肠球菌对氟喹诺酮类抗菌药的耐药机制

肠球菌属革兰氏阳性菌 ,是重要的医院感染病原菌 ,对多种抗菌药具有固有耐药性和获得性耐药性。氟喹诺酮类抗菌药是新一代广谱全合成抗菌药 ,具有抗菌谱广 ,抗菌作用强 ,不良反应较少等优点。随着新的氟喹诺酮类抗菌药的广泛应用 ,肠球菌对此类药物的耐药株日益增多。耐药机制主要涉及两个方面 :药物靶位 -拓扑异构酶Ⅱ的改变和药物的主动外排。     

氟喹诺酮类药物对粪肠球菌的防耐药突变浓度研究

目的通过测定4种氟喹诺酮类药物(FQ)对粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的最低抑菌浓度(MIC)、防耐药突变浓度(MPC)和突变选择窗(MSW),比较其抗菌活性及防耐药突变的能力。方法采用4种FQs(环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星和加替沙星)筛选粪肠球菌ATCC29212同源的第一步耐药突变体,用加替沙星筛选第二步耐药突变体;采用琼脂二倍稀释法测定粪肠球菌ATCC29212及其同源耐药突变体、粪肠球菌临床分离株的MIC、暂定MPC(MPCpr)和MPC,并计算MIC90、MPCpr90、选择指数SI(MPCpr90/MIC90及MPC/MIC)。结果加替沙星、莫西沙星、左氧氟沙星和环丙沙星对粪肠球菌ATCC29212的MPC分别为1.2、1.2、5.6和6.4μg/m L,选择指数分别为3.4、6、8和8;对30株环丙沙星敏感的粪肠球菌临床分离株的MPCpr90分别为2、1、4和4μg/m L,选择指数分别为4、4、8和8;而加替沙星和莫西沙星对15株环丙沙星中介耐药株的MPCpr90分别为32和16μg/m L,选择指数均达到了32。4种FQs药物对ATCC29212第一步耐药突变体的MIC及MPC值均较其源菌株升高;加替沙星和莫西沙星对第二步耐药突变体的MPC已高达32μg/m L;加替沙星、莫西沙星和左氧氟沙星对第一步耐药突变体的MSW较源菌株增宽。结论对于粪肠球菌临床分离株、ATCC29212及其同源的耐药突变体,加替沙星和莫西沙星的抗菌活性均高于左氧氟沙星和环丙沙星,且加替沙星和莫西沙星限制粪肠球菌耐药突变体被选择出来的能力强于左氧氟沙星和环丙沙星,结合药动学参数,加替沙星和莫西沙星能限制下一步耐药突变株的产生,而环丙沙星和左氧氟沙星则很容易筛选出下一步耐药突变株。但对于第二步耐药突变株,加替沙星和莫西沙星则很容易筛选出对这两种药物也耐药的菌株。因此,临床上为延长加替沙星和莫西沙星的使用寿命,对于环丙沙星非敏感的菌株应避免应用加替沙星和莫西沙星单药治疗。     

多重耐药外排泵抑制剂作用机制研究

多重耐药外排泵广泛存在于各种病原菌中,对细菌的药物敏感性以及细菌性感染的临床治疗影响很大。对于细菌来说,外排基因占所有转运蛋白基因的6%～18%,所以外排基因编码的外排泵是导致其多重耐药的重要机制。最新研究结果表明[1-2],临床分离的多重耐药的大肠埃希菌,其耐药性往往与某些基因的超表达相关,     

泵抑制剂对嗜麦芽寡养单胞菌临床分离株氟喹诺酮类敏感性的影响

目的 了解嗜麦芽寡养单胞菌临床分离株外排泵的分布以及不同泵抑制剂对该菌氟喹诺酮类敏感性的影响。方法 用琼脂二倍稀释法检测泵抑制剂存在时，嗜麦芽寡养单胞菌对环丙沙星、氧氟沙星和诺氟沙星的敏感性变化。结果 羰基氰氯苯腙(CCCP)和利舍平降低部分嗜麦芽寡养单胞菌株对氟喹诺酮的耐药性。维拉帕米无明显泵抑制作用。泵阳性株存在于耐药和非耐药菌株中，集中于耐药性较高的菌株。泵抑制剂对该菌外排氧氟沙星的抑制大于对诺氟沙星和环丙沙星的作用。结论 多重外排泵是嗜麦芽寡养单胞菌对氟喹诺酮类耐药的原因之一。泵抑制剂可部分逆转这种耐药性。     

泵抑制剂对鲍曼不动杆菌诱导突变株氟喹诺酮敏感性的影响

目的探讨主动外排泵在鲍曼不动杆菌诱导突变株对氟喹诺酮类药物敏感性的影响。方法用环丙沙星诱导鲍曼不动杆菌筛选突变株。采用琼脂二倍稀释法检测泵抑制剂羰基氰氯苯腙(carbonylcyanide-m-chlorophenyl-hydrazone,CCCP)或利舍平存在时鲍曼不动杆菌诱导突变株对环丙沙星、左氧氟沙星和加替沙星敏感性的变化。结果CCCP和利舍平能影响部分鲍曼不动杆菌突变株对3种氟喹诺酮的最低抑菌浓度(minimum inhibition concentration,MIC),使MIC降至原值的1/4以下,泵阳性株在对3种氟喹诺酮均敏感的突变株中即存在。结论主动外排泵表达增强可能是鲍曼不动杆菌突变株MIC值升高的原因之一。     

肠球菌多重耐药株出现的危险因素和用药探究

目的：了解某院肠球菌感染的临床分布、耐药情况、多重耐药株出现的危险因素及用药情况，为临床肠球菌感染患者抗菌药物的合理用药提供参考依据。方法：对2016年7月-2018年12月检出的肠球菌的标本来源、临床科室分布、药敏结果、患者基础疾病及抗菌药物选择进行回顾性分析。采用χ²检验对肠球菌属粪肠球菌、屎肠球菌、鸟肠球菌的药敏结果进行比较分析；同时采用Logistics回归分析对多重耐药株进行多因素分析。结果：共分离出151株肠球菌属，检出7种肠球菌，其中以粪肠球菌（53.64%）和屎肠球菌（29.13%）为主；屎肠球菌对氨苄西林、环丙沙星、左氧氟沙星、莫西沙星、呋喃妥因、青霉素的耐药率高于粪肠球菌和鸟肠球菌；屎肠球菌对高单位的庆大霉素耐药率为75%（P=0.000），高于粪肠球菌而低于鸟肠球菌的耐药率；粪肠球菌对奎奴普丁-达福普丁的耐药率96.2%（P=0.000）明显高于屎肠球菌（4.54%）和鸟肠球菌（70%）。对粪肠球菌和鸟肠球菌感染，临床上使用甲磺酸左氧氟沙星氯化钠注射液最多，而对屎肠球菌，使用注射用哌拉西林钠他唑巴坦钠最多。2种及2种以上基础疾病、泌尿道感染、既往3个月内使用过抗菌药物和既往3个月内住院是导致肠球菌感染患者发生多重耐药菌感染的危险因素。结论：屎肠球菌感染在该院肠球菌属感染中占主要地位，耐药率方面明显高于粪肠球菌和鸟肠球菌。针对肠球菌感染的患者，临床医师在经验性选择抗菌药物时，需要考虑以上4种多重耐药菌感染的危险因素。     

肠球菌及其耐药机制研究

在过去的几十年,抗生素广泛应用于临床各种感染性疾病的治疗,正因为抗生素的广泛使用,多重耐药问题也日益突出,新的耐药菌株不断出现。近10年来,由肠球菌(Enterococci)引起的医院感染(Nosocomialinfection,NI)越来越受到重视,美国医院感染监视系统(NISS)已将其列为医院感染的第二大病原菌犤1犦,占所有医院感染原因的12%犤2犦。而我国肠球菌感染亦有明显增加的趋势犤3犦,耐药肠球菌引起的医院感染也逐年上升犤4犦。肠球菌对常用抗生素的耐药性迅速递增,尤其是其多重耐药性给临床抗菌治疗带来困难犤5犦。因此,对肠球菌耐药性的研究已成为…     

大肠埃希氏菌的多重药物外排泵AcrAB-TolC

外排泵是细菌对多种抗生素耐药的重要机制之一，大肠埃希氏菌的细胞外膜上存在多种外排系统可泵出多种结构无关的化合物，AcrAB-TolC外排泵是其中最主要的，占绝对优势的多重药物外排泵，底物广泛，其构成包括泵转运子AcrB；周质融合蛋白AcrA；以及外膜通道蛋白TolC。在自然环境中，正常表达AcrAB-TolC有助于大肠埃希氏菌抵抗肠道的胆盐，脂肪酸等疏水性物质的侵入，在某些条件下，高水平表达AcrAB-TolC，可使细菌表现出对多种化合物的耐受，甚至高水平耐受，acrAB-tolC表达受到多种调控因子的调节，包括MarA,AcrR,RobA以及SoxS等，此外排泵与对多种化合物的耐受有关，尤其是与氟喹诺酮及其它临床应用抗生素耐药具有极好的相关性，质子泵抑制剂利血平与氟喹诺酮类药物联合应用，可使临床某些细菌对氟喹诺酮类药物的敏感性增加，在大肠埃希氏菌中未见类似报道。     

金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮类药物耐药机制的研究进展

金黄色葡萄球菌对氟喹诺酮的耐药主要为①药物靶酶及编码基因的改变②药物在体内蓄积量减少：主要为norA,norB,norC基因介导的外排泵表达增加导致外排增加。因而针对外排泵抑制剂的研究与开发利用有广泛的前景,目前的研究主要针对NorA外排泵抑制剂。     

VanC型肠球菌与屎肠球菌对常用抗菌药的耐药状况研究

目的：比较VanC型肠球菌及屎肠球菌对常用抗菌药物的敏感性。方法针对56株VanC型肠球菌及299株屎肠球菌,用琼脂二倍稀释法进行药物敏感性分析;检测高水平耐万古霉素屎肠球菌的万古霉素耐药基因型。结果VanC型肠球菌万古霉素最低抑菌浓度（ MIC）众数为4 mg? L－1,未发现对氨苄西林、万古霉素、替考拉宁及利奈唑胺耐药的VanC型肠球菌。屎肠球菌对氨苄西林、左氧氟沙星、红霉素及利福平的耐药率均达85％以上;对万古霉素和替考拉宁的耐药率分别为1．7％和0．7％;未发现对利奈唑胺和替加环素耐药的屎肠球菌。屎肠球菌万古霉素MIC众数为0．5 mg? L－1。5株万古霉素屎肠球菌万古霉素耐药基因均为vanA型。结论屎肠球菌对万古霉素尚保持较高敏感性,万古霉素对VanC型肠球菌最低抑菌浓度较屎肠球菌高。     

药物耐药性外排泵抑制剂的研究进展

外排泵抑制剂可以抑制耐药细菌和肿瘤细胞对进入胞体内药物的外排作用,提高对药物的敏感性.它在改善药物的药动学特性等方面也有广泛的作用.研制开发外排泵抑制剂,逆转现有药物的耐药性将是改善药物疗效的一种有效的治疗方法.简要阐述近年来外排泵抑制剂的研究进展.     

硝酸银使临床分离多重耐药革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌重新对阿米卡星敏感（英文）

高浓度的硝酸银可抑制所有检测的临床分离耐多重药菌株（最小抑菌浓度为32–64μM）。本研究报道了阿米卡星与亚致死量（15μM）的硝酸银在体外联用对临床分离多重耐药菌的作用。硝酸银可使原本已对阿米卡星耐药的泛耐药鲍曼不动杆菌和耐甲氧西林金黄色葡萄球菌重新变敏感（将原本都大于128μg/mL的最小抑菌浓度分别降低至2–16μg/mL和32μg/mL）。硝酸银同样可以将阿米卡星对能够产生超广谱β内酰胺酶的绿脓杆菌和大肠杆菌的最小抑菌浓度分别由16–32μg/mL和16μg/mL降至〈1–4μg/mL和〈1μg/mL。     

泵抑制剂对环丙沙星在铜绿假单胞菌内聚积的影响

目的探讨耐药铜绿假单胞菌（PA）中是否存在主动外排系统,以揭示PA对氟喹诺酮类药物的耐药机制。方法检测碳酰氰间氯苯腙（CCCP）对16株PA药物M IC的影响;荧光法检测PA耐药菌和敏感菌对环丙沙星（CIP）的摄取,以及加入CCCP后对CIP累积量的变化情况。结果外排泵阳性株为4株,CCCP可以使PA 16菌体内环丙沙星的累积量显著上升,而其它菌株中加入CCCP后,环丙沙星的累积量变化不大。结论本地区PA中可能存在氟喹诺酮药物的主动外排系统。     

鲍曼不动杆菌耐药表型与外排泵基因表达水平的研究

目的 探讨鲍曼不动杆菌临床分离株对常用抗菌药物的耐药性及与外排泵adeA基因表达水平之间的关系.方法 琼脂二倍稀释法检测鲍曼不动杆菌临床分离株对17种常用抗菌药物的最低抑菌浓度(MIC);PCR法扩增外排泵编码基因adeA:实时荧光定量RT-PCR(Real Time Fluorescent Quantitative RT-PCR)法检测adeA基因的mRNA表达水平.结果 药敏结果显示86株鲍曼不动杆菌对多粘菌素B全部敏感(100%),其次是美罗培南(73.2%)、亚胺培南(70.9%).耐药率最高的是庆大霉素(84.9%),其次为美罗西林(83.7%)和环丙沙星(79.1%).55株菌为多重耐药株(64%),其中5株(5/86)对多粘菌素B外的所有抗菌药物耐药(5.8%).adeA的检出阳性率为84.9%(73/86),Real Time RT-PCR结果显示多重耐药菌株adeA基因的mRNA相对表达量均高于敏感菌株,其中3株相对表达量为敏感菌株平均表达水平的30倍以上.结论 鲍曼不动杆菌临床分离株耐药情况严重,其主动外排系统adeA基因表达增强在多重耐药性形成中起重要作用.     

The development of efflux pump inhibitors to treat Gram-negative infections

ABSTRACT

Introduction: One of the possibilities for reducing the emergence and spread of antibiotic resistance is the use of anti-resistance compounds capable of resensitizing resistant microorganisms to current antimicrobials. For this purpose, multidrug efflux pumps, whose inhibition may increase bacterial susceptibility to several antibiotics, including macrolides to which Gram-negatives are considered intrinsically resistant, have emerged as suitable targets.

Areas covered: In the current review, the authors discuss different mechanisms that can be exploited for inhibiting multidrug efflux pumps and describe the properties and the potential therapeutic value of already studied efflux pumps inhibitors. Although efforts have already been made to develop these inhibitors, there are currently no good candidates for treating infectious diseases. Consequently, the authors also discuss potential approaches for their development.

Expert opinion: Classical anti-resistance drugs such as beta-lactamases inhibitors, while useful, are only purposeful for treating infections caused by beta-lactamase producers. However, inhibitors of multidrug efflux pumps, which are present on all organisms, can sensitize both susceptible and resistant bacteria to antibiotics belonging to several different structural families. Since some efflux pumps are involved in bacterial infections, their inhibition may also reduce the infectivity of Gram-negative bacterial pathogens.     

多重耐药肺炎克雷伯杆菌模型构建及外排抑制剂对其药物敏感性影响的研究

目的研究耐多药肺炎克雷伯杆菌模型的体外构建及泵抑制剂对其药物敏感性的影响。方法收集临床肺炎克雷伯杆菌,运用左旋氧氟沙星从低浓度至高浓度在体外诱导其成为对喹诺酮、头孢菌素、青霉素、氯霉素、四环素等多种抗生素的耐药株,并排除产ESBLs菌株。分别选用外排抑制剂(EPI)羰基氰氯苯腙(CCCP)及奥美拉唑在20μg/ml及40μg/ml两种不同浓度下与细菌共同培养后,运用琼脂稀释法测定细菌对左旋氧氟沙星敏感性的改变。同时运用纸片扩散法检测耐药株对多重抗生素的药物敏感性。结果起始运用亚抑菌浓度并逐步加大的梯度浓度法体外能成功构建多重耐药肺炎克雷伯杆菌模型,在CCCP耐药性逆转实验中,泵阳性株达53%,CCCP及奥美拉唑的抑制外排作用有统计学差异,尚不能认为外排抑制剂在高低两种浓度下对菌株的药物敏感性影响有统计学差异。运用外排抑制剂后菌株对多种抗生素的抑菌环直径有不同程度的增大。结论不规范长期低浓度应用喹诺酮类可以诱变出多重耐药菌株,外排机制在介导耐多药细菌形成中起着重要的作用,CCCP比奥美拉唑能更有效的抑制细菌主动外排,但是都不能完全逆转其耐药性。     

真菌多药耐药外排机制的研究进展

真菌多药耐药性是指真菌细胞对结构不同、作用靶点不同的药物同时具有耐药性的现象,是导致临床抗真菌治疗失败的重要原因之一。本文综述了酿酒酵母、条件致病真菌白假丝酵母、光滑假丝酵母和烟曲霉中多药耐药相关转运蛋白、药物外排机制以及基因表达调控网络的研究进展,旨在为深入了解真菌多药耐药性的机制、探讨克服多药耐药性的策略和提高抗真菌药物的药效提供参考。     

Expression of multidrug resistance efflux pump genes in clinical and environmental isolates of Staphylococcus aureus

Increased expression of multidrug resistance efflux pump (MDR-EP) genes in clinical isolates of Staphylococcus aureus occurs frequently, but its temporal and geographic variability is unknown. Such strains may contaminate the hospital environment, posing an infection control problem. Nearly 700 clinical isolates from different geographic locales as well as 91 environmental isolates recovered from two Detroit hospitals were studied. Ethidium bromide (EtBr) minimum inhibitory concentration (MIC), quantitative expression of all characterised chromosomal MDR-EP genes, and the presence of qacA/B and smr were determined for all strains. In addition, for norA- and/or mepA-overexpressing strains, the spa type was established. MDR-EP gene overexpression varied temporally and geographically, and overexpressing strains were present in the hospital environment. Increased expression of norA was associated with meticillin resistance and spa type t002, a rare type among control strains, consistent with widespread dissemination of a norA-overexpressing, meticillin-resistant S. aureus (MRSA) clone. Clonal spread also played a role for spa type t008, mepA-overexpressing, meticillin-susceptible strains. An EtBr MIC of ≤12.5μg/mL was highly specific (>90%) in identifying strains lacking MDR-EP gene overexpression.     

志贺菌主动外排系统对氟喹诺酮类抗生素耐药性的影响

目的 探讨主动外排系统AcrAB-TolC在志贺菌对氟喹诺酮类抗生素耐药性中的作用.方法 K-B纸片扩散法及MIC测定2009-2011年天津地区临床分离的144株志贺菌的药敏情况;加入泵抑制剂CCCP(羰基氰氯苯腙)检测耐药菌株对氟喹诺类抗生素敏感性的变化;应用定量PCR研究外排泵基因acrAB-tolC表达以探讨外排泵在菌株对氟喹诺酮耐药中的作用.结果 144株志贺菌中,共有5株志贺菌对环丙沙星等氟喹诺酮类抗生素耐药,均为福氏志贺菌.加入泵抑制剂后,5株志贺菌对5种氟喹诺酮类抗生素的MIC下降了4～16倍,而对照菌株对上述药物的MIC没有变化或仅下降至原值的1/2.实时定量PCR结果表明耐药菌株外排泵基因acrA、acrB和tolC的mRNA水平显著高于敏感野生株(P＜0.05).结论 本地区志贺菌临床株对氟喹诺酮类抗生素环丙沙星及氧氟沙星耐药率最高,为3.47％.AcrAB-TolC外排泵基因的高表达是导致志贺菌对氟喹诺酮类抗生素耐药的主要原因之一.     

某教学医院2015—2018年神经外科病房细菌耐药性监测

目的 了解神经外科病房临床分离菌的耐药性变迁,为临床合理用药提供依据。方法 收集2015—2018年间我院 神经外科住院患者送检标本的细菌培养及体外药敏试验结果,使用WHONET 5.6软件对药敏数据进行统计分析。结果 2015— 2018年共分离非重复临床分离菌2123株,其中革兰阴性菌1563株(73.6%)、革兰阳性菌560株(26.4%);标本类型以痰液(62.6%)、 尿液(12.8%)、脑脊液(8.9%)和血液(8.6%)为主;分离居前5位的细菌是鲍曼不动杆菌(20.3%)、肺炎克雷伯菌(16.4%)、铜绿假单 胞菌(14.5%)、大肠埃希菌(8.9%)和金黄色葡萄球菌(7.7%);鲍曼不动杆菌对亚胺培南和美罗培南的耐药率均>65%,铜绿假单胞 菌对碳青霉烯类药物的耐药率在30%左右,肺炎克雷伯菌2015—2016年对碳青霉烯类的药物耐药率均<30%,2017年对碳青霉 烯类药物耐药性明显升高(亚胺培南41.3%、美罗培南41.9%),2018年对碳青霉烯类药物的耐药性有较大幅度的下降(亚胺培南 3.4%、美罗培南3.4%),大肠埃希菌对碳青霉烯类的药物耐药率仍较低(<3%),金黄色葡萄球菌对苯唑西林的耐药率由57.9%降 至15.8%,未发现对利奈唑胺和万古霉素耐药的金黄色葡萄球菌。凝固酶阴性的葡萄球菌(CNS)是血液和脑脊液标本中分离居首 位的细菌,二者耐甲氧西林的凝固酶阴性的葡萄球菌(MRCNS)的检出率均>80%,在脑脊液中还分离到2株对利奈唑胺耐药的科 氏葡萄球菌。结论 神经外科病房临床分离菌以鲍曼不动杆菌、肺炎克雷伯菌和铜绿假单胞菌为主,近年来肺炎克雷伯菌的分 离率有明显增高的趋势,非发酵菌和肠杆菌科细菌对碳青霉烯类药物的耐药率也呈上升的趋势,耐甲氧西林的金黄色葡萄球菌 的检出率呈逐年下降的趋势,加强医院内感染防控措施及细菌耐药监测,合理使用抗菌药物。