荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用价值

目的探讨荧光原位杂交(fluorescence in situ hybridization,FISH)技术在产前诊断中应用价值。方法对2009年11月至2012年8月在华中科技大学同济医学院附属同济医院进行产前诊断的1148例孕妇,利用FISH技术对羊水间期核细胞进行染色体数目检测。结果 1148例孕妇中确诊胎儿为21-三体综合征28例;18-三体综合征7例;13-三体综合征2例;45,XO(特纳综合征)1例;47,XXY1例;47,XYY1例;共检测出染色体数目异常患儿40例。结论 FISH技术应用于产前诊断染色体数目异常,成功率及准确率较高,结果可靠。     

国产探针荧光原位杂交技术用于产前诊断未培养羊水细胞染色体异常的研究

目的 探讨国产探针荧光原位杂交(FISH)技术用于产前诊断未培养羊水细胞染色体非整倍体异常的临床价值,评价国产探针的性能.方法 应用FISH技术埘全旧37家省级及地区级医院产前诊断中心就诊的孕16～24周的1369例孕妇的未培养羊水细胞进行快速产前诊断;应用多色FISH技术对5条染色体(21、13、18、X和Y)进行检测.同时将羊水细胞接种、培养,行常规细胞染色体核型分析,作为FISH检测结果的对照.结果 被检测的1369份样本中,1361例未培养羊水细胞获得诊断结果,检测成功率99.42%(1361/1369).共检出异常核型35例,异常核型枪出率为2.57%(35/1361),其中包括21三体22例;13三体4例;18三体6例;18二倍体、X0 1例;18二倍体、XXY 2例.FISH榆测结果与常规细胞染色体核型分析结果一致.结论 应用国产探针FISH技术检测未培养羊水细胞染色体数目异常具有快速、简便、所用样本量少的优势,结果准确可靠.     

改良荧光原位杂交技术在产前诊断中的应用

目的:评价改良荧光原位杂交(fluorescent in situ hybridization,FISH)技术在产前诊断中的应用。方法:用改良FISH技术检测119例孕16~24周孕妇的羊水间期细胞及10例孕25~32周胎儿脐血间期细胞,5例孕9~12周绒毛间期细胞,每例均行常规染色体核型分析。结果:应用改良FISH法,所有样本均在6h内获得检测结果,除2例羊水培养失败外,其余样本均在3周内获得细胞遗传学诊断。两种方法均检出特氏综合征、18-三体综合征、21-三体综合征各1例,另5例常规染色体核型分析异常,因超出检测范围,FISH法未能检出,所有样本的两种方法检测结果均一致。结论:经改良后的FISH技术缩短了诊断时间,缓解了孕妇及家属的焦虑心情,且可用于多种不同样本的检测,因其高效、省时、取材多样等优点在产前诊断具有重要的临床价值。     

荧光原位杂交技术在未培养羊水细胞产前诊断中的应用研究

目的:探讨运用荧光原位杂交(FISH)技术对未培养羊水细胞的染色体非整倍体进行快速诊断的临床应用价值.方法:对符合产前诊断要求的孕妇于孕18～24周抽取羊水,用13、21、18及X、Y号染色体探针对其未培养羊水细胞进行诊断,并与核型分析结果比较.结果:125例标本的核型分析中,成功培养123例,其中117例为正常核型,6例为异常核型,异常核型为21-三体2例,9号染色体臂间倒位3例,6号和7号染色体平衡易位1例;与核型分析相比,FISH只检测出2例非整倍体核型,其余染色体结构异常未能检出,FISH检测时间为24～48小时,较传统核型分析时间2～3周大大缩短,且同核型结果一致,特异性100%.结论:荧光原位杂交技术具有简便、准确等优点,可快速地辅助核型分析,缓解患者及家属情绪,有临床推广价值.     

国产13、18、21、X、Y五色探针在产前遗传病诊断中的应用价值

目的 探讨国产21,13,18,X,Y五色探针诊断胎儿最常见染色体疾病的应用价值。方法 采集101例孕周l4~22周孕妇羊水标本,应用国产检测试剂盒21,13,18,X,Y探针进行羊水间期细胞FISH检测,其结果与羊水细胞学染色体培养结果进行对照,计算其灵敏度、特异性、Kappa值等。结果 101例FISH检测全部成功,未见异常99例,发现2例异常核型:21三体嵌合体(47XX,+21/46XX),18三体(47,XY,+18)。并与细胞学染色体培养结果进行对照,所得结果均一致,符合率,灵敏度,特异性,kappa值,均为100%。结论国产五色荧光探针与羊水间期细胞杂交可快速诊断胎儿21,13,18,X和Y染色体数目异常。结果可疑者,要进行常规染色体核型分析。     

羊膜腔穿刺术的临床应用

羊膜腔穿刺术 (ａｍｎｉｏｃｅｎｔｅｓｉｓ)现已成为围产医学临床上不可缺少的一种手段 ,应用范围越来越广 ,本文仅就羊膜腔穿刺术在围产医学中的应用作一简述。1　先天异常的羊水诊断1 1　胎儿染色体疾病的诊断　于孕 16～ 2 0周作羊膜腔穿刺抽取羊水 ,通过羊水细胞培养作羊水细胞染色体分析。可用于常染色体异常、各种三体综合征、性染色体异常和Ｘ性连锁遗传病携带者的胎儿性别鉴定。近年发展起来的荧光原位杂交 (ＦＩＳＨ)技术 ,未培养的羊水细胞ＦＩＳＨ能快速(16小时内 )诊断羊水细胞染色体数目异常。羊水细胞染色体ＦＩＳＨ能对微小…     

孕妇外周血游离DNA产前筛查提示限制性胎盘嵌合一例

对孕妇外周血游离DNA(cf-DNA)产前筛查提示2三体、7三体、21三体高风险的1例胎儿进行产前诊断,采用羊膜腔穿刺术,通过细胞培养及荧光原位杂交(FISH)方法对胎儿细胞进行染色体数目分析;采用单核苷酸多态性微阵列(SNP array)技术,对胎儿细胞染色体的微缺失或微重复进行检测。结果提示,羊水细胞FISH检测的结果为7三体、21三体极低比例嵌合。羊水细胞染色体核型及SNP array结果均正常。胎盘组织FISH检测结果为100%2三体,100%7三体及73%21三体的嵌合。因此认为,cf-DNA检测结果存在假阳性,应对cf-DNA检测假阳性结果孕妇进行产前诊断以明确诊断。     

15230例孕中期唐氏筛查产前诊断的临床应用

目的:探讨孕中期唐氏筛查对检出胎儿染色体异常的预测价值。方法:2008年1月至2009年10月,采用时间荧光免疫分辨法对我院15230例孕中期(15～20+6周)妇女进行血清标志物甲胎蛋白(AFP)、游离雌三醇(uE3)、绒毛膜促性腺激素(β-HCG)3项指标进行检测,对于筛查结果为高风险的孕妇于孕20～24周行羊膜腔穿刺进行胎儿羊水细胞染色体核型分析,并对唐氏筛查情况进行效果评价。结果:984例孕妇唐氏筛查为高风险,高风险率为6.46%,其中唐氏综合征阳性孕妇736例,18-三体阳性78例,神经管缺陷阳性169例。有773例高风险孕妇接受羊水穿刺,发现胎儿染色体异常29例,异常检出率为3.75%,其中唐氏综合征11例,18-三体1例,69,XXX1例。唐氏筛查的敏感性和特异性分别为92.86%和95.25%。结论:孕中期唐氏筛查是预测异常胎儿和不良妊娠结局的有效手段之一,羊水细胞核型分析在产前诊断中具有重要的实用价值。     

8594例孕妇无创DNA产前检测在胎儿染色体非整倍体疾病筛查中的临床应用

目的:分析无创DNA产前检测(NIPT)技术在胎儿染色体非整倍体疾病筛查中的临床应用价值。方法:选择2014年10月至2017年12月在空军军医大学第一附属医院妇产科门诊接受NIPT的8594例孕妇为研究对象,统计不同年龄段、孕周的孕妇染色体异常风险增加情况,并进行NIPT与羊水细胞染色体核型分析的结果符合情况比较。结果:8594例孕妇筛查出染色体异常高风险96例(1. 12%)。筛查出21-三体综合征、18-三体综合征、13-三体综合征高风险44例(0. 51%),性染色体异常高风险45例(0. 52%)和其他常染色体异常高风险7例(0. 08%)。年龄≥35岁孕妇染色体异常高风险(1. 80%),高于30岁(0. 72%)和30～34岁(1. 19%)年龄段,差异有统计学意义(P 0. 05)。8594例孕妇中于孕中期(孕13～20周)接受NIPT的孕妇比例最高(6556例,76. 29%),经羊水细胞染色体核型分析确诊率也最高(42/61,68. 85%)。77例NIPT染色体异常高风险孕妇经羊水细胞染色体核型分析确诊54例(70. 13%),其中阳性预测值分别为21-三体综合征100. 00%、18-三体综合征62. 50%、13-三体综合征25. 00%、性染色体异常54. 55%、其他常染色体异常50. 00%。结论:NIPT对21-三体综合征具有较高的检测价值。选择孕中期进行NIPT准确性较高。NIPT可以作为高龄孕妇的主要筛查手段,能有效地避免染色体异常患儿的出生。     

多色探针荧光原位杂交技术用于诊断羊水细胞染色体异常

应用羊水细胞进行产前诊断 ,已广泛应用于临床。用间期细胞行原位杂交是检测染色体异常的新技术[1] 。我们应用双色Ｘ/Ｙ计数探针 ,多色Ｘ/Ｙ、13、18、2 1探针荧光原位杂交 (ｆｌｕｏｒｅｓｃｅｎｃｅｉｎｓｉｔｕｈｙｂｒｉｄｉｚａｔｉｏｎ ,ＦＩＳＨ)技术 ,对妊娠 12～ 2 2周孕妇行羊膜腔穿刺抽取羊水细胞 ,诊断染色体非整倍体和胎儿性别 ,现将结果报道如下。一、资料与方法1.资料来源 :选择 1998～ 2 0 0 0年在我院因分娩过畸形儿 ,要求行产前诊断或引产的孕妇 2 5例 ,孕周 12～ 2 1周 ,年龄 2 5～ 35岁。按不同孕周分为 5组 ,每两周为…     

FISH技术在流产组织检查及产前诊断中的应用研究

目的探讨FISH技术诊断流产组织、未培养羊水细胞染色体异常的临床应用价值。方法采用着丝粒、专一序列探针对流产绒毛组织、胎儿组织及产前诊断孕妇的羊水细胞进行FISH检测;并与常规细胞遗传学方法进行对比。结果 7例流产绒毛组织中FISH技术检测出5例染色体异常,分别是3例nuc ish 22q11×3,1例nuc ish 16q22×3,1例三倍体;2例流产胎儿组织中FISH技术未发现异常。孕中期产前诊断的156例孕妇,常规细胞遗传学方法发现3例胎儿染色体异常,分别为47,XX,+21 1例,46,XX,dup(?q21q22)1例,47,XXY 1例;FISH技术与常规细胞遗传学方法检测结果基本一致,在病例46,XX,dup(?q21q22)中,G显带400带水平进行染色体核型分析不能确定其21号染色体重复的确切区带,而FISH结果为nuc ish 21q22×3,证实探针杂交区域有重复。另1例孕晚期羊水FISH检测结果未见异常。结论 FISH技术在流产胚胎染色体检查及产前诊断中具有检测快速,操作简便,标本采集及取材时间不受限等优势,目前FISH技术也存在探针位点有限及无法检测染色体结构异常等问题。     

荧光原位杂交与核型分析技术产前诊断非整倍体的对比研究

目的:在羊水未培养细胞样本中建立并优化荧光原位杂交技术,应用国产探针检测,探讨其诊断未培养羊水细胞非整倍体的临床应用价值。方法:对100例孕12~27周未培养羊水细胞进行FISH快速产前诊断,对5条染色体(X、Y、13、21和18号)进行检测。以细胞培养常规核型分析作为FISH检测结果的对照。结果:被检100例羊水未培养细胞均获得诊断结果,检测出7例非整倍体,FISH结果与核型分析结果一致。结论:应用国产探针行FISH诊断未培养羊水细胞非整倍体,实验方法成熟稳定,结果准确可靠,符合产前诊断要求,有较大的临床应用价值。     

孕中期羊水细胞染色体核型分析及其异常核型发生率的比较

目的：分析孕中期羊水细胞染色体核型及比较不同异常核型的发生率,并对各种异常核型的临床意义进行探讨。方法1998年9月至2010年11月在复旦大学附属妇产科医院集爱遗传与不育诊疗中心行羊水细胞染色体检查的孕妇共13 648例,抽取并培养成功的羊水标本共计13 795份,即13 795个胎儿获得核型诊断,对上述胎儿根据其母亲（孕妇）不同检查指征进行分组：当孕妇年龄≥35岁时为高龄孕妇组（4065个）;血清学筛查提示高危时为血清筛查高危组（6462个）;超声筛查出现异常征象时为超声异常征象组（1539个）;已知夫妇中有一方为染色体异常时为夫妇染色体异常组（108个）;除此之外,其他胎儿列为其他因素组（1621个）。采用羊水细胞培养法对各组胎儿进行染色体核型分析,并用荧光原位杂交技术对78个≥26孕周的胎儿行常见非整倍体快速诊断,对153个核型异常胎儿的父母进行淋巴细胞核型分析。结果 (1)各组异常核型分类及其构成：13 795个胎儿中共发现异常核型388个,异常核型发生率为2.813％(388/13 795)。388个异常胎儿中,非整倍体最多,为59.8％ (232/388);常染色体结构异常为24.7％( 96/388);嵌合体为12.4％( 48/388);其他较少见的异常核型包括标记染色体为1.3％ (5/388),性染色体结构异常为1.0％(4/388),三倍体为0.8％(3/388)。除了夫妇染色体异常组,其他各组均以非整倍体占绝大多数,有4例罕见的非整倍体,分别出现在高龄孕妇组、超声异常征象组及血清筛查高危组。超声异常征象组异常核型种类最多,而夫妇染色体异常组其胎儿染色体异常种类最集中（常染色体结构异常）。嵌合体主要分布在血清筛查高危组,占该组异常核型的20.0％ (29/145)。(2)异常核型种类及发生率：异常核型种类中以21三体最为常见,占全部异常核型的35.6％( 138/388),其次为常染色体平衡性结构重排为20.6％ (80/388)、嵌合体为12.4％ (48/388)、18三体为11.3％ (44/388),其他较常见的异常核型包括常染色体非平衡性结构重排和45,X0,各为4.1％(16/388),47,XXY为3.9％(15/388)。(3)父母淋巴细胞核型分析：153个胎儿进行了其父母淋巴细胞的核型分析,并最终确定了胎儿异常核型来源：家族性异常58个,新发生的异常95个。78个胎儿的荧光原位杂交技术诊断结果与G显带核型全部一致,其中2个为21三体。结论不同检查指征孕妇的胎儿异常核型的构成不同;孕中期胎儿异常核型种类繁多,致畸风险与异常核型种类有关。     

收集脱落滋养层细胞进行产前诊断

目的采用不同方法收集宫颈脱落滋养层细胞用于胎儿性别鉴定,探讨用宫颈脱落滋养层细胞进行产前诊断的可行性。方法2000年2月-2001年2月在北京妇产医院计划生育科,按一定标准选取人工流产前的孕妇进行后穹隆棉拭子、宫颈棉拭子、宫腔冲洗液的取材。人工流产取出的绒毛用于制备绒毛染色体以诊断胎儿性别。对男性胎儿孕妇的取样用聚合酶链反应(Polymerase Chain Reaction,PCR)方法检测睾丸决定基因(Sex Determining Region Y,SRY)基因和多肽核苷酸原位杂交(Peptide Nucleic Acid Probes,Fluorescent in situ Hy-bridization,PNA—FISH)方法检测X、Y染色质。结果对69例孕周为5～11周的孕妇进行了取材。宫腔冲洗液扩增出SRY基因的阳性率为55.6％(6/11),宫颈棉拭子悬液为9.1％(1,11),后穹隆棉拭子悬液为9.1％(1,11)。1例孕5周 6其宫腔冲洗液用PNA—FISH检测到Y信号的比例为20％。结论用官腔冲洗液、宫颈棉拭子及后穹隆棉拭子方法,从宫颈获得胎儿脱落滋养层细胞可能是一种产前诊断的可行途径。     

妊娠中、晚期血清瘦素、β-hCG及ADAM12水平的变化及其与子痫前期发生的关系

目的：探讨妊娠中、晚期妇女血清瘦素、人绒毛膜促性腺激素β亚单位（β-hCG）及解整合素-金属蛋白酶12（ADAM12）的水平变化及这些指标对子痫前期（PE）发生的预测价值.方法：选择2007年6月-2008年5月在福建省妇幼保健院定期产检和住院分娩的189例妊娠妇女,分别测定妊娠中期（20～24周）和妊娠晚期（30～34周）血清瘦素、β-hCG、ADAM12的浓度,其中25例发展为PE者为病例组,164例正常妊娠者为正常组.根据受试者工作特征（ROC）曲线确定预测界限值.结果：①妊娠中期病例组血清β-hCG、ADAM12浓度显著高于正常组（P＜0.001）.②妊娠晚期病例组血清瘦素、β-hCG、ADAM12浓度明显高于正常组（P＜0.001）.③病例组妊娠晚期血清瘦素、β-hCG及ADAM12水平均较妊娠中期升高（P＜0.05）,正常组妊娠晚期血清瘦素水平较妊娠中期升高（P＜0.001）,而血清β-hCG与ADAM12水平2组间差异无统计学意义（P＞0.05）.④妊娠中期以血清β-hCG≥32 μg/L、血清ADAM12≥818 μg/L为预测界值,两者联合阳性预测值为82.61%,高于单项阳性预测值（P＜0.05）.两者联合ROC曲线下面积与单项ROC曲线下面积比较差异无统计学意义（P＞0.05）.⑤妊娠晚期以血清瘦素≥23 μg/L、血清β-hCG≥37 μg/L及血清ADAM12≥900 μg/L为预测界值,三者联合阳性预测值达92.31%,高于单项阳性预测值（P＜0.05）.三者联合ROC曲线下面积大于单项β-hCG及瘦素ROC曲线下面积（P＜0.05）,但与单项ADAM12曲线下面积差异无统计学意义（P＜0.05）.⑥联合妊娠中、晚期血清β-hCG预测PE发生的阳性率为81.25%;联合妊娠中、晚期血清ADAM12预测PE发生的阳性率为90.48%,均比单一指标的阳性预测值高.结论：检测妊娠中、晚期妇女血清β-hCG及ADAM12水平可作为PE发生的有效预测指标;联合多项指标并动态监测可进一步提高对PE发生的阳性预测值及准确率.     

妊娠晚期超声检查异常再次行葡萄糖耐量试验结果分析

目的分析妊娠晚期因超声检查异常行75g葡萄糖耐量试验(OGTT)的结果及影响妊娠期糖尿病(GDM)诊断的因素。方法选择2010年9月至2011年1月间北京大学人民医院产科门诊,妊娠中期常规GDM筛查和诊断试验阴性,晚期因超声提示羊水过多和(或)胎儿大再次行75gOGTT的孕妇116例为研究对象,分为GDM组和非GDM组,对可能影响GDM诊断的因素进行统计学分析。结果诊断GDM19例(16.4%)。单因素分析提示年龄>30岁及常规筛查或诊断试验孕周<24周的孕妇GDM诊断阳性率高于年龄≤30岁和常规筛查或诊断试验孕周≥24周的孕妇(P<0.05)。多因素分析提示相对于年龄≤30岁的孕妇,>30岁的孕妇患GDM的OR>30(P<0.05);相对于超声检查时体质指数(BMI)较孕前增幅<4的孕妇,增幅>6的孕妇患GDM的OR=0.08(P<0.05),但增幅>6的孕妇超声检查孕周晚于增幅<4的孕妇(P<0.01)。结论对于妊娠中期常规筛查或诊断试验阴性的孕妇来说,妊娠晚期超声检查提示羊水过多和(或)胎儿大时,年龄>30岁的孕妇患GDM的可能性增加,超声检查时BMI较孕前增幅>6的孕妇可能性减少,但须考虑孕周的影响。     

Lack of correlation between amniotic fluid and maternal plasma contents of beta-endorphin, beta-lipotropin, and adrenocorticotropic hormone in normal and pathologic pregnancies

Reported are the concentrations of beta-endorphin, beta-lipotropin, and adrenocorticotropic hormone (ACTH) in the amniotic fluid and plasma of 40 healthy pregnant women at different stages of gestation. Moreover, the amniotic fluid levels of the three peptides were evaluated in 20 other pregnant women affected by different pathologic conditions (Cooley's disease, gestosis, diabetes, placental insufficiency, etc.). A silicic acid extraction procedure was performed on the samples. Each extract was subjected to Sephadex G-75 column chromatography, and the two fractions corresponding to beta-lipotropin and beta-endorphin were collected, freeze-dried, and assayed by two specific radioimmunoassays. Levels of ACTH were measured by radioimmunoassay directly on the extracts. Levels of beta-endorphin in amniotic fluid showed the highest values in the first trimester (173 +/- 30 fmol/ml, mean +/- SEM) but were significantly decreased in the second (75.2 +/- 14) and third trimesters (14.3 +/- 1.8). An inverse trend characterized plasma levels of beta-endorphin, which showed a progressive increase from the first trimester to term (10.4 +/- 11.1). Amniotic fluid levels of beta-lipotropin remained stable during the first (48.6 +/- 6.3) and second (54.6 +/- 11.1) trimesters, but decreased significantly in the third trimester (17.9 +/- 2.3). The plasma concentrations of beta-lipotropin showed the highest levels in the first trimester (10.9 +/- 0.9), and decreased significantly at term (8.9 +/- 1.3). Last, amniotic fluid levels of ACTH decreased from 55.3 +/- 4.75 fmol/ml in the first trimester to 12.5 +/- 1.16 in the second trimester, and rose again in the third trimester to 34.4 +/- 6.6 fmol/ml. Plasma levels of ACTH were characterized in the first two trimesters by values twice those recorded for nonpregnant women, and decreased at term to 8.9 +/- 1.4 fmol/ml. In the pregnant patients with fetuses affected by Cooley's disease (second trimester) and in those with edema-proteinuria-hypertension (EPH) gestosis (third trimester), amniotic fluid levels of beta-endorphin, beta-lipotropin, and ACTH were in the same range as those in healthy pregnant women.     

3405例产前诊断的指证及其结果评价

目的:分析产前诊断指证与胎儿染色体检测结果的关系。方法:3405例有产前诊断指证的孕妇,进行羊膜腔穿刺或脐静脉穿刺术,取羊水细胞或脐血细胞培养,作胎儿染色体核型分析。结果:3405例孕妇共检出胎儿染色体异常88例,染色体异常率为2.6%,显著高于一般人群的异常率(P<0.01)。其中夫妇一方为染色体平衡易位携带者组的胎儿染色体异常率达25.9%(7/27),产前胎儿超声异常标记组、孕母血清唐氏筛查阳性组和高龄孕妇组的异常率分别为6.2%(49/778)、1.7%(22/1283)和1.1%(7/664)。18-或21-三体儿妊娠史组、体外受精组、本次妊娠有先兆流产史组和孕期不良因素接触组,均未检出胎儿染色体异常。结论:出现胎儿染色体异常率最高的指证,依次为夫妇一方染色体平衡易位携带者、产前超声发现胎儿异常标记、孕母血清唐氏筛查阳性和高龄孕妇。有针对性地进行产前诊断,可有效地控制和减少出生缺陷的发生。     

Circulating levels of MCP-1 are increased in women with gestational diabetes

OBJECTIVE: We investigated whether gestational diabetes mellitus is associated with monocyte-chemoattractant-protein-1 (MCP-1) and soluble CD40 ligand (sCD40L), the functional relevant proteins in the inflammatory process. METHODS: In all 32 women with gestational diabetes mellitus, 18 women without gestational diabetes mellitus and 40 nonpregnant women were included. MCP-1 and sCD40L were measured at the time of the oral glucose tolerance test (second trimester), in the third trimester and postpartum. RESULTS: MCP-1 was higher in pregnant women (women with gestational diabetes mellitus and without) than in nonpregnant women (p < 0.001) in the third trimester, and also in the second trimester and postpartum. MCP-1 was elevated in patients with gestational diabetes mellitus in the third trimester compared to healthy pregnant women (p = 0.007). In gestational diabetes mellitus, MCP-1 increased from the second to the third trimester (p = 0.003). We found no association of sCD40L and gestational diabetes mellitus. CONCLUSION: The elevation of MCP-1 in the third trimester in gestational diabetes mellitus suggests an association between inflammation and GDM. Copyright (c) 2008 John Wiley & Sons, Ltd.