培养的大鼠VSMC为模型,用雷尼丁(RY)刺激VSMC内贮Ca2+释放入胞浆,用3H-亮氨酸及3H-胸腺嘧啶掺入量作为反应VSMC增殖的指标,加入不同的细胞内信号转导阻断剂,观察对RY效应的影响.结果与对照组相比,RY浓度依赖性地促进细胞内游离钙浓度的增高,差异显著(P＜0.05或0.01).RY刺激组蛋白核酸合成速率明显增高,与对照组相比差异显著(P＜0.01);尼卡地平(Nicardipine),蛋白激酶C抑制剂(H7),钙调素激酶(CaM-PK)抑制剂(W7)和丝裂素活化蛋白激酶(MAPK)抑制剂(PD98059)能明显抑制RY介导的VSMC蛋白核酸合成速率增高,与RY刺激组相比差异显著(P＜0.01).结论细胞内钙信号的变化明显促进VSMC增殖,但其效应可能通过Ca2+、PKC、MAPK来介导.钙离子拮抗剂可抑制血管平滑肌细胞增殖.     

α-硫辛酸对糖基化终产物诱导血管内皮细胞凋亡的影响

目的观察α-硫辛酸对糖基化终产物诱导血管内皮细胞凋亡的影响。方法体外培养人脐静脉内皮细胞,以人血清清蛋白作为阴性对照,用含不同浓度梯度(100、200、400mg/L)糖基化终产物的培养液对内皮细胞体外培养60min及α-硫辛酸200μg/ml作用30min后再加入200mg/L糖基化终产物作用内皮细胞60min,采用ELISA法检测内皮细胞8-OHdG水平,瑞氏-吉姆萨染色及Hoechst33258染色观察内皮细胞形态学变化。结果糖基化终产物组内皮细胞8-OHdG水平较对照组明显增加(P0.05),糖基化终产物以剂量依赖方式诱导培养的内皮细胞凋亡,α-硫辛酸干预后内皮细胞8-OHdG水平显著降低,明显减轻内皮细胞凋亡的形态学改变。结论α-硫辛酸抑制糖基化终产物诱导内皮细胞凋亡,其作用机制可能是通过降低细胞氧化应激水平。     

信号转导子和激活子3通路调控大鼠血管平滑肌细胞增殖迁移机制研究

目的研究转录信号转导子和激活子3（stat3）通路与大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖迁移的关系,明确VSMCs增殖的信号转导过程。方法应用脂质体转染Stat3反义寡核苷酸作用于大鼠VSMCs,应用酶联免疫法（ELISA）检测Stat3水平变化及MTF法检测细胞增殖状态,蛋白免疫印迹法（Western blot）检测stat3、磷酸化stat3及其靶基因产物Cyclin D1、Bcl—XL的表达。结果转染Stat3反义寡核苷酸后,大鼠VSMCs中Stat3水平明显下降（P〈0．01）,同时其增殖水平降低,而相应空白对照组、脂质体组、转染正义寡核苷酸组变化不明显。转染Stat3反义寡核苷酸的VSMCs中stat3、p-Stat 3、Cyclin D1蛋白表达水平随作用时间延长而下降（P〈0．01）,而Bcl—xL水平无明显变化。结论癌基因stat3信号通路与大鼠VSMCs增殖高度相关,可能通过其下游靶基因Cyclin D1影响其增殖,而阻断此通路则可抑制VSMCs的增殖。     

阿司匹林对脂多糖诱导的大鼠平滑肌细胞增殖的影响

目的观察阿司匹林对脂多糖(LPS)诱导的体外培养大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响。方法采用组织贴块法培养大鼠主动脉平滑肌细胞,选3-9代细胞用于实验。用乳酸脱氢酶活性测定法进行细胞毒性试验,观察阿司匹林加入对细胞有无毒性。采用四唑盐比色法计数不同浓度阿司匹林处理下,LPS诱导的大鼠血管平滑肌细胞增殖数量的变化。用流式细胞仪检测分别加入LPS和阿司匹林2mmol/L后大鼠血管平滑肌细胞周期变化。结果与对照组比较,阿司匹林5mmol/L组细胞上清液中乳酸脱氢酶活性无明显升高(P>0.05)。阿司匹林(0.5、1、2mmol/L)呈剂量依赖性的抑制大鼠主动脉平滑肌细胞的增值,实验显示2mmol/L浓度的阿司匹林在培养第五天时抑制的效果最大,与LPS组比较有极显著的差异。与LPS组比较,阿司匹林(2mmol/L)可使细胞静止期/DNA合成前期(Go/G1)的大鼠主动脉平滑肌细胞所占比例显著升高,而DNA合成期(S期)细胞所占比例显著降低。结论阿司匹林能呈剂量依赖性地抑制LPS诱导的大鼠主动脉平滑肌细胞的增殖,并将细胞抑制在G0/G1。     

晚期糖基化终产物受体与特发性肺纤维化关系的研究进展

晚期糖基化终产物受体(RAGE)是细胞表面分子中免疫球蛋白超家族成员之一,与多种配体结合,参与调控多条信号通路.目前研究证实:RAGE在特发性肺纤维化的肺组织中表达明显异常,并通过干扰上皮-间充质细胞转换调节细胞外基质的分泌,参与肺纤维化调控.阻断RAGE表达有可能干预肺纤维化进程.深入研究RAGE参与肺纤维化的分子机制,有望为特发性肺纤维化提供新的分子治疗靶点.     

维生素E对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导物甘油二酯的影响

为探讨抗氧化剂维生素Ｅ对糖基化终产物刺激大鼠主动脉平滑肌细胞信号转导的影响及其机制,应用薄层层析、放射自显影和放射酶标记分离来检测平滑肌细胞中甘油二酯含量;采用检测糖基化终产物的荧光值判断糖基化终产物的形成量。结果发现,维生素Ｅ与葡萄糖、牛血清白蛋白共同孵育后糖基化终产物荧光值明显降低,其刺激细胞产生甘油二酯的能力随之减弱。而维生素Ｅ预先处理平滑肌细胞后,糖基化终产物刺激细胞产生甘油二酯的水平也显著降低。以上提示维生素Ｅ能明显抑制糖基化终产物刺激平滑肌细胞产生甘油二酯,并且能抑制糖基化终产物的形成。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白-1α表达的影响

目的　探讨糖基化终产物 (AGEs)对大鼠主动脉平滑肌细胞巨噬细胞炎性蛋白 1α(MIP 1α)mRNA及蛋白表达的影响。　方法　将培养的大鼠主动脉平滑肌细胞用不同浓度 (10 0、2 0 0、4 0 0mg/L)的AGEs孵育 2 4h及同一浓度 (4 0 0mg/L)AGEs孵育 0、12、2 4、36h ,采用RT PCR方法及流式细胞仪检测MIP 1αmRNA及蛋白的表达水平。　结果　对照组平滑肌细胞内MIP 1α呈弱表达 ,10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs培养平滑肌细胞 2 4h显著增高MIP 1αmRNA的表达 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为对照组的 1 36、1 75、2 4 5倍 (P <0 0 5 ) ;10 0、2 0 0、4 0 0mg/LAGEs孵育2 4h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 197± 3、2 6 0± 6及 375± 6 ,分别为对照组(15 8± 4 )的 1 2 4、1 6 3、2 37倍 (P <0 0 5 )。 4 0 0mg/LAGEs培养 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1αmRNA的表达也明显增高 ,其电泳条带相对积分吸光度值分别为 0h组的 1 5 2、2 38、2 5 3倍(P <0 0 5 ) ;4 0 0mg/LAGEs孵育 12、2 4、36h后 ,各组平滑肌细胞MIP 1α蛋白的平均荧光强度分别为 2 4 4± 5、375± 6及 4 2 5± 3,分别为 0h组 (170± 5 )的 1 4 3、2 2 1、2 4 9倍 (P <0 0 5 )。　结论　糖基化终产物以时间及剂量     

法舒地尔对VEGF诱导肺动脉平滑肌细胞增殖的抑制作用

肺动脉平滑肌细胞(PASMCs)增殖是肺动脉高压(PAH)中肺动脉重塑的一个重要因素.各种刺激均可促进PASMCs的移行和增殖,导致动脉壁增厚和PAH的形成[1].血管内皮生长因子(VEGF)可以促进PASMCs的增殖[2,3],在严重的PAH发病过程中,VEGF控制着毛细血管前动脉的重构[4].小G蛋白Rho及其效应物Rho激酶(ROCK)信号通路在各种细胞功能中,包括血管平滑肌细胞的收缩和增殖中都起着重要作用.     

吡格列酮对AGE-BSA诱导大鼠平滑肌细胞增殖和PAI-1 mRNA表达水平的影响

目的探讨吡格列酮（Pio）对糖基化修饰的牛血清白蛋白（AGE-BSA）诱导大鼠血管平滑肌细胞（VSMCs）增殖以及纤溶酶原激活物抑制剂1（PAI-1）mRNA表达的影响。方法体外制备的AGE-BSA以不同浓度和不同时间干预大鼠VSMCs,观察Pio对AGE-BSA作用的影响（1）MTT法观察VSMCs增殖;（2）半定量RT-PCR测定PAI-1 mRNA表达水平。结果（1）各浓度的AGE-BSA作用16h开始导致VSMCs增殖（P〈0.05）;（2）AGE-BSA导致PAI-1 mRNA表达水平升高,呈浓度、时间依赖性;（3）Pio可明显抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖以及PAI-1 mRNA表达水平。结论Pio在2型糖尿病中可能通过抑制AGE-BSA诱导的VSMCs增殖和PAI-1 mRNA表达水平,在血管并发症方面起到有益作用。     

中链甘油三酯对血管平滑肌细胞增殖的双向作用

目的研究中链甘油三酯(MCT)对大鼠主动脉血管平滑肌细胞(RASMC)增殖的影响。方法采用体外细胞培养、油红O染色观察细胞形态的变化;MTT法、流式细胞术检测MCT对RASMC增殖的影响。结果油红O染色结果显示,脂质浸润始于125 mg/dL,随着MCT浓度的增高,浸润的细胞数量有所增加;高浓度情况下(2000mg/dL),细胞形态变化较明显,胞体变大变圆,细胞突起增多,呈不规则形。MCT对RASMC增殖的影响具有时间和浓度依赖性。在24~48 h,62.5~250 mg/dL,表现为促增殖作用,其中24 h,62.5 mg/dL时增殖率最大约为132.9%,与对照组相比差异有统计学意义(t=-4.5529,P=0.0005);24~48 h,≥250 mg/dL及24~144 h,≥500mg/dL,表现为抑制增殖作用,其中120 h,1000 mg/dL增殖率最低约为1.0%,与对照组相比差异有统计学意义(t=68.8652,P0.0001)。流式周期结果表明,与对照组比较,MCT组出现G0/G1期百分比降低(F=5.56,P=0.0039)和S期百分比增高(F=7.28,P=0.0011)。流式凋亡结果显示,除了24 h外,各时间点的凋亡百分比均比对照组低,其中48~144 h的凋亡率分别为2.6%(F=1.86,P=0.1591)、0.9%(F=6.43,P=0.002)、0.9%(F=3.41,P=0.0274)、1.0%(F=5.76,P=0.0033)和2.1%(F=5.18,P=0.0054)。结论 MCT对RASMC增殖的影响具有双向性,即在低浓度短时间促进增殖作用,在中、高浓度抑制增殖作用。     

糖基化终产物对大鼠主动脉平滑肌细胞结缔组织生长因子表达的影响

目的 研究糖基化终产物对结缔组织生长因子(CTGF mRNA)及蛋白质表达的影响,探讨糖基化终产物致动脉粥样硬化机制. 方法 采用组织块贴壁法培养大鼠主动脉平滑肌细胞.反转录聚合酶链反应、蛋白免疫印迹法检测血管平滑肌细胞结缔组织生长因子mRNA及蛋白质的表达. 结果 随着糖基化修饰的牛血清白蛋白(AGE-BSA)的干预浓度(100、200、400 mg/L)升高,CTGF mRNA的表达水平呈上升趋势,分别为(0.78±0.03)、(1.15±0.03)、(1.40±0.04)mg/L,与未干预(0.40±0.02)mg/L比较,差异有统计学意义(P<0.05),不同浓度间差异亦有统计学意义(P<0.05).以200 mg/L的AGE-BSA对平滑肌细胞分别干预0、4、8、16、24、48、72 h,发现4 h时CTGF mRNA表达即已升高(0.93±0.04)mg/L,8 h时最高(1.29±0.04)mg/L,以后虽略有下降,但仍维持较高水平. 结论 糖基化终产物促进血管平滑肌细胞表达结缔组织生长因子,可能是其致动脉粥样硬化机制中的一个重要方面.