Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞的survivin基因及蛋白表达与凋亡的作用

[摘要] 目的 探讨Survivin siRNA对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)的Survivin基因与蛋白表达与凋亡的影响。方法 合成Survivin siRNA转染混合物,以不同浓度转染HUVEC细胞, MTT法测定细胞生长抑制率, RT-PCR、Western blot检测HUVEC细胞Survivin mRNA及蛋白的表达变化,流式细胞术检测细胞的凋亡率。结果 HUVEC细胞转染荧光标记的FAM-siRNA后,细胞内有绿色荧光表达。分别以10,30,50nmol/L Survivin siRNA转染细胞后,细胞生长抑制率、Survivin mRNA表达、Survivin蛋白表达与对空白照组、阴性对照组、脂质体对照组比较差异有统计学意义(P<0.001)。细胞凋亡率与对照组比较明显下降(P<0.01)。随着Survivin siRNA浓度的增加,细胞抑制率与细胞凋亡率呈上升趋势,Survivin mRNA及Survivin 蛋白的表达呈逐渐降低趋势。结论 Survivin siRNA能抑制HUVEC的Survivin基因表达与并促进其凋亡。     

RNA干扰抑制Survivin表达对人喉癌细胞药物敏感性的影响

目的:探讨RNA干扰技术抑制Survivin基因表达对增强人喉癌HEP-2细胞化疗药物敏感性。方法:针对Survivin mRNA序列设计合成小干扰RNA(siRNA)的DNA模板,构建pRNAT-Survivin重组表达载体,转染人喉癌HEP-2细胞;通过RT-PCR和Western blot分析其对HEP-2细胞内源性Survivin表达的影响;四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察HEP-2细胞对化疗药物5-FU和优福定敏感性的改变。结果:成功构建pRNAT-Survivin重组质粒,并成功转染HEP-2细胞;RT-PCR和Western blot结果证实重组质粒在mRNA及蛋白水平分别显著抑制Survivin基因表达(P<0.01);MTT及流式细胞仪结果证明在5-FU和优福定联合作用下,pRNAT-Survivin组HEP-2细胞的生长抑制率明显增高(P<0.01)。结论:pRNAT-Survivin可抑制Survivin在人喉癌HEP-2细胞中的表达,并增强HEP-2细胞对化疗药物敏感性。     

靶向Survivin基因microRNA诱导肝癌细胞凋亡的实验

目的:探讨靶向Survivin的microRNA转染肝癌细胞阻抑Survivin表达,及其对肝癌细胞凋亡、增殖的影响。方法:设计合成特异性靶向Survivin的microRNA的序列。肝癌细胞株HepG2接种于细胞培养板内,分为5组,空白对照组、脂质体组和低、中、高浓度转染组(分别给予50、100和200 nmol/L microRNA转染);作用后收集各组细胞。四氮唑盐(MTT)法检测不同浓度的microRNA对细胞的生长抑制率。流式细胞术检测各组细胞增殖率和凋亡指数。逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测靶向Survivin的mRNA表达水平。结果:通过MTT检测,不同浓度microRNA转染组细胞的抑制率明显高于对照组(P<0.05)。各浓度mi-croRNA转染组细胞凋亡指数明显高于对照组(P<0.05),高浓度转染率最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞增殖指数明显低于对照组(P<0.05),高浓度转染组最明显(P<0.05)。各浓度microRNA转染组细胞Sur-vivin的mRNA转录水平有不同程度减弱。结论:不同浓度Survivin的microRNA转录能下调Survivin的mRNA表达,诱导肝癌细胞凋亡,抑制细胞增殖。     

肿瘤特异性启动子Survivin调控shRNA腺病毒的构建及对HepG-2细胞中CD133基因表达的抑制

目的：构建肿瘤特异性启动子Survivin驱动的小发夹RNA（shRNA）,通过下调HepG-2肝癌细胞中CD133的表达,探讨其对肝癌细胞增殖和侵袭能力的影响。方法：①构建pEntr-Surp-shRNA真核表达载体,转染HepG-2肝癌细胞,Hela细胞,293T细胞。②设计shRNA干扰片段,筛选干扰最佳干扰效率的CD133干扰片段,重组载体pAd.Surp-shRNA972,pAd.Surp-shRNA2377,pAd.Surp-shRNA485并筛选出稳定表达shRNA的转染克隆。③Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485腺病毒分别转染HepG-2肝癌细胞株,建立Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485实验组,未转染腺病毒组为空白组。感染肝癌细胞株,应用RT-PCR和Western blot检测CD133 mRNA和蛋白的表达,MTT法和 Tran－swell 法检测细胞体外增殖和侵袭能力。结果：①成功构建了Survivin 启动子调控的shRNA真核表达载体pEntr-Surp-shRNA,在293T细胞株无荧光,而在Hela、HepG-2细胞株中荧光表达明显,证实Survivin具有肿瘤特异性。②成功包装Ad.Surp-shRNA972,Ad.Surp-shRNA2377,Ad.Surp-shRNA485腺病毒。③RT-PCR和Western blot检别显示Ad.Surp-shRNA972、Ad.Surp-shRNA2377,有封闭CD133 mRNA和蛋白表达的效果;计算实验组与空白组相比mRNA抑制率分别为（63.44±0.02）%、（56.98±0.03）%;Ad.Surp-shRNA972、Ad.Surp-shRNA2377、Ad.Surp-shRNA485组蛋白抑制率分别为（55.43±0.40）%、（48.65±0.20）%、（34.67±0.40）%;实验组细胞的增殖和侵袭能力也受到明显抑制,Ad.Surp-shRNA972组生长抑制率为（72.88±0.74）%,Ad.Surp-shRNA2377组生长抑制率为（59.90±0.87）%,Ad.Surp-shRNA485组生长抑制率为（30.18±0.95）%。结论：肿瘤特异性启动子Survivin调控腺病毒介导的shRNA能显著下调CD133基因的表达,抑制肝癌细胞株HepG-2的增值和减弱其侵袭力。     

RNA干扰Survivin基因对Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响

目的:研究RNA干涉Survivin基因表达对人宫颈癌Hela细胞凋亡及抗肿瘤药物敏感性的影响.方法:将Sur-vivin SiRNA片段通过脂质体的介导转染宫颈癌Hela细胞系;RT-PCR检测Hela细胞中Survivin mRNA的表达,Western Blot检测Survivin蛋白表达;确定转染成功使干扰组细胞Survivin表达下调后,以流式细胞仪检测细胞凋亡率变化;细胞计数后绘制生长曲线观察细胞增殖能力变化;MTT法检测细胞对抗肿瘤药物的敏感性变化.结果:与对照组相比,两个Survivin基因干扰组的mRNA和蛋白表达抑制率分别为55%,60%和42%,55%,表达均下降(P<0.05);细胞凋亡率分别为19%和22%,较对照组高(P<0.05);生长曲线显示干扰组的细胞增殖能力下降;同一剂量药物作用下,各组细胞对抗肿瘤药物的敏感性均有提高,其中NVB组和PDD组有统计学意义(P<0.05).结论:Survivin SiRNA片段转染进入Hela细胞后,Survivin mRNA和蛋白表达水平均下降,Hela细胞的凋亡率增加,对抗肿瘤药物的敏感性增加.     

Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的：探讨Survivin反义核酸对乳腺癌细胞增殖的影响。方法：本实验分6组，分别以脂质体介导反义寡核苷酸、无义寡核苷酸及RPMI 1640培养液作为空白的对照组，转染人乳腺癌MCF-7细胞系，采用Realtime RT-PCR，Western blot方法检测各组MCF-7细胞Survivin蛋白及mRNA的表达情况，测定转染后细胞贴壁率变化，研究Survivin反义寡核苷酸对MCF-7细胞的生长抑制作用。结果：脂质体介导Survivin反义寡核苷酸转染人乳腺癌MCF-7细胞后，细胞内Survivin蛋白及mRNA表达显著降低，通过Realtime RT-PCR检测MCF-7细胞经作用后其Survivin mRNA起始拷贝数明显下降；同时细胞贴壁率降低达32．96％，细胞生长抑制率最高达73．62％，ASOND／LiP组与NODN／LiP组和LiP组差异有显著性（P＜0．05）。结论：脂质体介导转染的反义寡核苷酸可在Survivin蛋白及mRNA水平有效地降低乳腺癌MCF-7细胞内Survivin的表达，并能够有效抑制乳腺癌细胞的增殖活性，提示Survivin靶向治疗可能成为乳腺癌综合治疗的一种重要方法。     

10～23脱氧核酶沉默Survivin基因表达诱导人肝癌细胞的凋亡

目的 研究脱氧核酶沉默Survivin表达对人肝癌BEL-7402细胞凋亡的影响.方法 合成针对Survivin基因的"10～23"型脱氧核酶及其类似物;转染肝癌细胞;RT-PCR检测脱氧核酶细胞内Survivin mRNA的切割作用;荧光免疫法测定脱氧核酶对Survivin蛋白表达影响;流式细胞术检测脱氧核酶对肝癌细胞凋亡的影响.结果 "10～23"型脱氧核酶及其类似物成功转染入肝癌;非修饰脱氧核酶(DzT)和修饰的脱氧核酶(DzTi)能有效抑制肝癌细胞的生长(P<0.05);DzT和DzTi在胞内能有效地切割Survivin mRNA,DzTi比DzT的切割活性更显著;荧光免疫法测的DzT和DzTi能显著的下调Survivin蛋白水平(P<0.01);流式细胞术结果提示,DzT和DzTi细胞凋亡率明显升高出现凋亡峰(P<0.05);DzT和DzTi组细胞出现细胞周期阻滞,表现为G0/G1细胞所占比例上升,S期细胞所占比例下降.结论 脱氧核酶能有效沉默Survivin mRNA表达,抑制Survivin蛋白表达和促进肝癌细胞凋亡.     

联合应用Survivin和VEGF反义寡核苷酸对肺癌A549细胞的抑制作用

目的研究非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)A549细胞经Survivin和VEGF反义寡核苷酸(ASODN)单独和联合转染后细胞生长、凋亡以及对基因表达的抑制作用。方法针对Survivin和VEGF mRNA序列设计反义寡核苷酸,以脂质体(Lip)为载体,介导Survivin和VEGF ASODN单独和联合转染A549细胞。MTT法检测细胞生长抑制率,RT-PCR检测细胞中Survivin和VEGF基因的mRNA含量,流式细胞术检测细胞凋亡以及细胞中Survivin基因的蛋白表达。结果经脂质体转染后200~600 nmol/L Survivin ASODN和5~20μmol/L VEGF ASODN均能抑制A549细胞增殖,诱导细胞凋亡;在48 h时,400 nmol/L Survivin ASODN和10μmol/L VEGF ASODN抑制率和凋亡率有统计学意义(P<0.05);两者联合转染A549细胞抑制率和凋亡率分别为(61.37±1.94)%和57.03%,显著高于两基因单独转染(P<0.05);联合组的Survivin mRNA的表达量为(15.26±1.31)%,蛋白表达率为(30.40±1.33)%,VEGF mRNA的表达量为(13.12±1.45)%,均显著低于单独转染组(P<0.05)。结论 Survivin和VEGF ASODN均能抑制A549细胞基因表达,诱导细胞凋亡,两基因反义寡核苷酸联合转染的效果优于单独转染。     

RNAi抑制Survivin基因的表达对乳腺癌SKBr-3细胞的影响

目的 应用RNA干扰技术抑制人Survivin基因表达,观察其对乳腺癌SKBr-3细胞增殖和凋亡的影响.方法 设计、合成靶向Survivin基因的siRNA基因片段,应用脂质体包埋转染乳腺癌SKBr-3细胞,采用MTT比色法检测细胞增殖率、RT-PCR和Western blot法观察乳腺癌细胞Survivin mRNA和蛋白质的表达、流式细胞仪检测细胞凋亡率.结果 MTt检测显示Survivin-siRNA组对细胞增殖有明显抑制作用(P<0.05),其细胞最高抑制率为(43.1±O.3)%;RT-PCR检测显示Survivin-siRNA组mRNA表达明显下调(P<0.01),其相对表达量分别为0.203 ±0.018、0.229±0.019,抑制率分别为55.2%、49.4%;Western blot检测显示Survivin-siRNA组蛋白表达下调(P<0.01),其蛋白相对表达量分别为0.702±0.007、0.684±0.016,抑制率分别为34.8%、36.4%;流式细胞仪检测显示Survivin-siRNA组细胞凋亡率明显增高(P<0.01),分别为(14.2±1.4)%、(16.8±0.6)%.结论 Survivin-siRNA能有效封闭Survivin的表达,抑制SKBr-3细胞增殖并诱导细胞凋亡,推测Sur-vivin基因可能成为乳腺癌基因治疗的一个新靶点.     

PTEN基因对慢性粒细胞白血病Survivin、Xiap、Smac调控的研究

目的 探讨肿瘤抑制基因PTEN对人慢性粒细胞白血病(CML)中生存素(Survivin)、X连锁凋亡抑制蛋白(Xiap)、线粒体促凋亡蛋白(Smac)调控的作用.方法(1)将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒(Ad-PTEN-GFP)及对照载体腺病毒(Ad-GFP)转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562,四甲基偶氮唑盐(MTT)检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞周期及凋亡率;荧光定量PCR(FQ-PCR)检测PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA水平变化,Western印迹检测PTEN蛋白表达水平的变化.(2)研究10例慢性粒细胞白血病慢性期(CML-CP)、10例慢性粒细胞白血病急变期(CML-BC)及10名健康人(NC)骨髓单个核细胞内PTEN、Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平变化.结果 以感染复数(MOI)=200转染K562细胞后,Ad-PTEN-GFP组K562细胞最大增殖抑制率为38.6％,转染3d后Ad-PTEN-GFP组K562细胞内Survivin、Xiap、Smac mRNA表达水平(0.0700±0.0059、0.0089±0.0006、0.0600±0.0039)均明显低于Ad-GPF组(0.4370±0.0790、0.0661±0.0072、0.1580±0.0078)和未转染组(0.4530±0.0810、0.0700±0.0079、0.1770±0.0085),转染Ad-PTEN-GFP组与转染Ad-GFP相比Survivin mRNA表达水平降低6.14倍、Xiap降低7.44倍,而Smac mRNA降低2.95倍(均P＜0.01).CML-BC患者中PTEN mRNA表达水平低于CML-CP及健康对照组,而Survivin、Xiap、Smac mRNA在CML-BC患者中均高于CML-CP及健康对照组(均P＜0.01).结论 Survivin、Xiap、Smac基因可能在PTEN介导的慢性粒细胞白血病细胞凋亡通路中参与抑制细胞增殖、促进细胞凋亡的作用.     

极低频率电磁场对肝癌细胞SODD和Survivin基因表达的影响

目的研究极低频率电磁场（ELF）对肝癌细胞死亡结构域沉默子（SODD）和凋亡抑制基因Survivin基因表达的影响,探索ELF在肝癌治疗中的作用。方法应用RT-PCR和流式细胞仪（FCM）检测经ELF处理的肝癌细胞系BEL-7402的SODD和Survivin基因表达情况,并以L-02肝细胞为正常对照,分析ELF对肝癌细胞SODD和Sur-vivin基因表达的影响。结果经ELF处理后,BEL-7402细胞SODD和Survivin基因表达均明显下降（P〈0.05）,而对L-02细胞无影响（均P〉0.05）。结论 ELF能促进肝癌细胞凋亡,为临床应用ELF治疗肝癌提供了线索。     

川芎嗪对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响

目的观察川芎嗪（TMP）对人肝癌耐药细胞BEL-7402/ADM中P-糖蛋白（P-glycoprotein,P-gp）表达的影响,研究TMP对人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM的逆转机制。方法将人肝癌细胞耐药株BEL-7402/ADM及其亲本细胞BEL-7402分为：亲本组、耐药组、逆转组（耐药＋TMP）、阳性对照组（耐药＋维拉帕米）、二抗阴性对照组,用免疫组化SABC法和流式细胞术对照观察TMP对BEL-7402/ADM中P-gp表达的影响。结果流式细胞术结果显示耐药组显著高于亲本组（P〈0.01）;耐药＋TMP组和耐药＋维拉帕米组均显著低于耐药组和亲本组（P〈0.01）。免疫组化SABC法显示耐药组P-gp阳性表达率显著高于亲本组（P〈0.01）;TMP组、维拉帕米组的P-gp阳性表达率显著低于耐药组（P〈0.01）。结论 TMP能显著降低人肝癌多药耐药细胞BEL-7402/ADM细胞表面P-gp的表达,增加阿霉素等化疗药物对BEL-7402/ADM的细胞毒性作用,从而增加对肿瘤细胞的抑制率,提高化疗疗效。     

siRNA阻抑Survivin基因表达对肝癌细胞周期影响的研究

目的采用RNA干扰（RNAi）技术抑制人肝癌HepG2细胞中Survivin基因表达,观察小分子干扰RNA（siRNA）对肝癌细胞周期的影响。方法构建人肝癌HepG2的survivin-siRNA,将其导入肝癌细胞系后研究。HepG2细胞分为四组：siRNA干扰组、siRNA干扰对照组、未转染的对照组、空白载体组。作用48h后Western印迹检测基因沉默效果,MTT法测量细胞生长情况,流式细胞术分析siRNA对肝癌细胞增殖周期的影响。结果 Western印迹法显示干扰组survivin基因的表达受到明显抑制。MTT法显示经survivin基因干扰后的HepG2细胞相比对照组细胞吸光度A值较低;尤其是24、48小时降低更为明显（P〈0.05）。流式细胞术显示干扰组的G2/M细胞百分率相对干扰对照组显着增大（P〈0.05）。结论 siRNA转染能够抑制细胞survivin基因表达,使人肝癌细胞株HepG2细胞阻滞于G2/M期。     

塞来昔布对人恶性淋巴瘤Raji细胞株增殖、凋亡及Survivin表达的影响

【目的】探讨塞来昔布对人恶性淋巴瘤Raji细胞的作用及其可能机制。【方法】体外培养人Burkitt’s淋巴瘤Raji细胞，用不同浓度塞来昔布进行干预。采用MTT比色法检测Raji细胞生长情况；流式细胞术分析塞来昔布对Raji细胞周期分布的影响并检测细胞凋亡及Survivin蛋白在细胞中的表达情况；应用RT-PCR法检测Raji细胞中Survivin mRNA的表达水平。【结果】塞来昔布对Raji细胞生长具有抑制作用，且在12．5～150μmol／L范围内呈时间、剂量依赖性；流式细胞术检测出典型的“凋亡峰”，凋亡率（9．20±0．19）％～（44．63±1．34）％；塞来昔布使Raji细胞G0／G1期细胞数增多，S和G2／M期细胞数减少，凋亡率和细胞周期分布呈量效依赖关系；塞来昔布下调Raji细胞中Survivin蛋白和Survivin mRNA的表达。【结论】塞来昔布抑制Raji细胞增殖、诱导其凋亡可能与阻滞细胞周期和下调Survivin表达有关。     

shRNA沉默DNA-PKcs表达对肝癌耐药细胞BEL7402/5-FU耐药性的影响

目的观察shDNA-PKcs沉默DNA-PKcs基因对肝癌耐药细胞Bel7402/5-FU耐药性的影响。方法采用双酶切、测序分析鉴定shDNA-PKcs干扰质粒;用阳离子脂质体法将shDNA-PKcs质粒转染BEL7402/5-FU细胞,根据荧光细胞数计算转染率,Real-time PCR及Western blot检测沉默效率;MTT法检测细胞药物敏感性;Real-time PCR和Western blot检测P-gp mRNA和蛋白表达。结果双酶切鉴定结果显示质粒约为6300bp,测序结果显示插入序列为shDNA-PKcs序列。荧光细胞计数显示质粒的转染率为62.2%。Real time PCR及Western blot检测结果显示DNA-PKcs mRNA及蛋白水平的沉默效率分别为82.6%、71.8%;MTT检测结果显示shDNA-PKcs实验组的ADM和5-FU的IC50值比对照组ADM、5-FU低（P〈0.05）,DDP和MMC的IC50值与对照组比无统计学意义（P〉0.05）。Real time PCR和Western blot检测结果显示实验组P-gp mRNA、蛋白表达水平均比对照组低（P〈0.01）。结论 shDNA-PKcs干扰质粒能够有效抑制BEL7402/5-FU细胞中DNA-PKcs表达,增加细胞对化疗药物的敏感性,其机制可能与P-gp蛋白的下调有关。     

RNAi干扰Notch-1对人肝癌细胞BEL-7402 AFP表达及细胞增殖的影响

目的采用RNAi干扰细胞通讯因子Notch-1对肝癌细胞BEL-7402中AFP表达及细胞增殖的影响。方法通过siRNA抑制BEL-7402细胞中Notch-1的表达,采用qRT-PCR和Western blotting法,检测其对AFP表达的影响,采用MTI法测定细胞增殖情况。结果 siRNA抑制Notch-1达后,AFP mRNA及其蛋白水平显著下降,RNAi干扰组与对照组比较BEL-7402细胞生长明显受抑制(P<0.01)。结论 Notch-1 siRNA可以下调肝癌细胞BEL-7402中AFP mRNA及其蛋白的表达水平,抑制BEL-7402细胞的生长,提示Notch-1基因在肝癌细胞的发生、发展中具有重要作用,Notch-1可能是AFP过量表达肝癌的治疗靶点。     

食管鳞癌中Survivin和Smac/Diablo的表达及意义

目的:探讨Survivin和Smac/Diablo在食管鳞癌中的表达及其临床意义。方法:应用免疫组化SP法对80例经病理确诊为食管鳞癌的病例和相对应的30例病理确定为正常组织及30例癌旁组织进行Survivin蛋白和Smac/Diablo蛋白半定量免疫组化分析。结果:Survivin在食管鳞癌组织,癌旁组织,正常组织的阳性表达率分别为81.25%,10.0%,3.33%,有显著性差异(χ2=72.983,P<0.01)。Smac/Diablo在食管鳞癌组织,癌旁组织,正常组织的阳性表达率分别为61.25%,76.67%,93.33%,有显著性差异(χ2=11.518,P<0.01)。Survivin和Smac/Diablo表达与患者的年龄、性别、分化程度、浸润深度等均无明显关系(P>0.05)。但与TNM分期、淋巴结转移相关(P<0.05)。在Smac阳性组中的表达率为23.21%(13/56),在Smac/Diablo阴性组中的表达率为16.67%(9/54),两者间有统计学差异(P<0.05),两者关联性较强,呈负相关。Survivin阳性率与淋巴结转移呈低度正相关(r=0.329,P<0.05),Smac/Diablo阳性率与淋巴结转移呈负相关(r=-0.733,P<0.05)。结论:Survivin蛋白和Smac/Diablo蛋白表达与食管癌的病理分期,淋巴结转移都有着密切的关系,Smac/Diablo在食管鳞癌组织中低表达,其表达和Survivin呈明显的负相关,两者可能在食管鳞癌细胞凋亡信号传导网络中发挥重要作用。     

Survivin shRNA促进HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的研究

目的研究RNA干扰Survivin基因表达对HL-60细胞凋亡及其对阿糖胞苷敏感性的影响。方法采用PCR扩增以及定向克隆技术重组构建shRNA的表达载体pshRNA-Survivin,使用脂质体介导转染至HL-60细胞,分为6组：①空白实验组;②阿糖胞苷（Ara-C）组;③阳性质粒组;④阴性质粒组;⑤阳性质粒＋Ara-C组;⑥阴性质粒＋Ara-C组。采用RT-PCR技术检测HL-60细胞内Survivin及其mRNA表达,运用流式细胞仪进行细胞凋亡率改变的检测。结果与空白实验组比较,阳性质粒组的mRNA表达抑制率为57.7%,表达下降,差异有统计学意义（P〈0.05）;阳性质粒组细胞凋亡率为5.87%,阳性质粒＋Ara-C组细胞对Ara-C敏感性明显提高,细胞凋亡率为12.4%,差异有统计学意义（P〈0.05）。结论 Survivin siRNA能够高效特异的抑制HL-60细胞内Survivin基因的表达,诱导细胞凋亡,并提高了HL-60细胞对Ara-C的敏感性,这有助于白血病基因治疗的进一步发展。     

人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株的建立及其生物学特性观察

目的:建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。方法:采用体外低浓度梯度递增联合大剂量间断冲击的诱导方法建立5-FU获得性BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株。MTT法检测耐药细胞株对多种化疗药物的交叉耐药性。观察其细胞形态学、生长曲线、倍增时间、平板克隆形成率、贴壁率、细胞周期分布、染色体核型以及裸鼠致瘤性。流式细胞术检测阿霉素在亲本及耐药细胞株内的积聚量。免疫细胞化学法检测胸苷酸合酶在耐药细胞内的表达。结果:成功建立人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株模型。该耐药细胞对阿霉素、长春新碱、奥沙利铂及甲氨蝶呤均有不同程度的交叉耐药性,但对羟基喜树碱仍较敏感。体外培养见细胞趋向群集性生长。耐药细胞株倍增时间较亲本细胞株长,克隆形成率则较亲本细胞株低,差异有统计学意义。耐药细胞贴壁率在23、h明显低于亲本细胞株,其G0/G1期细胞分布比率较低而S期比率明显增加。阿霉素在耐药细胞株内的积聚量低于亲本细胞株,耐药细胞株胸苷酸合酶的蛋白表达量较亲本细胞株明显增强。结论:人肝癌BEL-7402/5-FU多药耐药细胞株可以成为研究5-FU获得性耐药机制及开展多药耐药逆转剂筛选较好的体外模型。