两种人乳头瘤病毒分型检测方法的比较

目的 通过比较PCR联合地高辛标记探针杂交法与实时荧光定量PCR法检测宫颈液标本中人乳头瘤病毒(HPV)感染的一致性,评价PCR联合地高辛标记探针杂交法的临床应用价值. 方法 将4型HPV(16、51、54和56)探针3′端加尾地高辛标记,检测标记探针的灵敏度和特异性.收集63例第二代杂交捕获(HC-Ⅱ)阳性和18例HC-Ⅱ阴性的宫颈液标本,采用HPV通用引物MY11/09对所有标本L1区基因序列进行PCR扩增,利用地高辛标记探针杂交法对PCR产物进行检测分型;同时利用实时荧光定量PCR对这81例标本进行检测,将两者的检测结果进行比较. 结果 地高辛标记探针杂交法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型40例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,分别占HC-Ⅱ阳性标本的63.5%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;实时荧光定量PCR法检测出HC-Ⅱ阳性标本中HPV-16型39例,HPV-51型2例,HPV-56型2例,占HC-Ⅱ阳性标本的61.9%、3.2%和3.2%,HC-Ⅱ阴性标本中检测出HPV-16型1例;重复性检测显示两种方法检测4型HPV感染的变异系数(CV)为0～1.45%和0～1.50%,检测标本中4型感染的符合率为97.5% ～100%. 结论 PCR联合地高辛标记探针杂交法具有较好的灵敏度和特异性, 可能对于临床HPV分型检测有应用价值.     

129例生殖道人乳头瘤病毒感染的分型

目的 了解女性生殖道人乳头瘤病毒（HPV）感染的型别组成。方法 用荧光定量聚合酶链反应（PCR）对129例已确诊为HPV感染的门诊标本进行HPV6、11型和HPV16、18型的分型检测。结果 在129例标本中检出阳性126例,阳性检出率为97.7%。其中单独HPV6、11型阳性69例,占53.5%;单独HPV16、18型阳性14例,占10.9%;HPV6、11和HPV16、18型同时阳性43例,占33.3%;HPV6、11和HPV16、18型同时阴性3例。结论 在女性生殖道HPV感染中HPV6、11、16、18占绝对优势。     

人乳头瘤病毒DNA的PCR检测

本文应用聚合酶链反应检测了70例尖锐湿疣，乳头瘤石蜡包理组织中的人乳头瘤病毒DNA，结果表明：HPV-DNA的检出率为70.0%(49/70)，多重感染占阳性例数的53.1%。HPV6和（或）HPV11为本地区尖锐湿疣、乳头瘤组织中HPV感染的主要型别。     

聚合酶链反应及微板杂交法对人乳头瘤病毒分型检测

目的：为适应临床人乳头瘤病毒分型检测,建立了通用引物扩增（ＧＰ－ＰＣＲ）及微孔板杂交－ＥＬＩＳＡ检测法。方法：先进行ＧＰ－ＰＣＲ,其中一条引物５’端标记有地高辛,探针标记有生物素,通过包被在微孔板上的亲和素预先固定;将扩增产物加入预先包被有ＨＰＶ型特异寡核 酸探针和ＨＰＶ基因组混合探针的聚苯乙烯微孔板中,４２℃杂交仅需２０～３０ｍｉｎ;最后,用酶底物与所标记的酶进行显色择应,通过测定吸光度来判断结     

人乳头瘤病毒基因检测及分型方法研究进展

流行病学和分子生物学资料表明,人乳头瘤病毒(HPV)的感染能够引起子宫内上皮样瘤变(CIN)及宫颈癌的发生.并且HPV的不同型别致病力也存在差异,高危型别、高病毒载量的持续感染是促使宫颈癌发生的重要因素.因此,HPV感染的早期发现、准确分型及病毒定量对宫颈癌的防治具有重要意义.作者对HPV基因的检测和分型方法如核酸杂交、PCR、荧光定量PCR等,以及各方法的优缺点进行综述.     

尖锐湿疣患者两种取材方法检测人乳头瘤病毒的比较

尖锐湿疣患者两种取材方法检测人乳头瘤病毒的比较朱德宏，孔繁荣，韩保卫（邓州市人民医院皮肤科邓州４７４１５０北京医科大学第一附属医院皮肤科北京１０００３４）关键词聚合酶链式反应；尖锐湿疣；人乳头瘤病毒目前，用聚合酶链式反应（ＰＣＲ）方法检测尖锐湿疣（Ｃ...     

基因微阵列分型与实时荧光定量PCR检测人乳头瘤病毒

目的评价基因微阵列分型方法与实时荧光定量PCR技术检测人乳头瘤病毒及其对宫颈癌患者诊断的意义。方法基因微阵列检测人乳头瘤病毒21种亚型;实时荧光定量PCR技术定量检测人乳头瘤病毒6/11型和16/18型。结果基因微阵列检测人乳头瘤病毒较实时荧光定量PCR技术阳性检出率更高(P<0.05),而在特异性上无显著差异(P>0.05)。两种方法联合检测可以提高检测特异性和敏感度。结论基因微阵列分型方法可用于宫颈癌筛查,而实时荧光定量PCR技术对宫颈癌患者疗效判断和预后更有意义。     

实时荧光聚合酶链反应技术与第2代杂交捕获法检测高危亚型人乳头瘤病毒的比较

目的 比较实时荧光聚合酶链反应技术(实时PCR)检测人乳头瘤病毒(HPV)16、18型与第二代杂交捕获法(HC-Ⅱ)检测13种HPV高危亚型.方法 采用实时PCR与HC-Ⅱ分别检测宫颈脱落细胞标本中的HPV16、18型和13种HPV高危亚型,并进行测序分析.结果 HPV16、18型实时PCR总的检出率为24%,13种HPV高危亚型HC-Ⅱ总的检出率为46.6%;高度鳞状上皮细胞内病变(HSIL)组实时PCR和HC-Ⅱ的检出率均较低度鳞状上皮细胞内病变(LSIL)组要高,分别为54%与21%、84.3%与65.6%.HPV16、18型在HPV高危亚型中的总检出率为51%.有2例宫颈炎组标本HC-Ⅱ检测阴性而实时PCR检测阳性,测序结果与实时PCR一致.结论 实时PCR法检测HPV16、18较HC-Ⅱ灵敏度高,但检测的HPV亚型少,相比之下HC-Ⅱ更适合于临床上HPV高危亚型的筛查检测.     

应用聚合酶链反应方法检测宫颈癌患者的人乳头瘤病毒

目的探讨人乳头瘤病毒（human papillomavirus,HPV）在宫颈癌的发生中的作用。方法采用聚合酶链反应（PCR）-核酸内切酶分型检测宫颈癌活检组织中HPV-DNA,对来源于子宫颈癌患者的石蜡包埋组织标本进行四种常见生殖道人乳头瘤病毒（HPV）（HPV6、11、16、18）的检测和分型。结果在宫颈癌活检组织中HPV-16,18型39.1%,与正常妇女宫颈组织阳性率均为2.2%比较,差异均具有统计学意义。尖锐湿疣主要是HPV-Ⅰ（6,11型）感染,阳性率为69.2%,HPV-Ⅱ仅占4.2%。结论宫颈癌主要与HPV16及18型感染有关。     

检测人乳头瘤病毒DNA的技术方法─—原位PCR技术

人乳头瘤病毒（humanpapillomavirus,HPV）是一种嗜鳞状上皮的环状链DNA病毒,至今已经发现超过60种以上的亚型[1],而与人类上皮肿瘤发生关系最大的是HPV16．18型,随着致癌基因研究的深入,人们发现HPV16、HPV18型的E6、E7蛋白在致癌过程中起关键的作用,一般认为HPVE6蛋白能与P53肿瘤抑制基因结合形成复合物加速P53蛋白的降解过程,使其抑制肿瘤细胞的发生、发展的功能失效。同样,外肿瘤抑制基因产物与HPV18E7蛋白通过一个结构互补的部位形成一个复合物,使灿蛋白不能与特定的内源蛋白（EZF）结合,磷酸化过程受阻,导致细…     

尖锐湿疣患者人乳头瘤病毒的检测与分型

目的:了解尖锐湿疣(CA)患者人乳头瘤病毒(HPV)的型别分布。方法:采用实时荧光定量聚合酶链反应法对CA患者病变部位疣体或分泌物进行HPV DNA(高危型和低危型)检测。结果:110例CA患者中,HPV阳性检出率为100.00%。低危感染占64.55%,高危感染占14.55%,高低危复合感染占20.91%。不同性别和年龄患者HPV检出率差异均无统计学意义(P0.05)。结论:CA患者以低危型HPV感染为主,高危HPV感染有较高比例分布,提示应加强生殖器肿瘤的防治。     

食管癌组织中人乳头瘤病毒的检测

用人乳头瘤病毒（ＨＰＶ）保守基因的通用引物和１６、１８型特异性引物，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ），检测２０例正常新鲜活检食管粘膜，４０例新鲜食管癌组织和５１例石蜡包埋的食管癌组织标本的ＨＰＶＤＮＡ，在２０例正常人食管粘膜组织中ＨＰＶＤＮＡ检出率９．１％，癌组织中为３６．２％，鳞癌和腺癌分别为３４．７％、４７．１％，鳞癌以１６型感染为主，腺癌以１８型为主。但肿瘤分化程度与ＨＰＶ感染无关。结果提示：ＨＰＶ感染与食管癌的发生有一定关系，不同型别的ＨＰＶ与不同组织的亲和性有差别。     

广州地区石蜡包埋宫颈癌组织中人乳头瘤病毒的检测与分型

目的调查近30年广州地区宫颈癌组织中人乳头瘤病毒（Human papillomavirus,HPV）的感染状况和HPV主要型别。方法采用HPV通用引物对石蜡包埋宫颈癌组织标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物测序所得序列分析对HPV分型。结果99例宫颈癌组织HPVDNA检出率为26.2%,广州宫颈癌患者存在HPV16、18、33、52和58五种型别。结论在本地区的99例宫颈癌病理组织中,以16、58和33基因型最为常见,共占HPV阳性型别构成比的88.4%,说明广州地区与宫颈癌密切相关的HPV基因型别较为集中。     

河南食管癌高发区同一样本新鲜和石蜡固定组织人乳头瘤病毒检测差异分析

目的：探讨人乳头瘤病毒（HPV）在高发区食管癌中差异性检测的原因.方法：利用聚合酶链式反应（PCR）,对同一食管癌手术切除标本,从新鲜组织和石蜡固定组织两方面进行HPV16-DNA检测.结果：30例食管癌新鲜组织HPV16感染率为84%,对应石蜡固定组织为53%; 新鲜组织中3例HPV16阴性的标本在其对应的石蜡固定组织中3例均为阴性,27例HPV16阳性的新鲜组织标本中其对应石蜡固定组织中仅16例检测到HPV16-DNA.结论：HPV16-DNA在食管癌中的差异性检测结果与材料处理方式不同有关,尤其是固定组织在处理过程中,DNA断裂,形成一些小分子片段,以至于超出所要扩增的范围.     

胃癌组织中HPV感染的意义

目的 研究西安地区人乳头瘤病毒（HPV）的感染与胃癌的关系。方法 运用PCR方法,同时设计HPV共同引物和HPV16型和HPV18型巢式引物,对胃癌组织（n=40)、癌旁组织和非肿瘤组织（n=10)进行HPV DNA的检测。结果 胃癌40例组织中HPV检出15例,总检出率为37．5％;癌旁组织和非肿瘤组织未检出。HPV的检出以HPV16型为主,占检出阳性的80．0％,且与癌组织的分化程度密切相关。结论 HPV的感染、主要为高危型HPV16型的感染与本地区胃癌的病因学可能关系密切。     

人乳头瘤病毒在人大肠癌中检出

用聚合酶链反应(Polymerase chain reaction,PCR)法对28例大肠癌(均为分化程度不同的腺癌)及18例相应癌旁组织中人乳头瘤病毒(human papillomavirus,HPV)16和18型DNA分别进行检测。在28例大肠癌组织中分别检测到3例(10.8％)呈HPV16DNA阳性和18例(64.5％)呈HPV18DNA阳性。而相应的18例癌旁组织中仅检测到3例(16.7％)呈HPV18DNA阳性,未检测到HPV16DNA。为了证实扩增产物的特异性,我们用限制性内切酶对PCR产物分别进行了酶切分析,结果与预期的完全相符。本文提示HPV感染可能是大肠癌的发病因素之一。     

人乳头瘤病毒16型、18型DNA在涎腺肿瘤组织中的表达

目的探讨人乳头瘤病毒(HPV)16型、18型与涎腺肿瘤病因学之间的关系.方法采用特异引物PCR法为44例涎腺肿瘤组织标本中31例HPVs阳性组织DNA进行分型检测.结果检出HPV16E7阳性率为13.60%,HPV18E7阳性率为47.72%,涎腺肿瘤组织中HPV18E7阳性率明显高于HPV16E7阳性率;恶性肿瘤组中HPV16E7和HPV18E7阳性率显著高于良性肿瘤组(P＜0.05).结论HPV18型感染与涎腺肿瘤的发生密切相关;HPV16,18型E7基因在恶性肿瘤的发生中起重要作用.     

PCR直接测序法检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒DNA

目的 探索检测宫颈癌组织中人乳头瘤病毒(HPV)DNA的有效手段。方法 采用HPV通用引物对宫颈癌标本中的HPVL1区基因序列进行PCR扩增,根据PCR产物序列分析对HPV分型。结果 50例宫颈癌组织HPVDNA检出率为78%,其中HPV16和HPV18型混合感染最多见。检测出1例HPV58型,其L1区基因序列与德国标准株58型比对,未发现碱基变异。结论 PCR直接测序法是对宫颈癌组织中HPV检测和分型的一种有效方法,并可检测到HPV少见的特殊类型,同时也能提供已知的HPV型别的突变信息。     

保妇康栓对人乳头状瘤病毒抑制作用的实验研究

目的:探讨中药制剂保妇康栓对人乳头状瘤病毒(HPV)16亚型的抑制作用。方法:以不同浓度的含保妇康栓培养基体外培养宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8,相差显微镜下观察活细胞形态学变化;采用四甲基偶氮唑蓝比色法以及流式细胞术技术检测不同浓度保妇康栓对细胞增殖的影响;应用逆转录-聚合酶链反应技术(RT-PCR)检测人乳头状瘤病毒HPV16亚型E6E7的表达。结果:不同浓度的保妇康栓可以抑制细胞的增殖;在药物作用下,CaSki细胞G1期细胞增加(P<0.05),G2、S期细胞减少(P<0.05),CaSki细胞凋亡率高于对照组(P<0.05),而对H8细胞周期和凋亡率影响不明显;两种细胞HPV16E6E7基因片段mRNA表达均明显低于对照组(P<0.01)。结论:保妇康栓在体外抑制宫颈癌细胞系CaSki和宫颈永生化细胞H8增殖,其机制可能是通过抑制HPV16E6E7表达而抑制肿瘤细胞生长。