Peroxiredoxin Ⅱ在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的观察Peroxiredoxin Ⅱ在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位,为探讨Peroxiredoxin Ⅱ在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据.方法根据小鼠Peroxiredoxin Ⅱ mRNA序列(Accession No:BC002034)设计引物,对小鼠生发泡完整卵细胞(GV卵)中的PeroxiredoxinⅡ可能编码区进行扩增.同时,取生后3d和2月小鼠的卵巢,免疫细胞化学染色显示Peroxiredoxin Ⅱ蛋白在卵泡中的分布.此外,运用RT-PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinⅡ在植入前胚的表达. 结果从GV卵中扩增所得684bp的cDNA序列,与小鼠Peroxiredoxin Ⅱ具有99%同源性;其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxiredoxinⅡ氨基酸序列完全相同.免疫细胞化学染色显示:生后3d小鼠卵巢内未见Peroxiredoxin Ⅱ阳性反应;2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质.卵泡细胞未见Peroxiredoxin Ⅱ阳性反应.RT-PCR结果表明:Peroxiredoxin ⅡmRNA在GV卵中处高水平,从MⅡ卵开始略有下降,在4-细胞胚和早期囊胚期间未检到.免疫细胞化学染色显示:GV卵、MⅡ卵、1-细胞胚、2-细胞胚、4-细胞胚、8-细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈Peroxiredoxin Ⅱ阳性反应.结论PeroxiredoxinⅡmRNA和蛋白在小鼠植入前胚的表达存在时程差别,Peroxiredoxin Ⅱ蛋白是母源性蛋白,它可能参与小鼠卵巢中卵母细胞和早期胚发育过程的调节.     

PeroxiredoxinⅡ小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的观察PeroxiredoxinⅡ在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位，为探讨PeroxiredoxinⅡ在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据。方法根据小鼠PeroxiredoxinⅡmRNA序列(Accession No：BC002034)设计引物，对小鼠生发泡完整卵细胞(GV卵)中的PeroxiredoxinⅡ可能编码区进行扩增。同时，取生后3d和2月小鼠的卵巢，免疫细胞化学染色显示PeroxiredoxinⅡ蛋白在卵泡中的分布。此外，运用RT-PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinⅡ在植入前胚的表达。结果从GV卵中扩增所得684bp的cDNA序列，与小鼠PeroxiredoxinⅡ具有99％同源性；其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxlredoxinⅡ氨基酸序列完全相同。免疫细胞化学染色显示：生后3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinⅡ阳性反应；2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质。卵泡细胞未见PeroxiredoxinⅡ阳性反应。RT-PCR结果表明：PeroxiredoxinⅡmRNA在GV卵中处高水平，从MII卵开始略有下降，在4-细胞胚和早期囊胚期间未检到。免疫细胞化学染色显示：GV卵、MII卵、1-细胞胚、2-细胞胚、4-细胞胚、8-细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiredoxinⅡ阳性反应。结论PeroxiredoxinⅡmRNA和蛋白在小鼠植入前胚的表达存在时程差别，PeroxiredoxinⅡ蛋白是母源性蛋白，它可能参与小鼠卵巢中卵母细胞和早期胚发育过程的调节。     

小鼠生发泡完整卵母细胞一个特异基因的克隆及其在胚胎的表达

目的：克隆和筛选小鼠生发泡完整卵母细胞(Gv卵)特异基因，并检测其一在胚胎中的表达。方法：应用抑制性消减杂交技术(SSH)，建立Gv卵特异的cDNA文库。通过斑点杂交法进一步筛选并对阳性克隆进行序列测定和同源性分析；采用RT-PC方法观察其一在着床前胚胎的表达。结果：克隆发现18个基因和8个EST序列在GV卵中特异表达。RT-PCR显示该阳性克隆的基因在GV卵、MII卵、1-细胞胚胎和2-细胞胚胎有表达，其短片段是预期要扩增者，从MII卵开始表达下降；长片段在Gv卵、MII卵、1．细胞胚胎和2-细胞胚胎表达未见明显变化。长、短片段两端序列一致。结论：该基因是GV卵特异cDNA文库中的一个基因，且是母源性基因，提示该基因在卵母细胞成熟和合子基因激活中起一定作用。     

PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡、GV卵、MII卵和植入前胚的表达和定位

目的　观察PeroxiredoxinII在小鼠卵巢中卵泡和植入前胚的表达与定位 ,为探讨PeroxiredoxinII在小鼠卵母细胞发育成熟和早期胚发育的作用提供依据。　方法　根据小鼠PeroxiredoxinIImRNA序列 (AccessionNo :BC0 0 2 0 34)设计引物 ,对小鼠生发泡完整卵细胞 (GV卵 )中的PeroxiredoxinII可能编码区进行扩增。同时 ,取生后 3d和 2月小鼠的卵巢 ,免疫细胞化学染色显示PeroxiredoxinII蛋白在卵泡中的分布。此外 ,运用RT PCR和免疫细胞化学染色方法观察PeroxiredoxinII在植入前胚的表达。　结果　从GV卵中扩增所得 6 84bp的cDNA序列 ,与小鼠PeroxiredoxinII具有 99%同源性 ;其推导的编码氨基酸序列与小鼠PeroxiredoxinII氨基酸序列完全相同。免疫细胞化学染色显示 :生后 3d小鼠卵巢内未见PeroxiredoxinII阳性反应 ;2月小鼠卵巢内阳性反应见于初级卵泡、次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的胞质。卵泡细胞未见PeroxiredoxinII阳性反应。RT PCR结果表明 :PeroxiredoxinIImRNA在GV卵中处高水平 ,从MII卵开始略有下降 ,在 4 细胞胚和早期囊胚期间未检到。免疫细胞化学染色显示 :GV卵、MII卵、1 细胞胚、2 细胞胚、4 细胞胚、8 细胞胚、桑椹胚和早期囊胚均呈PeroxiredoxinII阳性反应。　结论　PeroxiredoxinIImRN     

Peroxiredoxin Ⅱ mRNA在小鼠卵泡发育中定位的研究

目的观察PeroxiredoxinⅡmRNA在小鼠卵巢各级卵泡和MII卵中的分布，为了解PeroxiredoxinⅡ在卵母细胞发育及成熟过程中的功能意义提供形态学依据。方法原位杂交方法。结果在小鼠卵巢内，原始卵泡的初级卵母细胞未检到PeroxiredoxinⅡmRNA的杂交信号，初级卵泡的初级卵母细胞可检到杂交信号，次级卵泡和近成熟卵泡中卵母细胞的信号明显增强。离开卵巢的GV卵也能检到较强的杂交信号，排到输卵管的次级卵母细胞(MII卵)杂交信号与GV卵相比明显减弱。从原始卵泡到近成熟卵泡周围的卵泡细胞均可检到杂交信号，其信号强度在卵泡发育成熟过程中未见有明显变化。卵母细胞和卵泡细胞的PeroxiredoxinⅡmRNA杂交信号均分布在胞质。结论提示PeroxiredoxinⅡ可能参与了卵母细胞生长发育和卵母细胞成熟过程的调节。     

阻滞和非阻滞品系小鼠次级卵母细胞基因表达水平的比较

目的:通过基因芯片检测阻滞品系昆明(KM)小鼠和非阻滞品系B6C3F1小鼠次级卵母细胞(MⅡ卵)基因表达差异,探讨KM小鼠植入前胚体外发育阻滞是否与母源基因表达差异相关。方法:分别收集KM小鼠和B6C3F1小鼠MⅡ卵,运用基因芯片分析和real-time PCR验证,母源基因的差异表达。结果:基因芯片检测共筛出差异表达基因995个,其中B6C3F1小鼠MⅡ卵上调基因有793个;下调基因有202个。B6C3F1小鼠MⅡ卵表达上调的基因主要与调节基因转录、蛋白质合成与转运、氧化还原、生长因子等相关。结论:KM与B6C3F1小鼠植入前胚体外发育潜能不同可能与母源基因表达差异相关。     

肝癌组织差异表达基因cDNA序列的筛选与鉴定

目的：筛选并鉴定肝癌组织特异表达基因。方法：通过菌落原位杂交技术筛选用抑制消减杂交法构建肝癌与癌旁肝组织差异表达基因消减cDNA文库，用PCR方法进一步筛选出有插入片段的阳性克隆，将阳性克隆进行DNA测序和同源性比较分析，用Northern印迹方法对新的cDNA序列进行初步鉴定。结果：从消减文库中随机挑取的100个白色克隆中筛选出13个阳性克隆，DNA测序获得11个不同的cDNA序列；同源性比较分析表明，6个cDNA片段与在基因高度同源，5个cDNA片段为新的序列。其长度大于300bp的3个新序列，Norther印迹证实它都来源于肝癌组织。结论：用抑制消减杂交方法构建的肝癌差异表达基因消减cDNA文库富含肝癌特异表达基因，经验证的3个新的cDNA序列可能为肝癌特异的基因序列。     

体外培养的人卵母细胞的超微结构

目的探讨体外培养的人卵母细胞的超微结构。方法用光镜观察体外培养前生发泡期（GV期）、培养后生发泡破裂但仍处于MⅠ期的未成熟卵母细胞和达到MⅡ期的成熟卵母细胞的形态，并将成熟卵母细胞分为优质与非优质；用透射电镜观察卵母细胞的超微结构。结果GV期卵母细胞微绒毛短小稀少；核偏一侧，核仁致密。培养后卵母细胞微绒毛粗大增多，细胞器丰富，高尔基体周围有许多分泌小泡；线粒体和脂滴伴行；卵丘细胞的胞质突起与卵母细胞的微绒毛问形成缝隙连接，卵丘细胞之间形成较多桥粒。成熟的卵母细胞粗面内质网、高尔基体减少，滑面内质网发达，线粒体幼稚化，脂滴融合，皮质颗粒沿质膜下呈线性排列，细胞连接减少，第一极体含多种细胞器。非优质卵母细胞线粒体大量存在膜和嵴模糊、膨大的现象，有的极体碎裂，透明带形态不正常，其周围卵丘细胞的凋亡率较高。结论揭示了体外培养的不同时期、不同质量的人卵母细胞的超微结构。     

溶酶体4次穿膜蛋白β在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达

目的 观察溶酶体4次穿膜蛋白β(LAPTM4β)在小鼠卵母细胞及早期胚卵中的表达,分析新基因LAPTM4β在植入前胚卵发育中的作用,为研究植入前胚卵发育的基因调控提供实验依据.方法 从50只小鼠的子宫或输卵管中收集小鼠卵母细胞及从原核期到胚泡的早期胚卵共50枚.采用激光扫描共焦显微镜技术与免疫组织化学ABC法,观察小鼠卵母细胞及早期胚卵中LAPTM4β的表达;表达结果用Maticam2206图像分析系统进行半定量分析.结果激光扫描共焦显微镜下显示,小鼠卵母细胞和原核期胚卵细胞质的绿色荧光呈不均匀分布,近细胞膜处荧光信号强;2细胞期、4细胞期、8细胞期和桑椹胚卵裂球胞质中绿色荧光均呈局灶性分布,且靠近细胞膜处胞质中绿色荧光均较强,2细胞期中所见极体内也有绿色荧光信号;小鼠胚泡滋养层细胞及内细胞团中均可见中等强度的绿色荧光.免疫组织化学显示,在小鼠卵母细胞中可见LAPTM4β阳性反应颗粒呈浅棕色;原核期、2细胞期、4细胞期、8细胞期胚及桑椹胚,可见深棕色颗粒,且在卵裂球胞质中呈不均匀分布;胚泡的内细胞团及滋养层细胞中均可见棕色阳性反应颗粒.图像分析结果显示,卵母细胞与原核期胚相比,8细胞期与桑椹胚相比,桑椹胚与胚泡相比,LAPTM4β的表达量有显著差异(P<0.05).结论 LAPTM4β在正常小鼠卵母细胞及植入前各期胚卵中均有表达,且具有规律性;不同阶段早期胚卵中LAPTM4β的表达量均高于卵母细胞,推测IAPTM4β与小鼠早期胚卵的细胞分裂、增殖、分化及胚胎发育相关.     

通过差减文库筛选文昌鱼神经胚中特异表达的基因

目的:构建文昌鱼12 h神经胚与6 h原肠胚的差减cDNA文库,以期从中挑选出在神经、肌肉、体轴发育过程中特异表达的基因,以便对文昌鱼早期胚胎的发育调控机制进行进一步研究。方法:分别从文昌鱼12 h胚胎和6 h胚胎提取总RNA,反转录成cDNA,以文昌鱼12 h胚胎的cDNA作为tester,并以6 h胚胎的cDNA作为driver,经过两轮杂交和抑制性PCR扩增,产物与T载体连接,经蓝白斑筛选,提取质粒DNA,EcoR I酶切鉴定插入片段,由此构建文昌鱼早期两个不同发育时期的差减cDNA文库。结果:对200个文库克隆进行了测序,筛选到一些可能在文昌鱼12 h神经胚中特异表达的基因。结论:成功构建了文昌鱼12 h/6 h胚胎差减cDNA文库,所获得的12 h神经胚中特异表达的基因,为进一步对文昌鱼早期发育调控机制进行研究提供了材料。     

胚胎不同器官的细胞连接蛋白基因表达研究

目的 探索胚胎不同分化阶段、不同器官中细胞连接蛋白基因的表达规律及其与细胞分化的关系。方法 采用Ｃｏｎｎｅｘｉｎ系列基因探针,通过Ｎｏｒｔｈｅｒｎ印迹法,对不同胎龄的不同胚胎器官中Ｃｘ基因表达状态进行了研究。结果 （１）胚肿期肝、胃、肺、肾等器官中Ｃｘ３１、Ｃｘ４６、Ｃｘ３１．１不表达。（２）胚胎不同发育阶段连接蛋白基因呈不同表达状态。如Ｃｘ２６、Ｃｘ４３在３个月胎龄的肝脏中高度表达、Ｃｘ３２从第     

SPECULATIONS ON THE FUNCTION OF IMMUNE RESPONSE GENES

Immune response (Ir) genes linked to genes encoding histocompatibility antigens affect antibody-formation to synthetic polypeptides, weak native antigens and strong native protein antigens given in limiting doses. It has been proposed that the products of such Ir genes function as receptors for antigen on thymus-derived lymphocytes (T-cells) and these products are not immunoglobulin in nature. Ho wever, recent evidence indicates that (a) Ir genes are probably expressed in both T-cells and in bone-marrow-derived lymphocytes (B-cells); (b) IgM immunoglobulin is present on T-cells and functions in the binding of antigen, and (c) T-cells of nonresponder animals possess the capacity to recognize antigen. These results prompted us to consider alternative hypotheses for the function of Ir genes; namely (1)‘tolerance’hypotheses in which response is dominant over non-response, and (2) the possibility that the Ir gene product can act as an amplifier of T-cell function. These hypotheses are discussed within the context of murine studies and in relation to the association of human diseases, notably immunopathic phenomena, with HL-A.     

DEVELOPMENTAL EXPRESSION OF THE MOUSE MHC Q GENES

To investigate the role of class lb genes in the Q region of the mouse major histocompatibility complex (MHC), the developmental expression and foetal tissue distribution of the Q genes were studied in the C57BL/6 mouse. Using RNase protection assays, we examined Q gene expression in a wide spectrum of foetal tissues at different stages of gestation. Q4, Q6 and Q8 were widely expressed in a variety of tissues. In contrast, the expression of Q1 was restricted to the thymus and intestinal epithelium.     

POSSIBLE SEX-CORRELATED TRANSMISSION OF MATERNAL CLASS I HLA HAPLOTYPES

Forty-seven alleles of class I HLA-AB loci (14 for locus A and 33 for locus B) were identified in 787 participants in two groups of unrelated families. Group I included parents and children typed for bone marrow transplantation. Group II included families typed for renal transplantation. Before statistical evaluation, the A locus alleles were grouped into eight classes according to broad specificity, and the B locus alleles were grouped according to HLA epitopes into two classes. Significant differences in HLA-AB haplotype frequencies were found between male and female offspring. When families with children of both sexes were analysed, the frequencies of maternally inherited HLA-AB haplotypes were found to be significantly different in brothers and sisters. The results suggest the possibility that the transmission of specific AB haplotypes from mother to offspring may be correlated to children’s sex. The major histocompatibility complex has been shown to be involved in the expression of H-Y male-specific minor histocompatibility antigens. The possible selection in the transmission of specific maternal HLA-AB haplotypes to male offspring may contribute to the avoidance of maternal cytotoxic reactions toward the male foetus.     

REGULATION OF EXPERIMENTAL AUTOIMMUNE THYROIDITIS: INFLUENCE OF NON-H-2 GENES

Experiments were conducted to investigate the non-H-2 genetic effects on experimental autoimmune thyroiditis (EAT). Strains having C3H or BALB backgroud in general produced higher autoimmune responses to mouse thyroglobulin (MTg) than the B10 or A strains. Comparisons of C3H and B10 congenic strains carrying similar H-2 haplotypes demonstrated that the C3H congenics had significantly higher MTg antibody titres and more severe thyroid damage, even when the strains carry the low responder H-2 haplotypes. These observations show that non-H-2 gene(s) influences EAT, in addition to genes in the MHC.     

不耐热肠毒素和耐热肠毒素基因的融合

用重组基因技术将产肠毒素大肠杆菌（ＥＴＥＣ）的耐热肠毒素（ＳＴａ）基因与不耐热肠毒素Ｂ亚单位（ＬＴ－Ｂ）基因融合。表达的ＬＴＢ／ＳＴａ融合蛋白，既有ＬＴ－Ｂ的抗原性又有ＳＴａ的抗原性。由于基因融合的方式不同，对ＳＴａ的抗原性影响很大，但对ＬＴ－Ｂ的抗原性没有影响。ＬＴ－Ｂ／ＳＴａ融合多肽保留了ＥＴＥｃ肠毒素结合ＧＭ－１神经节甙酯的能力，却仍具有ＳＴａ的生物毒性。     

鸡柔嫩艾美耳球虫发育相关基因的cDNA阵列检测及分析

为从分子水平上了解球虫发育的相关信息,本文以柔嫩艾美耳球虫的4个发育阶段(未孢子化卵囊、孢子化卵囊、子孢子和裂殖子)为试材,分别与本实验室制备的柔嫩艾美耳球虫cDNA阵列进行杂交。经过分析,在4个不同发育阶段共有484个基因特异表达,其中仅79个为功能注释基因,其余为功能未知基因。在子孢子阶段筛选到了以下重要基因:1.糖代谢相关基因如糖原磷酸化酶、葡萄糖酸透性酶和丙酮酸激酶;2.入侵宿主细胞相关基因如微线蛋白2(MIC2)、黏液素和类黏液素蛋白。信号转导相关基因如磷脂酰激醇4激酶在未孢子化卵囊阶段特异低丰度表达,但是根据4个发育阶段杂交数据的趋势线,这些基因在子孢子和裂殖子阶段应高丰度表达。本研究为研制新的抗球虫药物提供了实验依据。     

孕妇血中胎儿细胞在产前诊断中的初步应用──胎儿SRY基因的鉴定

以Ｎｙｃｏｄｅｎｚ和Ｐｒｅｃｏｌｌ作为分离介质，对２３名孕龄为６～４１周，年龄为２１～２８岁的孕妇外周血中胎儿细胞进行了密度梯度离心富集。其中１５名怀男胎孕妇外周血富集前后各类细胞ＳＲＹ基因的ＰＣＲ扩增检查表明，大部分孕妇外周血多核细胞及低密度单个核细胞扩增结果为阳性，与胎儿实际性别符合率分别为８０．０％和９３．３％．这一结果提示：（１）ＰＣＲ分析母血中胎儿细胞单拷贝基因应采用低密度细胞多核细胞，且以前者为优；（２）密度梯度离心法已在一定程度上从母血中富集胎儿细胞，且所获得的细胞已基本上满足了ＰＣＲ扩增单拷贝基因所需的模板量；（３）富集实验证实母血中胎儿细胞大致由多核细胞及低密度单个核细胞两部分组成，而未经富集的孕妇血单个核细胞及高密度细胞中仅有少数几例呈ＳＲＹ阳性，符合率分别为１３．３％和６．７％；提示从未富集的孕妇外周血中按常规方法难以扩增出含量极微的胎儿单拷贝基因。在对３名怀女胎的孕妇外周血富集前后各类细胞共３２份标本进行ＳＲＹ基因的检测时，出现３例假阳性结果，其原因不明，不能排除外源男性ＤＮＡ的污染或前次妊娠的残留胎儿细胞的干扰所致。