两种细胞系用于建立体外脂肪肝模型的比较

目的对比油酸诱导肝癌细胞株HepG2、正常肝细胞株L02建立的肝细胞脂肪变性模型,通过检验复方蛋氨酸胆碱的防治作用,寻找简便、稳定的体外药物筛选模型。方法设正常组、HepG2模型组、HepG2不同浓度给药组、L02模型组、L02不同浓度给药组、用油酸诱导肝细胞脂肪变,复方蛋氨酸胆碱干预,以油红O染色镜下观察细胞内脂滴形成状况,并检测细胞上清中的ALT、AST、γ-GT水平。结果油酸刺激HepG2、L02肝细胞24 h,细胞内典型脂肪滴形成。复方蛋氨酸胆碱2次给药,药物难以使HepG2细胞内脂滴减少,L02细胞在加油酸48 h后油红O染色证明细胞内脂滴可减少,脂滴表达的红色IOD值,各给药组与模型组比较,差异有极显著性（P〈0.01）。细胞上清液中ALT、AST、γ-GT,复方蛋氨酸胆碱各组与模型组比较差异有显著性,证实其对肝细胞损伤较小。结论L02比HepG2更适合作为体外的筛药细胞模型,油酸刺激L02细胞形成脂肪变,药物提前24 h干预,24 h后再给药1次,这种造模和给药方案可作为一种可行的脂肪肝细胞筛药模型使用。     

小鼠急性脂肪肝模型的建立及脂肝清作用观察

[目的]复制小鼠急性脂肪肝并伴有高脂血症的动物模型,观察中药脂肝清对此模型的影响。[方法]腹腔注射地塞米松的同时灌胃高脂饮食复制小鼠急性脂肪肝模型,应用高、中、低剂量脂肝清对其进行预防治疗,并与中药脂必妥,西药辛伐他汀阳性药作对照,观察血糖、血清脂质、肝脏脂质、肝脏病理形态学等指标,并进行组间比较。[结果]此方法成功地复制了小鼠急性脂肪肝并伴有高脂血症的模型,中药脂肝清可以降低急性脂肪肝小鼠肝指数、血清及肝组织甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),改善此小鼠肝脏病理形态学,具有抗脂肪肝作用。[结论]此方法提供了一种小鼠急性脂肪肝的复制方法,中药脂肝清具有抗脂肪肝的功能。     

小鼠急性脂肪肝模型的建立及脂肝清作用观察*

[目的]复制小鼠急性脂肪肝并伴有高脂血症的动物模型,观察中药脂肝清对此模型的影响.[方法]腹腔注射地塞米松的同时灌胃高脂饮食复制小鼠急性脂肪肝模型,应用高、中、低剂量脂肝清对其进行预防治疗,并与中药脂必妥,西药辛伐他汀阳性药作对照,观察血糖、血清脂质、肝脏脂质、肝脏病理形态学等指标,并进行组间比较.[结果]此方法成功地复制了小鼠急性脂肪肝并伴有高脂血症的模型,中药脂肝清可以降低急性脂肪肝小鼠肝指数、血清及肝组织甘油三酯(TG)、总胆固醇(TC),改善此小鼠肝脏病理形态学,具有抗脂肪肝作用.[结论]此方法提供了一种小鼠急性脂肪肝的复制方法,中药脂肝清具有抗脂肪肝的功能.     

姜黄素对人肝L-02细胞胆固醇合成及转运蛋白表达的影响

目的 以正常人肝L-02细胞建立的脂肪变性肝细胞模型为研究对象,观察姜黄素对肝细胞胆固醇合成及转运的影响.方法 用MTT法观察姜黄素对脂肪变性人肝L-02细胞模型增殖的影响,用油红O染色定性观察细胞内脂滴形成情况;逆转录-多聚酶链反应(RT-PCR)半定量检测胆固醇合成限速酶HMG-CoA还原酶及转运蛋白Gaveoli...     

大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化

目的:系统了解大鼠脂肪肝成模过程中肝组织结构变化。方法:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型,按常规方法制备肝组织石蜡切片并镜检肝组织结构。结果:建模第1周大鼠肝脏中央静脉周围细胞内出现密集小脂滴,细胞有聚集和坏死现象。从第4周开始中央静脉周围脂变细胞越来越多,细胞内脂滴越来越大,细胞亦变大,同时出现炎症细胞浸润和纤维性增生。第8周时肝窦狭窄,肝叶的大部分细胞发生脂变,大脂滴居多,脂肪性肝炎和肝纤维化加重。第10周时脂变细胞达90%以上,其所含的绝大部分脂滴为大脂滴,将细胞核挤向一边。第12周时肝小叶结构完全消失,伴有假小叶形成和肝硬化早期症状。第15周时肝脏明显皱缩且与周围组织粘连严重,假小叶内出现纤维再分隔和肝细胞再生小结节,肝硬化加剧。脂变细胞内近80%的脂滴为大脂滴。第20周时肝脏颜色暗灰,肝叶完全粘连,结节明显,假小叶内的肝细胞干酪样坏死严重。结论:用四氯化碳皮下注射法构建大鼠脂肪肝模型方便有效,肝组织结构和肝脏病理变化有规律,易于观察分析,值得推广应用。     

体外诱导的酒精性脂肪肝细胞模型的建立、鉴定及机制探讨

目的建立体外诱导的酒精性脂肪肝细胞模型,初步探讨酒精性脂肪肝发生的机制。方法采用MTT法观察乙醇对人正常肝细胞株L02生长的影响,筛选最佳乙醇诱导浓度,全自动生化仪检测细胞内三酰甘油(TG)水平,油红O染色法观察细胞内脂滴,透射电镜观察细胞超微结构,免疫细胞化学方法观察PPARγ、SREBP-1、SCAP的表达。结果MTT法筛选出浓度0.28%的乙醇作为建立体外诱导的酒精性脂肪肝细胞模型的作用浓度;与L02细胞相比,0.28%乙醇诱导至第30代细胞(Ld30细胞)内TG显著增多(P0.05);油红O染色发现Ld30细胞内大量桔红色颗粒聚积;透射电镜观察超微结构发现胞浆中有许多大小不一的脂滴。Ld30细胞PPARγ、SREBP-1、SCAP的MOD值和阳性表达指数均显著增高(P0.05)。结论本研究在体外成功建立酒精性脂肪肝的细胞模型,提示酒精性脂肪肝发生的机制可能与PPARγ、SREBP-1、SCAP上调有关。     

山银花黄酮类提取物对人肝L-02细胞甘油三酯蓄积及SREBP-1c表达的影响

目的观察山银花黄酮类提取物对人肝L-02细胞甘油三酯蓄积的影响,并初步探讨SREBP-1c蛋白及基因表达在其中的作用。方法油红O染色初步观察山银花黄酮类提取物对脂变人肝L-02细胞中脂滴形成的影响。然后以脂变人肝L-02细胞为模型,不同浓度(0、5、10、20 mg/L)山银花黄酮类提取物作用于细胞24 h以及10 mg/L山银花黄酮类提取物作用于细胞不同时间(0、12、24、48、72 h),生化试剂盒测定细胞内甘油三酯(TG)的含量,Western印迹法检测细胞内SREBP-1c蛋白表达变化,实时荧光定量PCR检测细胞内SREBP-1c mRNA表达变化。结果山银花黄酮类提取物显著降低人肝L-02细胞中脂滴含量,细胞内TG水平下降,SREBP-1c蛋白及基因表达下调,且呈现一定的剂量和时间依赖性。结论山银花中黄酮类提取物能引起人肝L-02细胞TG含量下降,且这种作用与SREBP-1c蛋白及基因表达下调有一定关系。     

宁夏枸杞抗小鼠脂肪肝作用的实验研究

目的 观察宁夏枸杞抗小鼠脂肪肝的作用.方法 成年雄性昆明种小鼠45只,随机分为三组,空白对照组喂饲基础饲料;枸杞组喂饲高脂饲料+枸杞(100g/kg);脂肪肝模型组喂饲高脂饲料,喂饲6周,将小鼠处死后,取肝脏冰浴下制备10%的肝组织匀浆,测定甘油三酯(TG)、胆固醇(TC)、丙二醛(MDA)、组织蛋白,并取肝组织进行病理切片检查.结果 脂肪肝模型组小鼠的MDA、TC、TG含量明显高于空白对照组(P<0.01);枸杞组小鼠肝脏TG、TC、MDA的含量明显低于脂肪肝模型组(P<0.01);脂肪肝模型组肝脏脂肪变性较为严重、并伴有炎细胞浸润及坏死;枸杞干预组肝脏脂肪变性较轻,无明显炎细胞浸润及坏死.结论 宁夏枸杞具有明显的抗小鼠脂肪肝作用.     

脂肝泰胶囊对高脂血症性脂肪肝大鼠肝脏形态学改变的影响

目的 观察脂肝泰胶囊对大鼠高脂血症性脂肪肝肝脏形态学改变的影响,为临床治疗高脂血症性脂肪肝提供实验依据。方法 采用高脂饮食喂饲大鼠复制脂肪肝模型,实验分组为模型组、脂肝泰高剂量组、脂肝泰低剂量组、东宝肝泰对照组和正常对照组。以高、低剂量脂肝泰和东宝肝泰进行干预,各组大鼠肝脏取材,常规HE染色,光镜观察。结果 模型组肝细胞索结构不清,多数肝细胞内可见大小不等、数量不一的脂滴空泡,呈现中至重度脂肪变性;脂肝泰胶囊治疗组大鼠肝小叶和肝血窦结构清晰,细胞内无明显脂滴空泡。结论 脂肝泰胶囊能有效地防治高脂血症性脂肪肝。     

姜黄素对HepG2细胞脂质沉积的改善作用及机制研究

目的:探讨姜黄素对油酸诱导的HepG2细胞脂质沉积的影响及其作用机制。方法:将HepG2细胞分为对照组、模型组及姜黄素低、高剂量组。除对照组外,其他3组给予0.3 mmol/L油酸干预24 h,诱导细胞脂质沉积模型。造模后,姜黄素干预组分别予以50、100μmol/L姜黄素干预9 h。油红O染色观察各组细胞内脂质沉积情况,试剂盒检测细胞内三酰甘油(TG)和总胆固醇(TC)含量,PCR检测各组细胞固醇调节元件结合蛋白1C(SREBP1C)、脂肪酸合成酶(FAS)、乙酰辅酶A羧化酶α(ACCα)的mRNA表达。结果:与对照组相比,模型组细胞内脂滴明显增多,TG、TC水平显著升高(P0.05,P0.01),SREBP1C及其下游基因FAS、ACCα的mRNA表达水平均显著升高(P0.01)。与模型组相比,姜黄素干预组细胞内的红色脂滴明显减少,TG水平显著降低(P0.01),SREBP1C、FAS、ACCα的mRNA表达水平均显著下调(P0.05,P0.01)。姜黄素低剂量(50μmol/L)对脂质沉积的改善作用更为显著。结论:姜黄素或通过下调SREBP1C、FAS、ACCα的表达,抑制脂质的合成,进而改善HepG2细胞的脂质沉积。     

原代肝细胞脂肪变性细胞模型的构建

目的 为非酒精性脂肪性肝病(non-alcoholic fatty liver disease,NAFLD)发病机制和防治研究提供可靠的原代肝细胞脂肪变性细胞模型。方法 采用Seglen两步灌流法及其改良方法分离获取小鼠原代肝细胞,体外培养48 h后,给予不同浓度的游离脂肪酸(free fatty acid,FFA)混合物(油酸∶棕榈酸=2∶1)诱导24 h,采用油红O染色,观察肝细胞内脂滴沉积情况,全自动生化分析仪测定细胞内三酰甘油(TG)含量。结果 与对照组相比,模型组肝细胞内出现红色脂滴沉积,且与加入的FFA混合物浓度呈剂量依赖性;模型组肝细胞内TG含量明显高于对照组(P<0.05),且随着加入的FFA浓度升高而增加,提示肝细胞内脂质沉积随着加入的FFA浓度升高而增加。结论 成功构建了原代肝细胞脂肪变性细胞模型,为NAFLD的研究提供了可靠的细胞模型。     

肝脂消合剂对高脂饮食致脂肪肝小鼠组织病理的影响

目的观察肝脂消合剂对小鼠肝脂肪变性的治疗作用.方法以高脂乳剂塑造小鼠肝高脂的脂肪肝模型,以东宝肝泰片为阳性对照,并观测肝脂消合剂对小鼠的肝组织病理的影响.结果肝脂消合剂能使高脂乳剂所致小鼠脂肪肝肝组织中脂变肝细胞数目明显减少,胞浆内脂滴数目减少或消失,无明显炎细胞坏死或浸润.结论肝脂消合剂具有改善肝脂肪化变性的作用.     

吉非贝剂抗脂肪肝的实验研究

目的：探讨以降低甘油三酯为主的调血脂药吉非贝齐（Gemfibrozil Gem)对脂肪肝的治疗作用及机制。方法：以高脂饮食饲喂Wistar大鼠3个月诱发高脂性脂肪肝模型，造模成功后，模型鼠随机分为四组，分别为模型对照组，Gem高，中，低剂量组，另设正常对照组。结果:a)血脂和肝内脂质变化：与模型对照组相比，Gem高，中，低剂量组大鼠血TG和肝内TG的含量均明显下降。b)组织病理学检查：用药组大鼠的肝脂肪变性较模型组明显好转，甚至可完全恢复正常。结论：Gem能过改善体内脂质代谢达到治疗脂肪肝的目的。     

FATP4在大鼠非酒精性脂肪肝中的表达及相关性

目的 探讨FATP4(fatty acid transport protein4)基因在大鼠非酒精性脂肪肝形成中的作用.方法 Wistar大鼠64只,随机分为正常对照组(C组)和高脂饮食组(F组),又各分2、4、8和12周组(其中每组各8只):HE染色光镜观察肝脏组织病理改变;硫代巴比妥酸法测定肝脏组织丙二醛(MDA)的含量变化:免疫组织化学和Western blot方法研究高脂饲料诱导的大鼠脂肪肝形成中FATP4表达变化.结果 高脂饲料组大鼠肝脏内MDA含量明显高于对照组,随时间延长,逐渐增加:随着脂肪肝程度的加重,MDA含量逐渐增强,肝细胞FATP4蛋白表达亦明显增强.结论 非酒精性脂肪肝大鼠肝细胞FATP4表达变化与脂肪肝引起的脂质过氧化损伤程度密切相关.     

肝细胞色素P450 2E1在大鼠非酒精性脂肪肝发生中的作用

目的研究大鼠非酒精性脂肪肝肝细胞色素P450 2E1表达变化及其在脂质过氧化反应中的作用.方法Wistar大鼠40只,随机分为正常对照组和高脂饮食诱导脂肪肝组,用免疫组织化学和Western blot方法测定肝细胞色素P450 2E1表达变化,酶学测定丙二醛含量.结果脂肪肝大鼠丙二醛含量较正常对照组增高,以高脂饮食8、12周为甚(P＜0.05),肝细胞色素P450 2E1表达亦明显增强(P＜0.01).结论肝细胞色素P450 2E1表达变化与脂肪肝引起的肝脏损害以及脂质过氧化反应程度密切相关.     

祛痰活血汤干预大鼠非酒精性脂肪肝及其作用机制研究

目的：通过观察祛痰活血汤对非酒精性脂肪肝模型大鼠肝功、血脂等血液生化指标、肝组织病理形态学改变以及肝细胞核转录因子KB（NF—v,B）表达的影响,探讨其对非酒精性脂肪肝（nonalcoholicfattyliverdisease,NAFLD）的干预及作用机制。方法：取健康sD大鼠60只,雄性,适应性喂养1周,随机分为2组,正常对照组（A组）及造模组,其中正常组10只,普通饲料喂养;造模组50只,高脂饲料喂养。造模组经过高脂饲料喂养2周后,将其再次分组并开始按大鼠的体重进行灌胃给药。造模组50只大鼠分为模型对照组（B组）、祛痰活血汤低剂量治疗组（L组）、祛痰活血汤中剂量治疗组（M组）、祛痰活血汤高剂量治疗组（H组）、阳性对照组（凯西莱组）共5组,每组10只。B组、A组不用任何药物,灌胃10ml／kg的生理盐水。各组实验动物自由进食,每2周称重,并根据情况调整药品干预剂量。造模组在分组灌胃给药的第8、9、10周周末,随机抽取1～2只大鼠处死,抽血观察生化指标（天门冬氨酸转氨酶（AST）、丙氨酸转氨酶（ALT）、甘油三酯（TG）、总胆固醇（TC）等）以及肝组织病理学变化。第10周末处死所有大鼠,检测肝功能、血脂等,并取肝脏组织制备石蜡切片,观察肝组织病理学变化以及检测肝细胞NF—I（B表达的情况。结果：与正常对照组比较,模型对照组大鼠血清肝功能和血脂指标,肝脏病理炎症活动度、肝细胞NF—td3的表达水平均有显著的升高、加重,差异具有统计学意义（P〈0．01）;祛痰活血汤三个剂量组、阳性对照组与模型对照组比,各项指标均有不同程度的减轻或者降低,结果具有统计学意义（P〈O．05）。结论：祛痰活血汤能有效逆转非酒精性脂肪肝大鼠肝组织脂肪变性程度,改善肝功能、血脂等血液生化指标,具有调节脂质代谢紊乱,降低肝组织NF-Id~表达的作用,这可能是其防治NAFLD的作用机制之一。     

肝细胞外泌体抑制小鼠非酒精性脂肪肝脂质沉积

目的: 探讨人肝细胞系LO2细胞来源的外泌体（exosomes derived from hepatocytes，LO2-Ex）对高脂肪饮食诱导的非酒精性脂肪肝（nonalcoholic fatty liver diseases，NAFLD）小鼠肝脏脂质沉积的影响。方法: 培养正常人肝细胞系LO2细胞，超速离心法提取LO2-Ex。Nanosight纳米颗粒分析系统测定外泌体的粒径和浓度，透射电镜观察外泌体形态，免疫印迹法检测外泌体表面标志物。高脂肪饮食喂养雄性C57BL/6小鼠10周建立NAFLD小鼠模型，第11周连续尾静脉注射LO2-Ex 4周后收集肝组织，HE染色观察肝脏组织结构，计算肝脏指数（肝脏质量/净体重），油红O染色检测小鼠肝脏脂质沉积程度，天狼星红染色观察肝组织胶原沉积情况。结果: LO2-Ex的粒径为120 nm左右，具有外泌体特征性的脂质双层结构，表达外泌体特异蛋白CD9和TSG101，不表达Calnexin。与模型组相比，LO2-Ex组小鼠肝脏表面红润、细腻、有光泽。LO2-Ex能够改善NAFLD小鼠肝组织结构，提高小鼠肝脏指数。HE染色、油红O染色和天狼星红染色显示LO2-Ex减轻了肝组织的空泡变性、脂肪沉积和胶原沉积。结论:LO2-Ex可以抑制肝组织脂肪沉积，延缓小鼠NAFLD进展。     

丹参酮ⅡA磺酸钠对高脂性脂肪肝大鼠肝脏脂质过氧化的影响

目的研究丹参酮ⅡA磺酸钠对高脂性脂肪肝（HFL）大鼠肝脏脂质过氧化的影响,并初步探讨其作用机制。方法用高脂饲料诱发大鼠HFL模型,8周后将建模成功的大鼠随机分为模型组、丹参酮ⅡA磺酸钠（大、小剂量组）和阳性药易善复（PPC）组,每组均给予高脂饲料及相应药物,正常对照组喂以基础饲料。连续给药6周后比较各组间肝指数、血脂、血清丙氨酸转氨酶（ALT）、天冬氨酸转氨酶（ASL）活性和超氧化物歧化酶（SOD）、丙二醛（MDA）的含量;检测肝脂质、肝脏组织中SOD、MDA含量并进行肝脏病理学检查。结果丹参酮ⅡA磺酸钠可显著降低HFL模型大鼠肝指数,降低血清和肝组织中TG、TC、MDA水平,降低血清LDL-C含量和ALT、AST活性;增加血清和肝组织中SOD活性及HDL-C含量,与模型组相比差异显著（P〈0.05或〈0.01）;并可明显减少肝细胞浆内脂滴分布的程度和炎症范围。结论丹参酮ⅡA磺酸钠可通过改善肝功能及脂质代谢紊乱,减少肝中脂质沉积,减轻肝组织损伤,对高脂性脂肪肝有一定的治疗作用。