氯胺酮鞘内给药对神经病理性痛大鼠脊髓背角小胶质细胞活化、TNF-α和IL-1β产生的影响

目的:探究鞘内注射氯胺酮(ketamine,KTM)对坐骨神经结扎(CCI)神经病理性疼痛大鼠模型行为、脊髓背角肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和白介素1β(IL-1β)以及小胶质细胞标记蛋白OX42表达的影响。方法:(1)建立CCI模型大鼠,鞘内注射KTM或MI(米诺四环素)进行干预,测定大鼠机械缩足阈值(MWT)和热缩足潜伏期(TWL)。(2)运用ELISA法检测TNF-α和IL-1β表达水平。(3)使用Western Blot法检测OX42的表达情况。结果:(1)KTM组和MI组大鼠MWT和TWL值较CCI组显著升高;KTM组大鼠MWT和TWL值高于CCI组(P0.05)。(2)KTM组和MI组TNF-α和IL-1β表达水平低于CCI组(P0.05);其中KTM组TNF-α和IL-1β表达水平显著高于MI组(P0.05)。(3)KTM组和MI组OX42表达水平显著低于CCI组;KTM组OX42表达水平高于MI组(P0.05)。结论:鞘内KTM可以抑制脊髓背角小胶质细胞激活,减少TNF-α和IL-1β表达,显著改善坐骨神经结扎引起的神经病理性疼痛。     

曲古抑菌素A通过抑制脊髓背角内的炎症反应减轻大鼠神经病理性痛

目的:观察曲古抑菌素A (TSA)对脊神经结扎(SNL)大鼠镇痛效果及分子机制。方法:40只健康雄性Sprague Dawley(SD)大鼠随机分为假手术组(sham)、曲古抑菌素A处理组(TSA)、脊神经结扎组(SNL)和SNL+TSA组(SNL+TSA)。采用L5脊神经结扎(SNL)的方法建立神经病理性痛模型,鞘内注射TSA进行干预,通过von Frey丝和热板实验检测大鼠的痛敏,应用免疫荧光染色方法观察大鼠脊髓背角内HDAC1的表达情况;应用Western Blot方法观察大鼠脊髓背角内胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和离子钙接头蛋白分子1(Iba-1)的表达水平;应用real time RT-PCR方法检测大鼠脊髓背角内TNF-α、IL-1β和IL-6的mRNA表达水平。结果:SNL模型大鼠术后机械性痛阈值和热痛阈值均显著降低(P 0.05),鞘内给予TSA能够明显缓解大鼠患侧后足机械性痛敏和热痛敏; SNL模型大鼠脊髓背角内HDAC1的表达较对照组明显增加,而鞘内注射TSA可显著抑制其表达; SNL术后脊髓背角内GFAP和Iba-1的表达显著升高(P 0.05),鞘内给予TSA能够明显下调GFAP和Iba-1的表达; SNL术后大鼠脊髓背角内TNF-α、IL-1β和IL-6的表达较对照组明显上调(P 0.05),而鞘内给予TSA能够显著逆转这一趋势。结论:鞘内给予TSA能够通过抑制脊髓HDAC1表达缓解大鼠神经病理性痛。     

脊髓背角星形胶质细胞内PAPR-1/TNF-α通路参与脊神经结扎模型大鼠神经病理性痛的机制研究

目的观察PAPR-1/TNF-α信号通路在脊神经结扎模型大鼠脊髓背角星形胶质细胞内的表达情况,并探究其与神经病理性痛的发生发展关系。方法将大鼠第5腰神经(L5)进行结扎构建慢性神经病理性痛模型,Von-Frey细丝检测各组大鼠的机械性痛阈值,免疫组织化学染色和Western blot技术半定量和定量分析脊髓背角内PAPR-1和TNF-α的表达情况。结果与正常组相比,假手术组大鼠疼痛阈值未见显著改变(P0.05),脊神经结扎后大鼠的术侧后足的疼痛阈值显著降低,差异具有统计学意义(P0.05),且在术后2周内,疼痛阈值均保持在较低水平。免疫荧光组织化学染色结果显示,PAPR-1和TNF-α主要表达于脊髓背角内星形胶质细胞中,Western blot结果进一步显示,造模后大鼠脊髓背角内GFAP、PAPR-1及TNF-α水平显著高于正常组和假手术组(P0.05)。结论 PAPR-1/TNF-α信号通路主要表达于脊髓背角内星形胶质细胞中,且在慢性神经病理性痛的维持阶段保持较高表达水平,可能参与了慢性痛的发生和发展,临床治疗中具有一定的理论参考意义。     

鞘内注射MRS2395及MRS2211对足烫伤大鼠机械痛及炎症因子表达的影响

目的:观察鞘内注射P2Y_(12)受体拮抗剂MRS2395和/或P2Y_(13)受体拮抗剂MRS2211对足烫伤大鼠机械痛以及脊髓背角炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达的影响。方法:在烫伤前1 h、烫伤后第6、12、24和48 h测定给药后机械缩足反应阈值(MWT);烫伤后24 h,取脊髓背角,实时荧光定量PCR检测Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA表达,ELISA技术检测背角IL-1β、IL-6和TNF-α含量。结果:与假烫伤组相比,大鼠烫伤后6 h即出现MWT明显下降,持续24 h处于较低水平(P0.01),但48 h后MWT回升。与烫伤组相比,单独鞘内注射MRS2395或MRS2211组12 h后MWT升高(P0.05),联合给药组MWT升高更为明显(P0.01)。与假烫伤组相比,烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA表达明显上调(P0.01),IL-1β、IL-6和TNF-α水平上调(P0.01)。单独鞘内注射MRS2395或MRS2211仅部分抑制烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αm RNA表达上调(P0.05)以及部分抑制烫伤大鼠脊髓背角IL-1β、IL-6和TNF-α水平上升(P0.05)。MRS2395和MRS2211联合鞘内注射几乎完全阻断烫伤大鼠脊髓背角Iba-1、IL-6和TNF-αm RNA表达上调(P0.01),仅部分阻断IL-1β表达上调(P0.05),以及几乎完全阻断烫伤引起的脊髓背角IL-6和TNF-α水平上升(P0.01),仅部分阻断IL-1β水平上升(P0.05)。结论:单独鞘内注射MRS2395或MRS2211能够缓解烫伤痛大鼠机械痛敏症状,但联合用药时,镇痛效果更佳,其机制可能与抑制脊髓背角小胶质细胞激活以及炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达上调有关。     

脊髓小胶质细胞P2X_4受体在rrTNF诱导的病理性疼痛中的作用

目的:研究P2X4受体在坐骨神经周围给予重组大鼠TNF-α(recombinant rat TNF-α,rr TNF)引起的机械痛敏中的作用。方法:采用雄性SD大鼠(180~200 g),Western blot检测坐骨神经周围给予rr TNF后3 d、7d和14 d脊髓背角P2X4受体的表达水平,免疫荧光双染观察脊髓背角P2X4受体的表达部位;在坐骨神经周围给予rr TNF的大鼠前鞘内注射TNP-ATP,行为学检测大鼠50%机械撤足阈值的变化,Western blot检测脊髓背角TNF-α的表达是否发生变化。结果:与对照组相比,坐骨神经周围给予rr TNF(100 ng/L)后3 d、7 d和14 d同侧脊髓背角P2X4受体的表达水平明显升高(P0.01);P2X4受体只表达于小胶质细胞中,神经元和星形胶质细胞中没有表达。坐骨神经周围给予rr TNF的大鼠前鞘内注射TNP-ATP可防止rr TNF诱导的机械痛敏并抑制脊髓背角TNF-α的上调。结论:小胶质细胞P2X4受体可能通过上调脊髓背角的TNF-α介导rr TNF诱导的机械痛敏。     

糖皮质激素受体激动剂地塞米松对大鼠血清促炎因子IL-6、TNF-α表达及神经病理性疼痛的影响

目的:探索坐骨神经分支选择性损伤诱导的早期神经病理性疼痛(SNI)模型中给予糖皮质激素受体(glucocorticoid receptor,GR)激动剂对痛行为及促炎因子IL-6、TNF-α分泌的影响。方法:成年雄性SD大鼠随机均分为四组:Sham+Vehicle(生理盐水组),SNI+Vehicle组,SNI+DEX(GR激动剂地塞米松)组,SNI+RU(GR抑制剂米非司酮)组。Von Frey纤维丝检测各组大鼠缩足阈值(paw withdrawal threshold,PWT)的变化;Western Blot和免疫荧光染色检测各组脊髓中GR的表达水平;Elisa检测血清IL-6和TNF-α表达变化。结果:与SNI+Vehicle组比较,SNI+DEX组大鼠PWT阈值和脊髓GR的表达增高(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度降低(P<0.05);SNI+RU组大鼠PWT阈值和脊髓GR表达降低(P<0.05),血清IL-6和TNF-α浓度升高(P<0.05)。结论:GR在脊髓水平能够通过下调促炎因子IL-6和TNF-α的表达缓解SNI诱导的早期神经病理性疼痛。     

癫痫大鼠血清和脑组织IL-1β、IL-6和TNF-α水平变化

目的:探讨白介素-1β(IL-1β)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)对癫痫的神经免疫调节作用及卡马西平(CBZ)对它的影响。方法:180只Wistar大鼠随机分为对照组、红藻氨酸(KA)组和CBZ组,后两组再按癫痫发作后的不同时点分为6个亚组(1h、4h、12h、24h、48h和72h);以KA建立癫痫模型,采用放射免疫分析(RIA)测定IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化。结果:癫痫发作后72h内,血清和脑匀浆液中IL-1β、IL-6和TNF-α的水平变化不同;在不同时点,KA和CBZ组的三者水平均明显高于对照组(P<0.01或P<0.05),同时,CBZ组的三者水平明显低于KA组(P<0.01)。结论:癫痫大鼠免疫系统处于活化状态,细胞因子水平的失衡可能参与了癫痫的免疫病理过程;CBZ对癫痫具有一定的免疫抑制作用。     

MRS2211对糖尿病神经病理性疼痛大鼠的镇痛作用及可能的机制

目的:观察鞘内注射P2Y13受体阻断剂MRS2211对糖尿病神经病理性疼痛大鼠机械痛阈及脊髓背角Iba-1和IL-6表达变化的影响。方法:成年SD大鼠随机分为4组(n=8):正常组(仅鞘内注射生理盐水)、药物+正常大鼠组(鞘内注射MRS2211 100 pmol/L)、糖尿病大鼠模型组(diabetes mellitus,DM组)、MRS2211处理组(糖尿病大鼠+鞘内注射MRS2211 100 pmol/L)。SD大鼠单次腹腔注射链脲菌素60 mg/kg,2周后机械痛阈下降认为造模成功。各组大鼠开始鞘内注射生理盐水或MRS2211(100 pmol/L)每周二次,连续4周。在STZ注射前1 d、注射后第2,4,6周末测定给药后机械缩足反射阈值(mechanical withdrawl threshold,MWT);免疫印迹观察STZ注射后2、4、6周末大鼠脊髓背角Iba-1和IL-6表达变化。结果:与正常组相比,DM组MWT明显降低(P0.01),第2、4、6周末背角Iba-1和IL-6表达也明显上调(P0.01)。与DM组4周相比,MRS2211处理组MWT明显提高(P0.01);与DM组6周相比,MRS2211处理组MWT没有明显变化。与DM组4周相比,MRS2211处理组明显抑制STZ注射4周时脊髓背角Iba-1和IL-6表达上调(P0.01);但与DM组6周相比,MRS2211处理组在STZ注射6周时Iba-1和IL-6表达没有明显变化。结论:鞘内注射P2Y13受体拮抗剂MRS2211可以明显抑制糖尿病大鼠早期的机械痛敏症状,同时脊髓背角Iba-1表达和IL-6表达上调明显减弱。MRS2211有可能通过影响脊髓背角小胶质细胞功能在脊髓水平发挥镇痛作用。     

姜黄素对糖尿病大鼠脊髓背角TNF-α表达的影响

目的:探讨糖尿病大鼠模型脊髓背角TNF-α表达变化以及姜黄素对该分子表达的影响。方法:30只SD雄性大鼠随机分为对照组(Con)、糖尿病组(DM)和姜黄素治疗组(DM+Cur),每组10只;利用腹腔注射链脲佐菌素(STZ)制备大鼠糖尿病模型,DM+Cur组为糖尿病模型制备成功后给予姜黄素治疗,同时Con组和DM组给予等量的生理盐水。利用ELISA方法检测各组大鼠脊髓背角TNF-α分子的含量,利用RT-PCR方法比较各组大鼠脊髓背角TNF-αmRNA的表达。结果:成功制备Ⅰ型糖尿病(TIDM)大鼠模型,该模型具有高血糖、质量减轻、多饮、多食、多尿等特点,ELISA检测结果显示Con组、DM组和DM+Cur组大鼠脊髓背角TNF-α分子含量分别为:21±6 pg/mL、145±11 pg/mL以及80±7pg/mL,DM组TNF-α分子含量明显高于Con组(P<0.05),给予姜黄素治疗后,DM+Cur组TNF-α显著下降,但仍高于Con组(P<0.05)。RT-PCR检测结果显示DM组大鼠脊髓背角TNF-αmRNA高于Con组,给予姜黄素治疗后,DM+Cur组TNF-αmRNA较DM组有所降低,这一趋势与ELISA结果相一致。结论:STZ诱导的TIDM大鼠脊髓背角TNF-α表达增加,中药姜黄素可以降低TIDM大鼠髓背角TNF-α的表达。     

Wortmannin对急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达的影响

目的研究Wortmannin对急性肺损伤模型小鼠肺组织白介素-1β(IL-1β)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)表达的影响。方法 30只昆明小鼠随机分为正常对照组、急性肺损伤组和Wortmannin处理组。采用腹腔注射LPS(10 mg/kg)建立小鼠急性肺损伤模型,对照组腹腔注射同体积的生理盐水,Wortmannin处理组则于造模前2 h腹腔注射Wortmannin(1.4 mg/kg)。LPS注射后6 h处死大鼠,计算肺组织湿/干重(W/D)比值,Western blot方法检测三组小鼠肺组织内IL-1β和TNF-α蛋白的表达变化,RT-PCR方法检测三组小鼠肺组织内IL-1βmRNA和TNF-αmRNA的表达变化。结果急性肺损伤组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著上升,显著高于正常对照组(0.05);相比于急性肺损伤组小鼠,Wortmannin处理组小鼠肺组织IL-1β和TNF-α蛋白及mRNA表达水平显著降低(0.05)。结论 Wortmannin能抑制急性肺损伤小鼠肺组织IL-1β和TNF-α表达。     

鞘内给予氯胺酮通过抑制星形胶质细胞内STAT3的磷酸化改善大鼠神经病理性痛的研究

目的:观察神经病理性痛大鼠鞘内给予氯胺酮对于脊髓背角星形胶质细胞内信号转导和转录活化因子3(STAT3)磷酸化水平的影响。方法:采用L5脊神经结扎(SNL)方法制作慢性神经病理性痛模型,利用机械刺激法和热板法连续观察造模后大鼠的痛行为变化;应用免疫组织化学染色和Western Blot方法观察大鼠腰膨大节段胶质纤维酸性蛋白(GFAP)和磷酸化STAT3(pSTAT3)的表达水平。结果:SNL模型大鼠机械性痛阈和热痛阈均明显降低,且术后一周内均保持在较低的水平(P0.01),从术后第3 d起鞘内连续给予氯胺酮至第7 d能够明显缓解大鼠患侧后爪的机械性痛敏和热痛敏。免疫荧光组织化学染色显示:pSTAT3在星形胶质细胞上有表达,且SNL后pSTAT3与GFAP在脊髓背角的表达均升高。Western Blot结果显示:与对照组相比,SNL后第7 d脊髓背角的pSTAT3的表达明显上调(P0.05),从术后第3 d鞘内连续给予氯胺酮至第7 d能够明显下调STAT3的磷酸化水平。结论:鞘内给予氯胺酮能够明显下调脊髓背角星形胶质细胞内STAT3的磷酸化水平从而达到缓解疼痛的目的。     

小檗碱对神经病理性疼痛大鼠疼痛行为及IRAK1/TRAF6信号通路介导的神经炎症的影响

目的：探讨小檗碱对神经病理性疼痛大鼠是否具有疼痛缓解作用,并分析白细胞介素1受体相关激酶（IRAK1）/肿瘤坏死因子受体相关因子6(TRAF6)通路在其中的作用机制。方法：60只SD大鼠随机分为假手术组、脊神经结扎组（模型组）、小檗碱（低、高剂量）组及阳性药物（阿魏酸钠）组,每组12只。对各组大鼠进行动物行为学评估,测定大鼠后足热缩足反射潜伏期（TWL）、机械缩足反射阈值（MWT）;六胺银染色观察患侧脊髓背角病理变化;ELISA法检测各组大鼠背根神经节中炎症相关因子肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素1β(IL-1β)和IL-6的表达水平;RT-qPCR法和Western blot法分别检测脊髓IRAK1和TRAF6的mRNA及蛋白表达水平。结果：脊髓背角病理切片显示,模型组出现明显的神经元纤维增粗并缠绕成结,且有大量空泡变性,并且神经细胞的胞质出现含有嗜银颗粒的空泡;小檗碱和阳性药物治疗后脊髓背角损伤明显减少。与假手术组相比,模型组MWT和TWL显著降低,大鼠背根神经节中TNF-α、IL-1β和IL-6含量均显著升高,脊髓中IRAK1和TRAF6 mRNA和蛋白表达量显著升高（P...     

鞘内注射丹参酮ⅡA对CCI大鼠脊髓内TAK1及IL-1β、IL-6表达的影响

目的研究丹参酮IIA对坐骨神经慢性压迫大鼠脊髓背角内TAK1及IL-1β、IL-6表达的影响,探讨丹参酮IIA的镇痛机制。方法 60只SD雄性大鼠随机分为假手术组(sham组)(n=20)和模型组(n=40)。模型组又分为生理盐水组(NS组)和处理组(TSA组)(n=20)。模型组在手术当日及术后每日在模型大鼠鞘内注射生理盐水0.1ml和丹参酮IIA 20mg/kg,连续注射10 d。检测各组大鼠在手术前及术后的机械痛阈和热痛阈;术后第10天,免疫组织化学法检测大鼠脊髓背角内TAK1的表达;采用ELISA方法测定各组大鼠脊髓组织中IL-1β、IL-6表达。结果与假手术组比较,生理盐水组大鼠的机械痛阈和热痛阈明显降低,TAK1的表达增多,脊髓组织中IL-1β、IL-6的含量均增高;与生理盐水组比较,处理组的机械痛阈和热痛阈明显升高,脊髓背角内TAK1的表达下降,脊髓组织中IL-1β、IL-6的含量均减少,差异均有明显统计学意义。结论鞘内注射丹参酮IIA对坐骨神经慢性压迫模型大鼠的镇痛作用可能与降低脊髓背角内TAK1及IL-1β、IL-6的表达有关。     

鞘内注射MRS2211对糖尿病神经痛大鼠脊髓炎症因子和JAK2/STAT3表达及NR2B磷酸化的影响

目的:观察鞘内注射MRS2211对糖尿病神经痛(diabetic neuropathic pain,DNP)大鼠脊髓背角IL-1β、IL-6及JAK2/STAT3和NR2B(p Tyr1336,p Tyr1472)表达的影响。方法:成年SD大鼠随机分为5组(n=8):(1)对照组(鞘内注射生理盐水)、(2)糖尿病组(糖尿病+鞘内注射生理盐水)、(3)~(5)DNP+MRS2211组(糖尿病+鞘内分别注射10、50、100 pmol/L MRS2211)。大鼠腹腔注射链脲菌素50 mg/kg,2周后热痛阈明显下降认为造模成功。随后鞘内给药2次/日,4周。STZ注射前1 d、注射后第2、4和6周末测定给药后热缩足潜伏期(thermal withdrawal latency,TWL);酶联免疫吸附试验测定背角IL-1β和IL-6表达,免疫印迹检测背角JAK2/STAT3和NR2B表达。结果:与对照组相比,糖尿病组TWL明显降低(P<0.01);鞘内分别给予10、50、100pmol/L MRS2211可明显缓解STZ注射4周时的TWL(P<0.05),但STZ注射6周时,抑制TWL效果不明显。与对照组相比,在STZ注射2、4和6周后糖尿病大鼠脊髓背角IL-1β、IL-6和STAT3以及p Tyr1336NR2B、p Tyr1472NR2B表达明显上调(P<0.01);在STZ注射4和6周后脊髓背角JAK2表达明显上调(P<0.01)。在STZ注射4周时,MRS2211(100 pmol/L)处理组脊髓背角IL-1β、IL-6、JAK2/STAT3表达下调(P<0.05),同时Tyr1336NR2B磷酸化减弱(P<0.05),但在STZ注射6周时抑制效果不明显。鞘内注射MRS2211(100 pmol/L)不影响糖尿病大鼠脊髓背角p Tyr1472NR2B磷酸化。结论:鞘内注射MRS2211可明显缓解DNP大鼠热痛敏症状,其机制可能与抑制脊髓背角IL-1β和IL-6表达,进一步下调JAK2/STAT3表达,间接抑制背角神经元p Tyr1336NR2B磷酸化有关。     

脊髓小胶质细胞SFKs介导rrTNF诱导的机械痛敏

目的观察Src-家族激酶(SFKs)的激活在外源性TNFα引起的机械痛敏中的作用。方法大鼠坐骨神经周围施加重组大鼠TNFα(rrTNF),免疫组化观察给药后1、7d脊髓背角SFKs表达的变化,同时在给予rrTNF前鞘内注射SFKs抑制剂PP2,行为学测试检测大鼠50%机械刺激撤足阈值的变化。结果坐骨神经周围施加rrTNF可引起SFKs在双侧L5脊髓背角的表达显著上调,且SFKs的表达仅存在于小胶质细胞。提前鞘内注射SFKs抑制剂可防止rrTNF引起大鼠机械痛敏。结论脊髓背角小胶质细胞SFKs信号途径的激活在rrTNF引起的病理性疼痛的产生中起作用。     

嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS对脊髓来源小胶质细胞产生IL-1β、IL-6和TNF-α的刺激作用

目的:观察嘌呤P2Y受体激动剂ADPβS对脊髓背角来源小胶质细胞炎症因子IL-1β、IL-6和TNF-α表达和释放的影响。方法:培养新生SD大鼠脊髓背角小胶质细胞,PCR检测ADPβS作用下小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α在mRNA水平表达变化;ELISA检测ADPβS作用下小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-α释放变化。结果:与正常对照组相比,ADPβS(10μmol/L)可以刺激脊髓背角小胶质细胞Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调。P2Y_(12)受体拮抗剂MRS2395和P2Y_(13)受体拮抗剂MRS2211部分阻断ADPβS刺激小胶质细胞IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调,MRS2395和MRS2211联合预处理几乎全部阻断ADPβS刺激小胶质细胞Iba-1、IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调。结论:P2Y_(12)/P2Y_(13)受体激活可以促进脊髓背角小胶质细胞激活和IL-1β、IL-6和TNF-αmRNA表达上调及释放。     

NF-kB介导脂氧素A4拮抗TNF-α所致的系膜细胞白介素的合成

为研究脂氧素A4(LXA4)拈抗肿瘤坏步E因子α(TNF-α)对肾小球系膜细胞的白介素(IL）-β(IL-1β)、IL-6合成的作用。对体外培养大鼠肾小球系膜细胞，用不同浓度的LXA4预刺激，再加入TNF-α共同孵育；或单用TNF-α刺激肾小球系膜细胞。在孵育后用ELISA法检测培养上清中的IL-1β,IL-6蛋白表达量；用RT-PCR法检测IL-1β、IL-6的mRNA表达量。应用凝胶电泳迁移率试验（EMSA)测定核因子-kB(NF-KB)的DNA结合活性。结果发现，LXA4呈剂量依赖性地抑制TNF-α诱导的肾小球系膜细胞IL-1β和IL-6蛋白的合成与mRNA表达，抑制NF-kB的DNA结合活性。说明LXA4通过下调NF-kB的DNA结合活性，拮抗TNF-α对肾小球系膜细胞的IL-1β、IL-6合成的促进作用。     

脊髓背角HCN通道在神经病理性疼痛中的作用

目的:观察脊髓背角超极化激活环核苷酸门控阳离子通道(HCN通道)在坐骨神经缩窄性损伤(CCI)所致的慢性神经病理性疼痛中的作用。方法:8周龄成年雄性SD大鼠48只随机分为6组:(1)sham组(假手术组)、(2)CCI组(鞘内注射生理盐水)、(3)~(6)ZD7288+CCI(鞘内分别注射1,10,30,50μg ZD7288),每组8只。CCI及CCI+ZD7288组大鼠在鞘内置管5 d后行CCI术,术后鞘内给药,每日两次,连续14 d;sham组大鼠不进行鞘内置管,仅游离坐骨神经,不结扎。分别于CCI术前1 d,术后1、3、5、7、10、14 d鞘内给药2 h后测定热缩足潜伏期(TWL);术后第7、14 d处死大鼠,取术侧L4~L6脊髓背角,采用Western Blot技术检测脊髓背角HCN1,3,4及磷酸化蛋白激酶A(P-PKA)表达的变化。结果:大鼠CCI术后即形成稳定的热痛敏,TWL明显缩短;与CCI组相比,鞘内给予HCN通道阻滞剂ZD7288可明显延长CCI大鼠的TWL(P0.05)。Western Blot结果显示,与假手术组相比,CCI组大鼠在术后7、14 d术侧脊髓背角HCN1,3,4及P-PKA表达显著增加(P0.05);鞘内给予ZD7288可显著降低CCI大鼠HCN1,3,4及P-PKA的表达(P0.05)。结论:脊髓背角HCN通道的激活可促进CCI所致的神经病理性痛的发生与维持,HCN通道阻滞剂ZD7288具有良好的镇痛效应,ZD7288的镇痛作用可能与其抑制PKA的活性密切相关。     

鞘内注射BN50730抑制SNI大鼠痛敏和脊髓TNF-α的表达

目的： 观察鞘内注射血小板活化因子受体拮抗剂BN50730对坐骨神经分支选择损伤（SNI）神经病理痛大鼠痛阈及脊髓肿瘤坏死因子α（TNF-α）表达的影响,探讨脊髓血小板活化因子(PAF)及其受体参与痛觉信号调节的可能机制。方法: 鞘内置管的Sprague-Dawley大鼠24只随机等分为4组：假手术组,SNI组,SNI+DMSO对照组和SNI+BN50730组,建立SNI疼痛模型,手术后1、3、5、7、10和14 d鞘内给药并测痛阈,第14 d取腰段脊髓免疫组化法和ELISA法检测脊髓TNF-α的表达。结果: SNI神经损伤大鼠机械缩爪阈值明显降低(P<0.05),同侧脊髓背角TNF-α表达增强,ELISA检测脊髓TNF-α含量升高(P<0.05);鞘内应用BN50730降低脊髓TNF-α的表达,同时伴有大鼠痛行为的改善。各组大鼠辐射热缩爪潜伏期无明显差异。结论: BN50730对SNI神经病理性疼痛有治疗作用,TNF-α的表达下调可能与其镇痛机制有关。     

雷公藤内酯醇(T10)通过抑制脊髓背角内p38-MAPK的磷酸化发挥镇痛作用的机制研究

目的:观察鞘内给予雷公藤内酯(triptolide,T10)对于慢性炎性痛和神经病理性痛模型大鼠脊髓背角小胶质细胞内p38丝裂原激活的蛋白激酶(p38 mitogen-activated protein kinase,MAPK)的磷酸化水平的影响。方法:采用大鼠足底注射完全弗式佐剂(complete Freund’s adjuvant,CFA)构建慢性炎性痛模型,L5脊神经结扎(spinal nerve ligation,SNL)和坐骨神经分支选择性结扎(spared nerve injury,SNI)的方法制作慢性神经病理性痛模型。利用von Frey丝刺激法连续观察造模后大鼠的痛行为变化;应用免疫荧光染色方法观察大鼠腰膨大节段胶质纤维酸性蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)和电离钙绑定衔接分子1(ionized calcium binding adaptor molecule-1,Iba-1)的表达水平;应用Western Blot方法观察大鼠腰膨大节段p38 MAPK的磷酸化水平。结果:(1)行为学结果显示:CFA、SNL、SNI模型大鼠机械性痛阈均明显降低,且术后一周内与正常对照组相比均保持在较低水平(P0.01)。从术后第1 d起鞘内连续给予T10至第7 d,分别观察到T10能够明显提高上述模型大鼠手术侧后足的机械性痛阈(P0.05);但T10在SNL模型和SNI模型大鼠中的效果要弱于CFA引起的慢性炎性痛(P0.05)。(2)免疫荧光染色结果显示:CFA、SNL和SNI模型大鼠腰膨大脊髓背角内GFAP、Iba-1的表达明显高于正常对照组,而p-p38 MAPK阳性产物主要表达于小胶质细胞内。(3)Western Blot结果显示:造模后7 d脊髓背角内p-p38 MAPK的表达明显上调,鞘内给予T10后可以显著下调脊髓背角内p38的磷酸化水平(P0.05)。结论:鞘内给予T10有效缓解由于CFA、SNL和SNI诱导的慢性痛模型大鼠的机械性痛阈的机制可能是通过下调脊髓背角内p38 MAPK信号通路的磷酸化水平,进而达到抑制小胶质细胞和星形胶质细胞的活化。其次,T10对不同类型的疼痛模型的作用效果存在差异,对由CFA引起的慢性炎性痛的作用效果要强于由SNL和SNI诱导的慢性神经病理性痛。