松果菊苷对db/db糖尿病小鼠心肌细胞脂质代谢紊乱的改善作用

目的 探究肉苁蓉提取物松果菊苷(echinacoside)对糖尿病心肌病db/db小鼠模型心肌细胞糖脂代谢紊乱是否具有保护作用及可能作用机制。方法 将29只SPF级6周龄雄性db/db小鼠和db/m小鼠,适应性饲养1周后,按照数字表法随机取9只db/m小鼠作为正常对照组(db/m组,n=9),将db/db小鼠分为糖尿病心肌病组(db/db组,n=10)和松果菊苷干预组(db/db+ECH组,n=10)。其中db/db组和db/m组每天按照0.05ml/10g标准进行0.9%NaCl溶液灌胃10周。db/db+ECH组小鼠按松果菊苷300mg/(kg·d)灌胃干预10周。每周监测各组小鼠体质量,观察小鼠摄食、饮水及活动情况。于小鼠第18周龄用2%戊巴比妥钠腹腔注射麻醉小鼠并处死,取尾静脉血测定空腹血糖(FBG);分离血清检测各组小鼠血清脂质水平变化;采用HE染色观察心肌组织病理改变;苏丹红Ⅱ染色观察心肌细胞脂质蓄积情况;免疫印迹(Western blot)法检测糖脂代谢相关蛋白PPAR-α、CPT -Ⅰ、CD36和GLUT-4的表达水平;real-time PCR测定心肌细胞PPAR-α、CPT -Ⅰ、CD36和GLUT-4 mRNA的表达水平。结果 与db/m组比较,db/db组小鼠体质量、血糖和血脂水平显著升高(P＜0.05);同时HE染色切片显示,与db/m组比较,db/db组小鼠心肌细胞可见明显的肥大、坏死,心肌细胞排列结构紊乱;而db/db+ECH组小鼠心肌细胞形态有所缓解,细胞间隙减少,排列较规则。苏丹红Ⅱ染色观测心肌细胞脂质蓄积结果提示相较于db/m组,db/db组小鼠心肌细胞发生严重的脂质变性,可见不同大小的脂质液泡,同时伴有PPAR-α、CPT -Ⅰ和GLUT-4蛋白表达量显著降低(P＜0.01),CD36蛋白表达量显著增加(P＜0.01),且PPAR-α、CPT -Ⅰ、GLUT-4 mRNA表达量明显降低,CD36 mRNA水平上调(P＜0.01)。与db/db组比较,db/db+ECH组上述指标均有明显逆转,且切片观察小鼠心肌细胞脂质沉积显著减少。结论 松果菊苷能够明显改善db/db小鼠心肌细胞糖脂代谢紊乱,其机制可能与通过调控PPAR-α/CPT -Ⅰ信号转导途径有关。     

石斛合剂对db/bd小鼠糖尿病肾病水代谢的调节

目的观察石斛合剂对db/db糖尿病肾病小鼠水代谢相关指标的影响。方法选用8～9周龄雄性db/db小鼠,按空腹血糖及体质量随机分成模型组、六味地黄丸组、石斛合剂低、高剂量组,db/m小鼠为正常组。除模型组和正常组灌生理盐水外,其余各组灌胃相应的药物,连续给药8周。实验期间,分别于第0周、4周、8周测定各组空腹血糖（FBG）,实验结束后测定血清肌酐（Scr）、尿素氮（BUN）含量,观察肾病理变化,并用免疫荧光和Western-blot法检测AQP2、AQP3的表达。结果与模型组比较,石斛合剂低、高剂量组和六味地黄丸组干预8周后,都可以显著降低db/db小鼠的空腹血糖,并降低血清中Scr和BUN（P<0.05或P<0.01）;模型组AQP2、AQP3的蛋白表达较正常组明显升高（P<0.01）,石斛合剂高剂量组可下调AQP2、AQP3的异常高表达（P<0.05或P<0.01）。结论石斛合剂能有效改善db/db糖尿病小鼠的高血糖和肾功能,其对糖尿病肾病的防治作用可能与调节水通道蛋白的表达相关。     

基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠早期生物学特性研究

目的 研究基因缺陷型2型糖尿病模型动物db/db小鼠的早期生物学特性,为db/db小鼠应用于降糖药物的研究奠定基础。方法 采用db/db小鼠为模型组动物,db/m小鼠为对照组动物,测定两组小鼠的体质量、食量、饮水量、空腹血糖、正常饮食血糖、糖耐量、胰岛素耐量;于第14周眼底静脉丛取血,分离血清,测定糖化血清蛋白（GSP）、三酰甘油（TG）、总胆固醇（TC）;取肝、胰腺、腹部脂肪等主要脏器组织进行组织病理学检查。结果 与对照组比较,db/db小鼠体质量、食量、饮水量显著增加;空腹血糖及正常饮食血糖显著升高,整个实验期血糖水平稳定;糖耐量异常、胰岛素耐量异常,对外源胰岛素敏感性显著降低;血清GSP、TG、TC含量显著升高,腹部脂肪质量显著增加,肝组织不同程度的空泡变性,脂肪组织中脂肪细胞体积增大,胰腺中胰岛细胞胞浆减少、血管扩张。结论 db/db小鼠早期脂质代谢紊乱,血糖、血脂显著升高,糖耐量及胰岛素耐量异常,血糖水平稳定,是研究2型糖尿病较为理想的模型。     

NNC 55-0396对db/db小鼠的降糖作用及其机制

目的探讨NNC 55-0396对db/db糖尿病小鼠的降糖作用及其机制。方法取8周龄雄性野生型非糖尿病小鼠及db/db糖尿病鼠各12只,分别按随机数字表法为2组,共4组:野生安慰剂组、野生NNC干预组、db/db安慰剂组及db/db NNC干预组(n=6)。NNC干预组均予30 mg/(kg.d)剂量NNC 55-0396腹腔注射,安慰剂组予等体积生理盐水腹腔注射,干预1周;比较实验动物药物干预前后血糖、体质量、胰岛素及总胆固醇的变化水平,并用免疫组织化学法及Western blot检测T型钙通道特异性亚基Cav3.1及Cav3.2表达水平。结果①与db/db安慰剂组比较,db/db NNC干预组空腹血糖水平显著下降(P<0.01),而野生安慰剂组和野生NNC干预组之间差异无统计学意义(P>0.05);②与db/db安慰剂组比较,db/db NNC干预组体质量、胰岛素及胆固醇水平均明显降低(P<0.05);③NNC 55-0396显著下调db/db糖尿病鼠Cav3.1及Cav3.2在肝脏及脑组织中的蛋白表达水平(P<0.05)。结论 NNC 55-0396通过调节小鼠体内钙离子水平产生降血糖作用。     

红芪多糖对早期糖尿病肾病db/db小鼠肾间质纤维化的影响

目的通过研究红芪多糖(HPS)对早期糖尿病肾病(DN)db/db小鼠肾组织中转化生长因子-β1(TGF-β1)与结缔组织生长因子(CTGF)表达的影响,探讨HPS对早期DN小鼠肾脏的保护作用机制。方法 SPF级6周龄雄性小鼠60只,其中db/db小鼠50只,用随机数字表法分为5组:HPS高、中、低剂量组(200、100、50 mg/kg HPS溶液灌胃)、替米沙坦组(5 mg/kg替米沙坦溶液灌胃)、模型组(等体积蒸馏水灌胃),每组10只;db/m小鼠10只,作为正常对照组,给予等体积蒸馏水灌胃。连续灌胃8周,于治疗前及治疗后每2周检测血糖浓度,第4周末及第8周末收集小鼠24 h尿液,ELISA法检24 h尿微量白蛋白水平。框后静脉取血,血清用于检测血清肌酐(Scr)、尿素氮(BUN)。处死小鼠,剥离肾脏,左肾皮质用于HE染色,观察肾脏病理学变化;右肾皮质用于RT-PCR、Western blotting检测肾组织TGF-β1及CTGF mRNA和蛋白的表达量。结果与正常组比较,模型组小鼠血糖、Scr、BUN 24 h尿微量白蛋白水平显著升高(P0.01);肾小球肥大,系膜区明显增宽,毛细血管基底膜增厚;TGF-β1及CTGF mRNA和蛋白的表达水平显著升高(P0.01)。与模型组比较,除HPS低剂量组外(P0.05),其余各治疗组小鼠血糖、Scr、BUN和24 h尿微量白蛋白水平均明显下降(P0.05);肾小球肥大,系膜区明显增宽,毛细血管基底膜增厚情况均有不同程度改善;TGF-β1及CTGF mRNA和蛋白的表达水平明显降低(P0.01);HPS中剂量组疗效明显优于替米沙坦组。结论 HPS能够防治db/db小鼠早期DN,其机制可能与HPS抑制TGF-β1及CTGF mRNA在肾脏的表达有关。     

荞麦花叶发酵提取物对2型糖尿病db/db小鼠肾损伤的影响

目的：探讨荞麦花叶发酵提取物（EFBFL）对自发肥胖2型糖尿病db/db小鼠肾脏损伤的保护作用,从肾脏过氧化物酶体增殖物激活受体γ（PPARγ）和核因子κB（NF-κB）的蛋白表达水平阐明其可能的机制。方法：选择8周龄雄性db/db小鼠,以同窝db/m小鼠为正常对照组,db/db小鼠随机分为模型组、低剂量EFBFL组和高剂量EFBFL组,每组10只。低和高剂量EFBFL组小鼠分别为给予50和100 mg·kg^-1 EFBFL灌胃,正常对照组和模型组小鼠给予等量蒸馏水灌胃,每天1次,连续8周。于给药前后检测各组小鼠空腹血糖（FBG）,全自动生化分析仪检测血清中血肌酐（SCr）和尿素氮（BUN）水平,计算肾脏指数,通过HE和Masson染色观察小鼠肾组织形态表现,免疫组织化学法和Western blotting法检测小鼠肾组织PPARγ和NF-κB蛋白表达水平。结果：与模型组比较,EFBFL组小鼠FBG及血清中SCr、BUN水平明显降低（P<0.05或P<0.01）,肾脏指数增加（P<0.01）。与正常对照组比较,模型组小鼠肾组织中肾小球萎缩,肾小球基底膜弥漫性增厚,足突融合甚至消失,肾组织纤维化程度严重;与模型组比较,EFBFL组小鼠上述表现不同程度改善,以高剂量EFBFL组尤为明显。与模型组比较,EFBFL组小鼠肾组织PPARγ蛋白表达水平升高（P<0.05或P<0.01）,NF-κB蛋白表达水平降低（P<0.05或P<0.01）。结论：EFBFL可改善自发肥胖2型糖尿病db/db小鼠肾损伤,其机制可能与降低小鼠血糖、促进肾PPARγ蛋白的表达及下调NF-κB的蛋白表达有关。     

老年db/db小鼠生存状态的评价研究

目的 探讨老年db/db小鼠生存特征和生存质量。方法 以db/db小鼠作为2型糖尿病模型,对老年db/db小鼠摄食量、体质量、饮水量和尿量、自主活动次数以及血糖水平进行测定,并且对其生存率进行评价。结果 老年db/db小鼠体质量和摄食量随着生命进程呈下降趋势。db/db小鼠肾周脂肪和睾周脂肪显著高于db/m小鼠(P<0.05),但其腓肠肌含量显著低于db/m小鼠(P<0.05)。db/db小鼠5min内自主活动的累计时长和单次最大时长分别为db/m小鼠的1/5和1/6。db/db小鼠血糖显著高于db/m小鼠。当db/db小鼠<81周,其存活率恒定为73%,>84周,存活率降为0。结论 老年db/db小鼠具备2型糖尿病的典型症状,其生存质量较差,并且寿命缩短,本研究对db/db小鼠生命进程的深入研究提供了理论依据。     

恒古骨伤愈合剂对db/db小鼠的降血糖和改善肠道菌群作用研究

目的 探索恒古骨伤愈合剂对db/db小鼠血糖和肠道微生物的影响。方法 将野生型小鼠作为对照组,db/db小鼠随机分为模型组和恒古骨伤愈合剂治疗组;灌胃给药12周后,检测空腹血糖、血清糖化血红蛋白和胰岛素含量,使用16S rDNA技术分析小鼠肠内容物菌群变化及预测菌群功能。结果 与模型组比较,恒古骨伤愈合剂降低db/db小鼠空腹血糖(P<0.01)、血清糖化血红蛋白(P<0.01)、胰岛素抵抗指数(P<0.01),升高胰岛素含量(P<0.01);恒古骨伤愈合剂增加db/db小鼠盲结肠有益菌丰度,降低害菌丰度,其中马文氏菌属的丰度显著升高(P<0.01);恒古骨伤愈合剂抑制了db/db小鼠菌群D-精氨酸和D-鸟氨酸代谢、鞘脂代谢、半乳糖代谢的降低及赖氨酸降解、硫中继系统、丙酸代谢的升高(P<0.05)。结论 恒古骨伤愈合剂具有降血糖功效和调节db/db小鼠肠道微生态平衡的作用。     

氯原酸对db/db小鼠糖脂代谢紊乱的影响及其作用机制

目的 研究氯原酸(CGA)对自发性肥胖糖尿病db/db小鼠糖脂代谢紊乱的影响及其作用机制.方法 将13只5～6周龄雄性db/db小鼠随机分为db/db-CGA组(n=7)和db/db-CON组(n=6),13只5～6周龄雄性db/m小鼠随机分为db/m-CGA组(n=6)和db/m-CON组(n=7);CGA组均给予80mg/(kg·d)CGA灌胃,CON组均给予等体积PBS灌胃.12周后检测血浆、肝脏、骨骼肌中糖脂生化指标,内脏脂肪组织中脂联素和内脂素含量,肝脏葡萄糖-6-磷酸酶(G-6-Pase)和过氧化物酶体增殖物激活受体-α(PPAR-α)的mRNA水平及其蛋白表达.结果 给予CGA12周后,db/db-CGA组小鼠血浆、肝脏和骨骼肌中三酰甘油含量和空腹血糖均明显低于db/db-CON组(P均＜0.05),肌糖原含量明显高于db/db-CON组(P＜0.05);脂联素水平明显高于db/db-CON组(P＜0.01),低于db/m-CGA组(P＜0.05);内脂素水平明显低于db/db-CON组(P＜0.01),高于db/m-CGA组(P＜0.05);G-6-Pase mRNA表达水平较db/db-CON组明显下降(P＜0.05),PPAR-α mRNA和蛋白表达水平均较db/db-CON组明显升高(P＜0.05).结论 CGA可改善自发性肥胖糖尿病小鼠糖脂代谢紊乱,其机理可能与调节脂肪因子分泌,上调肝脏PPAR-α水平及抑制G-6-Pase表达有关.     

红芪多糖对db／db小鼠糖尿病心肌病TGF-β1／Smads信号通路影响的实验研究

目的通过研究红芪多糖(HPS)对db/db小鼠糖尿病心肌病(DCM)心肌组织中TGF-β1/Smads信号通路的影响,探讨其对DCM小鼠心肌纤维化的影响。方法将60只6周龄雄性db/db小鼠随机分为5组:HPS高、中、低剂量组,罗格列酮组和模型组;正常组为12只同周龄同背景的非转基因雄性db/m小鼠。连续灌胃干预8周。于给药前及给药后第2、4、6、8周末检测各组小鼠体重、血糖;HE染色观察小鼠左心室心肌纤维病理形态学变化;Masson染色观察小鼠左心室心肌胶原纤维化程度;Western blot、RT-PCR法检测心肌组织TGF-β_1及Smad2、Smad3蛋白和mRNA的表达。结果经HPS治疗8周后,HPS高、中剂量组和罗格列酮组血糖较模型组下降明显(P0.05);HE染色可见模型组心肌细胞结构模糊,部分区域明显肿胀变形且细胞核消失;Masson染色可见亮绿色胶原纤维在模型组心肌细胞间及血管周围较正常组明显增多且呈堆积状分布;模型组TGF-β_1及Smad2、Smad3蛋白及mRNA的表达水平与HPS低剂量组无显著差异(P0.05),其余各治疗组较模型组明显降低(P0.05),其中HPS高剂量组和罗格列酮组改善更明显(P0.05)。结论 HPS可改善db/db小鼠DCM心肌纤维化的程度,延缓DCM病情进展,其作用机制可能与其抑制TGF-β_1/Smads信号通路有关。     

2型糖尿病db/db小鼠的生物学特性

目的观察db/db小鼠的生物学特性,为该品系动物的实验研究应用提供基础。方法采用自发性2型糖尿病BKS.Cg-Dock7~(m+/+)Lepr~(db)/JNju小鼠和野生型小鼠,于8、12、16、20和24周龄时测定空腹血糖值,10、12、16、20和24周龄时测定体质量,并于24周龄时测定血清胰岛素、总胆固醇和甘油三酯水平,检测脏器质量和肝脏系数,并进行组织病理学观察。结果 db/db小鼠的空腹血糖值和体质量始终维持着较高的水平;血清胰岛素、总胆固醇和甘油三酯水平,以及肝脏和肾脏质量均明显高于野生型小鼠;24周龄db/db小鼠的胰腺和肝脏组织可见明显病理改变。结论 db/db小鼠具有明显的高血糖、高血脂、高胰岛素血症等2型糖尿病特征,是进行2型糖尿病实验研究的理想的动物模型。     

db/db小鼠的繁育及其胰岛的分离纯化

目的研究db/db自发性II型糖尿病(T2DM)小鼠的饲育方法、胰岛的分离纯化及其胰岛功能的检测。方法杂合子(+/db)采用自然交配,饲养于屏障环境中,常规全价营养饲料喂养。采用胰总管逆行灌注的方法分离胰腺,Ficoll-400密度梯度离心法纯化胰岛。结果 db/db小鼠占繁殖总数的1/2,其中以第4胎产子数最多,4胎后逐渐下降。纯化后的胰岛在倒置显微镜下呈圆形或卵圆形,纯度>90%,体外释放试验提示胰岛B细胞功能较差。结论屏障环境中db/db小鼠稳定繁殖,可成功分离出小鼠的胰岛并将其纯化。     

山茱萸总萜对db/db糖尿病小鼠的降血糖作用

为评价山茱萸总萜对2型糖尿病的降血糖作用,对db/db糖尿病小鼠每日灌胃给予25,50,100 mg/kg山茱萸总萜共10周,每2周眼眶采血测定空腹血糖1次。于末次给药24 h后采血测定空腹血糖、胰岛素(Ins)、糖化血清蛋白(GSP)、总胆固醇(TC)、三酰甘油(TG)。给药第8和10周分别进行葡萄糖和淀粉糖耐量试验。结果显示,给药4周后,山茱萸总萜各剂量组db/db小鼠的空腹血糖有明显降低(P<0.05)。给药10周后,山茱萸总萜25,50,100 mg/kg组db/db小鼠血清中TC、TG水平显著降低(P<0.05),血清糖化蛋白水平明显降低(P<0.05),db/db小鼠的葡萄糖耐量和灌胃淀粉糖耐量也有明显改善(P<0.05)。研究结果提示,山茱萸总萜可调节体内糖、脂等代谢过程,对糖尿病具有一定的治疗作用。     

Effects of phlorizin on vascular complications in diabetes db/db mice

Background  Diabetic macrovascular complications are important causes of cardiovascular and cerebrovascular diseases and also one of the major causes of morbidity and mortality in patients with type 2 diabetes mellitus (T2DM). Phlorizin has been reported to be effective in reducing the blood glucose level in diabetic mellitus, while little is known about its effects on vascular complications. This study aimed to observe the effects of phlorizin on the aorta of diabetes db/db mice and explore its mechanism.

Methods  Diabetic db/db mice (n=16) and age-matched db/m mice (n=8) were divided into three groups: normal control group (CC group, db/m mice, n=8), untreated diabetic group (DM group, db/db mice, n=8) and diabetic group treated by phlorizin (DMT group, db/db mice, n=8). Phlorizin (20 mg/kg body weight) was given in normal saline solution intragastrically for 10 weeks. Animals were weighed weekly. At the 10th weekend, all mice were fasted overnight and then sacrificed. Fasting blood was collected, and the aortas were dissected. The blood samples were analyzed for fasting blood glucose (FBG), serum advanced glycation end products (AGEs), malondialdehyde (MDA) and superoxide dismutase (SOD) activity, the aortic ultrastructure was studied.

Results  The weight and serum concentration of FBG, AGEs, and MDA in the DM group were higher than that in the CC group (P <0.01), and they were significantly lower in the DMT group (P <0.05). Serum SOD activity was lower than that in the CC group (P <0.01), and it is significantly higher in the DMT group (P <0.05). The severity of aorta damage in the DMT group was less than that in the DM group.

Conclusions  Phlorizin protected the db/db mice from diabetic macrovascular complications, attributed to the decreasing of blood glucose and AGEs level, and its antioxidant potential. This study may provide a new natural medicine for treating diabetic macrovascular complications.

     

姜黄素、小檗碱及其配伍对db/db小鼠糖脂代谢的影响

[目的]观察姜黄素、小檗碱分别及其配伍对db/db小鼠糖脂代谢的影响,为中药配伍合理性提供实验依据。[方法]db/db小鼠口服给予姜黄素和小檗碱,28d后,观察分别及其配伍对小鼠体质量、脏器系数、血清基础血糖、糖耐量曲线、总胆固醇、甘油三酯、高密度脂蛋白胆固醇、低密度脂蛋白胆固醇的影响。[结果]各给药组均可显著降低db/db小鼠的肝脏系数(P0.05);姜黄素低剂量(19.5mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组和姜黄素高剂量(39mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组可显著降低db/db小鼠基础血糖(P0.05);姜黄素低剂量(19.5mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组和姜黄素高剂量(39mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组可显著调节改善db/db小鼠糖耐量曲线(P0.05);姜黄素低剂量(19.5mg/kg)组、姜黄素高剂量(39mg/kg)小檗碱低剂量(72mg/kg)配伍组和姜黄素低剂量(19.5mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组可明显降低db/db小鼠甘油三酯的水平(P0.05)。[结论]将小檗碱和姜黄素进行配伍组合,其改善db/db小鼠的糖脂代谢紊乱的作用优于单独给药组,且姜黄素低剂量(19.5mg/kg)小檗碱高剂量(144mg/kg)配伍组综合表现出更为明显的疗效。     

2型糖尿病db/db小鼠肾脏动态病理特点

目的：探讨2型糖尿病db/db小鼠肾脏动态病理特点,阐明其糖尿病肾病的发生发展机制,为糖尿病肾脏并发症的研究提供实验依据。方法：选取SPF级7~8周龄雄性db/db小鼠（模型组）和同龄雄性db/m小鼠（正常组）各16只,分别于8、16和32周龄时检测2组小鼠体质量和空腹血糖（FBG）水平,每组各处死小鼠8只,取肾组织行HE和Masson染色观察其病理形态表现,电镜下观察其超微结构。结果：与正常组比较,模型组小鼠8、16和32周龄时体质量增大（P<0.01）,FBG水平明显升高（P<0.01）,双肾指数明显降低（P<0.01）;32周时模型组小鼠双肾指数明显低于16周时（P<0.05）。HE和Masson染色,16周龄时模型组小鼠肾组织可见明显病理改变,主要是肾小球体积增大和肾小管上皮细胞明显水肿;32周龄时病变明显加重,肾组织中可见大量蓝染胶原物质。电镜观察,16周龄时模型组小鼠肾组织以肾小球基底增厚、足突融合、肾小管上皮细胞线粒体数目减少及形态肿胀为主;32周龄时病变明显加重,可见大量胶原纤维。结论：16周龄糖尿病db/db小鼠肾脏有明显病理改变,主要是肾小球基底增厚、足突融合,32周龄时小鼠肾组织呈明显纤维化。