诱发型一氧化氮合酶在人类鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的　探讨人类鼻黏膜上皮细胞应答炎性刺激因子白细胞介素 1 β(interleukin 1 β ,IL 1 β)和肿瘤坏死因子 (tumornecrosisfactor α ,TNF α) ,合成诱发型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase ,iNOS)的能力及其机制 ,以及类固醇药物对上皮细胞的影响。方法　将人类鼻黏膜上皮细胞(包括鼻息肉上皮细胞 ,下鼻甲上皮细胞 )进行无血清原代细胞培养 ,分别加入各种不同浓度的炎性刺激因子 (IL 1 β和TNF α)以及地塞米松 ,采用原位杂交的方法检测不同条件下iNOSmRNA的水平。结果　①不论用IL 1 β或是TNF α刺激 ,iNOSmRNA水平均随浓度的增加 ,时间的延长而增加 ,尤以鼻息肉上皮细胞明显。但当浓度到一定水平后 ,iNOSmRNA水平不再继续升高 ;②用IL 1 β +TNF α共同刺激 ,iNOSmRNA水平要高于单纯用其中的一种 (P <0 .0 1 ) ,同样鼻息肉上皮细胞iNOSmRNA水平要高于下鼻甲上皮细胞 ;③加入地塞米松后 ,被炎性因子诱发的iNOSmRNA升高的水平下降。当地塞米松浓度为 4 0ng/ml以上时 ,iNOSmRNA水平不再继续下降。 结论　①IL 1 β和TNF α上调人类鼻黏膜上皮细胞合成的iNOSmRNA水平 ,鼻息肉上皮细胞更为活跃。它的机制可能是通过核因子 κB途径 ;②地塞米松降低这种上调作用 ,它的机制可能是通过阻断核     

鼻粘膜上皮细胞中缺氧调节血管内皮生长因子及其机制

目的：探讨人类鼻粘膜上皮细胞应答组织缺氧，分泌合成血管内皮生长因子（VEGF）的能力，以及缺氧调节VEGF的可能机制。方法：将人类鼻粘膜上皮细胞分别在常氧（21％）和缺氧（1％）条件下进行无血清原代细胞培养3－48小时，另外常氧培养的其中一组加入金属镍共同孵育，采用原位杂交和酶联免疫吸附试验（ELISA）的方法检测各种条件下VEGF的mRNA水平和蛋白质水平。结果：①缺氧条件下，VEGF的mRNA水平和蛋白质水平明显升高，与常氧组比较P＜0．001，且具有时间依赖性；②加入金属镍共同孵育，VEGF的表达也升高，与常氧组比较P＜0．01。结论：在人类鼻粘膜上皮细胞中，缺氧可明显上调VEGF的mRNA和蛋白质表达，它的机制可能是通过含铁血红素氧敏感分子，一个与促红细胞生成素（EPO）调节相似的途径。     

过敏性鼻炎和特发性鼻炎患者鼻粘膜中神经元性一氧化氮合酶的免疫反应性

最近,大量研究表明:一氧化氮(NO)在维持鼻粘膜内环境稳定方面起着重要的作用。NO是在一氧化氮合酶(NOS)的催化作用下形成的,人的NOS有以下三种不同存在形式,即:神经元型一氧化氮合酶(nNOS)、诱导型一氧化氮合酶(iNOS)和内皮型一氧化氮合酶(eNOS)。iNOS是一个钙调蛋白非依赖性的酶,在各种组织和细胞中被细胞活素、巨噬细胞、嗜中性的细胞、     

鼻息肉中一氧化氮合酶表达及其意义

目的 :了解鼻息肉 (NP)中一氧化氮合酶 (NOS)的分布特点和活性及其在NP发病中的作用。方法 :用免疫组织化学法检测 30例NP(NP组 )及 2 0例正常鼻黏膜 (正常鼻黏膜组 )中NOS的表达 ,并用分光光度计法检测其活性。结果 :NP组NOS活性为 (4.0 79± 0 .6 5 5 )U/mg蛋白 ,正常鼻黏膜组为 (1.5 2 6± 0 .310 )U/mg蛋白 ,二者间差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;NP组iNOS有大量细胞表达 ,分布在黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞以及炎症细胞中 ,与正常鼻黏膜组比较 ,差异有统计学意义 (P <0 .0 1) ;而eNOS也有表达 ,但与正常鼻黏膜组比较 ,差异无统计学意义 ;NP组i NOS表达明显高于eNOS表达 ,其差异有统计学意义 (P <0 .0 1)。结论 :NP主要表达iNOS ,分布在黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞以及炎症细胞中 ,其产生的大量一氧化氮在NP的发病过程中可能起着重要的作用     

鼻黏膜中一氧化氮合酶表达及其意义

目的了解正常鼻黏膜中一氧化氮合酶的分布特点及活性,并分析其在鼻黏膜中的生理作用。方法应用免疫组化法对20例正常鼻黏膜中内皮型一氧化氮合酶和诱导型一氧化氮合酶的表达情况进行检测,并应用分光光度法检测一氧化氮合酶活性,然后分析其表达特征,探讨其生理意义。结果正常鼻黏膜组织中有内皮型一氧化氮合酶表达,分布于黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞;诱导型一氧化氮合酶偶见细胞表达;两者表达水平差异有显著性意义(P<0.01)。一氧化氮合酶活性1.526±0.310U/mgPro。结论鼻黏膜中主要表达内皮型一氧化氮合酶,分布于黏膜上皮、腺体和血管内皮细胞。由该酶产生的一氧化氮在鼻腔的正常生理功能中可能发挥重要作用。     

一氧化氮和一氧化氮合酶的研究进展

自一氧化氮（ＮＯ）的生物学作用被揭示以来,每年均有大量关于ＮＯ或（和）一氧化氮合酶（ＮＯＳ）的研究报道,目前此项研究已扩展到全身各个系统。兹将ＮＯ和ＮＯＳ的一些基本问题、实验研究近况以及笔者的研究结果加以综述。１　ＮＯ生物作用的发现,ＮＯＳ的性质及Ｎ...     

Toll样受体-4介导诱发型一氧化氮合酶mRNA在鼻黏膜上皮细胞中的表达

目的 :探讨Toll样受体 4 (TLR 4 )对诱发型一氧化氮合酶 (iNOS )在鼻黏膜上皮细胞中表达的上调作用。方法 :应用核酸分子原位杂交技术检测 30例慢性鼻窦炎患者 (鼻窦炎组 )和 2 1例健康者 (对照组 )鼻黏膜上皮细胞中TLR 4和iNOSmRNA的表达。结果 :TLR 4和iNOSmRNA在鼻窦炎组鼻黏膜上皮细胞中的表达 ,分别为 (0 .14 33± 0 .0 184 0 ) /A和 (0 .136 8± 0 .0 0 76 5 ) /A ,分别与对照组 [(0 .10 2 4± 0 .0 1133) /A和 (0 .0 72 4± 0 .0 136 4 ) /A ]比较 ,差异有统计学意义 (均P <0 .0 1) ,且二者表达呈正相关 (r =0 .4 35 ,P <0 .0 1)。结论 :鼻黏膜上皮细胞通过TLR 4识别病原微生物 ,上调iNOSmRNA的表达 ,增加NO的合成 ,以杀伤、清除病原菌 ,增强宿主防御和免疫应答。     

In vitro expression of inducible nitric oxide synthase in the nasal mucosa of guinea pigs after incubation with lipopolysaccharides or cytokines

In order to demonstrate the involvement of nitric oxide synthases (NOS) – in particular the inducible isoform (iNOS) – in inflammatory processes within the nasal airways, we used organ-bath incubation to study isolated inferior turbinates and mucosa of the maxillary sinus of guinea pigs. The pattern of the expression in various substructures of the nasal mucosa was of special interest. Mucosa was incubated for 6 h with lipopolysaccharides (LPS) produced by E. coli, interleukin II (IL-2) or tumor necrosis factor-alpha (TNF-α). Saline was used as the control solution. Following incubation the specimens were fixed in buffered 4% formaldehyde solution over a period of 4 h. Tissues were next exposed to nicotinamide adenine dinucleotide phosphate (NADPH)-diaphorase-reaction and immunostained with specific antibodies to iNOS. Results then showed a clearly increased or initiated expression of iNOS in epithelium, glands, leucocytes and blood vessels of treated tissues in comparison to the control specimens. The inflammatory mediator LPS and the cytokines Il-2 or TNF-α alone were found to be capable of increasing the expression of iNOS, although the effects of LPS clearly exceeded those of the cytokines. This finding implicates iNOS-generated nitric oxide as a key factor for causing nasal swelling, secretion and obstruction during nasal infections and allergic episodes. Received: 18 November 1997 / Accepted: 22 April 1998     

鼻息肉鼻内镜术后诱导型一氧化氮合酶的检测

目的　检测诱导型一氧化氮合酶 (iNOS)在鼻息肉 (NP)鼻内镜术中术后的表达情况 ,探讨iNOS在预测NP的复发及客观判断内镜手术疗效中的作用。方法　取 5 0例NP鼻内镜术中术后NP组织、中鼻道黏膜组织和 37例行下鼻甲切除的下鼻甲黏膜组织 (对照组 ) ,应用免疫组化染色方法 ,分别检测两组组织中iNOS的表达情况。结果　①iNOS在 5 0例鼻内镜术中NP组织的上皮及腺上皮细胞中均有表达 ,在炎症细胞也有表达 ;在 37例对照组鼻黏膜上皮及腺上皮组织均无表达 (P <0 .0 1)。②NP组在术后 1～ 4个月中鼻道黏膜iNOS表达机率逐渐减少 ,大多数可见弱阳性表达。结论　iNOS在NP发生发展中发挥着重要作用 ;NP鼻内镜术后的iNOS动态监测可以作为制定手术疗效客观标准的参考和预测NP复发的高危因素之一     

Regulation of mucociliary motility by nitric oxide and expression of nitric oxide synthase in the human sinus epithelial cells

OBJECTIVES: This study was performed to investigate the changes in ciliary beat frequency (CBF) after treatment with Larginine in the human sinus mucosa and to determine the distribution of inducible nitric oxide synthase (iNOS) and endothelial nitric oxide synthase (eNOS) in the healthy sinus mucosa. STUDY DESIGN/METHODS: CBF was measured in the sphenoid sinus mucosa of 12 patients who underwent trans-septal trans-sphenoidal hypophysectomy for the treatment of pituitary gland tumor. CBF was measured over 24 hours in Dulbecco's modified Eagle's medium (DMEM) after treatment with L-arginine, its inactive spatial isomer D-arginine, or an NOS inhibitor, N(G)-nitro-L-arginine methyl ester (L-NAME). DMEM without treatment with these materials was used as a control. Other pieces of the mucosa were exposed to L-NAME and its inactive spatial isomer D-NAME after preincubation with L-arginine. The specimens were immunohistochemically stained for iNOS and eNOS. RESULTS: CBF increased 24 hours after treatment with L-arginine as compared with control groups. CBF increased in proportion to the increasing concentrations of L-arginine. There was no significant change after treatment with D-arginine or L-NAME. CBF increased after treatment with L-arginine at 30 minutes and maintained for 24 hours. L-NAME inhibited the increase in CBF by L-arginine, but D-NAME showed no such effect. Immunoreactivity to both iNOS and eNOS was frequently observed in the ciliated epithelial cells and was stronger to eNOS than to iNOS. CONCLUSIONS: From the results of this study it is suggested that nitric oxide (NO) produced by iNOS and eNOS using L-arginine may increase CBF in the healthy sinus mucosa and that NO may have a regulatory function in ciliary motility in the human sinus mucosa.     

变应性鼻炎患者外周血白细胞及鼻黏膜诱导型一氧化氮合酶mRNA 表达的意义

目的　探讨变应性鼻炎 (allergicrhinitis,AR)患者外周血白细胞及鼻黏膜诱导型一氧化氮合酶 (induciblenitricoxidesynthase,iNOS)mRNA表达的关系。方法　选择 3 5例AR患者及 3 0例健康人的外周血白细胞。其中 8例变应性鼻炎患者鼻黏膜 ,6例正常鼻黏膜。iNOS mRNA表达采用原位杂交方法。血浆一氧化氮 (nitricoxide,NO)水平采用硝酸还原酶比色法测定。结果　健康人外周血白细胞未见iNOS mRNA表达 ,而AR患者外周血白细胞iNOS mRNA表达高度增强 ,其阳性率达 40 82 %。正常人鼻黏膜上皮、腺体及巨噬细胞可见iNOS mRNA的低度表达 ,而AR患者中上皮、腺体及巨噬细胞增生 ,并iNOS mRNA表达高度增强 (t=2 3 17,P <0 0 0 1)。AR组血浆NO水平显著高于对照组 (t=2 7 89,P <0 0 1)。结论　AR患者血浆NO水平与外周血白细胞及组织内iNOS mRNA表达高度增强有关。提示iNOS NO通路在AR的发病过程中可能起重要作用。本研究为检测体内某些信号提供了简便易行的原位杂交试验方法     

前炎细胞因子对鼻息肉上皮细胞人类白细胞抗原表达的影响

目的　探讨前炎细胞因子对鼻息肉上皮细胞表达人类白细胞抗原 (humanleucocyteantigen ,HLA) DR的影响。方法　 2 3例鼻息肉及 1 1例鼾症患者下鼻甲标本 ,固定包埋 ,以HLA DR单抗免疫组化染色以观察HLA DR阳性细胞的分布。另分离其上皮细胞体外培养 ,并以白介素 1 β(interleukin 1 β ,IL 1 β) ,肿瘤坏死因子 α(tumornecrosisfactor,TNF α) ,IL 1 β +TNF α ,IL 1 β +TNF α +地塞米松分别刺激 ,采用免疫组化SP法 ,检测HLA DR在鼻息肉、下鼻甲组织上皮细胞及炎性因子下培养上皮细胞中的表达及分布。结果　HLA DR在鼻息肉组织中主要表达于上皮细胞层。在鼻眶手术患者下鼻甲组织中上皮表面纤毛层有轻微表达。培养的鼻黏膜上皮细胞阳性表达在胞浆 ,发现 :①对照组阳性细胞表达极少 ,鼻息肉组与下鼻甲组差异无显著性 ;②加入IL 1 β或TNF α ,HLA DR表达明显增加 ,与对照组差异显著 ,IL 1 β+TNF α刺激组表达最强 ,且鼻息肉上皮细胞表达强于下鼻甲组 ;③加入地塞米松后 ,各组表达水平下降 ,鼻息肉组与下鼻甲组无明显差别。结论　鼻息肉上皮细胞在前炎细胞因子作用下通过HLA DR分子的表达参与抗原提呈和炎症过程。糖皮质激素通过下调HLA DR的表达 ,可作为免疫抑制剂减轻局部免疫损伤。