聚和酶链反应操作体会

聚和酶链反应（polymerase chain reactionPCR）又称体外基闲扩增技术，是20世纪80年代中期发展起来的一种新的分子牛物学技术。由于当时缺乏耐热的DNA多聚酶，在每一循环的DNA模板变性后，又需添加一次DNA多聚酶闪而操作复杂易出错。至1989年纯化了耐热的TaqDNA多聚酶后PCR才应用到生物领域，随后广泛应用到基础医学、临床医学、临床诊断等领域，如进行DNA测序、遗传性疾病分析和诊断、各种传染性疾病的诊断。     

PCR技术在血液病诊断中的应用

多聚酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)技术是一种快速、敏感的DNA体外扩增技术。能在几小时内将单个分子的核酸扩增几百万倍,对于遗传性疾病的分子诊断和分子病理学研究是一项重大的革命。这种方法所需的组织样本只需少量的RNA或DNA,甚至在单根头发丝,漱口液或一滴干血中进行分析。应用PCR技术可将基因组DNA进行扩增,亦适应于RNA的扩增,还可进行细胞内特异的核酸片段的扩增(原位PCR)。PCR技术在临床诊断中的应用已经深入到各个学科和领域。     

低模板量DNA的分型方法及其相关问题

随着法医DNA分析技术的发展,越来越多低模板量DNA的生物检材被提取,并要求进行STR分型。在此对快速发展的各种低模板量DNA STR分型方法如增加聚合酶链反应(PCR)循环数、纯化PCR扩增产物、激光捕获显微切割和PCR扩增前的全基因组扩增等予以介绍,并就LT-DNA法庭科学应用中存在的相关问题予以论述。     

DNA分子标记在实验动物遗传分析中的应用

DNA分子标记技术很多,基本都是建立在RFLP、PCR和重复顺序的基础上的。本文重点介绍了限制性片段长度多态性（RFLP）标记、随机扩增多态性DNA（RAPD）标记、微卫星DNA（STR）标记、DNA指纹（DFP）标记、扩增片段长度多态性（AFLP）标记等几种重要的DNA分子标记技术的定义、结构、分布、组成、保守性、优点及丰富的多态性等。并重点介绍了微卫星DNA（STR）标记在分子遗传监测、遗传多样性分析和遗传血缘关系及个体识别等领域的应用。     

基于PCR技术的现代分子生物学操作在中药鉴定中的应用

全文着重介绍了以聚合酶链式反应（PCR）技术为支撑的现代分子生物学技术,包括随机扩增多态性DNA（RAPD）技术、ISSR—PCR技术、PCR—RFLP技术、mRNA差异显示技术、基因测序技术及基因芯片技术在中药鉴定中的应用,指出现代分子生物学技术的蓬勃兴起将极大地推动中药鉴定的发展。     

RAPD技术在中药材鉴定中的应用进展

随机扩增多态性DNA（random amplified pclymorphic DNA，RAPD）技术是1990年由Williams等发展起来的一项DNA分子标记技术。RAPD技术是建立在PCR技术的基础上．用一系列（通常数百个）不同的随机排列碱基序列的寡核苷酸单链（一般为10bp）作为引物，对所研究的基因组DNA进行单引物扩增。     

基于PCR技术的中药DNA分子标记鉴别

综述基于PCR技术的中药DNA分子鉴别研究，重点论述了RAPD法和DNA直接测序法的应用，提出了DNA分子鉴别研究的思想和实验设计。     

古代人类牙齿DNA的提取和扩增条件研究

目的 以河南洛阳二里头遗址出土的距今3000多年的夏代人牙齿为标本，从口腔医学的角度分析牙齿DNA提取的污染控制，并进行PCR扩增条件的比较研究。方法 对古代人类牙齿样本进行去污处理，放入液氮研磨机中打磨成牙粉，使用GENECLEAN Kit for Ancient DNA试剂盒从牙粉中提取DNA分子；利用不同条件的5种PCR反应体系扩增古DNA。结果 从牙齿样本中抽提出古代DNA片段A；在PCR扩增中，加入适量的小牛血清蛋白BSA有助于消除古代样本中PCR抑制物的作用；适合的Mg^2＋浓度则有助于增加DNA聚合酶的活性，减少非特异性扩增。结论 古DNA试剂盒是一种有效的古DNA抽提方法；小牛血清蛋白BSA和Mg^2＋浓度对PCR反应存在影响。     

随机扩增多态DNA分析技术及其在寄生虫学中的应用

<正> 随机扩增多态DNA(random amplified poly-morphic DNA,RAPD)分析技术,又称为任意引物PCR(arbitrarily primed PCR,AP-PCR),是90年代Williams和Welsh等几乎同时发明的将随机引物与PCR技术结合,对复杂基因组DNA分子多态性分析一种技术。1 RAPD的基本原理 RAPD技术是利用一系列单一的碱基序列随     

石蜡组织DNA提取方法的比较

目的 :选择一种高效、简便、稳定的从蜡块中提取基因组DNA进行聚合酶链反应 (PCR)扩增的方法。　方法 :分别采用四种不同的方法从石蜡组织中提取DNA ,比较所提取的DNA质量 ,PCR扩增cyclinD1基因的效率。对其中的一种方法进行了改良。　结果 :四种方法提取的DNA质量都能达到相关分子生物学实验的要求 ,但在操作程序、扩增效率等方面存在差异。　结论 :微波脱蜡法操作简单、快速、扩增成功率高 ,适合于应用PCR技术对病理标本进行相关研究。     

扩增大片段DNA的PCR方法

本实验通过比较两种缓冲体系对ＰＣＲ扩增产物的影响，提出一种适合扩增大片段ＤＮＡ使用的缓冲体系，它与常规使用的缓冲体系的主要区别在于前者不含ＫＣｌ，使用这种缓冲体系扩增的大片段ＤＮＡ特异性强，且重复性好。     

从血液中提取DNA方法探讨

目的:研究从血液中提取DNA的方法以应用。方法:静脉抽取血样,分别抗凝或不加抗凝处理后,提取DNA,通过电泳和PCR进行检测。结果:凝血和抗凝血的DNA产量和纯度分别是(40.2±8.86)mgDNA/L血液和(1.87±0.11)mgDNA/L,(39.1±10.2)mgDNA/L血液和(1.92±0.12)mgDNA/L。所有样本的DNA分子量都很高,从两者的DNA样本中能很容易地扩增出t-PA基因的第8内含子区Alu等位基因二态性,因此所提取的DNA是完整可靠的。结论:该方法能快速、简单、有效、无毒地从新鲜血液和凝血中提取DNA,适合于临床检测和分子生物学研究。     

衰老机制的分子水平研究进展

衰老机制复杂,涉及面广,对衰老机制的研究始终是生命科学领域中最基本、最关键的问题。有关衰老的学说繁多,但迄今为止没有一种学说能完全阐释衰老的机制。近年来,随着现代遗传学、细胞生物学、分子生物学等边缘学科的飞速发展,对衰老机制的研究越来越趋向于分子水平。现主要从端粒与端粒酶、衰老与长寿基因、DNA修复能力、线粒体DNA损伤几个方面与细胞衰老的关系进行阐述。     

Key Techniques and Application Progress of Molecular Pharmacognosy

At the boundary between pharmacognosy and molecular biology, molecular pharmacognosy has developed as a new borderline discipline. This paper reviews the methods, application, and prospect of molecular pharmacognosy. DNA marker is one of genetic markers and some molecular marker methods which have been successfully used for genetic diversity identification and new medicinal resources development. Recombinant DNA technology provides a powerful tool that enables scientists to engineer DNA sequences. Gene chip technique could be used in determination of gene expression profiles, analyses of polymorphisms, construction of genomic library, analysis of mapping, and sequencing by hybridization. Using the methods and theory of molecular biology and pharmacognosy, molecular pharmacognosy represents an extremely prospective branch of pharmacognosy and focuses on the study of systemic growth of medicinal plants, identification and evaluation of germplasm resources, plant metabolomics and production of active compounds. Furthermore, the great breakthrough of molecular pharmacognosy could be anticipated on DNA fingerprint analysis, cultivar improvement, DNA identification, and a global DNA barcoding system in the future.     

2种制备Taq DNA聚合酶方法的比较

目的比较2种制备纯化Taq DNA聚合酶的方法,为PCR提供实验用酶。方法Taq DNA聚合酶基因的pTaq表达质粒转化E.coli菌株,IPTG诱导12 h后收集菌体,分别用硫酸铵沉淀法和冻融法进行纯化,SDS-PAGE电泳和PCR扩增分析比较其纯度和活性。结果硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶活性能可有效扩增DNA片段;冻融法制备的Taq DNA聚合酶活性较低。结论硫酸铵沉淀法制备的Taq DNA聚合酶优于冻融法,能够达到分子生物学实验中基因扩增的要求。     

分子水平毒理学在疾病控制中的应用

毒理学是生命科学中的重要分支之一,随着分子生物学的发展、分子毒理学也得到了迅速发展。目前分子生物学技术运用在毒理学主要有微小RNA技术在肿瘤及其他疾病诊断与治疗的应用;脱氧核糖核酸芯片技术在基因突变快速检测,病毒基因表达特点等疾病的预防、检测及治疗方面的应用;指数富集的配基系统进化技术在基因诊断、治疗及毒素检测等疾病控制方面的应用;以及印迹技术、原位杂交技术、免疫组织化学、基因剔除等技术。     

不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒DNA的研究

目的：研究不同分子生物学方法检测乙型肝炎病毒（HBV）DNA的敏感性及影响因素。方法：用饱和酚抽提和血清蛋白变性后聚合酶链反应（PCR－1和PCR－2）检测48例慢性肝病患者的HBVDNA，并与分子斑点杂交法（Dot－H）检测结果进行比较。结果：Dot－H、PCR－1和PCR－2法对HBVDNA的检出率分别为70．83％、87．50％和91．67％，PCR－1和PCR－2中有17．02％表现为交叉阳性，慢性肝炎患者的检出率高于肝硬化患者，HBeAg阳性者高于其它HBV血清标志物（HBVm）阳性者。结论：PCR检测HBVDNA的敏感性高于Dot－H，所用PCR包含的多种引物可以提高HBVDNA的检出率。     

用PCR技术同时检测微量血痕的种属来源及其DNA多态性

应用聚合酶链反应技术扩增血痕DNA,根据扩增产物中有无aPoB基因的数量可变重复序列(VNTR)及其扩增片段的大小即可同时确定其种属特异性和DNA的多态性。实验结果显示人血痕可见扩增带并具有多态性,而猴猪狗猫鸡血痕无扩增带。     

多重聚合酶链反应分析石蜡包埋组织多肿瘤抵制基因探讨

目的：建立一种敏感、特异和快速检测石蜡包埋组织中多肿瘤抑制基因（ＭＴＳ１）的方法。方法：利用改良的ＤＮＡ制备方法,成功的从甲醛固定、石蜡包埋组织中提取ＤＮＡ,同时用建立的多重聚合酶合链反应（ＰＣＲ）进行检测。结果：３０例石蜡包埋的正常组织与新鲜组织提取的ＤＮＡ经ＰＣＲ扩增后,电泳图谱都出现５３６ｂｐ和３１０ｂｐ,即结果相同。结论：轵要提取、纯化得当,石蜡包埋组织在分子生物学研究领域中将有重要应用价     

电化学DNA芯片快速检测临床病原微生物的研究进展

电化学DNA芯片技术是集合聚合酶链反应、传感技术及生物芯片三大技术优点来检测目标核酸序列的新方法。目前,因电化学DNA芯片操作简单快速、特异性好、敏感性高、检测费用低、可同时检测多个样本、易于微型化和自动化等优点被用于多个领域,如传染病快速检验、疾病基因诊断、环境监测、食品安全、流行病学研究、法医鉴定及临床病源微生物的检测诊断等。该文对电化学DNA芯片工作原理及其在临床病源微生物检测诊断中的应用研究进展进行综述。