人白介素－1β水平与人牙周膜细胞OPG表达关系

目的：检测不同浓度重组人白介素－1β（recombinant human interleukin－1β,rhIL－1β）对体外培养人牙周膜细胞（human periodontal ligament cells,HPDLCs）表达骨保护因子（osteoprotegerin,OPG）的影响,研究rhIL－1β水平对牙周膜细胞骨向分化的作用。方法：正畸需要而拨除的健康前磨牙牙周膜,体外传代培养HPDLCs;ELISA法和RT－PCR法测定不同浓度rhIL－1β（0、5、10、15μg／L）下HPDLCs的OPG分泌量及mRNA表达。结果：ELISA和RT－PCR法检测结果显示,5、10、15μg／L rhIL－1β作用于HPDLCs均会下调其OPG蛋白分泌和mRNA表达。同一时间点与0μg／L对照组比较,5、10、15μg／L组OPG蛋白分泌和mRNA表达依此下调,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论：rhIL－1β水平升高会增强对HPDLCs的OPG表达抑制,对牙槽骨健康产生不利影响。     

红芪多糖对人牙周膜细胞增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响

目的：研究红芪多糖（HPS）对人牙周膜细胞（hPDLCs）增殖及分泌IL－1β、IL－6的影响。方法：采用改良组织块酶消化法培养人牙周膜细胞,经免疫组化SP法进行鉴定,MTT法检测细胞增殖情况,荧光实时定量PCR和酶联免疫法检测红芪多糖对LPS作用的hPDLCs分泌IL－1β、IL－6的影响。结果：10μg／mL HPS能够促进人牙周膜细胞增殖（P＜0．05）;10μg／mL LPS可显著刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6（P＜0．01）,而给予10μg／mL HPS能抑制LPS刺激人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6,且与LPS组具有显著性差异（P＜0．01）。结论：适宜浓度的红芪多糖能够促进体外培养的人牙周膜细胞增殖,并抑制LPS作用的人牙周膜细胞分泌IL－1β、IL－6。     

釉原蛋白对牙周膜干细胞迁移、黏附及增殖的影响

目的：检测釉原蛋白（amelogenin,AML）对牙周膜干细胞（PDLSCs）迁移、黏附和增殖的影响。方法：用0．25、50和100μg／ml 的 AML 培养人 PDLSCs。用划痕实验和 transwell 法检测 AML 对 PDLSCs 迁移的影响。用黏附实验检测 AML 对PDLSCs 黏附的影响。用 MTT 法和计数法检测 AML 对 PDLSCs 增殖的影响。结果：AML 可促进 PDLSCs 的迁移,而且呈剂量效应关系（P ＜0．05）。AML 对 PDLSCs 迁移和黏附有促进作用（P ＜0．05）,且随培养时间延长而增加。AML 可促进 PDLSCs的增殖,且呈剂量效应关系。结论：AML 可促进 PDLSCs 的迁移、黏附和增殖。     

促红细胞生成素对人牙髓细胞增殖和成骨分化的影响

目的：探讨促红细胞生成素（EPO）对体外培养的人牙髓细胞（hDPCs）增殖和成骨分化的影响。方法：体外培养鉴定人牙髓细胞。使用 EPO 对在成骨诱导培养基中培养的牙髓细胞进行刺激,CCK-8检测 EPO 对牙髓细胞增殖的影响;20 U ／ml EPO 培养 hDPCs 7 d 和14 d,采用碱性磷酸酶活性（ALP）检测和茜素红染色观察 EPO 对牙髓细胞矿化的影响;利用 Real-time PCR 检测加入 EPO 后牙髓细胞成牙本质向分化相关基因的表达情况。结果：EPO 以时间和剂量依赖性方式促进牙髓细胞的增殖;20 U ／ml 的 EPO 后作用,牙髓细胞碱性磷酸酶活性显著提高（P ＜0．05）,钙结节形成明显增多;成牙本质向分化相关基因 DSPP、OCN、OSTERIX、RUNX2的表达明显上调（P ＜0．05）。结论：EPO 能促进人牙髓细胞的增殖和分化。     

FGF18对人牙乳头间充质细胞增殖和矿化能力的影响

目的：初步探讨成纤维细胞生长因子18对人牙乳头间充质细胞增殖和矿化能力的影响。方法：采用MTT法和酶动力法检测FGF18对人牙乳头间充质细胞增殖、ALPase活性的影响，茜素红染色检测钙结节形成情况。结果：FGF18刺激人牙乳头间充质细胞48h后，在20μg／L、50μg／L、100μg／L、200μg／L显著促进细胞的增殖（P〈0．01），对细胞的ALP合成无显著性影响（p〉0．05），72h后10μg／L、20gμ／L、50μg／L、100μg／L、200μg／L均显著促进细胞增殖和ALP的合成：此外100μg／L和200μg／LFGF18可明显促进细胞钙化结节的形成（p〈0．05），结论：FGF18在人牙乳头间充质细胞的分化和矿化过程中可能起着重要的调节作用。     

依那西普对牙龈卟啉菌内毒素作用下原代培养牙周膜细胞影响的实验研究

目的　观察依那西普（Etanercept）对牙龈卟啉菌内毒素（lipopolysaccharide,LPS)作用下体外培养的人牙周膜细胞(HPDLCs)的增殖能力的影响。方法　体外原代培养人牙周膜细胞,经免疫细胞化学鉴定,加入LPS和1 μg/ml Etanercept+LPS,LPS浓度分别为10、50、100、200、300 μg/ml检测（吸光度）A值。采用MTT法测定细胞增殖能力。结果　 人牙周膜细胞原代细胞生长状态良好。第3代细胞进行鉴定,Vimentin染色呈阳性,Ck(pan)染色呈阴性。MTT法检测加入梯度浓度的LPS 24 h后,HPDLCs增殖率随着LPS浓度的增加,对HPDLCs的增殖抑制逐渐增强,200 μg/ml LPS能最大程度抑制HPDLCS的增殖,抑制率为46.21%(P<0.01)。Etanercept + LPS组对HPDLCs细胞作用相对增殖率与LPS组比较（P＜0.01）,能明显抑制LPS对HPDLCs的抑制作用。结论　TNF-α抑制剂Etanercept能明显抑制牙周膜细胞在内毒素刺激下的死亡。     

淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素表达的影响

目的 探讨不同浓度淫羊藿苷抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素（OPG）表达的影响.方法 体外培养人牙周膜细胞,用四唑盐（MTT）法检测不同浓度淫羊藿苷（0、0.001、0.01、0.1、1 μg/ml）及50μg/ml牙龈卟啉单胞菌超声提取物,不同时间（24、48、72h）作用下人牙周膜细胞的增殖水平.用RT-PCR及Western blot检测48h人牙周膜细胞骨保护素mRNA和蛋白的表达.结果 淫羊藿苷从0.01～1μg/ml对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白的表达有促进作用（P＜0.01）,浓度为0.1μg/ml作用最显著.结论 淫羊藿苷可抑制牙龈卟啉单胞菌超声提取物对人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达的影响,促进人牙周膜细胞增殖及骨保护素mRNA和蛋白表达.     

碱性成纤维细胞生长因子对人牙周膜细胞增殖与ALP活性表达的影响

目的：探讨碱性成纤维细胞生长因子（bFGF）以人牙周膜细胞的增殖与碱性磷酸酶（ALP）活性表达的影响,为bFGF应用于牙周组织的再生与修复提供实验依据。方法：采用MTT和ALP活性检测法,观察不同浓度（0．1－10ng/ml)的bFGF第24、48和72小时对5％和10％胎牛血清（FBS）体外培养的第3代人牙周膜细胞（PDLCs）的作用。结果：与对照组比较,①10％FBS,5ng／ml和10ng／ml的bFGF在第24、48、72小时,可显著促进PDLCs的增殖（P＜0．01－0．05）,5％,10ng／ml的bFGF在24、48小时,5ng／ml的bFGF在24小时对PDLCs有显著促增殖作用（P＜0．01）。②10％FBS,1ng／ml的bFGF在48、72小时,5ng／ml的bFGF在24、48、72小时,10ng／mlbFGF在48小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用P＜0．01－0．05）;5％FBS,10ng／ml的bFGF在24、72小时对PDLCs有显著增强ALP活性的作用（P＜0．05）。结论：以上结果提示：在一定的作用时间内一定条件下,5ng／ml和10ng／ml的bFGF可促进人PDLCs的生长和分化。     

Periostin对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的：研究小鼠重组Periostin对牙周膜细胞（PDL细胞）增殖及碱性磷酸酶（ALP）活性的影响。方法：采用MTT比色试验及酶动力学方法。测定PDL细胞的增殖和ALP活性。结果：Periostin仅在浓度为40μg/ml时,可显著促进PLD细胞的增殖（P＜0．01）,其余浓度则无作用,而其浓度在10μg/ml-80μg/ml范围中时,均可显著提高PDL细胞ALP活性水平（P＜0．05）。结论：小鼠重组Periostin对PDL细胞的增殖及ALP活性均有促进作用,但其在这两方面的作用存在着异,对此还需深入研究。     

雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响

目的：研究雌激素对大鼠骨髓基质细胞增殖和分化的影响,探讨其对成骨的影响。方法：体外培养4周龄雌性大鼠骨髓基质细胞,以不同浓度雌激素作用于成骨细胞,用噻唑蓝法测定细胞增殖情况;对硝基酚磷酸酯法测定细胞碱性磷酸酶活性;检测培养液中羟脯氨酸含量,了解细胞Ⅰ型胶原的分泌情况;通过矿化结节计数反映细胞的矿化能力。结果：雌激素促进成骨细胞增殖,增加碱性磷酸酶活性;提高培养液中羟脯氨酸含量,峰值浓度为10^-7mol／1,与对照组比较有统计学意义（P〈0．05）;雌激素显著提高细胞的矿化能力,10^-7mol／L浓度作用最显著（＋45．4％,P〈0．05）。结论：雌激素促进成骨细胞增殖和分化,提高其矿化能力,从而刺激骨形成。     

不同浓度肿瘤坏死因子对人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响

目的:观察不同浓度肿瘤坏死因子(TNF-α)对人牙周膜细胞增殖活性和碱性磷酸酶(ALP)活性的影响。方法:取第4代体外培养人牙周膜细胞(hPDLCs),分别与0、1、5、10、20 ng/mL不同浓度TNF-α共同培养7 d,采用MTT法测定培养后0～7 d各时间点HPDLCs的增殖活力;用实时PCR检测不同浓度TNF-α刺激72 h后细胞周期蛋白(CyclinD1)mRNA的表达;检测ALP活性。结果:与对照组相比,1、5 ng/mL的TNF-α均可促进HPDLCs的增殖和Cyclin mRNA和ALP的表达(P<0.05);10、20 ng/mL浓度可抑制PDLCs的增殖和Cyclin D1 mRNA、ALP的表达(P<0.05)。结论:不同浓度的TNF-α刺激牙周膜细胞后可以影响细胞的增殖和分化。     

淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响

目的：探讨淫羊藿苷对人牙周膜细胞增殖及骨向分化的影响,为淫羊藿苷在治疗牙周病方面的应用提供一定依据。方法：体外培养人牙周膜细胞,矿化诱导条件下将第3代细胞与10～0.001mg/L,6个浓度的淫羊藿苷作用,通过噻唑蓝（MTT）比色法、ALP活性测定及BSP表达水平,反应其对人牙周膜细胞增殖及分化的影响。结果：作用24h,各药物浓度均能促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用48h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）。作用72h,0.1～0.001mg/L组可促进人牙周膜细胞增殖（P〈0.05）,10mg/L组抑制人牙周膜增殖（P〈0.05）;作用72h,1～0.001mg/L组可促进人牙周膜碱性磷酸酶（ALP）活性（P〈0.05）;作用72h,0.1～0.001mg/L组的BSP表达水平较对照组显著增加（P〈0.05）。结论：淫羊藿苷在一定浓度范围内可促进人牙周膜细胞增殖及骨向分化。     

体外观察三种支架材料对人乳牙牙髓干细胞生物学行为的影响

目的：观察乳牙牙髓干细胞（SHEDs）在3种羟基磷灰石（HA）复合支架材料上黏附、增殖、分化情况。方法：利用正常替换的乳牙分离培养 SHEDs,免疫组织化学法鉴定细胞来源,体外诱导实验观察细胞分化能力。将 SHEDs 分别接种在羟基磷灰石／β-磷酸三钙（HA／TCP）,羟基磷灰石／胶原（HA／COL）和羟基磷灰石／聚乙丙交酯（HA／PLGA）支架材料上复合培养,于4、6、8、10 h 4个时间点检测各细胞黏附率,MTT 比色法检测 SHEDs 增殖情况;碱性磷酸酶（ALP）活性检测、能谱分析钙含量;Von Kossa 染色和灰度扫描细胞矿化能力。结果：SHEDs 在 HA／COL 上的黏附少于 HA／PLGA 和 HA／TCP（P ＜0．05）;HA／PLGA对 SHEDs 矿化诱导能力最强,其次是 HA／TCP,HA／COL 最弱。结论：SHEDs 在 HA／PLGA 上的黏附率、增殖率及矿化能力优于HA／TCP 和 HA／COL。     

茶多酚对炎性牙周膜细胞生物活性的影响

目的观察茶多酚对内毒素脂多糖(LPS)作用的人牙周膜细胞增殖和碱性磷酸酶活性的影响,为茶多酚在牙周疾病的防治中提供一定依据。方法体外培养人牙周膜细胞,采用MTT比色法观察茶多酚对LPS作用的人牙周膜细胞增殖活性的影响,通过碱性磷酸酶(ALP)活性测定法观察茶多酚对人牙周膜细胞的分化作用。结果100μg/ml LPS可抑制人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性。加入LPS同时分别给予50～1100μg/ml不同浓度茶多酚,能对抗LPS的抑制作用,增强人牙周膜细胞的增殖活性和碱性磷酸酶活性,其中在800μg/ml作用24h时促进作用达到最强。结论茶多酚可对抗内毒素对人牙周膜细胞的毒性作用,促进细胞的增殖和骨向分化。     

人参皂苷Rg1通过Akt/eNOS信号调控尼古丁胁迫下人牙周膜细胞的增殖和迁移

目的:探讨人参皂苷Rg1对尼古丁胁迫下的人牙周膜细胞(human periodontal ligament cells,HPDLCs)增殖和迁移的影响及分子机制.方法:采用组织块法分离培养HPDLCs,尼古丁(500 ng/mL)胁迫培养细胞7d.第3天分别进行人参皂苷Rg1 (0.01 μmol/L)处理、人参皂苷Rg1与PI3K抑制剂LY294002 (0.5 μmol/L)共处理、人参皂苷Rg1与Akt抑制剂Tricirbine(5μmol/L)共处理、人参皂苷Rg1与eNOS抑制剂L-NAME(1 mmol/L)共处理(Rg1+L-NAME组),持续处理至第7天.采用MTT法和Transwell法检测各处理组HPDLCs活力变化和细胞迁移率,并使用实时定量PCR与Western印迹法检测PI3K/Akt/eNOS信号蛋白变化,采用SPSS20.0软件包对数据进行统计学分析.结果:尼古丁抑制HPDLCs的增殖和迁移并显著上调PI3K表达,抑制Akt和eNOS表达;人参皂苷Rg1减缓尼古丁对细胞增殖和迁移抑制作用以及尼古丁对Akt和eNOS表达的抑制作用;Trieirbine与L-NAME衰减人参皂苷Rg1对尼古丁的抑制作用.结论:人参皂苷Rg1通过Akt/eNOS信号调控尼古丁胁迫下HPDLCs的增殖和迁移.     

经典Wnt信号通路在牙周膜细胞成骨分化过程中的调控

目的: 探讨经典Wnt/β-catenin信号通路对牙周膜混合细胞群成骨分化过程中的调控作用。方法: 体外组织块结合酶消化法培养牙周膜混合细胞群,通过RT-PCR、real-time PCR证实经典Wnt信号通路在牙周膜细胞中的表达,并运用细胞免疫荧光分析检测了β-catenin的表达位置及表达量;通过不同浓度的Licl激活牙周膜细胞中经典Wnt信号通路,并进行相应的诱导培养。培养14 d后,茜素红染色观察矿化结节形成情况,碱性磷酸酶活性检测ALP活性;通过CCK-8检测Licl刺激24 h、48 h、72 h后经典Wnt信号通路对牙周膜细胞增殖的影响。以单因素重复测量方差分析比较差异。结果: 经典Wnt/β-catenin信号通路在牙周膜混合细胞群中明显表达,可以通过Licl激活该信号通路,使β-catenin在细胞中累积引起下游变化;与对照组相比较,经典Wnt/β-catenin信号通路的激活引起牙周膜细胞矿化过程中矿化结节的减少,显著降低了ALP活性(P<0.01);经典Wnt通路对牙周膜混合细胞群增殖表现为显著的抑制作用(P<0.01)。结论: 经典Wnt/β-catenin信号通路抑制了牙周膜混合细胞群的矿化成骨过程,并抑制该细胞群的增殖。