PCR-酶切法检测Wilson病935密码子基因突变

目的：应用ＰＣＲ酶切法对中国人ＷＤ患者ＡＴＰ７Ｂ基因的高频突变点进行检测，企图建立一种能应用于临床的中国人ＷＤ快速基因诊断方法。方法：用限制性内切酶ＭａｅⅡ对４８例患者及３０例正常人的ＡＴＰ７Ｂ基因第１２外显子９３５密码子ＰＣＲ扩增生进行酶切分析。结论：ＡＴＰ７Ｂ基因第１２外显子９３５密码子为中国人ＷＤ患者的高频突变点之一：ＰＣＲ酶切法可作为ＷＤ常用的基因诊断方法应用于症状前期患者的筛选及产前诊断     

用于研究DLA－DRB1基因分型的寡核苷酸引物对的选择

我们用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法研究ＤＬＡⅡ类基因。为寻找合适的引物，用四对不同的引物：ＤＬＡ－ＤＲ－ＳＰ／Ｓｔｏｐ，ＤＬＡ－ＤＲ－ＳＰ／Ｐ３，ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＧＨ４６／５０及ＨＤＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ进行了一系列扩增。只有引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ获得了满意的结果。其类似核苷酸序列在ＤＬＡ－ＤＲＢｃＤＮＡ的核苷酸序列内被发现，特异性也为Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析所证实。内切酶ＨａｅⅢ和ＨｉｎｆⅠ酶解后显示出ＤＬＡ－ＤⅡ类基因高度的多态性和等位基因特异的多态性带型。揭示该引物对是目前用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法研究ＤＬＡ－ＤＲＢ１基因较理想的、实用的引物。     

用PCR－RFLP分析血清学和细胞学确定的DLA－DRB1基因单倍型及其分离

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法研究ＤＬＡⅡ类基因，包括１１只分别为８个不同ＤＬＡ单倍型的纯合子参考狗，和两个犬家族各８只狗。用引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ａｍＰＡ／Ｂ扩增其基因组ＤＮＡ，获得２７４ｂｐ扩增产物。该产物被３２个能识别ＤＬＡ－ＤＲＢ区等位基因变异的、不同的内切酶酶解，只有ＨａｅⅡ、ＨｈａＩ、ＨｌｎｆＩ、ＭｓｐＩ、ＲｓａＩ和Ｓａｕ９６Ｉ酶解后分别显示出高度的多态性，被归类为９个不同的ＲＦＬＰ带型，分别与所研究的ＤＬＡ单倍型及８个细胞学确定的ＤＬＡ－Ｄ特异性相关联。对两个犬家族的分离研究证实了ＲＦＬＰ带型的分型价值。因此上述引物对和内切酶构成了一个实用的分型系统，能对ＤＬＡＤＲＢ１基因进行ＰＣＲ－ＲＰＬＰ分型。     

用PCR—RFLP分析血清学和细胞学确定的DLA—DRB1基因单倍型及…

用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ方法研究ＤＬＡⅡ类基因，包括１１只分别为８个不同ＤＬＡ单倍型的合子参考狗，和两个犬家族各８只狗，用引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ扩增其基因组ＤＮＡ，获得２７４ｂｐ扩增产物，该产物被３２个能识别ＤＬＡ－ＤＲＢ区等位基因变异的，不同的内切酶酶解。只有ＨａｅⅡ，ＨｈａＩ，ＨｉｎｆＩ，ＭｓｐＩ，ＲｓａＩ和Ｓａｕ９６Ｉ酶解后分别显示出高度的多态性，被归类为９个不同的ＲＦＬＰ带型，分别     

用于研究DLA—DRB1基因分型的寡核苷酸引物对的选择

我们用ＰＣＲ－ＲＦＬＰ法研究了ＤＬＡⅡ类基因。为寻找合适的引物，用四对不同的引物：ＤＬＡ－ＤＲ－ＳＰ／Ｓｔｏｐ，ＤＬＡ－ＳＰ／Ｐ３，ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＧＨ４６／５０及ＨＤＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ进行了一系列扩增，只有引物对ＨＬＡ－ＤＲＢ－ＡＭＰ－Ａ／Ｂ获得了满意的结果，其类似核苷酸序列在ＤＬＡ－ＤＲＢｃＤＮＡ的核苷酸序列内被发现，特异性也为Ｓｏｕｔｈｅｒｎｂｌｏｔ杂交分析所证实，内切酶ＨａｅⅡ类基     

中国人血友病甲患者FⅧ基因突变研究

为研究血友病甲发病的分子机理，应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）结合限制性内切酶ＴａｑⅠ酶切分析和ＰＣＲ结合变性梯度凝胶电泳（ＰＣＲ－ＤＧＧＥ），分别研究了７４名中国血友病甲患者ＦⅧ基因外显子１８、２２～２４、２６和外显子８与１４的３′端的基因突变情况，结果检测到一例基因突变，该突变位于第２４号外显子２２０９位密码子，ＣＧＡ－ＴＧＡ，导致了终止密码子的产生。ＰＣＲ－ＤＧＧＥ发现２例基因突变，分别位于外显子８的３４９位密码子，ＧＡＴ－ＧＡＧ，导致Ａｓｐ３４９Ｇｌｕ和外显子１４的１６８９位密码子，ＣＧＣ－ＴＧＣ，使Ａｒｇ１６８９Ｃｙｓ。血友病甲基因突变的研究将有助于开展遗传咨询和产前诊断工作。     

丙型肝炎病毒三种不同分型方法的比较

分别应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）产物酶切分型法（酶切法）、型特异引物分型ＰＣＲ法及血清丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）型特异性抗体酶联免疫测定法（ＥＩＡ），对１２０例抗－ＨＣＶ阳性患者血清进行ＨＣＶ分型检测，比较其分型结果。结果显示酶切法与ＰＣＲ法均成功地对９６例（８０％）进行分型，其中Ⅱ型８６例（８９．６％），Ⅲ型８例（８．３％），Ⅱ／Ⅲ型混合感染２例（２．１％），且两种方法的结果完全一致。ＥＩＡ法检测出型特异性抗体７８例（６５％），其中血清１型（相当于基因Ⅰ、Ⅱ型）６８例（８７．２％），血清２型（相当于基因Ⅲ、Ⅳ）６例（７．７％），血清１、２型双阳性者４例（５．１％）。对三种方法均阳性的６６例的分型结果进行比较，ＥＩＡ法与酶切法和ＰＣＲ法的符合率达９７．０％。表明三种分型方法的结果高度一致。     

中国汉人HLADQAl基因对系统性红斑狼疮的遗传易感性研究

利用ＨＬＡ基因的ＰＣＲ－ＲＦＬＰ核苷酸分型技术，以等位基因特异性的限制性内切酶（ＡｐａｌⅠ、ＢｓａｊⅠ、ＨｐｈⅠ、ＦｏｋⅠ、ＭｂｏⅡ、ＭｎｌⅡ）消化ＤＱＡｌ座位特异的ＰＣＲ扩增产物，研究了上海及其附近地区中国汉人ＨＬＡ－ＤＱＡｌ基因与系统红斑狼疮的遗传关联。发现系统红斑狼疮ＤＱＡｌ＊０１０２（３６．５％，ＲＲ＝２．２５，Ｐ＜０．０５，ＥＦ＝０．２０）及＊０４０１（１５．４％，ＲＲ＝１２．４２，Ｐ＜０．００５，ＥＦ＝０．１４）显著增加，而ＤＱＡｌ＊０５０１（１１．５％，ＲＲ＝０．２１，Ｐ＜０．００５，ＰＦ＝０．３１）和＊０．０６０１（３．９％，ＲＲ＝０．２７，Ｐ＜０．０５，ＰＦ＝０．０９）显著下降。排除ＤＱＡｌ＊０４０１的影响后，＊０１０２频率的升高表现得更加明显（ＲＲ＝２．８４，Ｐ＜０．０１）。上述发现显示：ＤＱＡｌ＊０１０２及＊０４０１对ＳＬＥ有遗传易感作用，而ＤＱＡｌ＊０５０１和＊０６０１有遗传抵抗作用，并提出了有关可能的单体型。     

PCR－SSP技术在肾移植HLA┐DR位点分型中的应用

ＰＣＲ┐ＳＳＰ技术在肾移植ＨＬＡ┐ＤＲ位点分型中的应用薛竹尔秀江张玉海马威然应用聚合酶链式反应－序列特异性引物（ＰＣＲ－ＳＳＰ）技术，对８７例肾移植供受者进行ＨＬＡ－ＤＲ位点基因分型，并同时与血清学分型进行对比研究，显示血清学分型与基因分型ＤＲ位点两...     

人CD4基因在大肠杆菌中的表达

本文设计并化学合成了一对ＰＣＲ引物，以人ＣＤ４ｃＤＮＡ为模板，成功地扩增出人ＣＤ４Ｎ端两个结构域的编码基因（６００ｂｐ），并在此基因两端分别插入了ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ酶切位点及起始和终止码。通过ＥｃｏＲＩ和ＨｉｎｄⅢ双酶切位点将ＣＤ４基因克隆入ｐＵＣ１９质粒，经过ＰＣＲ和酶切鉴定得到ＣＤ４重组克隆ｐＴ４０３。ＤＮＡ序列分析结果表明，所克隆ＣＤ４基因与已发表的人ＣＤ４基因序列完全一致。将ＣＤ４基因     

An unusual DRB1*1503 haplotype without a detectable DRB5 locus in a black African family

A DRB1*1503 allele not associated with DRB5 locus has been detected in an African family during routine HLA typing for bone marrow transplantation. PCR/SSOP analysis showed the DR2-associated alleles in all the family members but the DRB5 locus appeared to be absent in the patient and his brother. The samples were then analyzed for the presence of DRB6 pseudogenes and we found that the unusual haplotype was associated with DRB6*0101 allele. This finding strengthen the hypothesis of a recombination hot spot between DRB1 and DRB6 genes.     

Identification of two new HLA-DRB1 alleles,DRB1*1138 and DRB1*1344

Two new HLA-DRB1 alleles have been identified by sequencing based typing (SBT). HLA-DRB1*1138 and DRB1*1344 were discovered after following up ambiguous results involving unusual alleles after DRB1 generic typing.     

Novel HLA-DRB1 alleles discovered during routine sequencing based typing,DRB1*03052, DRB1*04032, DRB1*1139 and DRB1*1346

We report the discovery of four HLA-DRB1 alleles during routine sequencing based typing (SBT). These alleles--DRB1*03052, DRB1*04032, DRB1*1139 and DRB1*1346--differ from previously identified DRB1 alleles by known nucleotide polymorphisms.     

组合分析法探讨HLA-DRB1、-DQA1等位基因与乙型肝炎病毒感染结局的关系

目的采用组合分析法探讨中国北方汉族人群HIA．DRB1、-DQA1等位基因与乙型肝炎病毒（hepatitisBvirus，HBV）感染不同结局的关系。方法采用序列特异性引物多聚酶链式反应（PCR-SSP）技术对207名慢性乙型肝炎患者和148名自限性HBV感染者进行HLA-DRB1、-DQA1等位基因的检测，并运用病例对照研究设计和组合分析法比较HLA-DRB1、-DQA1等位基因与HBV感染不同结局的关系。结果携带HIA-DQA1＊0102或HLA-DQA1＊0301等位基因者，感染HBV后发展为慢性乙肝的风险显著低于不携带这些等位基因者，比值比（oddsratio，OR）分别为0．23和0．52。用此两个等位基因进行组合分析发现，仅携带HLA-DQA1＊0102或HLA-DQA1＊0301任何一个等位基因者，较不携带HLA-DQA1＊0102和HLA-DQA1＊0301两个等位基因者发展为慢性乙肝的风险显著降低（OR=0．28，X^2=31．16，P〈0．0031），而同时携带HLA-DQA1＊0102和HLA-DQA1＊0301两等位基因者，发展为慢性乙肝的风险降低则更为明显（OR=0．16，X^2=5．86，P=0．02）。结论具有两个保护（或危险）作用的等位基因者比不具有或仅有其中一个等位基因者对HBV感染的结局影响更大。     

Identification of three new DRB1 alleles,DRB1*0107, *0425 and *13012 and confirmation of DRB4*01033

The characterization of three novel DRB1 alleles is described, DRB1*0107, DRB1*0425 and DRB1*13012 as well as confirmation of DRB4*01033. Two alleles, DRB1*0107 and *0425, showed amino acid differences with previously identified HLA molecules. In DRB1*0107, the glutamine at position 10 was substituted by a glutamic acid. DRB1*0425 showed one amino acid difference with DRB1*0418 (I to F) at position 67, and five amino acid differences with DRB1*04011 at positions 67 (L to F), 70 (Q to D), 71 (K to R), 74 (A to L) and 86 (G to V). The alleles DRB1*13012 and DRB4*01033 had protein sequences identical to DRB1*13011 and DRB4*01031/01032, respectively. Nucleotide differences were present at position 306 for DRB1*13012 and at position 321 for DRB4*01033.