组织工程化人工复合皮肤的构建

目的 为皮肤缺失的移植提供具有生物活性的表皮、真皮的组织工程化人工复合皮肤。方法 将体外传代培养的表皮角朊细胞和真皮成纤维细胞分别接种在冷冻干燥及戊二醛交联的I型胶原基质网架的两侧,在液面下培养1周后,改为气－液界面培养,动态观测人工皮肤光镜下组织学形态及电镜下超微结构。结果 人工复合皮肤具有表皮、真皮双层结构。培养过程中表皮逐步增殖、分化、发育,形成基底层、棘细胞层、颗粒层和角质层;真皮基质网架渐渐降解,并逐步被增殖的成纤维细胞及其所分泌的细胞外基质所取代,完成真皮构建。结论 利用组织工程技术体外构建人工复合皮肤,可用于皮肤缺失者的自体移植治疗,体外构建的复合人工皮肤可从根本上解决自体供皮不足,且细胞源于自体皮肤,排除了发生免疫排斥反应和疾病传播的风险,具有安全、有效、实用等优点。     

组织工程化胆管研究进展

目的 总结近年来组织工程化胆管的研究进展.方法 通过收集近年来组织工程化胆管领域中与体外测试平台、支架材料、种子细胞的获取方式及种子细胞与材料复合后的体内修复效果相关的文献,对组织工程化胆管的基础和临床应用研究情况作一综述.结果 组织工程化胆管的发展极为迅速,在体外测试平台、支架材料、种子细胞、动物模型修复效果方面已经...     

组织工程化皮肤研究新进展

组织工程化皮肤是指运用工程及生命科学的原理和方法构建出的用于修复、维持和改善损伤皮肤组织功能的替代物 ;其核心是建立由细胞和生物材料构成的三维空间复合体。理论上 ,组织工程化皮肤应具有如下功能 :①作为损伤皮肤的替代物 ;②作为基质植入宿主体内并生长 ;③或作为含药理成分的化学刺激物 ,促进创面愈合[1] 。但现阶段 ,还不能作为永久性的皮肤替代物。本文对以胶原为细胞外基质材料所形成的组织工程化皮肤的研究进展作一简要综述。一、胶原作为细胞外基质材料及特点胶原蛋白是真皮结缔组织的主要成分 ,占皮肤干重的70 % ,具有天然…     

组织工程化皮肤的研制与临床应用

覆盖于人体表面的皮肤是人体与外界环境接触的屏障，不仅起保护、分泌、代谢和感觉等作用，而且．参与免疫反应和维持机体内环境的稳定。但严重创伤和大面积烧伤患者的皮源缺乏一直是临床亟待解决的难题．用组织工程学的原理与方法构建或预制皮肤可望成为解决皮源缺乏的理想方法：组织工程化皮肤通常可分为表皮替代物、真皮替代物和复合皮肤替代物三种类型，目前虽有近二十种组织工程化皮肤产品应用于临床并取得了一定疗效，     

自体组织工程化皮肤修复全层皮肤缺损的实验研究

目的为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物,直接用于修复全层皮肤缺损.方法选用长枫杂交仔猪10只,酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞,将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与30%氧化异丙烯F-127 混匀成细胞悬液后,种植聚羟基乙酸(polyglycolic acid,PGA)形成细胞-生物材料复合物,用于修复自体动物背部直径4 cm全层皮肤缺损,以单纯生物材料(PGA+氧化异丙烯)充填的创面作为对照组.修复术后1,2,4,8周取材,通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价.结果第1周新生组织即出现表皮与真皮2层结构,特殊染色观察到连续的基底膜.第2周表皮与真皮均较前增厚.修复后第8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似.对照组则无皮肤形成,仅见大量肉芽组织.结论应用组织工程技术,以PGA+氧化异丙烯为表皮细胞、成纤维细胞载体构建的组织工程化皮肤可修复全层皮肤缺损.     

深低温保存组织工程化骨的实验研究

目的：深低温保存是组织工程化骨（TEB）实现大规模临床应用的必要保证。深低温保存方法分慢速冻存和玻璃化冻存。目前，玻璃化冻存是最有发展前景的冻存方法，并被认为更适用于TEB的深低温保存。因此，希望通过改进玻璃化液来提高TEB的玻璃化冻存效果。方法：通过检测第2（P2）代成骨诱导的犬骨髓基质干细胞（cBMSCs）在部分脱钙骨（pDBM）上的粘附率和生长曲线来获得适宜的细胞接种密度和体外培养时间，将在此基础上构建的TEB进行深低温保存。由TEB冻存后的细胞活性来选择一种理想的玻璃化液，并将其用于玻璃化冻存和慢速冻存TEB的对比实验研究。结果：P2代成骨诱导的cBMSCs在pDBM上适宜的细胞接种密度是50×10^6／ml，最佳的体外培养时间是8天。VS442作为玻璃化液用于TEB的深低温保存。尽管玻璃化冻存TEB的细胞存活率仅为46．2％±7．2％，低于慢速冻存的77．4％±5．1％，但经过体外培养11天后的细胞活性超过了后者，可基本恢复到冻存前的水平。结论：VS442是玻璃化冻存TEB理想的玻璃化液。尽管实验采用的慢速冻存方法可简单有效的保存TEB，但对于TEB而言，玻璃化冻存还是更具有发展潜力的深低温保存方法。     

应用b-FGF刺激的软骨细胞构建自体组织工程化软骨的研究

目的　探索碱性成纤维细胞生长因子 (b FGF)对体外软骨细胞增殖和体内组织工程化软骨构建的影响。　方法　细胞取自猪耳软骨 ,用Ham′sF 12培养液体外培养 ,实验分两组 :培养液含b FGF组 (b FGF组 ) ,培养液无b FGF组 (对照组 )。培养过程中观察细胞形态 ,于 (12 75± 1 2 6 )d后分别收集 2组第 2代细胞 ,进行细胞增殖倍数比较 ,并按 5 0× 10 6 cell ml浓度与聚环氧乙烯 (Plu ronic)混合 ,制成细胞 生物材料复合物 ,按每一样本 0 5ml注射到猪自体皮下 ,8周后取材 ,从重量、体积、GAG含量和组织学等方面进行分析。结果　b FGF组细胞贴壁呈类成纤维细胞样 ,对照组细胞贴壁呈多角形 ;各组第 2代细胞数和原代细胞数相比 ,b FGF组扩增 70倍 ,对照组为 5 4倍 ,b FGF组是对照组的 12 7倍 ;8周后取材 ,b FGF组形成的组织工程化软骨的平均重量和体积为 0 371g 0 370cm3,约是对照组的 2倍 ;GAG含量和组织学上 ,两者均非常接近正常猪耳软骨。结论　培养液中应用b FGF ,原代软骨细胞能在 2周内大量扩增 ,并能在体内构建良好的软骨 ,这有助于解决软骨组织工程种子细胞缺乏问题。     

皮肤组织工程

目的 综述近阶段皮肤组织工程研究领域中的进展。方法 广泛查阅国内外近期在皮肤组织工程研究的文献,着重阐述表皮替代物,真皮替代物,培养的表皮真皮复合皮片的研究进展和重要问题。结果 多数学者认为理想的皮肤替代物应及时重建已人的表皮和真皮结构。目前的研究主要集中在如何尽早移植表皮细胞,并保护移植后细胞的活性和功能,以及研制能更有效地促进细胞功能,诱导创床血植入,移植后可降解,无毒性,无病原携带风险的细胞     

表皮细胞生长因子和碱性成纤维细胞生长因子在不同发育阶段大鼠皮肤表达特征的比较性研究

目的 研究表皮细胞生长因子（EGF）和碱性成纤维细胞生长因子（bFGF)在胚胎、新生及成年三个不同发育阶段大鼠皮肤的表达特征及其可能的生物学意义。方法 取胚胎、新生和成年大鼠皮肤,经4%多聚甲醛固定、包埋与切片后,用SP免疫组织化学法研究EGF和bFGF的定位与表达特征。结果 EGF的阳性表达可见于胚胎、新生及成年三个发育阶段大鼠皮肤,主要位于表皮棘细胞,真皮成纤维细胞、毛囊上皮细胞和血管内皮细胞胞浆,bFGF在新生和成年大鼠表皮及真皮呈强阳性表达,但在胎鼠皮肤则为弱阳性乃至阴性,结论 EGF在不同发育阶段大鼠皮肤呈强阳性表达,表明其对上皮的发生、表型维持以及损伤后的修复十分重要。而大鼠胚胎皮肤bFGF低表达或缺乏的结果表明它可能是动物胚胎创伤后无瘢痕愈合的原因之一。     

利用胎儿表皮干细胞构建组织工程皮肤修复裸鼠全层皮肤缺损创面

DMEM培养基、角质形成细胞无血清培养基、重组人表皮生长因子、霍乱毒素、dispase酶（美国Gibco公司），小鼠Ⅳ型胶原、L-谷氨酰胺、纤维蛋白、牛胰岛索（美国Sigma公司）．角蛋白14单克隆抗体、角蛋白19、整合素B，（美国ADI公司），重组人成纤维细胞生长因子2（FGF2，珠海亿胜生物制药有限公司）．凝血酶（奥地利Immuno AG公司），聚乙醇酸（PGA，日本Synthecon公司，[第一段]     

人表皮生长因子对皮肤的保护作用

皮肤细胞表达 10种以上的生长因子 ,它们以自分泌和旁分泌的方式对细胞自身和邻近细胞进行多种调节[1] 。皮肤组织的基本细胞成员 :表皮细胞、成纤维细胞、血管内皮细胞等是表皮生长因子 (epidermalgrowthfactor,EGF)的靶细胞 ,提示 :表皮组织、真皮和皮肤血管的微循环系统都要受到EGF的调控。细胞外基质 (extracellularmatrix ,ECM )的分子组成、理化状态和代谢功能 ,也都要受到EGF直接或间接通过细胞进行的调节。ECM是细胞生存的微环境 ,也担负着细胞信号转导功能 ,直接关系到细胞增殖、生长和功能活动[2 ] 。生长因子是基因表达的…     

组织工程皮肤的应用研究

目前，人们对人工活性皮肤替代物（细胞工程或组织工程人工皮肤）的研究已进行了约半个世纪。将表皮细胞培养于经辐照的鼠成纤维细胞（Fb）滋养层，是组织工程皮肤治疗大面积烧伤的里程碑。由于培养基的改良与商品化，促使角质形成细胞的无血清层和无滋养层培养成功，结合早期切痂和应用临时皮肤覆盖物，     

皮肤组织工程研究进展

组织工程学是近年来发展起来的一门新兴学科 ,现就皮肤组织工程的研究作一简要概述 :早在 195 1年 ,就有学者建议用实验室生长的皮肤来治疗烧伤病人[1] ,但由于表皮细胞培养困难 ,此方法未能实施。直到 1975年Ｒｈｅｉｎｗａｌｄ和Ｇｒｅｅｎ[2 ] 攻克了体外大规模培养表皮细胞的难题 ,皮肤替代物的研究和制作才日渐广泛。皮肤替代物可分为 :表皮替代物、真皮替代物和复合皮肤替代物。一、表皮替代物1.表皮细胞悬液 :Ｂｉｌｌｉｎｇｈａｍ等[3 ] 首先用培养的表皮细胞悬液治疗大面积全厚皮肤缺损 ,但该方法存在两大难题 :一是无法确定转移到…     

组织工程化皮肤治疗糖尿病皮肤溃疡研究进展

随着人们生活水平提高、生活模式改变及社会老龄化,糖尿病发病率逐年增高。糖尿病皮肤溃疡为糖尿病常见并发症之一,多与糖尿病病程、病情关系密切。目前对于糖尿病皮肤溃疡,临床上常规治疗为控制感染、血管重建、减压治疗和清创术。但是,常规治疗手段并不能取得令人满意的治疗效果[1]。近年来,组织工程学取得了长足发展,显现出其在临床各个领域的广阔的应用前景,使糖尿病皮肤溃疡的治疗有了新的选择[2]。     

组织工程化肌腱研究进展

对组织工程化肌腱领域中目前研究的主要成果进行综述，着重阐述了肌腱细胞外基质替代物、肌腱细胞生物学性质及肌腱细胞与细胞外基质材料复合研究中的主要问题。认为，研制适于肌腱细胞生长、粘附和发挥功能的细胞外基质材料；建立生长、增殖可调控的肌腱细胞系；在模拟体内力学条件下，进行肌腱细胞三维培养，将是研究具有特定修复功能的组织工程化肌腱的重要问题。     

自体组织工程化全层皮肤缺损修复实验研究

目的 为制成含表皮细胞与成纤维细胞的双层皮肤替代物，直接用于修复全层皮肤缺损。方法 选用长枫杂交仔猪10只，酶消化法获取皮肤表皮细胞与成纤维细胞，将原代培养处于对数生长期的表皮细胞、成纤维细胞分别与30％氧化异丙烯F－127混匀成细胞悬液后，种植聚羟基乙酸（polyglycolic acid,PGA)形成细胞－生物材料复合物，用于修复自体动物背部直径4cm全层皮肤缺损，以单纯生物材料（PGA＋氧化异丙烯）充填的创面作为对照组。修复术后1，2，4，8周取材，通过组织学和基底膜特殊染色等方法对新生组织进行评价。结果 第1周新生组织即出现表皮与真皮2层结构，特殊染色观察到连续的基底膜。第2周表皮与真皮均较前增厚。修复后第8周组织工程化皮肤的形态结构均与正常皮肤相似。对照组则无皮肤形成，仅见大量肉芽组织。结论 应用组织工程技术，以PGA 氧化层丙烯为表皮细胞、成纤维细胞载体构建的组织工程化皮肤可修复全层皮肤缺损。     

组织工程皮肤种子细胞的研究进展

组织工程即应用细胞生物学与工程学的原理和技术,在正确认识哺乳动物正常及病理条件下组织结构和功能的基础上,研究和开发用于修复、维护和改善人体各种组织或器官损伤后功能和形态的生物替代物的学科。组织工程包括3个基本的要素：种子细胞（seed cell）、可降解的支架材料及讯息因子。组织工程皮肤作为组织工程研究中较为活跃的领域,是在无细胞的生物材料中引入特定的种子细胞,通过一定的组织构建,形成更加接近于人体组织结构的生物活性替代物。种子细胞作为组织工程的基本要素,其黏附、增殖能力、分化程度及免疫特性是生物活性皮肤构建过程中需重点考虑的问题。目前用于皮肤组织工程构建的种子细胞主要包括：表皮细胞、成纤维细胞、干细胞等。     

老化皮肤成纤维细胞的研究进展

成纤维细胞是皮肤真皮中最主要的细胞成分,在合成分泌纤维和细胞外基质中扮演着重要的角色,在组织创伤修复中发挥着重要的作用。随着年龄的增长,皮肤老化突显,可以表现为皮肤干燥粗糙,皱纹增多、加深,皮肤松弛,弹性下降等。这些临床表现都与成纤维细胞数量减少、合成功能下降或异常有关。因此,在皮肤老化的研究中,人们越来越关注成纤维细胞的结构和功能的改变及其对皮肤老化产生的影响。本文就其研究进展综述如下。