钩端螺旋体培养基的改进

在国内首次应用硫酸铵盐析法提取兔血清白蛋白,然后加适量刺激钩端螺旋体(以下简称钩体)的生长物质,配制成钩体实验培养基浓缩液。用13个血清群95个血清型株的3～15代传代培养试验证实:菌株发育丰盛,通常细胞浓度约达2.0×10~8/ml,菌形正常、运动活泼、视野清晰、培养物血清学特性无改变;因不含免疫球蛋白,故对各血清型株不易引起变异,保持固有血清学特性。适合于一般或专业实验室作分离、研究、保藏钩体菌种用。本培养基浓缩液用法简便,经适当稀释后即可使用。     

应用PAP法检查钩端螺旋体的初步研究

1974年 Tripathy 用过氧化物酶标抗体检查钩端螺旋体,其优点是用普通光学显微镜即能检查,实验周期短,为此我们建立了辣根过氧化酶、抗辣根过氧化物酶复合物免疫组织化学染色法(PAP 法)检测钩端螺旋体。材料和方法一、钩体抗原片制备:钩体取自本院神经科实验室所培养,镜下运动活泼,不自凝,钩体计数>1亿条/ml 的钩体菌液,于10000转/分低温离心洗涤三次,弃上清液,收集沉淀,钩体计数为2亿条/ml,低温保存备用。钩体抗原片制备:取抗凝血液与洗涤后钩体菌液均匀混合,按1:1和1:20配制,抗凝血液中钩体数量相当1亿条/ml 和1500万条/ml,取混有钩体的血液按血常规涂片方法制战薄膜涂片,置37℃     

114例结核菌株初始耐药分析

为了解初始耐药现状,对114例新发培阳结核菌株进行初始耐药试验,结果报告如下： 方法1.培养基：改良罗氏培养基。2.药敏试验浓度(μg/ml):SM(S)lOO 和10;INH(H)10 和 1;RFP(R)250和50;EMB(E)50和5。3.方法：挑取生长两周新鲜菌落,研磨后比浊配制成浓度为1mg/ml菌液,再以10倍的生理盐水稀释成lO^-1mg/ml浓度,每支药敏培养基接种O.lml,每周观察一次并报告结果。     

钩端螺旋体EMJH培养基实验室应用

目的 探索柯氏培养基和EMJH培养基在培养钩端螺旋体菌的差异及在钩体病防治上应用价值。方法 观察2种培养基在15群15型钩体培养菌培养过程形态、数量、自凝现象等差异,并对健康人临床疑似钩体病人和暴发流行钩体病人血清进行 MAT试验抗体检测。结果 EMJH培养基接种钩体后第2 d就大量生长繁殖,而柯氏培养基1周后才达繁殖高峰,钩体MAT试验也显示EMJH培养基培养的钩体菌敏感性较柯氏培养基培养菌高。结论 EMJH培养基可用于快速分离钩体,有利于早期确定钩体病的流行和实验室研究。     

钩端螺旋体复方明胶培养基的研制

本文报道了钩端螺旋体(以下简称钩体)生长速度快、浓度高的一种新型综合培养基;该培养基制备方法简便,可经反复高压蒸汽灭菌,保存期长。所试验的钩体菌株包括标准株(56601、56605、56608)、地方株(波摩那群:罗株、澳洲群上34株)和水生林(Patoc Ⅰ株),培养5至7天可达生长高峰;钩体在该培养基中经过三年的传代培养,未发现抗原性变异。     

钩端螺旋体外膜菌苗的研究：Ⅴ,多价外膜菌苗人群接种后免疫效果观察

本文报道了钩端螺旋体外膜菌苗和普通菌苗对人体接种后反应和血清学效果的比较。钩体外膜菌苗组除局部中反应(12.5％)高于普苗组(5.1％)之外,其余与普苗组相似,均较轻微。以抗体水平来看,免疫后1、3及6个月时,钩体外膜菌苗组1针次的GMT均高于普苗组2针次的2～3倍,且有显著性差异(t=2.58,P<0.01)。钩体外膜菌苗较普通菌苗为优。     

抗猪带绦虫六钩蚴独特型抗体疫苗对猪体免疫保护作用的研究

目的　本研究在证实猪带绦虫六钩蚴抗原具有很高的免疫保护性的基础上 ,探讨六钩蚴抗独特型抗体作为六钩蚴抗原替代物对猪体的保护作用 ,为研制猪体囊虫疫苗提供理论基础。　方法　用六钩蚴粗制抗原免疫家兔 ,制备兔抗六钩蚴抗体 (Ab1) ,再用Ab1免疫昆明小白鼠 ,制备抗独特型抗体 (Ab2 ) ,免疫猪体 ,以 3节猪带绦虫孕卵节片攻击感染 ,90d后剖杀 ,观察感染情况。　结果　 5头试验猪只有 1头在膈肌发现 1个囊虫 ,而 2头阳性对照猪均被感染 ,各检查部位囊虫数平均为 4.5个 /10 0g和 3 .2个 /10 0 g。　 结论　抗猪带绦虫六钩蚴独特性抗体Ab2对猪体有较强的免疫保护作用。     

MiR-590-3p在胰腺癌干细胞中的表达

目的 应用无血清培养基分离胰腺癌干细胞,检测其miR-590-3p的表达。方法 运用无血清培养基克隆培养ASPC-1、PANC1细胞,检测其单克隆形成、分化及细胞周期、半数抑制浓度(IC50)和表面标记物CD24+、CD44+表达。实时定量PCR法检测细胞miR-590-3p的表达。结果 经无血清培养基培养,(0.94±0.53)％的ASPC-1细胞和(0.57±0.12)％的PANC1细胞能存活,呈克隆球样悬浮生长,并可以在体外连续传代。加入血清后细胞球又重新贴壁生长。ASPC-1细胞球G0/G1期比例和CD24+、C44+、CD24+ CD44+的细胞比例及IC50分别为(75.3±5.4)％、0.96％～2.01％、27.52％～34.47％、0.35％ ～0.44％和(224.37±5.71) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(43.7±3.8)％、0.38％～0.42％、17.65％ ～ 18.25％、0.05％～ 0.08％、(11.43±2.10) μg/ml(P值均＜0.05)。PANC1细胞球G0/G1期比例和CD24+、CD44+、CD24 +CD44+的细胞比例及IC50分别为(80.1±4.7)％、5.31％ ～9.84％、72.05％ ～93.06％、4.91％ ～5.21％、(296.58±4.27) μg/ml,均显著高于亲本细胞的(46.1±5.3)％、4.09％～4.97％、47.71％～55.66％、1.48％ ～2.63％、(26.17±3.81) μg/ml(P值均＜0.05)。ASPC-1、PANC1细胞球miR-590-3p表达分别是亲本细胞的4.67和4.52倍。结论 应用无血清培养基可以从ASPC-1、PANC1细胞系中分离出具有干细胞特性的胰腺癌细胞球,其miR-590-3p表达上调,该基因可能是胰腺癌干细胞特性维持的关键基因。     

阿苯达唑:一种比甲硝唑和替硝唑有更 效的体外抗贾第虫药

作者用人株(BAH54)、波特兰株(PI)及其克隆株(PIC10)3株蓝氏贾第鞭毛虫滋养体进行阿苯达唑抗贾第虫体外实验,并与甲硝唑和替硝唑进行比较。甲硝唑和替硝唑用双蒸水稀释,阿苯达唑用二甲基亚砜(DMSO)稀释,试验浓度分别为0.1、0.5、1.0、2.0及10.0μg/ml等。受试虫株均培养在含有10%新生小牛血清,而不含抗生素与维生素混合液的BI-S-33培养基中,虫体浓度范围为30000～50000个滋养体/ml,在培养基中加入适当浓度的药后,37℃培养。药物处理的时间分别为4h和24h,然后将虫体置换于无药培养基中培养到7天,另设双蒸水或DMSO的无药对照组,用半定量法测定滋养体的吸附能力。与对照组相比较,对滋养体形态、增     

加微量EMJH于柯氏培养基对生长欠佳的钩端螺旋体培养观察

<正> 1979年我所在云南牟定县分离出部分钩端螺旋体(下简称钩体)菌株,但其在坷氏培养基内生长欠佳,长期达不到鉴定浓度。经使用荷兰阿姆斯特丹 WHO/FAO 钩体病咨询研究合作中心馈赠的 EMJH(John-son)培养基,虽菌株生长良好,但 EMJH数量有限,且价格昂贵,为此我们采用柯氏(Korthof)培养基内加入微量 EMJH,菌数明显增殖,达到鉴定所需浓度,且保存周期延长,现报告如下。     

不同浓度胎牛血清肝浸汤培养基培养阴道毛滴虫效果观察

3株阴道毛滴虫用肝浸汤培养48 h,虫体密度分别为0.7×10^5/ml、1.5×10^5/ml和2.0×10^5/ml;用含终浓度为1%、5%、10%的胎牛血清肝浸汤培养48 h,虫株Ⅰ的密度分别为6.0×10^5/ml、640.0×10^5/ml和1 280.0×10^5/ml,虫株Ⅱ分别为16.0×10^5/ml、1 600.0×10^5/ml和2 400.0×10^5/ml,虫株Ⅲ分别为65.0×10^5/ml、840.0×10^5/ml和520.0×10^5/ml。表明肝浸汤添加适量胎牛血清后培养效果良好。     

结核分枝杆菌接种菌量对异烟肼和利福平药敏试验的影响

目的比较接种不同菌量结核分枝杆菌（MTB）绝对浓度法药物敏感性（药敏）与比例法药敏的差异程度,为MTB药敏检测准确性提供参考。方法选择临界敏感或临界耐药MTB菌株53株,用比浊法制作MTB菌悬液,10倍梯度稀释,10^-4、10^-510^-6mg/ml菌悬液0.1 ml接种于改良L-J培养基上作活菌计数,10^-2、10^-3mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作绝对浓度法药敏,10^-3、10^-5mg/ml菌悬液0.1 ml接种于含INH、RFP改良L-J培养基上作比例法药敏。结果MTB活菌计数值多在5×1065×10⁷CFU/ml。10^-2、10^-3mg/ml菌悬液绝对浓度法药敏一致率INH、RFP分别达98.1%、100.0%;绝对浓度法与比例法药敏符合率INH、RFP均达90.6%100.0%。结论不同菌量MTB绝对浓度法药敏结果与比例法药敏结果比较一致性好,在常规药敏检测中不会影响结果的准确性。     

HIV感染者检测病毒载量和CD4淋巴细胞计数的关系

目的 探讨HIV感染者抗逆转录病毒治疗前血液标本HIV病毒载量(VL)及CD4淋巴细胞计数的关系.方法 采用RT-PCR法和流式细胞分析系统,对重庆地区部分HIV病毒感染者169份血液标本的VL和CD4平行检测结果进行分析.结果 169份标本中VL能被定量的有160份(94.7%),其结果6.0×103~2.80×107拷贝/ml之间,CD4细胞计数3~836个/μl.经相关性分析,CD4细胞值与VL对数值呈负相关(r=-0.43,P<0.01).结论平行检测VL和CD4细胞数可帮助了解疾病进展状况,选择开始治疗的时机.     

链脲佐菌素诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制的研究

目的 探讨链脲佐菌素(STZ)诱导的糖尿病大鼠骨转换变化及其分子机制.方法 单次尾静脉注射STZ制造糖尿病大鼠模型.成模后与正常对照组大鼠同步饲养8周,处死后测定两组大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶、骨钙素、24 h尿钙水平和尿I型胶原氨基末端交联肽(NTx)/肌酐(Cr)比值,双能X线吸收法(DEXA)测定大鼠离体腰椎和股骨骨密度.骨形态计量学方法分析大鼠骨量和骨转换变化情况,并用实时荧光定量RT-PCR方法检测骨组织中标志骨吸收的NF-κB受体活化因子配体(RANKL)/骨保护素mRNA比值和标志骨形成的骨钙素以及调控成骨的核结合因子1(Cbfa1)、osterix(OSX)mRNA表达水平.结果 与正常对照组相比,糖尿病大鼠血钙、磷、碱性磷酸酶水平无显著差异,骨钙素水平显著减低[(3.03±0.52)对(6.18±0.71)ng/ml,P<0.01],24 h尿钙水平显著增加[(16.84±0.71)对(4.98±0.58)mg/24 h,P<0.01],尿NTx/Cr比值显著下降[(5.67±0.86)对(5.23±0.98)nmol/g Cr,P<0.05].糖尿病大鼠腰椎骨密度显著减低[(0.107±0.011)对(0.149±0.009)g/cm~3,P<0.01],股骨骨密度亦显著减低[(0.099±0.013)对(0.139±0.013)g/cm~3,P<0.01].骨形态计量学分析提示糖尿病大鼠骨小梁骨量减少,骨小梁矿化表面减少,骨形成速率减低[(0.44±0.11)对(0.78±0.14)μm/d,P<0.01].实时荧光定量RT-PCR提示糖尿病大鼠骨组织中RANKL/骨保护素mRNA比值[(0.57±0.11)对(0.89±0.13),P<0.01]、骨钙素[(2.25×10~(-4)±1.19×10~(-4))对(3.43×10~(-4)±1.63×10~(-4)),P<0.01]、Cbfa1[(26.68×10~(-4)±6.53×10~(-4))对(37.21×10~(-4)±7.14×10~(-4)),P<0.01]、OSX[(1.93×10~(-4)±0.65×10~(-4))对(4.19×10~(-4)±0.71×10~(-4)),P<0.01]mRNA水平均较正常对照组显著减低.结论 糖尿病大鼠是一种低转换型骨量减少,其骨组织中调控破骨的RANKL/骨保护素mRNA水平和调控成骨的Cbfa1、OSX、骨钙素mRNA水平均下降.     

恩替卡韦治疗慢性乙型肝炎患者疗效观察

目的观察恩替卡韦治疗CHB患者的疗效。方法 43例HBeAg阳性和18例HBeAg阴性患者接受恩替卡韦治疗,比较两组治疗24周和48周时的疗效。结果在治疗24周时,HBeAg阳性组HBV DNA转阴15例（34.9%）4,8周时转阴28例（65.1%）,而HBeAg阴性组分别转阴15例（83.3%）和17例（94.4%,P=0.001和0.018）;两组在24周和48周时ALT复常率均无显著性差异（P=0.713和0.138）;在34例HBV DNA定量〉10^7copies/ml与27例HBV DNA定量〈107copies/ml两组中,治疗24周时,HBV DNA转阴例数分别为11例（32%）和19例（70%,P=0.03）,治疗48周时,则分别为23例（68%）和22例（81%,P=0.22）。结论本研究提示恩替卡韦治疗CHB有很好的抗病毒活性。     

Inhibition of growth and reduction in tumorigenicity of UCI-107 ovarian cancer by antagonists of growth hormone-releasing hormone and vasoactive intestinal peptide

PURPOSE: To evaluate the tumor inhibitory activities of antagonists of growth hormone-releasing hormone (GH-RH) and vasoactive intestinal peptide (VIP) in UCI-107 human ovarian cancer model, and to investigate the role of the insulin-like growth factor (IGF) system in the response. METHODS: In the present study we investigated the effects of GH-RH antagonist JV-1-36 and VIP antagonist JV-1-52, on the growth and tumorigenicity of UCI-107 ovarian cell carcinoma xenografted into nude mice. Studies on the effects of hGH-RH(1-29)NH2, IGF-I, IGF-II, JV-1-36, and JV-1-52 on the proliferation of UCI-107 cells cultured in vitro were also performed. RESULTS: After 22 days of therapy with JV-1-36 or JV-1-52 at the dose of 20 microg/day, the final volume of UCI-107 tumors was significantly (P<0.05) decreased by 50.5% and 56%, respectively, compared to controls. The concentration of IGF-II in tumors was reduced by 66% in the JV-1-36-treated group and by 62% in the group given JV-1-52 (both P < 0.05). Exposure in vitro to 1 microM concentrations of JV-1-36 or JV-1-52 for 24 h decreased the tumorigenicity of UCI-107 cells in nude mice. All ten mice injected with cells treated with medium alone developed tumors within 23 days after cell inoculation, while only eight of ten and four of ten mice injected with cells exposed to JV-1-36 or JV-1-52, respectively, had tumors. In vitro exposure of UCI-107 cells to 5-35 ng/ml IGF-II produced a significant suppression in the rate of cell proliferation (P < 0.01). CONCLUSION: Our results suggest that GH-RH and VIP antagonists inhibit the growth of UCI-107 ovarian cell carcinoma by mechanisms that appear to involve direct effects on the cancer cells.     

鲍曼不动杆菌噬菌体ZZ1在小鼠体内的药代动力学研究

目的研究噬菌体ZZ1对小鼠的安全性及药代动力学。方法尾静脉1次大剂量注射高浓度去内毒素ZZ1悬液,观察小鼠反应状态,检测活性ZZ1在各组织中的浓度变化及小鼠血清抗ZZ1中和抗体的效价。结果 ZZ1对实验小鼠具良好安全性和稳定性,但免疫原性强,注射后72h即可刺激产生抗ZZ1中和抗体,第4d和第16d抗体平均滴度分别为1︰8和1︰256。ZZ1在小鼠组织中的分布以脾脏浓度较高,注射后0.5h达1.2×109 PFU/ml;肺、肾浓度较低,注射后0.5h分别为4.0×107和4.1×107 PFU/ml。结论 ZZ1对实验小鼠具有良好安全性,且在体内各组织中稳定,可用于鲍曼不动杆菌AB09V感染小鼠模型的治疗研究。     

拉米夫定治疗e抗原阴性慢性乙型肝炎的早期预测指标分析

目的 评价拉米夫定(LAM)治疗e抗原阴性慢性乙型肝炎患者治疗前基线ALT、HBsAg、HBV DNA水平以及治疗4周和12周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml对其治疗104周时抗HBV疗效的预测价值. 方法 127例成年e抗原阴性慢性乙型肝炎患者均接受LAM 100 mg/d治疗,且均完成≥104周的治疗.治疗期间定期复查肝功能、HBV标志物(HBsAg、抗-HBs,HBeAg、抗-HBe、抗-HBc)及HBV DNA水平.分别比较和分析不同基线ALT、HBsAg、HBV DNA水平及治疗4周和12周时不同HBV DNA水平与治疗104周时疗效的关系.数据采用x~2检验及多元逐步Logistic回归分析.结果 基线ALT<5×正常值上限(ULN)和ALT≥5×ULN两组患者,治疗104周血清HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例分别为50.0%和86.8%(P<0.01).基线HBsAg<2000 COI和HBsAg≥2000 COI两组患者,治疗104周时HBsAg<500 COI的比例分别为19.1%和17.5%(P>0.05);HBsAg/抗-HBS血清学转换率分别为2.1%和2.5%(P>0.05),血清HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例分别为61.7%和67.5%(P>0.05).基线HBV DNA<1×10~6拷贝/ml和HBV DNA≥1×10~6拷贝/ml两组患者,至治疗4周和12周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例差异均有统计学意义(P值均<0.01),但至治疗104周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例分别为62.7%和67.1%,差异无统计学意义(P>0.05).治疗4周时HBVDNA<1×10~3拷贝/ml和HBV DNA≥1×10~3拷贝/ml两组患者,104周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例分别为70.7%和60.9%(P>0.05);治疗12周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml和HBV DNA≥1×10~3拷贝/ml两组患者,104周时HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的比例分别为78.8%和38.1%(P<0.01).结论 基线ALT≥5×ULN和治疗12周HBV DNA<1×10~3拷贝/ml的e抗原阴性慢性乙型肝炎患者用LAM继续治疗至104周时可以取得较好的病毒学应答.治疗前不同基线HBsAg水平对治疗104周时HBsAg的水平、HBsAg/抗-HBs血清学转换率和HBV载量的预测价值不大;基线HBV DNA水平对104周时是否获得病毒学应答的预测价值也不大.     

聚乙二醇干扰素联合利巴韦林治疗获极快速病毒学应答的初治基因1型慢性丙型肝炎患者疗效观察

目的观察获得极快速病毒学应答的初治基因1型慢性丙型肝炎患者,在继续接受36 w聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗后的疗效。方法将基线HCV RNA水平〉400000 IU/ml、接受聚乙二醇干扰素α-2a（180μg/w）联合利巴韦林（1000～1200 mg/d）治疗2 w后HCV RNA阴转的基因1型慢性丙型肝炎初治患者,随机分为两组,分别接受36 w和48 w治疗,在停药后随访24 w,观察疗效。结果本研究共纳入40例患者,两组各20例。治疗36 w患者在治疗结束时病毒学应答（ETVR）、持续病毒学应答（SVR）和复发率分别为100%（20例）、90%（18例）和10%（2例）,治疗48 w患者ETVR、SVR和复发分别为95%（19例）、90%（18例）和5.3%（1例）,两组比较无统计学差异（P〉0.05）;在40例患者,基线HCV RNA水平与SVR呈负相关（OR=0.422,95%CI为0.05～0.29,P=0.007）;在治疗36 w患者,基线HCV RNA〈6×10^7IU/ml患者SVR显著高于HCV RNA≥6×10^7IU/ml患者（P=0.005）,但在治疗48 w患者,未发现这种差异（P=0.063）。结论对于基线HCV RNA水平〉400000 IU/ml的基因1型慢性丙型肝炎初治患者,接受聚乙二醇干扰素α-2a联合利巴韦林治疗,如在2 w时获得病毒学应答,治疗36 w疗程与48 w疗程的SVR相当。     

供者淋巴细胞输注治疗异基因造血干细胞移植后EB病毒相关的淋巴细胞增殖性疾病的疗效和安全性

目的 采用控制数量的供者淋巴细胞输注(DLI)治疗EB病毒(EBV)相关的淋巴细胞增殖性疾病(PTLD),观察其有效性和安全性.方法 2006年11月到2009年11月移植的患者,临床或病理诊断EBV相关的PTLD采用DLI治疗者纳入研究.采用COBE血球分离机应用淋巴细胞程序采集白细胞,首选原供者,次选直系亲缘供者,冻存外周血采集物(G-PB)与移植时输入的外周血干细胞(PBSC)组分相同.控制输入的单个核细胞(PBMC)在(0.5～1.0)×108/kg.原基础免疫抑制剂预防移植物抗宿主病(GVHD),观察疗效及其副作用.结果 PTLD患者9例,输注13例次,输入外周血PBMC 0.8(0.16～1.03)× 108/kg,CD3+T淋巴细胞4.2(1.6～5.7)×107/kg.7例半相合移植患者采用了原供者,有效率为7/7,完全缓解率为6/7,退热中位时间2(1～5)d,淋巴结缩小中位时间6(1～14)d;7例中6例发生GVHD,均为轻中度,得到控制.至今无病存活3例.2例非亲缘HSCT采用了半相合供者的外周血白细胞,仅获得短暂部分疗效.结论 在配型不合/半相合移植中,采用原供者控制细胞数量的DLI并免疫抑制剂预防GVHD治疗EBV相关的PTLD安全有效.最佳方案尚需进一步研究.