人绒毛膜滋养层细胞的分离纯化及鉴定

目的建立一种简便易行、经济有效的纯化培养滋养层细胞的方法.方法:取孕6-8w的正常绒毛组织10例,采用胰蛋白酶消化法分离细胞,将细胞随机分为两组(各5例),一组用淋巴细胞分层液进行纯化,另一组未纯化,最后用含15%胎牛血清的培养基培养细胞.用免疫细胞化学法进行细胞纯度鉴定.结果本纯化的细胞阳性率为(68.6 2±2.69)%,纯化后的细胞阳性率为(91.60±1.55)%,两者之间的差异具极显著性意度( P<0.001).结论该法简便易行,经济有效,可获得纯度较高、合乎试验要求的细胞滋养层细胞.     

人早孕绒毛细胞滋养层细胞培养方法的改良

目的 探索一种简便高纯度的早孕滋养细胞的体外培养方法。方法 采用完整早孕绒毛通过胰蛋白酶联合胶原酶消化法分离,Percoll梯度分离法提纯体外培养,应用光镜HE染色和免疫细胞化学法检测细胞纯度。 结果 CK-7表达阳性细胞数可以达到90%以上。结论 完整绒毛消化和Percoll纯化联合可在短期内获得高纯度、高产量的滋养细胞以供后期试验,方法更加简便。     

绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离培养与鉴定

目的探索绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的分离和培养方法,并进行鉴定。方法采用胰蛋白酶和胶原酶两步消化法分离培养滋养层细胞,倒置相差显微镜观察滋养层细胞的形态学特点;应用常规HE染色和免疫组织化学染色,透射电镜技术进行绵羊多核绒毛膜滋养层细胞鉴定。结果倒置相差显微镜下,滋养层细胞为双核及多核细胞,细胞形态为上皮样,呈片状铺展生长;绵羊胎盘子叶与培养的滋养层细胞爬片的细胞角蛋白免疫组织化学染色均显示多核滋养层细胞胞质为棕色阳性信号,透射电镜可见滋养层细胞表面微绒毛发达,胞质内有较多膜包小泡及丰富的微丝和脂滴。结论建立了胰蛋白酶和胶原酶两步消化法分离培养绵羊多核绒毛膜滋养层细胞的方法,获得了较高纯度的具有生物学活性的多核绵羊绒毛膜滋养层细胞。     

绒毛滋养层细胞逆流迁移行为的研究进展

胎盘形成和发育期间，滋养层细胞群体先入侵子宫内膜基质并与毛细血管相接触，侵袭进入毛细血管后继续迁移，最后定居于母体螺旋动脉并对其结构进行重建，以确保胎儿胎盘系统得到充足的血液供应。在此过程中，子宫脉管中滋养层细胞迁移的方向与血流方向相反，是一种特殊的逆血流而上的迁移。为更好地了解和认识这种逆流迁移现象，就相关研究中所采用的细胞模型、实验方法及细胞逆流迁移相关调控因素的研究进展等进行了简要综述，以期对绒毛滋养层细胞入侵子宫的相关研究提供理论基础和依据。     

人早孕绒毛滋养层细胞的分离纯化及马鞭草抗早孕机理的初步研究

目的：探讨马鞭草抗早孕的细胞学作用机理。方法;正常妊娠６－８周早期胎盘Ｐｅｒｃｏｌｌ梯度离心分离出滋养层细胞进行体外培养,观察马鞭草对培养的滋养层细胞形态及绒毛膜促性腺激素分泌功能的影响。结果：２５,５０ｍｇ／ｍｌ马鞭草乙醇提取液对滋养层细胞生长及绒毛膜促性腺激素分泌有明显的抑制作用。结论;一定浓度的马鞭草可直接杀伤滋养层细胞,抑制绒毛膜促性腺激素的分泌而中止早孕。     

人滋养层细胞侵袭力分子调节机制研究

胎盘是妊娠过程中形成的暂时性的特异器官,它在母体和胎儿间起着重要的桥梁作用。滋养层细胞具有类似于肿瘤细胞迁移和浸润的能力,作为胎盘组织的主要组成细胞之一,在胚胎植入、胎盘的形成和发育等许多生理过程中发挥着重要的作用,但同时也是多种毒素和病原微生物入侵时的靶细胞。滋养细胞侵入过度将导致绒毛膜癌等疾病的发生,浸润不足则可能造成流产、子痫前期等妊娠期疾病。目前,诸多研究表明在胎盘形成过程中,有许多分子和信号通路参与对其滋养层细胞的调控,但滋养层细胞迁移与浸润的具体机制尚不完全明确。本文对人滋养层细胞侵袭力分子调节机制进行了系统论述,旨在为研究病理性妊娠的发生、发展过程提供参考。     

两种方法培养人早孕绒毛滋养层细胞的比较***

背景：人早孕绒毛滋养层细胞体外培养是研究各种妊娠疾病的基础,如何获得纯度高、数量多的滋养层细胞以及如何简化实验步骤,仍是目前研究的热点。 目的：寻求一种培养高纯度人早孕绒毛滋养层细胞方法。 方法：取5~10周正常绒毛组织,胰酶消化和差速贴壁联合应用法与组织块培养法分别进行人早孕绒毛滋养层细胞原代培养,免疫组织化学观察细胞角蛋白7和波形蛋白的表达,进行滋养层细胞纯度的鉴定。 结果与结论：两种方法均能培养出人早孕绒毛滋养层细胞,呈三角形,多边形。抗-细胞角蛋白7阳性表达,抗-波形蛋白阴性表达。胰酶消化和差速贴壁联合应用法培养细胞纯度高于组织块培养法(P < 0.05)。提示胰酶消化和差速贴壁联合应用法是一种培养人早孕绒毛滋养层细胞较好的方法。      

H2O2通过ERK通路抑制绒毛外细胞滋养层细胞的侵袭能力

目的研究活性氧过氧化氢（H2O2）对绒毛外细胞滋养层细胞（EVCT）侵袭行为的影响及其信号传导机制。方法建立EVCT体外培养模型,利用Transwell细胞侵入系统检测EVCT的体外侵袭作用,应用Western blot法评价细胞外信号调节蛋白激酶（ERK1/2）的活性变化,使用CCK-8测定细胞的生长状况。结果与对照组比较,15μmol/LH2O2和50 μmol/L PD98059均可显著抑制EVCT的侵入指数（分别为43.3±4.7,49.3±7.0）（P〈0.01）,同时降低EVCT的ERK1/2磷酸化水平（P〈0.01）,但并不影响EVCT的细胞活力（P〉0.05）。结论 H2O2可能通过抑制ERK1/2的激活,进而影响EVCT的侵袭行为,参与子痫前期的发病机制。     

米非司酮对早孕绒毛滋养层细胞Bcl-2和caspase-3表达的影响

探讨米非司酮对人早孕绒毛滋养细胞中Bcl—2和caspase-3表达的影响及其在滋养细胞凋亡中的作用。方法：将105例自愿要求终止妊娠的早孕妇女随机分成两组，即米非司酮流产组(55例)及人工流产组(50例)。采用免疫组化染色方法检测早孕妇女的绒毛组织中Bcl—2和caspase-3的表达。结果：米非司酮组与人流组绒毛滋养细胞中Bcl—2的表达率分别为54．6％和88．0％；caspase-3的表达率分别为89．1％和42．0％。米非司酮组与人流组相比较绒毛滋养层细胞Bcl—2呈低表达(P＜0．01)，caspase-3呈高表达(P＜0．01)。结论：Bcl—2和caspase-3在米非司酮诱导的早孕绒毛滋养层细胞凋亡的信号传导中起关键作用。     

脂多糖抑制滋养层细胞的迁移

目的 探讨脂多糖对滋养层细胞迁移的调节作用.方法不着留取正常早孕绒毛,分离滋养层细胞,采用无血清培养基培养,并利用Transwell检测浓度为0(对照组),11,和100ng/ml的脂多糖对其迁移能力的凋节作用.结果脂多糖作用后24h后,滋齐层细胞的迁移能力受剑明显的抑制,与对照组(One/ml)比较,差异有统计学意义,P<0.01.结论脂多糖能够抑制细胞滋养细胞的迁移.这可能与子痫前期的发病机制有关.     

简便绒毛细胞培养法制备染色体

目的探讨一种简便的绒毛细胞培养方法以及绒毛和胚芽染色体核型一致性分析。方法将33例标本(包括17例胚胎停育组和16例正常对照组)分别用胰蛋白酶法、胰蛋白酶加机械研磨法制备细胞悬液,培养后制备染色体,比较这两种消化方法在培养周期、核分裂相数等方面的差异;比较16例对照组标本在培养周期、分裂指数等方面的差异;将20例标本分别行绒毛、孕囊壁、胚芽染色体核型分析,比较三者染色体核型是否一致。结果 33例标本中有1例培养失败,培养成功率97%,16例胚胎停育组中检出异常核型7例。两种消化方法在绒毛细胞培养周期上具有显著相关性,但与核分裂相的数目无相关性。16例对照组中,与其他胎龄组相比,12周胎龄绒毛组织原代培养周期最长,有显著差异;二次传代周期和平均分裂指数均明显优于与原代。20例标本中有1例绒毛和胚芽染色体核型不一致。结论应用胰酶消化加机械研磨法制备绒毛细胞悬液,培养后制备染色体,方法简单高效;第二次传代培养有助于提高培养成功率并节约核型分析时间;对于同一标本,绒毛和胚芽染色体核型可能不完全一致。     

DC-SIGNR在人胎盘滋养层细胞中的表达及意义

目的:探讨DC-SIGNR在人胎盘绒毛组织中的定位及在体外培养滋养层细胞上的表达.方法:建立稳定的滋养层细胞原代培养体系,采用免疫组化单染及荧光双染的方法检测不同孕期正常胎盘绒毛组织及体外培养滋养层细胞上DC-SIGNR的表达.结果:DC-SIGNR主要表达于胎盘滋养层细胞、Hofbauer细胞及胎盘微血管内皮细胞的胞质及包膜,在原代培养的人绒毛膜滋养层细胞中的DC-SIGNR的表达与在体组织表达一致.结论:DC-SIGNR表达于不同孕期的胎盘组织及体外分离培养滋养层细胞,为研究滋养层细胞上该受体在宫内感染中的作用提供体外实验的细胞学基础.     

HSD3B1是一种新的滋养层细胞相关性标记物

滋养层细胞肿瘤和肿瘤样病变与非滋养层细胞肿瘤仅从形态学上鉴别有时很困难。尽管已有一些滋养层细胞肿瘤标志物如hPL、hCG、Mel-CAN、p63、HLA—G、CK18和inhibin-α等，但这些标记物大多数并不特异且有不同程度的缺陷。作者评价了HSD381作为滋养层细胞标记物的价值。该研究共检测了19例胎盘部位结节（PSN）、18例上皮样滋养细胞肿瘤（ETT）、9例巨大胎盘结节（EPS）、14例胎盘部位滋养细胞肿瘤（PSTT）、35例绒癌、86例宫颈鳞状细胞癌、16例宫颈腺癌、63例子宫内膜癌、84例肺癌（鳞癌41例、腺癌43例）和70例乳腺浸润性导管癌中HSD381的表达。结果发现HSD381高度表达于合体滋养层细胞及正常胎盘和种植部位的中间滋养层细胞，而细胞滋养层细胞不表达。在所有正常胎盘、绒癌、PSTT、ETT、PSN和EPS中均有HSD381表达，     

自然流产患者绒毛滋养层细胞PCNA和caspase-3的表达

目的从细胞增殖与细胞凋亡的角度探讨自然流产的发生机制。方法取正常早孕流产和自然流产病例各20例的绒毛组织,光镜观察绒毛形态学变化;免疫组织化学SP法检测增殖细胞核抗原(PCNA)及凋亡蛋白酶caspase-3在滋养层细胞中的表达。结果自然流产绒毛组织均出现不同程度的退行性改变,细胞滋养层的增殖指数较对照组降低,而细胞滋养层、合体滋养层的凋亡指数却明显升高。结论凋亡蛋白酶caspase-3可能参与自然流产的发生机制。     

负载滋养层细胞抗原对小鼠树突状细胞表型及功能的影响

目的 研究负载滋养层细胞抗原对小鼠髓源性树突状细胞(DC)分化成熟过程的影响,获得致耐受性DC.方法 体外使用粒细胞巨细胞集落刺激因子(GM-CSF)诱导小鼠骨髓细胞定向分化、经LPS刺激获得成熟DC;通过外胎盘锥组织块培养法获得滋养层细胞,制备可溶性抗原,加入DC培养体系.流式细胞术检测DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ的表达,ELISA法检测DC分泌IL-10和IL-12的浓度,混合淋巴细胞培养评估 DC刺激同种T细胞增殖、活化的功能.结果 成熟DC表型为CD40high CD80highCD86highMHC-Ⅱhigh,分泌大量的IL-12和极少量的IL-10 ,体外能有效刺激T细胞的增殖;负载滋养层细胞抗原的DC表型为CD40midCD80lo wCD86lowMHC-Ⅱlow,在分泌大量IL-12的同时IL-10也明显升高,不能有效刺激T细胞增殖,并使T细胞分泌细胞因子呈现明显Th2偏倚.结论 负载滋养层细胞抗原后的DC表面共刺激分子及MHC-Ⅱ表达降低,刺激T细胞增殖能力下降;其自分泌和促使T细胞旁分泌的细胞因子呈现Th2偏倚,是一种耐受性DC.     

血清代用品在绒毛膜细胞培养制备染色体中的应用

本文首次报道自行研制的血清代用品 (SS)替代小牛血清用于绒毛膜细胞培养制备染色体。通过 2 0 0例与常规方法的对比研究 ,结果表明 ,用血清代用品 (SS)替代大部分小牛血清进行绒毛膜细胞培养 ,其培养成功率及可分析的分裂相数与常规法比较均无显著性差异 (P >0 0 5 )。说明该代用品能用于绒毛膜细胞培养进行染色体分析     

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响

枸杞多糖对体外培养人绒毛膜滋养层细胞的影响王燕蓉卢小东徐晶芬（宁夏医学院组胚教研室）（南京医科大学组胚教研室）枸杞多糖（ＬＢＰ）具有抗衰老，增强机体ＳＯＤ活性，防止细胞膜损伤，增强免疫功能的作用。我们利用体外培养方法观察了ＬＢＰ对人早期绒毛细胞生长及...     

角朊细胞培养技术最新进展

角朊细胞的培养在组织工程化人工皮肤的构件中是重要的研究内容之一。近年来，人们对角朊细胞的几种主要培养方法进行了不同程度的改进。本综述了角朊细胞的几种主要培养方法，以及培养过程中各种细胞生长因子和物质影响研究的最新进展。