CNTF基因在大鼠脊髓中的表达及生后发育的变化

目的 观察CNTF基因在大鼠脊髓中的表达以及生后发育过程中的变化。方法 以地高辛标记（dig）－CNTF cDNA为探针，采用原位杂交法，观察CNTF mRNA在大鼠脊髓中的分布；采用TR－PCR法，半定量分析大鼠生后发育过程中，脊髓CNTF mRNA表达水平的变化。结果 CNTF mRNA原位杂交阳性信号存在于正常大鼠脊髓白质的腹索、外侧索周边的部分胶质细胞中；灰质中未能发现阳性杂交信号。RT－PCR结果显示，大鼠生后1d脊髓细胞中即可见CNTF mRNA表达，但表达量较低；出生15d表达量迅速增加；30d时最高；60d时的表达量有下降的趋势。结论 大鼠脊髓白质的部分胶质细胞可表达CNTF mRNA；大鼠出生后1d CNTF mRNA即有表达，之后随脊髓的发育而呈动态变化的趋势。     

HDAC1-11 mRNA在出生后大鼠坐骨神经发育过程中的表达变化

目的:研究组蛋白去乙酰化酶HDAC1-11 mRNA在大鼠出生后坐骨神经发育过程的变化。方法:RT-PCR法分析坐骨神经发育成熟过程是HDAC1-11mRNA的表达水平。结果:HDAC1-11 mRNA持续表达于大鼠坐骨神经发育成熟的过程中,在大鼠60 d时表达水平显著的低于初生时的表达水平。结论:HDAC1-11 mRNA参与大鼠坐骨神经发育成熟的过程,且其表达水平随着大鼠年龄的增加呈现由高到低的动态变化,提示其与坐骨神经髓鞘的发育成熟以及维持神经的正常功能密切相关。     

Nnat基因在大鼠脑发育过程中表达的初步研究

目的:观察Nnat基因在大鼠脑发育过程中基因表达的变化规律,藉以探讨Nnat在神经系统发育过程中的作用。方法:采用半定量RT-PCR法分析出生前后大鼠脑内Nnat表达水平的变化,Western blot检测Nnat蛋白的表达。结果:在大鼠胚胎第9 d(E9)脑内Nnat mRNA开始表达,但表达量较低,以后其表达量逐渐升高,出生前有轻微下调。出生后大鼠的不同脑区Nnat mRNA的表达量都呈现下降趋势,60 d时达到较低的水平。Nnat蛋白在不同脑区都具有表达,但不同亚型蛋白量的相对比例不同。结论:Nnat基因在胚胎期及出生后大鼠脑内的表达量与中枢神经系统发育及分化过程的时间上有一定的同步性,提示Nnat的作用可能与神经元分化的调节有关。     

生后不同时期大鼠坐骨神经NGF基因的表达

采用 RT-PCR方法半定量分析生后 1、15、3 0、60、12 0和 3 60 d大鼠坐骨神经中 NGF m RNA表达的变化。结果表明 ,大鼠生后 1d坐骨神经中即有 NGF m RNA的表达 ;随着生后发育过程 ,NGF m RNA的表达量逐步增加 ,并呈严格单调上升的趋势。开始时增加速度较慢 ,但随鼠龄的增加而逐渐加快 ,至 49d时达到最快 ,然后逐渐减慢 ,到 12 0 d时已接近生后稳定表达水平。     

脑源性神经营养因子对出生后大鼠周围神经髓鞘化的作用

目的:探讨脑源性神经营养因子(BDNF)对出生后大鼠周围神经髓鞘化的作用及其作用机制.方法:用光镜和电镜方法检测坐骨神经纤维的髓鞘化情况;用免疫印迹方法检测坐骨神经p75的表达;用免疫荧光方法检测坐骨神经雪旺细胞内核转录因子(NF-kB)的表达.结果:出生后3 d,与对照组相比,实验组坐骨神经髓鞘化的神经纤维数目减少,p75表达下调,雪旺细胞内NF-KB转移率下调;出生后14 d,与对照组相比,实验组坐骨神经出现较多的髓鞘化异常.结论:内源性BDNF影响出生后大鼠周围神经的髓鞘化,尤其在早期作用明显;内源性BDNF主要通过p75和NF-kB信号途径调节出生后大鼠周围神经的髓鞘化.     

Slit-Robo GTPase激活蛋白在坐骨神经切断后脊神经节的表达变化

目的:观察Slit-Robo GTP酶激活蛋白(srGAP)在成年哺乳类动物脊神经节(DRG)的表达及其变化,了解srGAP在神经再生中的作用.方法: 应用RT-PCR、免疫印迹法、免疫组织化学方法,检测成年SD大鼠正常和坐骨神经切断后1、3、7d 的DRG srGAP1、2、3 mRNA及其蛋白的表达.结果: srGAP1、3 mRNA在正常DRG均有弱表达,而srGAP2不表达;坐骨神经切断后3、7d,srGAP1、3 mRNA表达增强,以术后7d最高;免疫组织化学显示,srGAP1在神经元胞体、突起均有表达,在DRG内胶质细胞亦有表达,坐骨神经切断后3、7d表达增强.结论: 本研究结果说明Slit-Robo信号通路存在于大鼠周围感觉神经元内,周围神经损伤可激活此信号通路.     

β-1,4半乳糖基转移酶-I在钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化

为了观察β-1,4-半乳糖基转移酶-I(β-1,4-galactosyltransferase-I,β-1,4-GalT-I)在正常和钳夹伤后大鼠坐骨神经中表达的变化,本研究采用RT-PCR方法,从小鼠坐骨神经中特异性地扩增β-1,4-GalT-I cDNA片段并将其克隆到pGEM-T载体。采用体外转录的方法合成地高辛标记的正、反义β-1,4-GalT-I RNA探针。通过原位杂交和图像分析的方法,观察β-1,4-GalT-I mRNA在正常和夹伤大鼠坐骨神经中的表达及其变化。结果表明:β-1,4-GalT-I mRNA在大鼠坐骨神经的髓鞘中表达,在夹伤坐骨神经后1~2d,β-1,4-GalT-I mRNA在坐骨神经的表达最高,于夹伤后1周开始下降,在夹伤后1个月恢复至正常水平。上述结果提示坐骨神经夹伤后β-1,4-GalT-I mRNA的表达发生变化,并且主要表达在坐骨神经的Schwann细胞。本研究结果为进一步分析β-1,4-GalT-I在周围神经再生中的调控机制奠定了基础。     

神经型一氧化氮合酶相关分子NIDD mRNA在周围神经损伤后的表达变化

目的 探讨正常及损伤的周围神经中神经型一氧化氮合酶(nNOS)相关分子(NIDD)的表达定位与变化.方法 在利用实时荧光定量PCR(FQ-PCR)研究大鼠坐骨神经损伤对nNOS及其相关分子NIDD mRNA表达变化的基础上,通过原位杂交与间接免疫荧光相结合的方法进一步研究其表达定位情况.结果 nNOS及NIDD mRNA主要分布在正常和损伤坐骨神经的施万细胞(SCs)中,损伤后表达增多,分别在神经夹伤后2周以及切断后1周的近、远侧断端中出现表达高峰.原代培养的SCs中也检测到nNOS及NIDD,其mRNA分布在核周细胞质区域.结论 周围神经损伤对nNOS相关分子NIDD的表达有影响,SCs表达NIDD可能参与神经损伤后再生修复机制.     

移植坐骨神经大鼠相应背根神经节中生长相关蛋白43的表达

背景:周围神经移植后,相应的背根神经节感觉神经元胞体内生长相关蛋白43(GAP-43)表达的时程与规律尚未明确。目的:观察大鼠坐骨神经移植术后GAP-43在相应背根神经节中的表达变化。方法:取健康成年雄性Wistar大鼠,随机分为2组,对照组行假手术组;实验组行坐骨神经移植,分别于术后3d,1,2,4,6,8周6个时间点处死后取其手术侧L4~L5背根神经节,应用RT-PCR和Western Blot技术检测GAP-43mRNA及其蛋白表达。结果与结论:对照组大鼠背根神经节中GAP-43mRNA表达量较低,且随时间无明显改变;实验组术后1周时GAP-43mRNA在相应背根神经节中即有表达增强,2周时达到高峰,6~8周表达逐渐减弱。两组大鼠背根神经节中GAP-43蛋白与GAP-43mRNA表达的变化规律相同。结果表明神经损伤后相应神经元的再生能力存在损伤反应性变化。     

大鼠脊髓发育及损伤后NIDD mRNA表达的实验研究

目的：探讨在大鼠发育过程中及急性脊髓损伤后脊髓组织中NIDD （nNOS-interacting DHHC domain-containing protein with dendritic mRNA）mRNA的表达变化及意义。方法：采用改良Allen＇s打击法，咬除T8-10椎板后，造成大鼠脊髓损伤模型，致伤量为10×10g·cm；借助实时荧光定量PCR、原位杂交与免疫荧光结合的方法，定量、定位研究发育过程中及脊髓损伤后早期大鼠脊髓组织中NIDD mRNA与nNOS mRNA表达的时间和空间分布特征。结果：大鼠发育过程中，胚胎16d的大鼠脊髓中可见NIDD mRNA的高表达，在生后1d，与nNOS共表达于尚未分化成熟的前角，在白质也见NIDD的阳性信号。成年后呈低表达；nNOS mRNA于生后1～3d出现表达高峰；脊髓损伤后NIDD mRNA表达明显增多，在8h到达高峰，分布于脊髓前角、中间带、中央管周围及后角nNOS阳性的神经元，7d恢复至正常水平；nNOS mRNA在损伤后8h达到高峰，1d降低至正常水平。而且，在脊髓损伤后NIDD mRNA与nNOS mRNA二者表达呈正相关。结论：胎鼠脊髓中，NIDD高表达于nNOS阳性细胞，提示其在脊髓组织的发育成熟过程中的作用可能与nNOS相关。脊髓损伤后脊髓组织中NIDD与nNOS表达增多，提示在脊髓损伤的病理过程中，NIDD可能通过调节nNOS的细胞亚定位及活性而发挥一定的生物学作用。     

Developmental expression of P0 mRNA and P0 protein in the sciatic nerve and the spinal nerve roots of the rat

Summary Expression of myelin P0 protein by myelinating Schwann cellsin vivo is dependent on axonal influences. This report describes P0 gene expression during development of rat sciatic nerve and spinal nerve roots using Northern blotting,in situ hybridization and immunohistochemistry. We demonstrate that: (1) the appearance of P0 mRNA and P0 protein in Schwann cells during nerve development in the rat begins prenatally, at day 18 post-fertilization (E18); (2) P0 mRNA and P0 protein have essentially identical developmental profiles, and are expressed in Schwann cells that are many days prior to myelin formation; (3) initial P0 gene expression is greatest in Schwann cells at the periphery of nerve bundles and in Schwann cells in contact with motor axons; (4) the decline in P0 expression with nerve maturation is accompanied by a sharp decline in P0 message levels in most Schwann cells, but a small subpopulation of these cells continue to synthesize very high levels of P0 mRNA. This study provides data on myelin P0 protein gene expression and distribution during PNS development and adds further insights into the axonal influences controlling Schwann cell behaviour during myelination of the rat PNS.     

睫状神经节神经营养因子在大鼠坐骨神经生后发育中的表达──免疫组织化学研究

用免疫组织化学ＡＢＣ技术和计算机图像处理系统研究了ｌｄ龄、１月龄、２月龄和３月龄大鼠坐骨神经中睫状神经节神经营养因子样免疫反应的分布及其强度的变化。结果表明，在４个年龄组中均存在阳性免疫反应。阳性免疫反应见于雪旺细胞胞浆；轴突和髓鞘呈阴性。睫状神经节神经营养因子免疫反应以１月龄鼠最高，２月龄次之，３月龄最低。本文的结果提示，睫状神经节神经营养因子在出生后即存在于雪旺细胞中，其含量随周围神经的发育而有所变化。     

神经生长因子mRNA在大鼠脊髓和脊神经节的表达——原位杂交研究

我们以 SD大鼠坐骨神经为材料 ,在 NGF- c DNA文库建立的基础上 ,人工合成神经生长因子引物 ,并用 PCR地高辛标记法标记 NGF探针 ,采用原位分子杂交组织化学方法 ( ISHH) ,观察 NGF- m RNA神经生长基因表达细胞在大鼠腰段脊髓和脊神经节内的分布。结果发现在大鼠坐骨神经损伤模型腰段脊髓横切面的前角、侧角及腰背根神经节均有 NGF基因的表达细胞 ,蓝色反应物弥散性分布于胞浆内 ,呈细小颗粒状或长柱状。损伤侧要强于未损伤侧 ,并对其杂交信号进行定量分析 ,结果显示在大鼠坐骨神经损伤模型术后第 5天、第 10天及第 15天 ,脊髓前角运动神经元 ,侧角交感神经元、背根节感觉神经元内的杂交信号增强 ,表明损伤的早、中期 NGF- m RNA表达量增加。讨论了神经再生的理化因素     

Injury-induced CRMP4 expression in adult sensory neurons; a possible target gene for ciliary neurotrophic factor

Neurotrophic cytokines, such as ciliary neurotrophic factor (CNTF) play an important role in the development and regeneration of the nervous system. In the present study, we screened gene expression induced by CNTF in adult dorsal root ganglion (DRG) neurons using the Illumina microarray. We found that the expression of both short and long forms of collapsin response-mediator protein 4 (CRMP4) was increased in cultured primary sensory neurons by CNTF. In addition, sciatic nerve injury induced the expression of CRMP4 mRNA and protein in DRG neurons. Finally, the increased CRMP4 protein was transported into peripheral axons following nerve injury. These findings indicate that CRMP4 may be a target gene for CNTF in the regenerative axon growth of DRG neurons after injury.     

重组人睫状神经营养因子对大鼠坐骨神经再生长的影响

目的: 观察重组人睫状神经营养因子(CNTF)对大鼠坐骨神经再生长的影响,并与神经生长因子(NGF)的作用进行比较。方法: 随机将动物分成正常对照组、模型组、CNTF给药小剂量组(48 μg/kg)、中剂量组(216 μg/kg)、大剂量组(1 080 μg/kg)、NGF 给药组(20 μg/kg),每组各10只。模型组采用大鼠坐骨神经切断再缝合法造成坐骨神经损伤模型,给药组采用不同药物剂量对神经损伤部位肌肉注射给药45 d后,测定神经动作电位潜伏期和传导速度。结果: 与模型组相比较,CNTF各给药组神经动作电位潜伏期显著缩短(P<0.01),传导速度显著增快(P<0.01);同时,216 μg/kg、1 080 μg/kg CNTF组和NGF组对神经动作电位潜伏期的影响无显著差别(P>0.05),但是216 μg/kg、1 080 μg/kg CNTF组的神经动作电位传导速度比NGF组显著增快(P<0.01)。结论: CNTF对大鼠坐骨神经再生具有一定的促进作用,而且其作用可能优于NGF。     

重组睫状神经营养因子对受损周围神经施万细胞相关基因表达的作用

目的研究重组睫状神经营养因子(CNTF)对受损周围神经施万细胞基因表达的作用。方法用硅管套接切断的大鼠坐骨神经，在受损神经局部给予重组CNTF，术后用免疫组织化学ABC法结合计算机图像分析观测S100蛋白(S100)、生长相关蛋白-43(GAP-43)、磷酸化酪氨酸(PTyr)、信号转导子和转录激活子(STAT)3的免疫反应阳性物质在修复侧远段神经的分布和相对含量。结果CNTF组修复侧远段神经相应区域S100、GAP-43、PTyr、STAT3阳性物质的含量显著或非常显著高于生理盐水组。结论重组CNTF能上调受损神经施万细胞S100、GAP-43、PTyr和STAT3的表达，提示重组CNTF通过强化受损神经施万细胞JAK-STAT途径，E调其S100和GAP-43的基因表达。     

坐骨神经夹伤与心脏毒素注射导致腓肠肌功能损伤中Calpains和FoxOs的差异表达及相关性分析***◆

背景：钙蛋白酶家族和FoxO转录因子在肌萎缩过程中发挥着重要的作用。 目的：观察钙蛋白酶家族成员及FoxO转录因子(FoxO1和FoxO3a)在心脏毒素注射与坐骨神经夹伤致腓肠肌失功能损伤中表达的变化。 方法：分别采用坐骨神经夹伤和心脏毒素注射建立大鼠腓肠肌功能损伤模型,于造模后的第3,7,14,21天取大鼠腓肠肌进行实时荧光定量PCR检测,并采用线性回归法进行相关性分析。 结果与结论：结果显示,腓肠肌组织中的钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ和FoxO3a mRNA在坐骨神经夹伤7 d达到高峰,随后下降;钙蛋白酶Ⅲ和FoxO1 mRNA在坐骨神经夹伤后14 d达到高峰,随后下降。钙蛋白酶Ⅰ、钙蛋白酶Ⅱ、FoxO3a mRNA在心脏毒素注射后第3天达高峰,随后逐渐下降;FoxO1 mRNA在心脏毒素注射后7 d时达最高;而钙蛋白酶Ⅲ mRNA在心脏毒素注射后3 d时表达显著下降,随后逐渐恢复至正常水平。线性回归分析结果显示,在失神经肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅲ的表达与FoxO1呈正相关(r=0.901 5);在心脏毒素注射肌损伤过程中钙蛋白酶Ⅰ(r=0.898 7)和钙蛋白酶Ⅱ(r=0.937 4)表达趋势与FoxO3a呈正相关。可见,在不同的肌损伤模型中,钙蛋白酶Ⅰ和钙蛋白酶Ⅱ的表达趋势相似,而钙蛋白酶Ⅲ的表达不同。