苦参碱诱导人喉癌细胞Hep-2凋亡的实验研究

目的 研究苦参碱对人喉癌细胞Hep-2的生长抑制作用及凋亡机制.结果 四甲基噻唑蓝(MTT)法测定苦参碱对细胞的抑制作用,荧光显微镜、DNA琼脂糖凝胶电泳、流式细胞仪技术(FCM)观察细胞周期及凋亡.结果 不同浓度苦参碱对Hep-2细胞有明显抑制作用,且呈时间依赖性及剂量依赖性;FCM检测结果 显示:S期细胞比例及凋亡率增高,G2/M期细胞比例下降,且呈剂量依赖性;形态学发现Hep-2细胞染色质凝聚,核碎裂,凋亡小体形成;DNA琼脂糖凝胶电泳显示典型的梯形条带.结论 苦参碱可能是通过将人喉癌细胞周期阻滞在S期,诱导喉癌细胞凋亡,抑制其增殖,发挥其抗癌功能.     

黄体酮对人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM的逆转作用研究

目的　研究黄体酮 (ProgresteroneProg)对人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM的逆转作用和机制。方法　以人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM为研究对象 ,以逆转剂维拉帕米 (VerapamiVera)为对照 ,采用MTT法检测Prog对细胞Tca8113 /BLM逆转 ;流式细胞仪检测Prog对细胞内阿霉素 (ADM)浓度聚积、细胞膜上P -gp的表达 ,以及对细胞周期的影响。结果　Tca8113、Tca8113 /BLM细胞对BLM的IC5 0分别为 10 1和 12 0 1;加用 2umol/LProg作用细胞后Tca8113、Tca8113 /BLM细胞对BLM的IC5 0分别为 9 5 6和 12 1,耐药细胞对BLM的增敏倍数为 9 92 ;ADM浓度在Tca8113 /BLM细胞内明显增加 (P <0 0 1) ,而亲本细胞Tca8113没有明显改变 ;细胞膜上的P -gp的阳性表达率也显著下降 ( P <0 0 1) ;细胞周期发生改变 ,G1细胞减少 ,G2期和S期细胞增多。结论　Prog能显著提高耐药细胞内药物的浓度 ,可逆转人舌癌耐药细胞Tca8113 /BLM对BLM的耐药作用 ,其逆转机制可能与P -gp的结合有关     

肿瘤坏死因子、干扰素在舌癌细胞体外化、放疗中的协同作用研究

目的 观察肿瘤坏死因子（TNF）、干扰素（IFN）在舌癌综合治疗中的地位及可行性,探讨舌癌治疗的新途径。方法 采用MTT法检测TNF,IFN对舌鳞状细胞癌（Tca8113)细胞株的体外抑制作用及其对化、放疗的影响。结果 （1）TNF,IFN对Tca8113的抑制作用均存在明显的量效关系,二者合用时抑制作用比单用时明显增加（P＜0．05）;（2）TNF,IFN能明显增强低剂量Taxol、DDP、PLM等化疗药物对Tca8113的生长抑制作用（P＜0．05）或（P＜0．01;（3）TNF能增强2－8Gy放疗剂量下对Tca8113杀伤作用（P＜0．01）。结论 TNF、IFN可能提高舌癌（Tca8113)化、放疗效果,降低其毒性,在舌癌的综合治疗中存在广阔的应用前景。     

姜黄素对宫颈癌细胞系体外增殖的影响及机制研究

目的 探讨姜黄素对宫颈癌细胞系SiHa细胞体外增殖的影响及其对细胞周期的作用.方法 10～60μmol/L姜黄素分别处理SiHa细胞后,苔盼蓝染色和四甲基偶氮唑蓝法检测癌细胞的生长活性,流式细胞仪分析细胞周期各时相的变化.结果 不同浓度的姜黄素对宫颈癌细胞系SiHa细胞的增殖均有抑制作用,并呈剂量依赖性.药物处理后的细胞G1期的比例增加,S期减少,G2/M期细胞比例相对增多.与对照组比较,不同浓度姜黄素(10、20、40、60μmol/L)处理后,G2/M期比例分别为8.7%±2.1%、10.4%±1.3%、10.9%±2.2%、11.8%±1.4%.结论 姜黄素能抑制宫颈癌细胞的体外增殖,其机制可能与细胞周期阻滞有关.     

苦参碱对血小板衍生生长因子介导的大鼠肝星状细胞迁移、增殖和凋亡的影响

目的研究苦参碱对体外培养的肝星状细胞（HSC）迁移、增殖与凋亡的影响,探讨苦参碱抗肝纤维化的作用机制。方法用0.25、0.5mg/ml的苦参碱分别处理肝星状细胞-BB型（HSC-T6）和由血小板衍生生长因子-BB（PDGF-BB）干预的HSC-T6,观察HSC的生长情况,采用Transwell小室检测细胞迁移,用MTT法测定细胞增殖,TUNEL法检测细胞凋亡。结果苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组细胞迁移数、吸光度值均低于空白对照组,细胞凋亡率则明显增高;在有PDGF-BB参与的3组中,苦参碱0.25mg/ml组和0.5mg/ml组的细胞迁移率和吸光度值降低,但是细胞凋亡率在3组之间差别无统计学意义。结论苦参碱对单纯激活状态下的HSC迁移、增殖均有较强的抑制作用,并能促进HSC凋亡的发生;苦参碱对PDGF作用下HSC的迁移、增殖有一定的抑制作用,但对此状态下的HSC的凋亡则无明显促进作用。     

姜黄素对人肺成纤维细胞凋亡及细胞周期的影响

目的研究姜黄素对人肺成纤维细胞(human lung fibroblasts,HLFs)体外生长、细胞周期及凋亡的影响。方法应用CCK-8、Annexin-V/PI、PI流式细胞分析术、免疫印迹法,检测姜黄素对细胞的增殖、凋亡、细胞周期和Bax蛋白表达的影响。结果姜黄素对HLFs的增殖有抑制作用,可促进HLFs的早期凋亡,对细胞周期可产生G2/M期阻滞,增加HLFs的Bax蛋白的表达。结论姜黄素可抑制HLFs的增殖并能诱导其凋亡,其机制可能与细胞的G2/M期阻滞及凋亡相关蛋白的表达增强有关。     

β-胡萝卜素对白血病HL-60细胞凋亡及细胞周期分布的影响

目的：　探讨β－胡萝卜素抑制白血病细胞增殖的机制。方法：　体外培养白血病细胞株ＨＬ－６０,培养时添加１０μｍ ｏｌ／Ｌ、５０μｍ ｏｌ／Ｌ、１００μｍ ｏｌ／Ｌβ－胡萝卜素作用２４ｈ、４８ｈ、７２ｈ 后,用台盼蓝拒染法进行活细胞计数,绘制细胞生长曲线;应用流式细胞术分析细胞周期分布,同时利用流式细胞术结合ＤＮＡ 凝胶电泳检测白血病细胞凋亡。结果：　细胞生长曲线显示１０～１００μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素均对白血病细胞株ＨＬ－６０ 有显著性抑制作用,且呈剂量效应关系。流式细胞术结果显示５０μｍ ｏｌ／Ｌ的β－胡萝卜素处理ＨＬ－６０ 细胞２４ｈ 后,出现Ｓ期阻滞,并诱导５．５９％ 的细胞凋亡。ＤＮＡ 凝胶电泳结果同样显示β－胡萝卜素能够诱导白血病ＨＬ－６０ 细胞凋亡。结论：　β－胡萝卜素对于髓系白血病细胞株ＨＬ－６０ 细胞的增殖具有显著性抑制作用,其机制可能是干扰的白血病细胞ＤＮＡ代谢;β－胡萝卜素诱导白血病细胞凋亡也是其抑制白血病的重要途径之一。     

p53及p21^wafl蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系

目的 探讨p53及p21^wafl蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性（MDR）的关系。方法 采用脂质体介导的转染技术，将野生型p53（wt-p53）基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM；分子信标（Molecular Beacon）法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113／BLM中p53基因的mRNA水平；Western blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21^wafl、P-gp和MRP蛋白的表达变化；MTT法检测不同细胞的药物敏感性，流式细胞仪检测细胞周期的改变，激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡。结果 在人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM中p53基因的表达明显下调，并且未检测到p21^wafl蛋白的表达；转染了wt—p53的耐药细胞Tca8113／BLM／p53中p53和p21^wafl蛋白表达均显著上调，而P-gP和MRP的蛋白表达则明显下调，其对药物BLM的敏感性增加10．1倍（P〈0．01）；转染细胞的周期也发生改变，G2期细胞增加，G1和S期细胞减少，转染细胞明显出现凋亡。结论 人舌癌耐药细胞系Tca8113／BLM多药耐药性的产生，可能通过p53和p21^wafl的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P—gp和MRP表达上调来实现。     

p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞多药耐药性的关系

目的探讨p53及p21waf1蛋白表达与人舌癌细胞系Tca8113多药耐药性(MDR)的关系。方法采用脂质体介导的转染技术,将野生型p53(wt-p53)基因导入人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM;分子信标(Molecular Beacon)法检测人舌癌细胞系Tca8113及其耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的mRNA水平;W estern blot检测亲本、耐药细胞和转染细胞中p53、p21waf1、P-gp和MRP蛋白的表达变化;MTT法检测不同细胞的药物敏感性,流式细胞仪检测细胞周期的改变,激光共聚焦显微镜观察细胞凋亡。结果在人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM中p53基因的表达明显下调,并且未检测到p21waf1蛋白的表达;转染了wt-p53的耐药细胞Tca8113/BLM/p53中p53和p21waf1蛋白表达均显著上调,而P-gp和MRP的蛋白表达则明显下调,其对药物BLM的敏感性增加10.1倍(P<0.01);转染细胞的周期也发生改变,G2期细胞增加,G1和S期细胞减少,转染细胞明显出现凋亡。结论人舌癌耐药细胞系Tca8113/BLM多药耐药性的产生,可能通过p53和p21waf1的表达下调使得多药耐药性相关蛋白P-gp和MRP表达上调来实现。     

裙带菜多糖对人食管癌细胞TE-13生长抑制作用的研究

[目的]观察裙带菜多糖(PUP)对食管癌细胞TE-13的生长抑制作用,探讨其诱导细胞周期阻滞和细胞凋亡的机制。[方法]以食管癌细胞TE-13作为研究对象,MTT法检测PUP对其增殖的抑制作用;在电子透镜下观察PUP对TE-13超微凋亡结构的影响;流式细胞技术检测其周期分布和凋亡率;RT-PCR法检测PUP对TE-13细胞中凋亡相关基因Survivin表达的影响。[结果]PUP对食管癌细胞TE-13有显著增殖抑制效应,作用时间越长,在一定范围内的PUP浓度越大,抑制效应越强。PUP作用48h时半数抑制浓度(IC50)为52.17μg/ml。25、50、100μg/ml的PUP作用48h后,TE-13均发生凋亡形态的变化;100μg/ml PUP处理72h后,凋亡率为52.19%;周期分布显示G0/G1期细胞增多,S期细胞明显减少。RT-PCR结果显示PUP能降低食管癌细胞中Survivin mRNA的表达。[结论]PUP在体外显著抑制食管癌细胞TE-13的增殖,其机制与PUP诱导食管癌周期阻滞和下调Survivin mRNA的表达有关。     

高脂膳食大鼠血清对人肺腺癌细胞系SPCA1增殖活性的影响

目的 用血清生理学方法直接从细胞水平研究膳食脂肪对肺癌细胞增殖的影响。方法 SD雄性大鼠分为两组，分别喂以普通饲料及高脂饲料。30d时取血并分离血清，用含20％大鼠血清的：RPMll640培养液培养人肺腺癌细胞SPCA1，从MTT比色法、Giemsa染色、核增殖抗原(PCNA)表达三个方面观察两组血清对细胞增殖活性的影响。结果 MTT比色法结果显示高脂组细胞在第5天出现生长活跃的状态，使生长曲线反常上扬。Giemsa染色结果发现高脂组细胞呈局灶样增殖，在每个增殖灶的周围有多个呈花瓣状分布的细胞坏死灶。对照组中细胞染色较浅，有多个坏死灶，而无增殖灶出现。核增殖抗原检测结果发现高脂组PCNA阳性细胞数表达明显多于对照组，且阳性信号表达较强。结论 高脂膳食大鼠血清能促进人肺腺癌细胞系SPCA1增殖，其机制可能涉及多个方面。     

量子点荧光技术标记口腔鳞癌细胞中bax的应用研究

目的利用量子点(QD)优良的光学性质对人舌癌Tca8113细胞内bax进行特异性荧光标记。方法利用QD545nm通过间接免疫荧光法,在激光共聚焦显微镜下观测人舌癌Tca8113细胞内bax的表达,并激光连续照射1 h,用激光共聚焦显微镜自带软件Leica Confocal Software测量量子点QD545nm的荧光信号强度。结果激光共聚焦显微镜下可见人舌癌Tca8113细胞内bax明显表达,且激光连续照射1 h,QD545nm标记的荧光未见明显衰减,而FITC标记的荧光1 h内已基本淬灭。结论量子点荧光标记技术能对细胞内bax进行标记。     

苦参碱联合阿霉素对耐药白血病K562／AO2细胞株凋亡及Bel-2表达的影响

目的研究苦参碱联合阿霉素对耐药白血病细胞系K562／AO2体外增殖的抑制、诱导凋亡及对Bcl-2表达的影响。方法实验分对照组,阿霉素组,苦参碱组（又分为0．50mg／ml、0．75mg／ml、1．0mg／ml3个不同的浓度组）和苦参碱＋阿霉素组（也根据苦参碱的浓度不同分为0．50mg／ml、0．75mg／ml、1．0mg／ml3个不同的浓度组）,共分为8个组。取对数生长的肿瘤细胞,1×10^6／孔,分别加入阿霉素、不同浓度的苦参碱,不同浓度的苦参碱联合阿霉素予以处理,对照组只加等体积的培养基不加药物。加入药物后继续培养48小时。以MTr法检测肿瘤细胞增殖的抑制率,流式细胞术检测肿瘤细胞凋亡、Bcl-2表达。结果单纯阿霉素组、单纯苦参碱组、苦参碱＋阿霉素组对K562／A02细胞系均有抑制作用;随苦参碱浓度的增高,抑制作用增强,各组间差异有统计学意义（P〈0．01）;苦参碱＋阿霉素组的细胞抑制率均显著高于单纯苦参碱组和单纯阿霉素组,差异有统计学意义（P〈0．01）。苦参碱组及苦参碱联合阿霉素组K562／A02细胞凋亡率较对照组明显升高,差异有统计学意义（P〈0．01）;苦参碱＋阿霉素组的细胞凋亡率较单纯苦参碱组及单纯阿霉素组均显著升高,差异有统计学意义（P〈0．01）,并且随苦参碱浓度的增加,细胞凋亡率增加。各单纯组及联合组细胞Bcl-2的阳性表达率与对照组相比均明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）;苦参碱＋阿霉索组细胞Bcl-2表达率与单纯苦参碱组、单纯阿霉素组相比均明显下调,差异有统计学意义（P〈0．05）。结论苦参碱与阿霉素联合能增强对K562／AO2细胞的抑制作用,促进其凋亡,明显降低Bcl-2表达。     

增殖细胞核抗原与卵巢癌细胞系化学敏感性

目的 :探讨增殖细胞核抗原 (PCNA)与上皮性卵巢癌细胞系化学敏感性的关系。方法 :使用顺铂作用于A2 780及AD6 0细胞株。在MTT法测定耐药倍数基础上 ,用ABC检测PCNA表达。结果 :MTT测定AD6 0的耐药倍数为 2 .4。A2 780PCNA的表达低于AD6 0 ,且随药物浓度的递增染色较耐药组明显变浅。A2 780、AD6 0相同药物浓度作用后PCNA的表达有显著性差异 (P 0 .0 1) ;同一细胞株不同药物浓度作用后PCNA表达有显著性差异 (P 0 .0 1)。结论 :增殖细胞核抗原表达与上皮性卵巢癌细胞对细胞毒性药物的化学敏感性呈负相关。     

GPER介导血管内皮细胞增殖与迁移作用

目的通过观察G蛋白偶联雌激素受体（GPER）激活在血管内皮细胞中的促增殖作用,探讨其在心血管和肿瘤疾病中的可能作用机制。方法使用免疫荧光检测GPER在血管内皮细胞中的表达。采用GPER特异性激动剂G1（10nM）和阻断剂G15（1uM）以及ERK信号阻断剂PD98059（1uM）干预血管内皮细胞,用细胞增殖试剂盒、cck-8试剂盒、Hanging Cell Culture Inserts小室测定G1对内皮细胞增殖以及迁移的作用。结果GPER在牛主动脉内皮细胞中有所表达,GPER的激活对内皮细胞的增殖、活性和迁移有明显的促进作用（P〈0．05）,在G15和PD98059作用下这种促增殖作用消失（P〈0．05）。结论GPER通过ERK1／2信号通路介导血管内皮细胞增殖和迁移作用。     

Ellagic acid suppresses oxidised low-density lipoprotein-induced aortic smooth muscle cell proliferation: studies on the activation of extracellular signal-regulated kinase 1/2 and proliferating cell nuclear antigen expression

Proliferation of intimal vascular smooth muscle cells is an important component in the development of atherosclerosis. Ellagic acid is a phenolic compound present in fruits (raspberries, blueberries, strawberries) and walnuts. The present study investigated the effect of ellagic acid on the oxidised LDL (ox-LDL)-induced proliferation of rat aortic smooth muscle cells (RASMC). The study found that ellagic acid significantly inhibited ox-LDL-induced proliferation of RASMC and phosphorylation of extracellular signal-regulated kinase (ERK) 1/2. Furthermore, ellagic acid also blocked the ox-LDL-induced (inducible) cell-cycle progression and down regulation of the expression of proliferating cell nuclear antigen (PCNA) in RASMC. Therefore, ellagic acid reduced the amount of ox-LDL-induced proliferation of RASMC via inactivation of the ERK pathway and suppression of PCNA expression. These results may significantly advance the understanding of the role that antioxidants play in the prevention of atherosclerosis.     

膳食雌激素影响乳腺癌MCF-7细胞增殖和凋亡的机制探讨

目的:探讨膳食中常见的两种环境类雌激素大豆异黄酮(genistein,GS)、玉米赤霉烯酮(zearalenone,ZEA)影响人乳腺癌细胞MCF-7增殖和凋亡的分子生物学作用机制。方法:MCF-7细胞在DMEM培养液(含10%胎牛血清)中进行常规传代培养,实验前将细胞转移至无酚红DMEM(含5%活性碳葡聚糖苷处理过的FBS)中继续培养5d,收集细胞,PBS洗涤后接种于内置血盖片的六孔板或75ml培养瓶,32×10-9mol/LZEA和75×10-6mol/LGS对细胞分别处理72h,用半定量RT-PCR技术观察GS对核增殖抗原PCNA、bcl-2及baxmRNA表达的影响,并用免疫组化方法对结果进行验证。结果:与溶剂对照组相比,75×10-6mol/LGS对MCF-7细胞处理72h可显著提高baxmRNA表达而抑制bcl-2和PCNAmRNA的表达,随后的免疫组化实验也证实了这一结果;ZEA的作用效应则与GS相反。结论:膳食雌激素GS和ZEA可通过影响细胞增殖和凋亡相关调节基因PCNA、bcl-2和bax表达而调节人乳腺癌细胞MCF-7的增殖和凋亡作用。     

刚地弓形虫培养上清抑制胃癌细胞株SGC-7901增殖

目的 观察弓形虫培养上清对胃癌细胞株SGC-7901增殖的影响. 方法 取对数期生长的SGC-7901细胞接种于细胞培养板中,实验组加入相同体积不同数量（1×106、1×107、1×108/ml）弓形虫速殖子培养上清,对照组加入等体积的RPMI-1640培养液,通过显微镜观察培养24 h后细胞形态;计数细胞,绘制生长曲线;MTT法测定培养24、48、72 h后细胞增殖情况;Western blotting检测弓形虫培养上清作用24 h凋亡相关蛋白Bax和Bcl-2的表达. 结果 经弓形虫速殖子培养上清作用24 h后,胞质中颗粒明显增多,细胞密度有所降低;细胞生长受到抑制,且呈浓度依赖性;经1×106、1×107、1×108/ml弓形虫培养上清作用24、48、72 h均能显著抑制SGC-7901细胞的增殖;作用24 h后,抗凋亡蛋白Bcl-2的表达降低,促凋亡蛋白Bax表达增强. 结论 弓形虫培养上清能抑制胃癌细胞株SGC-7901的增殖.