携带野生型PTEN基因的重组腺病毒治疗子宫内膜癌的体外研究

目的:观察携带野生型PTEN基因的重组腺病毒(Ad-PTEN)体外转染子宫内膜癌细胞后的表达,并探讨其对肿瘤细胞产生抑制增殖、诱导凋亡的作用及机制.方法:细菌内同源重组方法构建Ad-PTEN,体外转染PTEN基因突变的子宫内膜腺癌RL95-2细胞中,X-gal染色检测转染效率.应用RT-PCR、Western印迹、细胞免疫组化检测Ad-PTEN在RL95-2细胞中的转录及表达; 应用细胞计数、MTT实验, 观察Ad-PTEN对RL95-2细胞生长的影响;应用光镜、透射电镜观察外源性PTEN基因表达对RL95-2细胞形态学及超微结构的影响;应用流式细胞分析仪(FCM)检测Ad-PTEN对RL95-2细胞周期分布的影响、凋亡诱导作用及半胱氨酸天冬氨酸特异蛋白酶casapase-3的激活.结果:外源性野生型PTEN基因经腺病毒介导成功转入RL95-2细胞,3种方法均检测出有PTEN mRNA及PTEN蛋白的表达,当感染复数(MOI)为50时,体外转染效率达到100%.Ad-PTEN显著抑制RL95-2细胞生长并诱导其凋亡.此外, Ad-PTEN还能诱导RL95-2细胞周期G0/G1期阻滞以及caspase-3的激活.结论:重组腺病毒Ad-PTEN是高效的基因转移系统,能将PTEN目的基因转移到丧失该基因功能的子宫内膜癌RL95-2细胞中,对RL95-2细胞产生强有力的生长抑制及凋亡诱导作用,其机制可能包括细胞周期G0/G1阻滞及caspase-3 蛋白酶的激活.     

PTEN基因对子宫内膜癌细胞PI3K/AKT通路的影响

 【目的】探讨PTEN基因在子宫内膜癌PI3K/AKT通路中的作用,评估PTEN基因在抗肿瘤治疗中的意义。【方法】利用慢病毒载体系统, 构建人PTEN基因RNA干扰慢病毒载体和PTEN基因过表达慢病毒载体,分别转染PTEN野生型的HEC-1A细胞和PTEN突变型的Ishikawa细胞, 建立PTEN 基因敲减及过表达的细胞模型,Western Blot方法检测PTEN基因敲减或过表达前后PTEN蛋白的表达和AKT通路的活化情况, MTT法检测慢病毒转染前后细胞增殖的变化,流式细胞术检测慢病毒转染前后细胞周期及细胞凋亡率的变化。【结果】1. HEC-1A细胞转染PTEN基因干扰慢病毒载体后,细胞的增殖曲线和细胞凋亡率与对照组比较无明显变化。但Ishikawa细胞转染PTEN基因过表达慢病毒载体后,增殖曲线和细胞凋亡率显示其生长呈明显抑制状态。2.当HEC-1A细胞转染了RNA干扰病毒后（HEC-1A-RNAi）,Western Blot 结果显示PTEN蛋白表达下调,其EGFR, p-EGFR, mTOR, p-mTOR, AKT, p-AKT蛋白表达增强,当Ishikawa细胞转染了过表达载体病毒后（Ishikawa-PTEN）,Western Blot 结果显示其PTEN蛋白表达上调,p-EGFR,p-mTOR,AKT,p-AKT蛋白表达减弱。3.HEC-1A-RNAi细胞周期中G1期细胞比例减少,S期细胞比例增加,Ishikawa-PTEN细胞周期中G1期细胞比例增加,S期细胞比例减少。【结论】PTEN 基因可以抑制细胞增殖过程, 有可能成为子宫内膜癌患者基因治疗的选择之一。     

肉桂醛促进子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的机制

【目的】探讨肉桂醛对子宫内膜癌RL95-2细胞凋亡的影响及其作用机制。【方法】选取肉桂醛作用子宫内膜癌RL95-2细胞,噻唑蓝（MTT）比色法检测子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖活性和肉桂醛的IC50,Hoechst33258染色荧光显微镜观察细胞凋亡形态学改变,流式细胞术检测RL95-2细胞的凋亡百分率,Western blot检测肉桂醛对RL95-2细胞Cleavedcaspase-3、Caspase-3、NF-κB、IL-6和IGF-R蛋白表达的影响。【结果】肉桂醛可降低子宫内膜癌RL95-2细胞的增殖率,与药物浓度和作用时间有关;与溶剂对照组比较,肉桂醛组（0.29、0.59和1.20mg/mL）作用48h后RL95-2细胞的凋亡百分率明显增高（P<0.01）,出现典型的凋亡小体,Cleavedcaspase-3蛋白的表达明显增加（P<0.01）,Caspase-3蛋白的表达无明显变化（P>0.05）,而NF-κBp65、IL-6和IGF-R蛋白的表达均明显降低（P<0.05）。【结论】肉桂醛可降低RL95-2细胞NF-κB·p65、IL-6和IGF-R蛋白的表达,促进RL95-2细胞的凋亡,从而起到抗子宫内膜癌作用。     

PTEN基因影响K562细胞周期的分子机制探讨

【目的】探讨抑癌基因PTEN对人慢性粒细胞白血病细胞系K562细胞周期的影响。【方法】将携带有野生型PTEN和绿色荧光蛋白的腺病毒（Ad-PTEN-GFP）及对照载体腺病毒（Ad-GFP）转染人慢性粒细胞白血病细胞系K562。MTT检测细胞增殖抑制率;流式细胞仪检测转染效率、细胞凋亡率和细胞周期的变化;荧光定量PCR（FQ-PCR）检测PTEN、CyclinD1、CyclinD2、CDK4、P27Kip1 mRNA水平变化,Western blot检测上述蛋白表达水平的变化。【结果】与Ad-GFP组比较,Ad-PTEN-GFP转染K562细胞后,细胞凋亡率最高为30%,细胞周期显示：G0/G1期细胞比例由54.9%增加至78.5%,G2/M期比例由30.2%降至13.6%,Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4 mRNA及Cyclin D1蛋白表达降低,P27Kip1 mRNA及蛋白表达增加。【结论】PTEN基因高表达可以促进K562细胞凋亡,并通过抑制Cyclin D1、Cyclin D2、CDK4及增加P27Kip1表达使细胞周期阻滞在G0/G1期。     

腺病毒载体介导的大鼠DNA多聚酶β重组体的构建及其在PC12细胞中的表达

【目的】为探讨DNA多聚酶β在神经细胞损伤中的作用与机制，构建其重组腺病毒载体，并在PC12细胞中表达。【方法】RT—PCR获取大鼠DNA多聚酶β（POLβ）的编码序列，TA克隆测序，酶切POLβ基因并连人穿梭质粒pAdTrack—CMV，电转至含腺病毒pAdeasy骨架质粒的大肠杆菌BJ5183。重组腺病毒质粒（pAd—polp）和Lipofectamine2000转染293细胞，用重组腺病毒感染PC12细胞。【结果】10个TA克隆中有3个克隆的序列与GENE BANK中大鼠POLβ cDNA序列完全一致，同源重组检测时30个克隆中有8个含目标条带。DNA序列正确的POLβ重组腺病毒质粒转染293细胞后，感染Ad—polβ的293及PC12细胞荧光显微镜下可见绿色荧光，重组腺病毒Ad—polβPCR鉴定含目标条带，Ad—polβ感染PC12细胞Western Blot检测到POLβ蛋白表达。【结论】成功构建了大鼠DNA多聚酶β的腺病毒重组体并在PC12细胞中表达     

Biglycan对地塞米松诱导血管平滑肌细胞钙化的作用

【目的】初步探讨地塞米松导致VSMCs钙化的分子机制。【方法】用地塞米松（Dex）诱导血管平滑肌细胞（VSMCs）,检测其双链蛋白聚糖（BGN）的表达。并通过10^-8mol／LDex诱导BGN重组腺病毒Ad／BGN感染的VSMCs．分别检测VSMCs钙化程度,BGN、osteocalcin、cbfal、骨形态生成蛋白4（BMP4）的表达。实验分4组（n=3）：Ad／Bgl—BGP组：用空载体Ad／Bgl感染细胞;Ad／BGN—BGP组：用Ad／BGN感染细胞;Ad／Bgl．Dex组：用Dex诱导Ad／Bgl感染的VSMC：Ad／BGN—Dex组：用Dex诱导Ad／BGN感染的VSMCs。【结果】Ad／BGN转染后,VSMCs钙化增强,osteocalcin、cbfal和BMP4蛋白水平较之相应对照组表达明显增多（P〈0．05）,而Dex诱导组在转染Ad／BGN后osteocalcin、cbfal、BMP4蛋白表达更多。Dex诱导后,Ad／BGN转染的VSMCs,其BGN蛋白的表达量较未加Dex的相应对照组显著增加（P〈0．05）。【结论】BGN能促进地塞米松诱导的血管平滑肌细胞钙化。     

miR-34c抑制人子宫内膜癌的机制分析

目的 MicroRNAs (miRNAs)是内源性表达长度约为22个核苷酸的小RNA分子,通过结合到靶mRNA上而抑制基因的表达。近年的研究表明某些miRNAs可以调节肿瘤细胞的增殖与迁移,然而miRNA在子宫内膜癌中的作用有待于进一步探索。本研究旨在探讨miR-34c在人子宫内膜癌中的表达规律、功能和分子机制。 方法 通过荧光定量PCR技术检测20例人子宫内膜癌组织标本中miR-34c的表达。通过阳离子脂质体介导的方法将miR-34c转染入人子宫内膜癌细胞RL95-2中,应用MTS法检测子宫内膜癌细胞的增殖,克隆形成实验检测子宫内膜癌细胞的生长,流式细胞术检测细胞周期,Transwell实验检测子宫内膜癌细胞的迁移。生物信息学和荧光素酶报告基因实验确认miR-34c作用的靶基因。RNAi技术下调c-Met的表达。通过蛋白印迹检测miR-34c对c-Met蛋白以及细胞内重要信号通路与细胞周期相关蛋白的影响。 结果 miR-34c在子宫内膜癌中表达明显降低。miR-34c能使子宫内膜癌细胞RL95-2细胞周期滞留在G₁期,显著抑制细胞的增殖。细胞移形实验发现miR-34c能够显著抑制RL95-2细胞迁移。生物信息分析表明c-Met是miR-34c作用的靶基因,进一步通过荧光素酶报告基因实验得以证实。蛋白印迹分析发现miR-34c能下调RL95-2细胞中的c-Met蛋白、p-Akt蛋白以及p-ERK1/2蛋白表达情况,同时还能够下调CDK4、CDK6蛋白以及p-Rb蛋白的表达水平。RNAi技术下调c-Met的表达能够明显抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移。 结论 本研究结果证明miR-34c通过作用于靶基因c-Met而抑制子宫内膜癌细胞的增殖与迁移,说明miR-34c是子宫内膜癌中的重要抑癌基因。      

全反式维甲酸对人子宫内膜癌细胞MMP-9表达影响的研究

目的全反式维甲酸（all trans retinoic acid，ATRA）对多种肿瘤细胞具有明显的诱导分化作用，对人子宫内膜癌细胞亦如此，本文通过观察ATRA对子宫内膜腺癌细胞株（RL95—2）中基质金属蛋白酶-9（matrix metalloproteinase 9，MMP-9）的作用，进一步探讨ATRA对肿瘤细胞浸润性的影响。方法体外培养的子宫内膜癌细胞分为两组，一组给予ATRA处理，另一组设为对照组，用免疫组织化学方法检测两组RL95—2细胞中MMP9的表达。结果经ATRA处理后的子宫内膜癌细胞中MMP-9呈阴性表达，未用药组MMP-9呈阳性表达，定位于细胞浆。结论ATRA对体外培养的RL95—2细胞中MMP-9的表达具有抑制作用，可能降低子宫内膜癌细胞的浸润性。     

ＲＮＡｉ沉默ＰＥＬＰＩ／ＭＮＡＲ基因对子宫内膜癌细胞增殖和细胞周期的作用

【目的】 构建脯氨酸－谷氨酸－亮氨酸富集蛋白１（ＰＥＬＰ１）基因慢病毒表达载体,研究沉默ＰＥＬＰ１／雌激素受体非基因组活性辅助调节因子（ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ）基因表达对子宫内膜癌细胞增殖和周期的作用及机制。【方法】 构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,并转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,Ｒｅａｌ－ｔｉｍｅ ＰＣＲ和ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ和蛋白水平的表达。使用普通培养基和加入Ｅ２的培养基培养各组细胞,ＭＴＴ检测各组细胞增殖情况;流式细胞仪检测细胞生长周期情况;Ｗｅｓｔｅｒｎ ｂｌｏｔ检测ＥＲ下游靶基因ｃ－ｆｏｓ,ｃｙｃｌｉｎ Ｄ１的蛋白表达水平。【结果】 成功构建合成靶向ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ＲＮＡｉ慢病毒表达载体,转染子宫内膜癌Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞,转染后 ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ ｍＲＮＡ的表达和蛋白的表达分别下降８６％和６５％（Ｐ ＜ ０．０５）。转染后Ｉｓｈｉｋａｗａ细胞与对照组相比增殖抑制（Ｐ ＜ ０．０５）, 细胞周期Ｇ０／Ｇ１期细胞比例增加,Ｓ期细胞比例减少 （Ｐ ＜ ０．０５）。加入雌激素后,三组细胞的生长速度加快,细胞Ｓ期的比例增加,转染组增殖抑制明显（Ｐ ＜ ０．０５）,Ｓ期比例降低（Ｐ ＜ ０．０５）。转染组ＥＲ下游基因ｃ－ｆｏｓ、ｃｙｃｌｉｎ－Ｄ１蛋白水平均显著降低（Ｐ ＜ ０．０５）。【结论】 在子宫内膜癌细胞中沉默ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ的表达能能抑制细胞生长、使细胞阻滞在Ｇ１期,下调ＥＲ靶基因蛋白表达,ＰＥＬＰ１／ＭＮＡＲ有望成为子宫内膜癌治疗的潜在靶点。     

来曲唑对人子宫内膜癌细胞作用的研究

目的：探讨第3代芳香化酶抑制剂来曲唑（letrazole）对子宫内膜癌细胞生长的抑制作用。方法：体外培养人子宫内膜癌细胞株RL-952，培养液中加入来曲唑和（或）丙酸睾酮、醋酸甲地孕酮（MA），用计数法分析细胞的生长，用流式细胞仪检测细胞周期和凋亡细胞，并对药物处理过的细胞进行苏木精．伊红（H-E）染色、光镜下观察细胞形态和凋亡细胞。结果：来曲唑联合丙酸睾酮、MA对RL-952子宫内膜癌细胞周期有影响，使G0／G1期的细胞增加，S期、G2／M期细胞减少；单用丙酸睾酮或来曲唑对RL-952子宫内膜癌细胞周期均无明显影响。结论：芳香化酶抑制剂来曲唑可抑制丙酸睾酮所致RL-952子宫内膜癌细胞株的增殖。     

Adenovirus-mediated PTEN gene transfection suppresses growth and promotes chemosensitivity of endometrial carcinoma

Objective： To determine the potential of sustained transgene expression by intratumoral injection of Ad-PTEN in the nude mouse model of endometrial carcinoma. Methods and Results： We constructed recombinant adenovirus carrying the wild-type PTEN gene （Ad-PTEN）. RL95-2 cells, an endometrial carcinoma cell line lacking PTEN function, was infected with Ad-PTEN and showed increased expression of PTEN and chemosensitivity to doxorubicin, decreased proliferation rate, and elevated apoptosis and Go/G1 arrest. Furthermore, the tumorigenicity of these cells was also completely suppressed. These results indicated that gene therapy with Ad-PTEN could significantly inhibit the endometrial carcinoma xenografts growth in nude mice by intratumoral injection, induce apoptosis of tumor cells, and reduce expression of proliferating cell nuclear antigen （PCNA）. Immunohistochemistry analysis also showed that the expression of progesterone receptors （PR） in Ad-PTEN treated tumor cells were induced, while P-glycoproteins （P-gp） and estrogen receptors （ER） decreased significantly. Conclusion： PTEN may play an important role in the development of endometrial carcinoma. Our findings cast new lights for treatment ofendometrial carcinoma.     

Ad-PTEN对人小细胞肺癌NCI-H446细胞生长的抑制作用

目的研究重组腺病毒第10号染色体同源丢失性磷酸酶张力蛋白基因（PTEN）对小细胞肺癌的抑癌增效和化疗增敏效应及其分子机制。方法采用重组腺病毒载体PTEN（简称Ad-PTEN）感染QBI-293A细胞,并用该细胞进行病毒扩增和效价测定。将Ad-PTEN感染NCI-H446小细胞肺癌细胞。分为5组：PBS组、空载体Ad组、Ad-PTEN组、顺铂（DDP）组和Ad-PTEN＋DDP组,Western blot鉴定PTEN基因表达,MTT法和流式细胞仪（FCM）检测Ad-PTEN对NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长抑制和诱导凋亡的增效作用,用RT-PCR检测细胞凋亡相关基因p53、bax、caspase-3、bcl-2、和survivin的转录。结果 Ad-PTEN可在QBI-293A细胞中增殖。Ad-PTEN感染NCI-H446细胞后,Western blot检测到了PTEN基因的表达。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN＋DDP组体外能明显抑制人NCI-H446小细胞肺癌细胞的生长和诱导凋亡,且Ad-PTEN＋DDP组效应较Ad-PTEN组、DDP组更为显著（均P〈0.05）。Ad-PTEN组、DDP组、Ad-PTEN＋DDP组的NCI-H446细胞中的p53、bax及caspase-3基因表达均上调,而Bcl-2和Survivin基因表达均下调,这些凋亡相关基因的上调或下调的表达趋势以Ad-PTEN＋DDP组最显著（均P〈0.05）。结论 Ad-PTEN体外可抑制NCI-H446小细胞肺癌细胞生长,Ad-PTEN对DDP的细胞毒作用具有增敏效应,其机制可能与上调p53、bax及caspase-3基因表达和下调bcl-2和survivin基因表达有关。     

Construction and Expression of Human PTEN Tumor Suppressor Gene Recombinant Adenovirus Vector

Phosphatase and tensin homologue deleted onchromosome10(PTEN)is a newtumor suppres-sor gene and possesses mutation in multiple kindsof tumors which include breast cancer[1].Teng[2]found the incidence for loss of heterozygosity(LOH)in breast cancer speci mens was48%(32/67),and the mutation and inactivation of PTENgene plays a central role in cell migration,growthandinvasion of breast cancer[3].This study ai ms atestablishing a kind of proliferative defective recom-binant adenovirus vector A…     

PTEN IVS4基因多态性与子宫内膜息肉及子宫内膜癌风险的相关性

目的 探讨PTEN IVS4基因多态性（rs 3830675）与子宫内膜息肉及子宫内膜癌风险的关系.方法 本研究是以中国汉族人群为研究对象的病例对照研究,选取150例子宫内膜息肉患者为病例组,100例年龄相匹配的健康女性为对照组.应用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性PCR-RFLP分析方法对单核苷酸多态性（r3830675）进行基因分型.结果 对照组、子宫内膜息肉组和子宫内膜癌组年龄、体质量指数、初产年龄、产次、吸烟及饮酒分布均无统计学差异（P＞0.05）.PTENIVS4基因型和等位基因分布在病例组和对照组中无统计学差异（χ2=0.996,df=2,P=0.608;χ2=0.651,df=1,P=0.420）.病例组与对照组携带（-/＋）、（＋/＋）基因型与（-/-）基因型相比发生子宫内膜息肉的风险无统计学差异（OR=0.864,95％ CI：0.505～1.478,P=0.593;OR=0.770,95％ CI：0.452-1.312,P=0.337）.携带等位基因[-]与等位基因[＋]相比发生子宫内膜息肉的风险也没有显著差异（OR=0.857,95％CI：0.589～1.247,P=0.420）.在病例组中,携带（-/＋）基因型较（-/-）基因型发生子宫内膜癌风险显著降低（OR=0.433,95％ CI：0.207～ 0.908,P=0.027）,等位基因[＋]较等位基因[-]发生子宫内膜癌风险显著降低（OR=0.542,95％CI：0.305～ 0.962,P=0.036）.结论 PTEN IVS4多态性可能是子宫内膜息肉恶化的危险因素.     

PTEN基因重组腺病毒载体的构建及鉴定

目的构建含PTEN基因的重组腺病毒载体,为PTEN进行肺腺癌的基因治疗奠定基础。方法用PTEN引物VT415和VT416扩增PTEN基因后,分别用EcoRⅠ＋SalⅠ双酶切PCR-PTEN和PSUCMV,回收并纯化PTEN cDNA小片断和PSUCMV的大片断,使两者连接获得含有PTEN基因的重组穿梭质粒载体PSUCMV-PTEN;采用细胞内同源重组方法构建PTEN基因重组腺病毒载体,将质粒PSUCMV-PTEN与含有5型腺病毒右臂的质粒Pbghe3通过Lipofectamine 2000共转染至293细胞,经PCR鉴定,扩增病毒,氯化铯密度梯度离心法纯化浓缩,测定病毒滴度。结果经双酶切和PCR进行鉴定,经鉴定正确的腺病毒命名为VSUCMV-PTEN,TCID_（50）法测定病毒滴度为1.0×10^10pfu/ml。结论成功构建了含PTEN基因的重组腺病毒载体Ad-PTEN,为下一步体内外实验证实PTEN对肺癌的抑制作用研究打下基础。     

二甲双胍对人子宫内膜癌细胞增殖的影响

目的探讨二甲双胍在体外对人子宫内膜癌细胞增殖的影响及其可能的作用机制。方法二甲双胍干预人子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞不同时间后,采用MTT法检测其对细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞周期,Western印迹法检测IGF-1Rβ、Akt和p-Akt的表达。结果二甲双胍显著抑制子宫内膜癌RL95-2和KLE细胞的增殖。流式细胞术检测显示二甲双胍使G_0/G_1期细胞比例升高,S期细胞比例降低。Western印迹法检测显示二甲双胍能够降低IGF-1Rβ和p-Akt的表达。结论二甲双胍能抑制子宫内膜癌细胞生长,其作用机制可能与下调IGF-1Rβ表达和抑制Akt活性有关。     

PTEN基因重组腺病毒载体对脑胶质瘤U251生长和凋亡的影响

目的探讨PTEN基因对人脑胶质瘤细胞株U251生长及凋亡的影响。方法携带PTEN基因的重组腺病毒载体转染U251细胞株,采用RT-PCR技术和Western blot方法检测Ad-PTEN-GFP组及Ad-GFP及Control组中PTEN mRNA及蛋白水平表达,用MTT及流式细胞仪检测各组细胞生长、周期及凋亡率等变化,Western blot检测细胞蛋白水平表达的变化。结果 Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,经荧光显微镜、PCR和Western blot证实转染成功。Ad-PTEN-GFP转染U251细胞后,细胞生长明显受抑制（P〈0.05）。Ad-PTEN-GFP转染组中p-Akt及P65蛋白水平下降,与Control组相比差异有统计学意义。结论 PTEN基因转染后能抑制人脑胶质瘤U251的生长,调控细胞周期,可能通过PTEN-Akt-NF-кB促进细胞凋亡。     

野生型PTEN 过表达对体外活化肝星状细胞内钙离子浓度的影响

目的 探讨野生型第10 号染色体缺失的磷酸酶张力蛋白同源物基因（PTEN）过表达对体外活化肝星状细胞（HSC）内钙离子浓度的影响。方法 体外培养活化大鼠肝星状细胞系（HSC-T6）,利用腺病毒载体,将野生型PTEN 基因转染活化HSC ;Western blot 及实时荧光定量聚合酶链反应（qrt-PCR）检测HSC 的PTEN 蛋白及mRNA 表达;采用钙离子荧光探针Rhod-2/AM,于激光扫描共聚焦显微镜下检测HSC 内钙离子浓度变化。实验分组：① Control 组：腺病毒转染时以DMEM 代替病毒液;② Ad-GFP 组：转染表达绿色荧光蛋白（GFP）的对照空病毒Ad-GFP ;③ Ad-PTEN 组：转染携带野生型PTEN 基因并表达GFP 的重组腺病毒Ad-PTEN。结果 野生型PTEN 在活化大鼠HSC 大量表达,3 组HSC 内钙离子浓度比较,差异有统计学意义（P <0.05）,Ad-PTEN 组HSC 内钙离子浓度（251.60±90.88）低于Control 组（1 953.95±132.99）及Ad-GFP 组（1 937.57±115.17）,而Control 组与Ad-GFP 组之间HSC 内钙离子浓度比较,差异无统计学意义（P >0.05）。结论 野生型PTEN 过表达可降低体外活化大鼠HSC 内钙离子浓度。