消瘤方对子宫内膜异位症患者子宫内膜基质细胞NF-κB/MAPK信号通路的影响

目的:探讨中药消瘤方对子宫内膜异位症(endometriosis,EMs)患者在位和异位内膜基质细胞核转录因子(NF)-κB/丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的影响。方法:采用改良筛网法原代分离、培养EMs患者在位、异位及正常人子宫内膜基质细胞;将分离出的子宫内膜细胞分为正常组、在位组和异位组,其中在位和异位组再随机分为空白对照组(生理盐水组)、西药对照组(孕三烯酮组)、中药低剂量组(消瘤方提取物5 g/L组)及高剂量组(消瘤方提取物10 g/L组),各组分别加入相应药物干预后采用RT-PCR方法检测内膜细胞NF-κB/MAPK因子的表达水平。结果:药物干预后发现,消瘤方高剂量组和西药组可抑制在位及异位子宫内膜细胞的NF-κB/MAPK p38信号因子的激活,降低NF-κB/MAPK p38因子的表达,差异具有统计学意义(P0.01,P0.05)。结论:子宫内膜异位症的发生与NF-κB/MAPK信号通路的激活密切相关,消瘤方可通过抑制子宫内膜细胞NF-κB/MAPK信号通路因子的表达,从而阻止内异灶的形成而起到治疗的作用。     

阻断Wnt/β-catenin信号通路对17β-雌二醇作用后子宫内膜异位症患者在位子宫内膜间质细胞活化的影响

目的 探讨17β-雌二醇(17β-E2)作用后子宫内膜异位症(内异症)患者在位子宫内膜间质细胞(endometrial stromal cell,ESC)内是否存在功能性Wnt/β-catenin信号通路的激活,以及阻断该信号通路对ESC活化的影响.方法 体外分离培养内异症患者在位ESC,用0.1 nmol/L 17β-E2处理ESC 48 h.免疫细胞化学染色检测17β-E2作用后β-cate-nin在ESC中的表达.通过转染T细胞因子(T-cell facter,TCF)依赖的荧光索酶报告质粒(PGL3一OT)检测ESC内的Wnt/β-catenin信号,以PGL3-OF为阴性对照.将TCF的显性负性突变体(dominant negative TCF,dnTCF)表达质粒转染ESC,阻断Wnt/β-catenin信号的转导,用Western blot法检测ESC血管内皮生长因子(VEGF)和基质金属蛋白酶9(MMP-9)表达变化.结果 免疫细胞化学染色发现17β-E2能促进β-catenin在ESC核内的表达.17β-E2(0.1 nmol/L)作用后,转染相同量的质粒,PGL3-OT组细胞荧光活性明显高于PGL3-OF组(P<0.01).Western blot检测结果显示17β-E2能明显促进ESC VEGF和MMP-9的表达;转染dnTCF-3阻断Wnt/β-catenin信号通路,ESC中VEGF和MMP-9的表达较转染空载体(pcDNA3)组均显著下降(均P<0.01).结论 17β-E2能促进内异症患者ESC Wnt/β-catenin信号通路的激活,阻断该信号通路可抑制ESC的活化.     

Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59抑制子宫内膜异位症子宫内膜干细胞的增殖

目的分析Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59对子宫内膜异位症(EM)子宫内膜干细胞增殖的影响。 方法分离纯化获得子宫内膜干细胞,随机分为对照组、低剂量组(5 mmol/L Wnt-C59)和高剂量组(30 mmol/L Wnt-C59)。MTT法分析各组细胞增殖情况,Western blotting法分析细胞凋亡蛋白及Wnt/β-catenin通路蛋白的表达变化,酶联免疫吸附测定法分析LC3、Beclin1水平变化。结果与对照组比较,低剂量组和高剂量组细胞增殖受到明显抑制,Wnt3a及β-catenin蛋白水平明显降低,细胞凋亡蛋白Caspase-3及Caspase-9水平明显升高,LC3、Beclin1蛋白水平明显升高(P＜0.05),且高剂量组均更为明显(P＜0.05)。Pearson相关性分析显示,Wnt3a及β-catenin蛋白水平均与细胞增殖抑制率呈负相关(P＜0.05)。结论Wnt/β-catenin通路抑制剂Wnt-C59能有效抑制EM子宫内膜干细胞增殖,促进其凋亡、自噬作用,其作用可能与其对Wnt/β-catenin信号通路的抑制有关。     

消异方对子宫内膜异位症模型大鼠NGF表达的影响

目的：观察消异方对子宫内膜异位症大鼠异位内膜NGF表达的影响,初步探讨消异方治疗子宫内膜异位症的机制。方法：采用自体手术移植法建立大鼠子宫内膜异位症模型,随机分为模型组、米非司酮组、散结镇痛胶囊组、消异方低、中、高剂量组。造模成功各组给药4周,免疫组化方法检测大鼠异位子宫内膜组织NGF的表达情况。结果：模型组异位内膜中NGF的表达水平明显高于米非司酮组、散结镇痛胶囊组和中药消异方各剂量组（P〈0.05）。结论：消异方能降低大鼠子宫内膜NGF的含量,抑制异位内膜生成,以达到预防和治疗子宫内膜异位症的作用。     

消异方治疗子宫内膜异位症痛经疗效观察

目的：观察消异方治疗子宫内膜异位症痛经的临床疗效。方法子宫内膜异位症痛经患者60例,随机分为两组,治疗组30例给予消异方胶囊治疗,对照组30例给予散结镇痛胶囊治疗,疗程均为3个月经周期。观察治疗前、后两组患者痛经疼痛视觉模拟评分（VAS）、血清神经生长因子（NGF）、子宫动脉血流阻力指数（RI）情况。结果治疗后两组VAS疼痛评分均低于治疗前（P＜0．05）,但两组疗效、VAS疼痛评分比较,差异无统计学意义（P＞0．05）;两组治疗后血清NGF、子宫动脉血流的阻力指数均低于治疗前（P＜0．05）,治疗组患者血清NGF水平下降更明显（P＜0．05）。结论应用消异方治疗子宫内膜异位症痛经与散结镇痛胶囊疗效相当,其作用机制可能是与降低血清NGF水平、改善盆腔微循环有关。     

宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症大鼠异位内膜中Bcl-2、Bax蛋白表达的影响

目的:观察宫瘤消胶囊对子宫内膜异位症(内异症)模型大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2、Bax蛋白的表达的影响,为该药治疗内异症提供理论依据。方法:于大鼠动情期行自体移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功后随机分为模型组、桂枝茯苓胶囊组及宫瘤消胶囊小、中、大剂量组,各组分别给予指定药物进行灌胃干预,另取一组正常大鼠为正常内膜组,用生理盐水灌胃。用免疫组织化学法检测各组大鼠异位内膜中凋亡基因Bcl-2和Bax的蛋白表达情况。结果:与正常内膜组比较,模型组Bax蛋白表达明显降低,Bcl-2蛋白的表达明显升高,Bax/Bcl-2比值降低(P0.01);与模型组比较,宫瘤消胶囊各剂量组Bax蛋白表达明显升高,Bcl-2蛋白表达明显降低,Bax/Bcl-2比值增加(P0.05,P0.01),且作用随药物剂量增加而增加(P0.05,P0.01)。结论:宫瘤消胶囊可能通过调节凋亡基因Bcl-2和Bax的表达来实现对异位内膜的凋亡的控制。     

靶向siRNA阻断Wnt/β-catenin信号通路对子宫内膜异位症裸鼠模型异位子宫内膜VEGF和MMP-9表达的影响

目的利用siRNA载体介导的RNA干扰技术靶向沉默β-catenin以阻断Wnt/β-catenin信号通路,观察对子宫内膜异位症裸鼠模型异位子宫内膜血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)和基质金属蛋白酶-9(matrix metalloproteinases-9,MMP-9)表达的影响,探讨Wnt/β-catenin信号通路促进异位内膜组织粘附、侵袭和转移的作用。方法采用人子宫内膜异体移植方法构建子宫内膜异位症裸鼠模型。将18只子宫内膜异位症裸鼠随机分为3组(n=6):siRNA干扰组、阴性对照组和空白对照组,前两组每日分别腹腔注射100μL siRNA转染复合物(含β-catenin siRNA3μg和转染试剂7.5μg)和阴性对照转染复合物(含阴性对照si RNA3μg和转染试剂7.5μg)1次,共注射5次。末次腹腔注射后24 h断颈处死裸鼠,观察盆、腹腔病灶形成情况,取异位病灶标本。Real time PCR和免疫组织化学检测异位内膜组织β-catenin、VEGF和MMP-9 mRNA和蛋白的表达。结果实验裸鼠共20只,18只成模成活。Re...     

Lewis大鼠子宫内膜异位症模型复制

目的　建立子宫内膜异位症 (EMT)的Lewis大鼠动物模型。方法　取Lewis大鼠 4 0只 ,分 3组 ,Ⅰ组 :用手术移植的方法把自体子宫组织块移植到腹膜、肠系膜上 ;Ⅱ组 :分别把子宫角近侧端和远侧端的子宫组织块移植于腹膜上 ;Ⅲ组 :移植同样大小的脂肪组织于腹膜 ,于术后 4、8周 ,再次开腹 ,观察存活情况和病理学变化。结果　腹膜和肠系膜病灶的面积和成活率差异无显著性 (P >0 0 5 ) ,移植远侧端的异位病灶的面积和成活率大于移植近侧端的异位病灶的面积和成活率 (P <0 0 5 ) ,移植物外观呈囊状 ,表面有血管 ,镜下见子宫内膜上皮细胞、间质细胞和腺体 ,类似于正常的内膜 ,但间质细胞层较薄 ,腺体减少。结论　该模型生长快 ,成功率高 ,为研究子宫内膜异位症的较理想的动物模型     

活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢功能及妊娠结局的影响研究

目的 探讨活血消异方对子宫内膜异位症大鼠卵巢功能及妊娠结局的影响。方法 100只雌性SD大鼠适应性喂养7 d,取动情周期正常的大鼠98只,按照体质量随机分为空白组(n=14)、假手术组(n=14)、供体组(n=12)、受体组(n=58)。应用同种异体子宫内膜移植法建立子宫内膜异位症大鼠模型,造模成功的56只受体组大鼠按照体质量随机分为模型组及活血消异方低、中、高剂量组,每组14只。活血消异方低、中、高剂量组分别予5.86、11.72、23.44 g/kg活血消异方灌胃,空白组、假手术组、模型组予蒸馏水灌胃,连续15 d。每组按体质量随机选取6只大鼠取腹主动脉血,酶联免疫吸附测定法检测血清抗米勒管激素(AMH)含量;剩余大鼠每组按体质量随机选取6只行高频小动物超声检查,测定卵巢体积、卵巢动脉血供(阻力指数和搏动指数),并行卵泡计数。雌鼠与雄鼠以2∶1合笼,观察妊娠率、活胎数、死胎数、吸收胎数,测量子宫连胎质量,测量活胎胎盘质量、胎鼠质量、身长、尾长,并对活胎进行骨骼及内脏畸形鉴定。结果 各组大鼠血清AMH含量、卵巢体积比较差异无统计学意义。与模型组比较,空白组,假手术组,活血消异方低、中...     

宫瘤消胶囊治疗子宫内膜异位症气滞血瘀证的临床疗效

目的:观察宫瘤消胶囊治疗子宫内膜异位症气滞血瘀症的临床疗效。方法:选取子宫内膜异位症气滞血瘀症患者119例,按照随机数字表法分为对照组59例与观察组60例。对照组服用孕三烯酮胶囊,观察组加服宫瘤消胶囊,连续治疗6个月经周期,采用视觉模拟评分比较两组经期疼痛情况及治疗疗效。结果:观察组总有效率为90.00%,显著高于对照组的72.88%;观察组在第4、5、6个月经周期,经期疼痛视觉模拟评分值均低于对照组;治疗后,观察组血清CA125、CA199水平及气滞血瘀证评分均低于对照组;在非月经期间,观察组盆腔疼痛、盆腔压痛、性交疼痛及骶韧带触痛结节等症状、体征评分低于对照组,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论:在孕三烯酮胶囊治疗基础上,采用宫瘤消胶囊治疗子宫内膜异位症气滞血瘀症的临床疗效优于单纯孕三烯酮胶囊治疗效果。     

瘦素对体外培养子宫内膜异位细胞生长的影响

目的:探讨瘦素对体外培养的子宫内膜异位细胞增殖及凋亡的影响。方法:体外原代培养人异位子宫内膜细胞、在位内膜细胞及正常内膜细胞,应用MTT比色法(四甲基偶氮唑蓝比色法)检测瘦素对三种细胞增殖情况的影响,并用流式细胞仪检测细胞凋亡情况。结果:除了异位内膜组细胞在1ng/mL浓度瘦素下与对照组相(0ng/mL)比无明显差异外,1、10、100ng/mL浓度的瘦素作用于三种细胞与对照组比较均有明显促进细胞增殖的作用(P<0.05)。三组细胞在不同浓度的瘦素(1、10、100ng/mL)作用下与对照组比较均明显的抑制细胞凋亡,并随剂量增加凋亡率呈下降趋势,差异有显著性(P<0.05)。结论:瘦素能促进子宫内膜异位、在位细胞及正常内膜细胞的增殖并抑制其凋亡。     

大鼠子宫内膜异位症模型的建立和评价

目的 建立大鼠子宫内膜异位症模型及实验方法。方法 手术制备大鼠子宫内膜异位模型，观察形态学改变，配合子宫内膜抗体及雌二醇、孕酮水平的检测。结果 大鼠子宫内膜异位模型组中抗子宫内膜抗体阳性率、血清雌二醇和孕酮均较假手术组及丹那些组为高(P＜0．01)。病理学观察，模型组异位于宫的内膜腺体中腺腔扩大，腺上皮呈柱状或立方形。丹那些治疗组的异位内膜腺体及腺上皮明显萎缩。结论 手术制备大鼠子宫内膜异位症模型，操作简单，价格低廉，成功率高，为寻找治疗异位症的新药提供了药效学研究的模型及评价方法。     

miRNA-221在EMS组织及间质细胞中的表达及对细胞增殖的影响

目的 探讨microRNA-221（miRNA）在子宫内膜异位症（endometriosis,EMS）患者组织及细胞中的表达及对EMS间质细胞增殖的影响。 方法 收集非EMS患者在位内膜（正常子宫内膜）及EMS患者卵巢异位内膜,分离培养及鉴定子宫内膜间质细胞,采用茎环法实时荧光定量PCR（qRT-PCR）检测在位、异位内膜组织及间质细胞中miRNA-221的表达;雌激素（17β-E₂,终浓度为10-8mol/L）刺激间质细胞48 h后检测miR-221-3p表达变化;异位间质细胞转染miR-221-3p inhibitor和inhibitor阴性对照（NC）后,观察其对miR-221-3p、人第10号染色体缺失的磷酸酶及张力蛋白同源基因（PTEN）表达和增殖的影响。 结果 miR-221-3p在EMS组织中的表达为正常子宫内膜组织的4.2倍（P=0.039）,在EMS间质细胞中的表达为正常子宫内膜间质细胞的2.66倍（P=0.029）。与正常子宫内膜组织及间质细胞相比,miR-221-5p在EMS组织及间质细胞中表达差异均无统计学意义（P>0.05）。雌激素处理正常及异位间质细胞48 h后miR-221-3p表达差异无统计学意义。抑制miR-221-3p功能后,异位间质细胞增殖抑制（P=0.018）,PTEN基因表达上调（P=0.021）。 结论 miRNA-221在EMS组织及间质细胞中表达上调,抑制miR-221-3p功能可促进PTEN表达从而抑制EMS间质细胞增殖。     

沙利度胺对大鼠子宫内膜异位症模型血管生成的影响

目的探讨沙利度胺(thalidom ide,THD)对大鼠子宫内膜异位移植物生长和血管生成的影响。方法采用自体移植法建立SD大鼠子宫内膜异位症模型,3周后行剖腹术测量移植物的大小,然后将大鼠随机分为模型对照组(每天腹腔注射生理盐水2mL),孕三烯酮(YSXT)组(腹腔注射孕三烯酮0.5mg.kg-1.d-1),沙利度胺3个剂量组(分别腹腔注射5、20、40mg.kg-1.d-1),联合用药组(腹腔注射孕三烯酮0.5mg.kg-1.d-1,沙利度胺20mg.kg-1.d-1)。4周后再次剖腹评价子宫内膜异位病灶大小和形态学的变化,并通过Ⅷ因子标记异位子宫内膜血管,采用免疫组化法检测异位内膜组织中微血管密度(Microvessel density,MVD)。结果各治疗组异位内膜呈现不同程度萎缩,腺体明显减少,移植物体积均小于模型对照组(P<0.05);各治疗组MVD均低于模型对照组(P<0.05),其中以沙利度胺40mg.kg-1.d-1剂量组最为明显。结论沙利度胺对大鼠子宫内膜异位病灶有抑制作用,可能是通过抑制血管生成起作用。     

沙利度胺对大鼠子宫内膜异位症模型血管生成的影响

目的探讨沙利度胺（thalidom ide,THD）对大鼠子宫内膜异位移植物生长和血管生成的影响。方法采用自体移植法建立SD大鼠子宫内膜异位症模型,3周后行剖腹术测量移植物的大小,然后将大鼠随机分为模型对照组（每天腹腔注射生理盐水2mL）,孕三烯酮（YSXT）组（腹腔注射孕三烯酮0.5mg.kg-1.d-1）,沙利度胺3个剂量组（分别腹腔注射5、20、40mg.kg-1.d-1）,联合用药组（腹腔注射孕三烯酮0.5mg.kg-1.d-1,沙利度胺20mg.kg-1.d-1）。4周后再次剖腹评价子宫内膜异位病灶大小和形态学的变化,并通过Ⅷ因子标记异位子宫内膜血管,采用免疫组化法检测异位内膜组织中微血管密度（Microvessel density,MVD）。结果各治疗组异位内膜呈现不同程度萎缩,腺体明显减少,移植物体积均小于模型对照组（P〈0.05）;各治疗组MVD均低于模型对照组（P〈0.05）,其中以沙利度胺40mg.kg-1.d-1剂量组最为明显。结论沙利度胺对大鼠子宫内膜异位病灶有抑制作用,可能是通过抑制血管生成起作用。     

非动情期SD大鼠子宫内膜异位症模型的建立

目的　研究SD大鼠非动情期子宫内膜异位症建立方法和异位病灶的组织学形态及体液免疫反应。方法　采用外科诱导法对 40只非动情期和 40只动情期SD雌性大鼠行子宫组织自体移植手术。采集造模前后的血液进行体液免疫IgG、IgA、IgM、C3 、C4 的观察 ;手术后 7周取健侧子宫中段的在位内膜和移植的异位内膜行组织学研究。结果　SD大鼠非动情期进行子宫组织自体异位种植术成模率 95% ,与大鼠动情期进行子宫组织自体异位种植术成模率 94 8%比较 ,二者差异无显著性 ;异位内膜上皮细胞功能活跃 ,有类似正位子宫内膜的周期变化 ,其生理特征与正位子宫内膜基本相同。且造模后大鼠体液免疫反应敏感IgG、C3 增高 (P <0 0 1、3 P <0 0 5) ;IgM降低 (P <0 0 1)、IgA、C4 差异无显著性。结论　SD大鼠非动情期和动情期进行子宫组织自体异位种植术均可建立良好的子宫内膜异位症模型     

改良法建立大鼠深部浸润型子宫内膜异位症模型

  目的 采用改良法通过自体移植在大鼠子宫膀胱间建立深部浸润型子宫内膜异位症（DIE）模型并探讨其优缺点。方法 移植大鼠自体子宫内膜于子宫膀胱间腹膜处,同时切除宫旁游离脂肪建立改良子宫膀胱间DIE模型,并与常规直肠子宫陷凹处DIE模型及非改良子宫膀胱间DIE模型作对比。术后2周再次手术观察病灶生长情况,并对病灶粘连程度进行评分;同时对改良子宫膀胱间DIE模型病灶进行组织形态学、组织化学观察。结果 3组均成功建立DIE模型,体积大小无统计学差异。直肠子宫陷凹处DIE模型和非改良子宫膀胱间DIE模型的病灶粘连评分分别为2.38±0.74和2.75±0.46,改良子宫膀胱间DIE模型病灶粘连评分为1.00±0.50,较前两组明显减小（P<0.05）,且具有与在位子宫内膜相似的形态和结构。结论 采用改良法建立子宫膀胱间DIE模型操作简单、病灶粘连轻,适用于实验研究。     

隔药饼灸对子宫内膜异位症大鼠血清IL-6水平影响的研究

建立SD大鼠子宫内膜异位症模型,用隔药饼灸进行治疗,并和西药丹那唑对照,结果表明隔药饼灸能降低子宫内膜异位症大鼠血清IL-6水平．和丹那唑比较无显著差异。实验提示降低血清IL-6水平是隔药饼灸治疗子宫内膜异位症的机理之一。     

大鼠子宫内膜异位模型的建立与组织学观察

目的为开发诊治子宫内膜异位症(endometriosis,EMT)的新药研究提供理想的动物模型。方法取雌性未交配性成熟大鼠,术前雌激素诱导,麻醉开腹取部份右侧子宫,将内膜种植于左腹壁内,术后16周取出包块,进行组织形态学、组织化学观察。结果异位内膜在腹壁内生长,呈隆起囊状小包块,内有黏液,具有正常子宫内膜基本组织结构,囊腔较大。异位内膜中有糖原、RNA的存在。结论该手术方法建立的子宫异位内膜生长良好,术后一周就可摸及包块大小,为开发研究子宫内膜异位症的新药提供了方便。