尿激酶受体反义寡核苷酸抑制乳腺癌细胞的浸润

尿激酶受体（uPAR）与乳腺癌细胞的浸润转移有关【瞩。通过站抗尿激酶（＂l，A）或uPAR的功能可能是抑制乳腺癌浸润转移的有效手段。本研究应用uPAR反义寡校青酸（Anti－0DNS）研究11r7rtll在乳腺癌细胞浸润、转移中的作用。一、材料与方法1．主要试剂及仪器：uPAR单克隆抗体为美国AInricandipec产品。BiocoaMatrigel浸润小室为美国Bectonfi。kinson］211：：）wale产品。流式细胞仪EpicsXL型为美国Culter公司产品。GSap扫描吸光度仪为美国Hther＆iendricInstants产品。2．细胞培养：人乳腺癌MDA－MK231细胞置含体积分数0．15…     

肺癌细胞粘附分子CD_(15)的表达及其意义

对60例肺癌组织进行了细胞粘附分子CD_(15)表达的免疫组化研究。结果发现,CD_(15)在癌旁正常组织的4/10例支气管粘膜上皮和3/10例肺泡上皮游离面弱阳性表达;在肺癌组织中明显增强表达,总阳性率66.7％,其中腺癌(85.3％)显著高于鳞癌(50％),P<0.05,大细胞癌1/4例阳性,小细胞癌2例均阴性,其阳性物质主要位于细胞浆、细胞膜或腺腔缘。CD_(15)表达随肺癌分化程度减低、淋巴结转移和分期增高而明显增高(P<0.05)。结果表明,CD_(15)对判断肺癌发生、发展、预测淋巴结转移和预后是一种良好指标。     

CD_(44V6)在鼻咽鳞癌中的表达及其临床意义

目的： 探讨转移特异性ＣＤ４４ 变体ＣＤ４４Ｖ６ 在鼻咽鳞癌中的表达及其临床意义。方法： 利用免疫组化ＳＰ方法检测５６ 例鼻咽鳞癌石蜡标本中ＣＤ４４Ｖ６的表达，并对其阳性表达与临床因素之间的关系进行探讨。结果：５６例鼻咽鳞癌中ＣＤ４４Ｖ６ 总阳性表达率为６２５ ％ 。Ⅰ－ Ⅱ期与Ⅲ－ Ⅳ期鼻咽鳞癌之间，高中分化与低分化鳞癌之间ＣＤ４４Ｖ６阳性表达率均无明显差别（ Ｐ＞ ００５） ；ＣＤ４４Ｖ６阳性率在有颈淋巴结转移组和无颈淋巴结转移组之间也无明显差别。远处转移组ＣＤ４４Ｖ６ 阳性率明显高于非远处转移组（ Ｐ＜ ００５） ；放疗后生存５ 年以上组ＣＤ４４Ｖ６ 阳性率明显低于生存５ 年以下组（ Ｐ＜ ００５） 。结论： ＣＤ４４Ｖ６ 的阳性表达与鼻咽鳞癌病人的远处转移及预后不良有关，并可作为判断鼻咽鳞癌生物学行为和预后的一个有用指标     

CD_(44V6)在肺癌中的表达及其临床意义

目的　探讨 CD44 V6 在肺癌中的表达及其临床价值。方法　采用免疫组化 ( SP法 )检测了 45例非小细胞肺癌 ( NSCL C)和 16例小细胞肺癌 ( SCLC)中 CD44 V6 分子的表达情况。结果　 13 1例 NSCL C呈现 CD44 V6 阳性反应 ,阳性率为 68.9% ,而 SCLC则全部阴性 ( P<0 .0 1)。 2在鳞、腺癌中 ,有淋巴结转移组中的 CD44 V6 阳性率高于无淋巴结转移组 ( P<0 .0 5 )。结论　 CD44 V6 在 NSCL C转移过程中可能起重要作用 ,并可作为一个预后指标 ,而 SCL C的转移则不依赖于 CD44 V6 的介导 ;而且 CD44 V6 可作为一种新的标志物 ,用于鉴别肺癌的组织学类型。     

脂质体介导的CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞粘附功能的影响

目的：观察脂质体介导的CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞粘附功能的影响，探讨CD44分子在原发性开角型青光眼(POAG)发病过程中可能的作用。方法：采用硫代修饰的CD44反义寡核苷酸，通过脂质体导人体外培养的人眼小梁细胞，RT—PCR、Western印迹及MTT法观察CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞CD44基因表达及粘附功能的影响。结果：RT—PCR及Western印迹结果提示：CD44反义寡核苷酸抑制人眼小梁细胞CD44表达。MTT法检测显示：CD44反义寡核苷酸对人眼小梁细胞与细胞外基质透明质酸的粘附起抑制作用且呈浓度依赖性。结论：CD44反义寡核苷酸抑制人眼小梁细胞与细胞外基质透明质酸的粘附，粘附分子CD44可能参与了POAG发病过程。     

hTERT反义寡核苷酸对乳腺癌细胞增殖的影响

目的探讨hTERT反义寡核苷酸抑制端粒酶活性对乳腺癌细胞增殖的影响。方法用脂质体介导反义寡核苷酸转染MCF-7乳腺癌细胞株,采用TRAP-ELISA法检测转染后细胞端粒酶的活性,观察其前后的变化。MTT法检测细胞活性,流式细胞仪观察细胞周期及细胞凋亡率变化。结果转染细胞的端粒酶活性及细胞生长都明显受到抑制。流式细胞仪检测到细胞凋亡峰,细胞阻滞于S期,正义寡核苷酸则无此作用。结论端粒酶hTERT为靶点的反义寡核苷酸可明显抑制乳腺癌细胞的增殖,且具有促凋亡作用。     

凋亡抑制因子反义寡核苷酸对肝癌细胞生物学作用

目的: 探讨survivin反义寡核苷酸对人肝癌细胞凋亡、增殖、化疗药物敏感性的影响. 方法: 设计合成特异性survivin的反义寡核苷酸(ASODN). 以高表达survivin基因的人肝癌细胞系(SMMC-7721)为靶细胞、ASODN为阻断剂,Western blot法检测细胞survivin表达情况, 通过MTT试验观察ASODN对该细胞系的生长抑制作用, 倒置显微镜观察细胞形态变化, 流式细胞仪分析细胞增殖周期, MTT法检测survivin表达抑制前后细胞对紫杉醇敏感性影响. 结果: ASODN明显抑制了SMMC-7721肝癌细胞的生长, 细胞分裂阻滞在分裂期的中期,并诱导细胞发生凋亡, 而各对照组细胞生长良好; 各ASODN药物组细胞凋亡指数明显高于各对照组(P<0.05)且细胞增殖指数明显低于各对照组(P<0.05); 紫杉醇药物组细胞IC50低于对照组(16.2±2.2) μg/L vs (35.5±4.3) μg/L, P<0.01. 结论: survivin ASODN能下调其蛋白表达, 诱导人肝癌细胞凋亡, 抑制细胞增殖,增加肝癌细胞对化疗药物的敏感性.     

反义血管内皮生长因子(VEGF)转染体内抑制胆囊癌VEGF及其受体表达的研究

目的:探讨Oligofectamine介导的血管内皮生长因子(VEGF)反义寡核苷酸(ASODN)转染对人胆囊癌GBC-SD细胞裸鼠移植瘤的生长及VEGF、Flt-1和KDR表达的影响。方法:通过裸鼠皮下接种体外培养的人胆囊癌GBC-SD细胞建立人胆囊癌裸鼠移植瘤模型,并将裸鼠分为对照组(A组)、VEGF SODN Oligifectamine组(B组)和VEGF ASODN Oligifectamine组(C组),各组裸鼠在接种后24h内,在接种部位皮下分别缓慢注射200μl磷酸缓冲液(PBS)、VEGF SODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl)及VEGF ASODN100μg Oligofectamine0.5μl(总体积为200μl),每3天1次,连续治疗5周,观察各组裸鼠的成瘤性、体积及瘤重的变化,并运用免疫组化技术检测胆囊癌裸鼠移植瘤中VEGF、Flt-1和KDR的表达变化。结果:A、B、C组裸鼠2周时的成瘤率分别为87.5%、87.5%和37.5%,C组显著低于A、B组(P<0.05),5周时各组的成瘤率均为100%。各组裸鼠移植瘤5周时的体积和瘤重分别为:A组(253.49±27.11)mm3和(1.96±0.17)g,B组(255.84±26.51)mm3和(1.86±0.21)g,C组(125.45±17.49)mm3和(0.97±0.13)g,C组显著低于A、B组(P<0.05),C组的抑瘤率为(50.79±9.19)%。A、B组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达均无统计学差异(P>0.05),而C组裸鼠移植瘤VEGF、Flt-1和KDR的表达较A、B组明显减弱(P<0.05)。结论:VEGF ASODN在体内能显著抑制人胆囊癌裸鼠移植瘤的增殖,降低其在裸鼠体内的成瘤性,抑制VEGF、Flt-1和KDR在蛋白水平的表达,抑制裸鼠移植瘤的生长及血管的形成。     

E-cd及CD_(44)V_6在乳腺癌中的表达及意义

目的探讨E-钙粘素(E-cadherin,E-cd)及粘附分子CD_(44)的变构体CD_(44)V_6在乳腺癌中的表达与淋结巴转移及临床分期的关系。方法应用免疫组化SP法检测53例乳腺癌中E-cd、CD_(44)V_6的表达情况。结果53例乳腺癌组织中,E-cd、CD_(44)V_6的阳性表达率分别为64.15%(34 63)、64.15%(34/53),有淋巴结转移和临床分期Ⅲ、Ⅳ者CD_(44) V_6的表达显著高于无淋巴结转移和Ⅰ、Ⅱ期者(P均<0.01),而E-cd的表达在有淋巴结转移和TNM临床分期Ⅲ、Ⅳ者明显低于无淋巴结转移和Ⅰ、Ⅱ期者(P均<0.01)。结论CD_(44)V_6在乳腺癌中的过度表达及E-cd的下调表达在乳腺癌的发生、发展中可能协同起作用,并可作为判断乳腺癌生物学行为的指标。     

CD_(44)v_6与肿瘤侵袭和转移研究进展

CD44是由单一基因所编码的具有高度异质性的单链膜表面糖蛋白家族,介导细胞与细胞、细胞与细胞外基质之间的黏附作用,其拼接变异体的不同构成了其基因产物的多样性;尤其拼接变异体V6(CD44v6)被认为具有致瘤性;CD44v6在一定程度上参与了肿瘤的发生发展,是预后因子之一,并且可能作为肿瘤进展的标志物。CD44v6的过表达与肿瘤的侵袭、转移和临床分期有关。对CD44v6的检测不仅能预测患者的预后,而且还可为肿瘤的个体化治疗直接提供信息。     

MMP7反义寡核苷酸对肺腺癌A549细胞粘附和侵袭能力的影响

目的:观察基质溶解素(Matrilysin,MMP7)反义寡核苷酸(Antisense oligodeoxynucleotide)对肺腺癌A549细胞体外粘附和侵袭能力的影响.方法:采用硫代磷酸修饰的MMP7 ASODN,通过脂质体导入A549细胞,RT-PCR检测MMP7 mRNA表达;平板粘附模型和Boyden chamber模型比较A549细胞的粘附和侵袭能力.结果:MMP7 ASODN转染A549细胞后,与未转染组和脂质体组比较,RT-PCR电泳条带相对光密度值显著降低(P<0.01).粘附于平板和穿过Boyden chamber的细胞数有明显下降(P<0.01).结论:MMP7 ASODN可以有效抑制肺腺癌A549细胞株MMP7基因的表达,降低细胞粘附和侵袭能力.     

CD_(44)V_6、PCNA和VEGF在乳腺癌中的表达及其相关性分析

目的 :探讨 CD4 4V6、增殖细胞核抗原 (PCNA)、血管内皮细胞生长因子 (VEGF)在乳腺癌中的表达及其与乳腺癌浸润和转移的关系。方法 :采用免疫组化 S- P法检测 76例乳腺癌组织中 CD4 4V6、PCNA、VEGF的表达。结果 :CD4 4V6、VEGF在乳腺癌中表达阳性率分别为 86 .8%、80 .3%。CD4 4V6表达同肿瘤大小、组织学分级、淋巴结状态相关有显著性 (P<0 .0 5 ) ;VEGF则与组织学分级和淋巴结状态相关有显著性 (P<0 .0 5 )。 CD4 4V6的表达与 PCNA、VEGF的表达相关 (P<0 .0 5 )。结论 :CD4 4V6、PCNA、VEGF可以作为评价乳腺癌浸润和转移的指标 ,三者在淋巴结转移过程中具有协同作用。     

c-myc的反义寡核苷酸抑制血管平滑肌细胞增殖的研究

目的探讨ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖的研究。方法　贴壁法培养血 管平滑肌细胞,将不同浓度的反义及正义寡核苷酸加入培养液,观察对血管平滑肌细胞增殖的作用。结果５μｇ／ｍｌ ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸加入培养液后第 ５、７天抑制血管平滑肌细胞增殖,１５μｇ／ｍｌ ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸加入培养液 后第３、５、７天抑制血管平滑肌细胞增殖。各浓度ｃ－ｍｙｃ的正义寡核苷酸未发现其抑制血管平滑肌细胞增殖。结论 ｃ－ｍｙｃ的反义寡核苷酸抑制培养大鼠血管平滑肌细胞增殖。     

细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸在小鼠体内的分布及其作用

目的 探讨细胞间粘附分子-1反义寡核苷酸(ICAM-1-ASO)静脉注射后在小鼠体内的分布及其对心脏组织ICAM-1表达的作用。方法 FITC荧光标记的ICAM-1-ASO(10mg／kg)经小鼠颈外静脉注射6h后，应用荧光显微镜观察其在小鼠体内的分布；取心脏组织进行免疫组织化学及半定量RT-PCR检测。观察心脏组织中ICAM-1的表达，研究ICAM-1-ASO对心脏组织ICAM-1表达的作用。结果 ICAM-1-ASO经静脉注射6h后，在。肾脏以及心脏组织中可见较多的颗粒状荧光分布，而在肝、肺、脾组织中仅见少量散在的荧光分布。RT-PCR检测表明ICAM-1-ASO(10mg／k)可降低心脏组织中ICAM-1 mRNA水平；但免疫组织化学检测各组间ICAM-1的蛋白水平未显示出显著性差异。结论 ICAM-1-ASO经静脉注射6h后可以明显抑制心脏组织ICAM-1 mRNA的表达，其作用的理想靶器官是心脏和。肾脏。     

反义寡核苷酸抑制整合素αv亚基表达对喉癌细胞侵袭和增殖的影响

目的应用反义寡核苷酸体外细胞转染技术抑制喉癌细胞整合素αv(integrin αv,ITGAV)表达,探讨ITGAV表达抑制对喉鳞癌Hep-2细胞侵袭和增殖能力的影响。方法设计合成特异性靶向整合素αv的反义寡核苷酸序列(antisense oligonucleotides sequence,ASONs),用阳离子脂质体包被并转染喉鳞癌Hep-2细胞,免疫荧光技术检测转染前后整合素αv亚基的蛋白表达,MTT法检测转染后Hep-2细胞的增殖情况,Boyden小室法检测转染前后喉癌细胞的侵袭能力。结果靶向整合素αv的ASONs对喉鳞癌细胞株的侵袭和增殖能力具有明显的抑制作用,并具有剂量-时间依从性。结论靶向整合素αv的ASONs能够抑制喉鳞癌细胞株生长,并使其侵袭能力减弱,整合素αv可能成为喉鳞癌基因治疗的新靶点。     

端粒酶反义寡核苷酸体外抑制宫颈癌细胞端粒酶活性的研究

目的探讨端粒酶反义寡核苷酸(ASON)对宫颈癌Hela细胞端粒酶活性的影响.方法针对端粒酶RNA的ASON作用于Hela细胞,同时以加有转染剂FuGENE6者为对照组,计数连续作用1,3,5 d后的细胞数.TRAP方法测定端粒酶的活性.结果ASON组与随机引物及空白对照组比较,端粒酶活性降低,细胞的增殖速度延缓;有转染剂FuGENE6的ASON组的细胞增殖数目和端粒酶活性显著低于无FuGENE6的ASON组;细胞对有FuGENE6的ASON的摄取显著多于单纯的ASON.在FuGENE6的介导下,ASON对端粒酶活性的抑制与ASON的浓度和治疗时间呈正相关.结论针对端粒酶RNA的ASON能抑制Hela细胞的端粒酶活性,转染剂FuGENE6可以增强端粒酶ASON对宫颈癌细胞端粒酶活性的抑制作用.     

反义寡核苷酸阻断乳腺癌细胞中葡萄糖神经酰胺合成酶的表达和意义

目的探讨靶向葡萄糖神经酰胺合成酶（glucosylceramide synthase,GCS）的基因试剂MBO－asGCS逆转乳腺癌多药耐药的作用机制及其意义。方法MBO-asGCS处理体外培养的人乳腺癌细胞MCF-7及其耐药型MCF-7／AdrR,采用细胞毒性分析测定MBO—asGCS对MCF-7-AdrR存活率的影响,RT—PCR和Western印迹分析对耐药型细胞GCS的表达变化,检测对caspase3／7的活性影响及流式细胞仪测定MBO-asGCS对耐药型细胞的凋亡情况。结果MBO-asGCS转染人耐药型乳腺癌细胞MCF-7／AdrR后,与未转染组细胞的Ic50分别是0．18μmol／L和12．50μmol／L,药物敏感性提高了69倍;MBO—asGCS抑制GCS的mRNA表达70％,减少GCS蛋白表达39％（P〈0．01）;转染MBO．asGCS后耐药型细胞的caspase3／7活性上升53％（P〈0．05）,细胞凋亡率上升5．6倍（P〈0．01）。结论GCS过表达是耐药型乳腺癌细胞的特征,靶向人GCS的反义寡核苷酸可直接抑制GCS的过表达,诱导耐药细胞凋亡,有效逆转其耐药性,GCS可能是治疗耐药型乳腺癌的一个潜在靶点。     

ANGPTL3反义寡核苷酸对EC9706细胞侵袭黏附能力的影响

目的:观察ANGPTL3反义寡核苷酸(ASODN)对食管癌细胞EC9706侵袭黏附能力的影响.方法:根据GenBank收录的ANGPTL3 mRNA序列,设计ASODN,并制成脂质体-ASODN混合液转染EC9706细胞,观察转染后EC9706细胞黏附率、细胞侵袭穿膜细胞数及侵袭抑制率.结果:ANGPTL3 ASODN...     

VEGF反义寡核苷酸对K562细胞VEGF表达的影响

目的　研究硫代磷酸化修饰的血管内皮生长因子 (VEGF)反义寡核苷酸 (ASODN)对慢性红白血病细胞K 5 62VEGF表达的影响。方法　将终浓度分别为 10、2 0、3 0 μmol·L-1的VEGFASODN和错义序列与K 5 62细胞分别孵育 2 4、48h ,另设空白对照组。采用RT PCR检测VEGFmRNA的表达 ,免疫组织化学方法检测VEGF蛋白的表达。结果　VEGFA SODN对K 5 62细胞VEGF表达有明显的抑制作用 ,与错义序列组和空白对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 5 )。错义序列组与空白对照组比较VEGF的表达无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论　VEGFASODN可下调慢性红白血病细胞K 5 62VEGFmRNA和蛋白的表达水平     

反义寡核苷酸抑制survivin表达来增强乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231对多西他赛敏感性的研究

目的: 探讨利用反义寡核甘酸(ASODN)技术封闭乳腺癌细胞株survivin基因,观察survivin基因表达下调能否诱导细胞凋亡及增强对多西他赛(docetaxel)药物敏感性.方法: Survivin ASODN单独及联合多西他赛处理乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231,RT-PCR检测survivin mRNA的表达,免疫细胞化学方法和Western blotting检测survivin蛋白表达,倒置显微镜观察细胞形态变化,MTT法检测细胞的生长抑制率.结果: Survivin ASODN可下调人乳腺癌细胞株中survivin mRNA 和蛋白质的表达;survivin ASODN 与多西他赛联合用药组相比对照组和多西他赛组可明显抑制细胞株的生长(P<0.01).结论: Survivin ASODN明显抑制survivin基因在乳腺癌细胞株MCF-7和MDA-MB-231中的转录及翻译,明显提高乳腺癌对多西他赛的敏感性.