苯丙酸诺龙对大鼠成纤维细胞增殖作用的研究

目的　利用培养大鼠成纤维细胞 (fibroblast,FB) ,研究蛋白同化激素苯丙酸诺龙 (nandrolone phenyl-propionate,NP)对创伤后 FB的增殖作用。　方法　 Wistar大鼠致伤后取材行 FB原代培养 ,实验组培养液按 NP用药剂量 0 .5～ 15 .0μg/ ml分为 NP1 ～ NP5共 5组 ,对照组为含 5 %胎牛血清的培养液 ,7d后 MTT法测定不同剂量 NP对FB存活力的影响 ,选作用最大的一组继续实验 ,流式细胞术测定 FB增殖指数。　结果　各 NP组 FB存活值均高于同时间点对照组 ,NP4 组第 1～ 7天差异均有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,NP5组从第 1～ 6天与对照组相比差异有统计学意义 (P<0 .0 5 ) ,而第 7天则无差异 ;流式细胞术检测 FB增殖指数显示 NP组均高于同期对照组 ,差异有统计学意义 (P<0 .0 1)。　结论　蛋白同化激素 NP能够促进 FB的复制增殖 ,且这种增殖作用有剂量依赖性。     

羧甲基壳多糖对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 观察羧甲基壳多糖（carboxymethyl-chitosan，CM-CH）对体外培养的瘢痕疙瘩成纤维细胞（keloid fibroblasts，KFB）增殖和胶原合成的作用，探讨其治疗瘢痕疙瘩的机制。方法 采用四噻唑蓝（methylthiazoletrazolium，MTT）测定法和羟脯氨酸比色法（hydroxyproline，HP）测定不同浓度CM-CH作用KFB后对其增殖和上清液中胶原合成的影响。结果 CM-CH在10、50、100、200μg／ml作用KFB48、72h后，对KFB增殖有明显抑制作用（P〈0．05）。200μg／ml作用24、48、72h后，对KFB增殖抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。CM-CH在10、50、100、200μg／ml对KFB作用48h后，能显著抑制该细胞胶原的合成（P〈0．01）。100、200μg／ml CM-CH抑制作用与曲安萘德组比较差异无统计学意义（P〉0．05）。结论 CM-CH对体外培养的KFB增殖和胶原合成有明显抑制作用，从而提示该物质治疗瘢痕疙瘩具有潜在前景。     

姜黄素对瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的:观察姜黄素对体外培养的人瘢痕疙瘩成纤维细胞增殖及胶原合成的作用,以寻找治疗人瘢痕疙瘩的有效药物。方法:体外培养人瘢痕疙瘩成纤维细胞,分别应用MTT比色法和羟脯氨酸比色法检测姜黄素作用后细胞增殖及胶原合成的变化。结果:和对照组相比,姜黄素能够显著抑制瘢痕疙瘩成纤维细胞的增殖及胶原合成(P<0.01)。结论:姜黄素具有体外抗瘢痕疙瘩的作用,可能成为治疗瘢痕疙瘩的有效药物。     

AcSDKP对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的：探讨N-乙酰基-丝氨酰-天冬氨酰-赖氨酰-脯氨酸（AcSDKP）对人真皮成纤维细胞增殖及胶原合成的影响。方法：人真皮成纤维细胞的原代培养及鉴定后,给予不同浓度AcSDKP（10-7,10-8,10-9,10-10,10-11mol/L）的干预,设立空白对照组。WST-8法检测人真皮成纤维细胞增殖;RT-PCR技术检测人真皮成纤维细胞Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达。结果：与空白对照组相比,10-10mol/LAcSDKP抑制人真皮成纤维细胞增殖作用最强;10-8mol/L和10-9mol/LAcSDKP对Ⅰ、Ⅲ型胶原mRNA表达的抑制作用最显著。结论：本实验发现AcSDKP能够抑制人真皮成纤维细胞增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原的合成,有望为病理性瘢痕的防治提供新方法。     

当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的:探讨当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期及凋亡,用放射免疫法测定胶原合成。结果:1mg/L、4mg/L和16mg/L当归挥发油组与对照组相比G0/G1期细胞、G2/M期减少,显著增加了S期细胞(P<0.05)。凋亡率随当归挥发油浓度增大逐渐增大(P<0.05)。当归挥发油呈剂量和时间依赖性抑制细胞合成胶原(P<0.05或0.01)。结论:当归挥发油抑制成纤维细胞的增殖和胶原合成。     

当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡及胶原合成的影响

目的:探讨当归挥发油对增生性瘢痕成纤维细胞增殖、凋亡和胶原合成的影响。方法:体外培养人增生性瘢痕成纤维细胞,用噻唑蓝比色法检测细胞增殖活性,用流式细胞术分析细胞周期及凋亡,用放射免疫法测定胶原合成。结果:1mg/L、4mg/L和16mg/L当归挥发油组与对照组相比G0/G1期细胞、G2/M期减少,显著增加了S期细胞(P<0.05)。凋亡率随当归挥发油浓度增大逐渐增大(P<0.05)。当归挥发油呈剂量和时间依赖性抑制细胞合成胶原(P<0.05或0.01)。结论:当归挥发油抑制成纤维细胞的增殖和胶原合成。     

血竭素对瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的:研究天然药物血竭素高氯酸盐(dracorhodinperchlorate,Dp)对瘢痕成纤维细胞合成胶原的影响,为开发新的治疗增生性瘢痕的有效药物提供实验依据。方法:以四甲基偶氮唑(MTT)法、吸光度检测法及逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)法分别测定血竭素对成纤维细胞增殖、培养基中的胶原含量以及Ⅰ、Ⅲ型前胶原mRNA表达的影响。结果:MTT法显示血竭素对成纤维细胞的抑制率增高,且呈现浓度和时间依赖性(P<0.05),还能显著降低培养基中可溶性胶原的含量(P<0.05)。RT-PCR法对Ⅰ、Ⅲ型前胶原的mRNA检测显示随着药物浓度增高其表达量降低(P<0.05)。结论:血竭素对瘢痕成纤维细胞的增殖和胶原合成具有显著的抑制作用。     

正常皮肤提取物对成纤维细胞增殖和胶原合成的影响

目的 探讨自体成纤维细胞注射移植后是否出现过度增殖和胶原异常分泌.方法 按照Engel-Catchpole程序制备正常皮肤提取物,在浓度分别为0.0625、0.1250、0.2500、0.5000、1.0000 mg/mlDMEM培养基下,观察对正常成纤维细胞增殖和胶原合成的影响.结果 正常皮肤提取物抑制正常皮肤成纤维细胞的增殖,细胞外胶原的分泌也受一定的影响,受抑制的程度与培养基中皮肤提取物的浓度呈正相关.结论 正常皮肤内存在成纤维细胞增殖和胶原分泌功能的负调节机制,有可能在进行自体成纤维细胞注射移植时发挥作用.     

体外持续培养对瘢痕成纤维细胞胶原合成的影响

目的探讨人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,其胶原合成能力的变化。方法体外持续培养人瘢痕成纤维细胞,检测不同代次细胞的大体形态、羟脯氨酸含量及超微结构的变化,并对比分析。结果第1、6、12、18代瘢痕成纤维细胞的羟脯氨酸(HPr)含量分别为(0.1460±0.0066)、(0.1020±0.0095)、(0.0700±0.0061)、(0.0540±0.0035)mg/L。随着体外培养细胞代次的增多,HPr呈下降趋势,并有相应的超微结构的变化。结论人瘢痕成纤维细胞在体外持续培养时,胶原合成能力逐渐下降,可能与其局部微环境的刺激因子有直接关系。第1～6代为最适实验细胞。     

不同表皮对成纤维细胞增殖及胶原含量的影响

目的 了解不同表皮对成纤维细胞（Fb）增殖的影响，并探寻其机制。方法 将10例增生期瘢痕患者自身的正常皮肤Fb＋正常表皮、瘢痕Fb＋瘢痕表皮进行非接触性共同培养，另培养不加表皮的瘢痕Fb，将这3个培养体系依次设为A、B、C组；另将10例成熟期瘢痕患者的皮肤同法培养，也建立3个培养体系依次为D、E、F组。检测各组Fb培养72h后的细胞数量、培养上清液中I型与Ⅲ型胶原含量及其比值的变化。结果 C组与A组、F组与D组比较，均表现为细胞数显著升高，培养上清液中I、Ⅲ型胶原含量上升，I型与Ⅲ型胶原比值下降（P〈0．05）；B组与C组比较，培养上清液中Ⅲ型胶原含量增高，I型与Ⅲ型胶原的比值下降（P〈0．05），细胞数和I型胶原含量两组相近；E组与F组比较，细胞数显著降低且上清液中I、Ⅲ型胶原含量下降（P〈0．05），两者比值无明显变化。B组与A组、E组与D组比较，细胞数及I、Ⅲ型胶原含量均显著增高（P〈0．05），I型与Ⅲ型胶原的比值均显著下降（A、B组为2．20±0．27、1．16±0．21，D、E组为2．18±0．14、1．93±0．26，P〈0．05）。结论 正常表皮可能通过产生某些活性物质调节Fb增殖及胶原合成，在防止瘢痕增生中发挥重要作用。     

胰岛素及丹参对体外培养成纤维细胞影响的实验研究

为了探讨胰岛素、丹参在伤口愈合过程中对胶原合成与分解代谢的影响，应用人胚皮肤培养成纤维细胞，分设胰岛素组、丹参组及对照组，培养２，４和６天，观察细胞的生长情况。成纤维细胞生长曲线显示：胰岛素组高于对照组，对照组高于丹参组。细胞核分裂率三组分别为１９．６０‰，２．５０‰和３．７７‰。扫描电镜观察发现胰岛素组成纤维细胞周围及表面有大量纤维状物，丹参组成纤维细胞表面光滑，仅有少量纤维状物。认为，胰岛素对成纤维细胞增殖和胶原合成有促进作用，而丹参对成纤维细胞增殖和胶原合成则有抑制作用     

X-线对大鼠皮肤伤口愈合过程中成纤维细胞影响的组织学研究

本实验采用纯系 SD 雌性大鼠为实验动物通过对连续 X-线照射后伤口皮肤组织学研究,观察到 X-线对成纤维细胞的分裂、增殖的抑制作用以手术7天内影响最大。7天～13天也明显于对照组。因此,提出了瘢痕疙瘩、增生性瘢痕切除后,在行放射线照射时应以第4天～7天,并适当前移为宜。     

外源性bFGF对深Ⅱ度烫伤大鼠创面血管内皮细胞增殖与迁移的影响

目的观察大鼠深Ⅱ度烫伤创面敷用bFGF后肉芽组织中血管增殖与迁移情况,以及相关信号蛋白的表达情况.方法 Wistar大鼠133只随机分为正常对照A组(n=7)、单纯烫伤B组(n=42)、bFGF治疗C组(n=42)、c-fos抗体D组(n=42).利用大鼠30%深Ⅱ度烫伤模型,于伤后3、6小时,1、3、7、 14和21天取创面皮肤标本,运用免疫组织化学染色,检测真皮内血管形成的情况,原位杂交和免疫组织化学技术观察血管内皮细胞增殖细胞核抗原(proliferation cell nuclear antigen,PCNA)、黏着斑蛋白激酶(focal adhesion kinase,FAK)及c-fos的表达情况.免疫荧光手段观察细胞外信号调节激酶(extracellular signal-regulated kinase,ERK)在血管形成中的激活情况.结果 B、C组于伤后7天血管内皮细胞增殖明显,14天后FAK的表达也显著增加.损伤后3～6小时ERK的表达增强,随后1～3天,c-fos亦发生相对应的变化.各时间点D组血管内皮细胞PCNA和FAK的表达均减弱,肉芽组织中微血管的数量低于B组.敷用外源性的bFGF后,血管内皮细胞的增殖与前者变化不显著,但FAK的表达较A组增强明显,ERK的表达也显著增加,特别是c-fos也在伤后1～3天呈增强趋势.结论使用外源性bFGF通过ERK信号通路激活c-fos介导血管内皮细胞的迁移活性;肉芽组织中血管形成能力的增强有助于加速创面愈合进程.     

兔肌腱细胞与成纤维细胞生物学特性研究

为了研究在体外培养条件下，肌腱细胞与成纤维细胞的生物特性，按Ｈｅｎｄｅｒｓｏｎ方法作兔肌腱细胞与皮肤成纤维细胞体外培养，观察细胞形态、贴壁时间及延展时间。采用免疫组织化学的方法对细胞合成胶原的类型进行了测定。结果表明：两种细胞未贴壁前均呈圆形，贴壁后呈梭形或多角形。成纤维细胞的贴壁时间、延展时间较肌腱细胞快；贴壁后细胞群体的排列方向，肌腱细胞群体排列趋于一致、规则，成纤维细胞排列呈不规则。肌腱细胞合成Ⅰ型胶原，成纤维细胞合成Ⅰ和Ⅲ型胶原。根据细胞的贴壁时间、延展时间、排列方向及合成胶原类型，可以区分肌腱细胞及成纤维细胞。     

几丁糖抑制人成纤维细胞增殖的实验研究

目的通过研究几丁糖对人成纤维细胞的细胞周期和Ki-67蛋白表达的影响,探讨几丁糖预防手术后组织粘连的机制。方法分别用含0、0.01、0.1、1.0、10.0mg/ml几丁糖的培养液作用于人成纤维细胞48h后,用流式细胞仪检测细胞周期。制作成纤维细胞的细胞爬片,用以上各浓度的含几丁糖培养液作用24h后,行细胞核的Ki-67蛋白免疫组织化学染色,观察细胞核中Ki-67蛋白的表达情况。结果在几丁糖作用下,成纤维细胞的生长在形态上受到明显抑制。几丁糖浓度为1.0、10.0mg/ml时,处于增殖期的成纤维细胞百分率分别为32.3%±5.2%、14.7%±2.9%,均显著低于几丁糖浓度为0时的百分率41.9%±5.8%,具有统计学意义(P<0.05);几丁糖浓度为0.01、0.1mg/ml时,处于增殖期的成纤维细胞百分率分别为39.0%±6.0%、35.5%±3.4%,虽低于几丁糖浓度为0时,但差异无统计学意义(P>0.05)。几丁糖浓度为0.1、1.0、10.0mg/ml时,Ki-67阳性细胞百分率分别为37.3%±3.4%、30.5%±6.2%、17.8%±3.0%,均显著低于几丁糖浓度为0时的57.6%±8.9%,具有统计学意义(P<0.05);几丁糖浓度为0.01mg/ml时,Ki-67阳性细胞百分率为54.1%±8.0%,低于几丁糖浓度为0时,无统计学意义(P>0.05)。结论几丁糖能抑制人成纤维细胞增殖,使处于静止期细胞数量增多,这可能是其预防手术后组织粘连的机制之一。     

成纤维细胞生长因子促进小鼠皮肤伤口愈合的研究

为了探索成纤维细胞生长因子（ｆｉｂｒｏｂｌａｓｔｇｒｏｗｔｈｆａｃｔｏｒ，ＦＧＦ）对创伤愈合的作用设计了本实验。于小鼠背部皮肤制成无菌手术切割伤口。实验组用ＦＧＦ溶液（含ＦＧＦ３００μｇ／ｍｌ，肝素１００μｇ／ｍｌ）０．５ｍｌ，对照组用生理盐水０．５ｍｌ，分别滴入伤口处，然后用无菌纱布包扎，每天换药一次。术后１，３，５，７和１０天观察伤口愈合情况。结果显示：实验组毛细血管和成纤维细胞增生较对照组明显，并提前２～３天达最高峰。表明ＦＧＦ能强有力地促进肉芽组织增生和伤口愈合。     

EFFECTS OF CONTINUOUS STRETCHING ON CELL PROLIFERATION AND COLLAGEN SYNTHESIS IN HUMAN BURN SCARS

Hypertrophic and contracted scars are common complications of deep and partial thickness burns, and the usual way to prevent them is to stretch the burn area actively as well as passively. However, little has been written about the effects of stretching on burn scar tissue at a cellular and molecular level. The stretching usually results in an increased area of skin, and a central question is whether this is caused by stimulation of cell proliferation or decreased cell density, which could lead to impaired quality of the skin. In the present study a new in vitro model was developed and used to study the effects of stretching on the proliferative activity as well as on the synthesis of collagen in human burn scars. Proliferation was measured quantitatively by thymidine incorporation and spatially by immunohistochemistry. The net proliferation in the burn scar was decreased after one day, and significantly decreased after six days of continuous stretching (p = 0.02). However, immunohistochemistry showed increased proliferation in the basal layer of the epidermis while the proliferative activity in the dermal cells was inhibited. Collagen synthesis was decreased after six days of stretching whereas no effect was shown after one day. These findings indicate that static stretching of a human burn scar results in inhibition of proliferation in dermal cells leading to a low cell density in the dermis which, combined with increased collagen synthesis, could lead to reduced biomechanical strength.     

苦参碱对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响

目的：研究苦参碱(Matrine，简称Mat)对人增生性瘢痕成纤维细胞增殖的影响。方法：将Mat以不同浓度梯度作用于体外培养的增生性瘢痕成纤维细胞，测MTT反应的A^0值及LDH值，用免疫组织化学检测Mat用药前后的细胞核内增殖性抗原(proliferatmg cell nuclear antigen，PCNA)的表达。结果：增生性瘢痕成纤维细胞在Mat0．25～100mg／ml范围内呈剂量依赖性增殖抑制，但LDH值无明显改变；PCNA的表达，在Mat作用后明显减弱。结论：Mat在体外能明显抑制增生性瘢痕成纤维细胞的增殖而不引起细胞坏死性改变。     

透明质酸钠对大鼠成肌细胞增殖和分化的影响

目的 研究透明质酸钠对成肌细胞增殖和分化的影响。方法 采用酶消化法将新生SD大鼠骨骼肌组织分离、纯化、原代培养及传代培养；取第3代成肌细胞，分别加入浓度为0．05%、0．1％及0．2％的透明质酸钠溶液作为生长培养基行体外培养为实验A、B及C组，加入常规生长培养基为对照D组，观察各组成肌细胞增殖情况，并采用细胞计数及MTT法绘制生长曲线。另选择0．1%透明质酸钠融合培养基行体外成肌细胞培养，常规融合培养基作对照，观察透明质酸钠对成肌细胞分化功能的影响。结果A、B及C组成肌细胞增殖表现相似，2d时进入对数生长期，4d时均达顶峰；D组成肌细胞于3d时进入对数生长期，5d时细胞数倍增，6d时达顶峰。MTT法所测吸光度（A）值的变化反映成肌细胞的增殖情况，与细胞计数的结果一致，以B组细胞增殖作用最明显，B组A值在2～8d时均高于C、D组（P〈0．05），8d时高于A组（P〈0．05）。0．1％透明质酸钠融合培养基中的成肌细胞融合率较低且上升缓慢，7d时融合率最高，为11．7％；常规融合培养基成肌细胞融合率于6d时达到峰值，约为35．0%。结论 透明质酸钠与成肌细胞的细胞相容性较好，可以作为良好的成肌细胞培养基。     

肝素对大鼠Ⅱ度烧伤创面愈合的影响

目的　研究肝素对大鼠 度烧伤创面愈合的影响。方法　 2 0只 SD大鼠随机分为两组 ,制成2 0 %面积深 度烧伤 ,实验组采用肝素 10 0 U /kg加生理盐水至 1ml皮下注射 ;对照组采用生理盐水 1ml皮下注射 ,每天一次直至创面完全愈合。从大体观察创面愈合天数及全身有无出血现象 ,光镜观察肉芽组织及胶原纤维生长情况 ,电镜观察成纤维细胞生长情况。结果　大鼠全部成活。实验组创面愈合时间为 (2 2 .8± 1.87)天 ,对照组为(2 6 .2± 2 .82 )天 ,实验组创面愈合所需时间明显少于对照组 (P<0 .0 0 5 )。光镜观察发现实验组肉芽组织及胶原纤维生长明显优于对照组。电镜观察发现实验组成纤维细胞生长优于对照组。结论　肝素皮下注射能加速创面愈合。