琼脂糖凝胶中DNA的回收

用冻结压榨法、玻璃粉吸附洗脱法和透析袋电洗脱法，分别从琼脂糖凝胶中回收日本血吸虫中国大陆株副肌球蛋白编码基因的聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增产物，经ＢａｍＨ Ｉ及ＥｃｏＲ Ｉ双酶切的线状质粒载体ｐＴｒｃＨｉｓ Ａ，以及碱裂解法制备的质粒载体，均取得较为满意的回收率。冻结压榨法适于回收少量的ＤＮＡ，透析袋电洗脱法适于回收较大量ＤＮＡ，玻璃粉吸附洗脱法则应用范围较宽。     

DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果

目的：摸索在DNA检测中琼脂糖凝胶多次重复使用的效果。方法：按常规制备琼脂糖凝胶,胶不离框,上样、电泳,电泳后胶连框一起放于饭盒内,盖好盒盖,于4℃冰箱保存。下次使用时保证电泳方向与前次相反,即把胶调转方向加样、电泳。结果：重复使用6~7次,DNA条带仍清晰可见。结论：这是一种简便易行、效率高、节省实验经费并易于推广的好方法。     

液化低熔点琼脂糖凝胶直接消化DNA法在构建突变体中的应用

用多级多聚酶链反应与液化低熔点琼脂糖凝胶中直接消化ＤＮＡ相结合方法构建了８个突变体，经证实其重组ＤＮＡ的阳性率为１００％。从低熔点琼脂糖凝胶中切下目的ＤＮＡ，在６８℃完全熔化后用５倍体积的双蒸水稀释，该化合物即可直接用于酶解反应。混合物中凝胶比例以１０ｇ／Ｌ为宜。因而克服了凝胶中因目的ＤＮＡ量少而纯化后回收率低无法进一步实验的弱点。     

对琼脂糖凝胶电泳分离DNA片段的有效性的再认识

目的探讨琼脂糖凝胶电泳对DNA酶切片段的分离效果.方法将酶切后DNA片段进行琼脂糖凝胶电泳,回收单一目的片段并再行电泳,观察非目的片段的分离效果.结果第一次回收的"单一"目的片段中,除目的DNA外,还含有多条较小的DNA分子;再次电泳回收的单一目的片段中,肉眼已看不见其它DNA分子,其纯度已大为提高;但是将几个批次的再次回收的目的片段浓缩后进行电泳发现其中仍然含有其它DNA片段.结论琼脂糖凝胶电泳难以将大小不同的DNA片段彻底分开,电泳后回收的目的片段中含有大小不同的污染分子.     

琼脂糖凝胶区带电泳应用于蛋白尿的分析

目的：运用琼脂糖凝胶区带电泳进行蛋白尿的分析。方法：采用血清琼脂糖凝胶区带电泳技术分析未经处理和处理后的蛋白尿样本。结果：通过对95例临床尿蛋白阳性标本进行琼脂糖凝胶区带电泳，可粗略区分出溢出性蛋白尿2例、选择性蛋白尿30例、非选择性蛋白尿63例，5例健康组未检出蛋白峰。结论：该法简便快速，在蛋白浓度较高时有很好的重复性，可用于尿蛋白的分析，经透析浓缩处理后的样本电泳效果更好。     

全自动毛细管电泳与琼脂糖电泳对血红蛋白电泳检测的比较分析

[摘要]　目的　比较全自动毛细管电泳与琼脂糖电泳的血红蛋白电泳检测结果,探讨全自动毛细管电泳仪在地贫筛查中的价值。方法　使用法国Sebia公司Capillarys 2全自动毛细血管电泳仪及配套试剂,在9.8kV电压、pH9.4的缓冲液条件下,在8条并联的石英毛细管内进行血红蛋白电泳,用415nm波长直接检测血红蛋白各组分的百分比;毛细管电泳发现的异常标本同时采用Sebia Hydrasys LC琼脂糖凝胶电泳系统进行电泳、染色、脱色、烘干,用Hyrys扫描系统扫描,得出血红蛋白各组分的百分比,与毛细管电泳检测结果进行对比。结果　在2400份临床标本中,Capillarys 2全自动毛细管电泳仪共检出β地贫262例,其中HbA2增高161例,HbF增高28例,HbA2+HbF同时增高73例;用Hydrasys LC琼脂糖凝胶电泳系统对262例异常标本进行复检对照,结果基本一致;仅在HbF≤3.0%时,琼脂糖凝胶电泳无法将其与HbA区分,而毛细管电泳可以准确分辨。α地贫筛查中,Capillarys 2全自动毛细管电泳仪共检出HbH 13例、HbBart’s 1例、HbCS 3例;而琼脂糖凝胶电泳系统仅检出HbH 10例、HbBart’s 1例、HbCS 1例,漏检HbH 3例、HbCS 2例。结论　全自动毛细管电泳能比琼脂糖电泳更准确区分HbA、HbA2、HbF、HbH、HbBart’s、HbCS等条带,对地贫筛查效果更佳。     

单细胞电泳凝胶片的保存方法

单细胞凝胶电泳又称为彗星试验(SCGE),是一种具有高灵敏度的检测DNA损伤的方法,广泛应用于DNA交联的检测、药物的遗传毒性评价、细胞凋亡鉴定的工作中^[1]。但是在凝胶片的保存方面,国内外文献中只有干燥脱水保存方法的报道^[2],湿片保存方法鲜见报道。本文就通过测定彗星损伤指标,对SCGE试验中凝胶片湿片的保存时间进行研究。     

血红蛋白浓度对Hb琼脂糖凝胶电泳中HbA_2定量的影响

目的探讨点样前血红蛋白(haemoglobin,Hb)浓度对全自动琼脂糖凝胶电泳中HbA2定量的影响,以固定合适的点样前的Hb浓度范围,建立本实验室正常成人HbA2的参考值。方法35例正常人标本按点样前Hb浓度分为4组(各组浓度约为80、16、8和4g/L),用全自动琼脂糖凝胶进行Hb电泳测定各组HbA2含量,以方差分析对各组之间均数作两两比较。固定上样前Hb4～8g/L条件下测定100例正常成人HbA2含量。结果点样前4组不同Hb浓度下HbA2含量分别为(8.0±1.2)%、(4.4±0.36)%、(3.5±0.39)%、(3.3±0.22)%。经方差分析,Hb浓度约为8g/L、4g/L之间HbA2含量差异无显著性(P>0.05),其他各组之间HbA2含量差异均有显著性。固定上样前Hb浓度4～8g/L条件下,测定100例正常成人HbA2的含量为(3.2±0.29)%(正常参考值范围2.7%～3.8%)。结论点样前不同Hb浓度对全自动琼脂糖凝胶电泳中HbA2定量有显著性影响,合适的点样前Hb浓度应为<8g/L。固定点前Hb浓度在4～8g/L条件下,得出本实验室正常人HbA2的参考值范围为2.7%～3.8%。     

改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶的应用

目的 寻求更加准确、简便、快速、实用的乳酸脱氢酶同工酶（LDH）测定方法。方法 据LDH同工酶等电点不同,选择琼脂糖胶作支持物,对以往LDH同工酶测定方法进行改进,将五型LDH同工酶进行分离并定量测定。结果 改进后的LDH同工酶测定方法稳定,区带清晰,重复性好,结果可靠,试剂可长期保存。结论 改良琼脂糖凝胶电泳法测定血清LDH同工酶应用前景良好。     

琼脂糖凝胶电泳法快速筛选轮状病毒

本文用琼脂糖凝胶电泳检测轮状病毒RNA,并与聚丙烯酰胺凝胶电泳的结果相比较,结果43份聚丙烯酰胺凝胶电泳阳性的标本,琼脂糖凝胶电泳亦均为阳性。两种方法检测轮状病毒RNA的敏感度一致,而琼脂糖电泳省时、简便、经济。可作为一种快速方法用于轮状病毒感染的筛选和快速诊断。     

对单细胞凝胶电泳法检测细胞核DNA损伤的影响因素

目的 :探讨对单细胞凝胶电泳法 (SCGE)检测细胞核DNA损伤的影响因素。方法 :结合一氧化氮对食管癌细胞系EC10 9细胞核DNA的损伤作用模型 ,对SCGE实验中的影响因素等进行分析讨论和综合评价。结果 :受试物的浓度及其对细胞的作用时间、细胞周期等是SCGE实验中的主要影响因素。结论 :SCGE中的一些因素对实验结果有显著影响。     

Optimization of Pulse-Field Gel Electrophoresis for Borrelia burgdorferi Subtyping

Objective To optimize the performance of Pulsed-Field Gel Electrophoresis (PFGE) for the comparison of inter-laboratory results and information exchange of Borrelia burgdorferi subtyping. Methods A panel of 34 strains of B. burgdorferi were used to optimize PFGE for subtyping. In order to optimize the electrophoretic parameters (EPs), all 34 strains of B. burgdorferi were analyzed using four EPs, yielding different Simpson diversity index (D) values and the epidemiological concordance was also evaluated. Results The EP of a switch time of 1 s to 25 s for 13 h and 1 s to 10 s for 6 h produced the highest D value and was declared to be optimal for MluI and SmaI PFGE of B. burgdorferi. MluI and SmaI were selected as the first and second restriction enzymes for PFGE subtyping of B. burgdorferi according to discrimination and consistency with epidemiological data. Conclusion PFGE can be used as a valuable test for routine genospecies identification of B. burgdorferi.     

聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳分离血清蛋白质

对影响盘状电泳的因素进行了实验研究,发现用6.5%的丙烯酰胺,以硼砂硼酸为电极缓冲液,不加浓缩胶,封水时保持清晰界面,加适量的Triton-X-100等为最佳条件,从而建立了血清蛋白质聚丙烯酰胺凝胶盘状电泳快速分离法。本方法灵敏、快速、提高了分辨率,结果满意。     

尿蛋白电泳在肾脏疾病鉴别诊断中的意义

目的 采用非浓缩尿电泳对尿蛋白成分进行测定,判断肾脏疾病的受损部位及病变程度.方法 采用spife 3000全自动电泳分析仪对87例蛋白尿患者、25例经肾穿刺术确诊的肾病患者进行尿蛋白琼脂糖电泳分析.结果 87例蛋白尿患者电泳图谱显示23例生理性蛋白尿,41例肾小管性蛋白尿,10例肾小球性蛋白尿,13例混合性蛋白尿.25例确诊的肾病患者中,有6例局灶节段性肾小球硬化,13例局灶性肾小球肾炎,2例肾小球轻微病变,2例狼疮性肾小球肾炎,2例系膜增生性肾炎.结论 该技术简便、快速、无创伤,尿蛋白电泳组分和肾脏损害部位及程度有关.     

云南省鼠疫菌株脉冲场电泳分析

目的:对云南不同片区及不同类型的鼠疫菌株进行基因分型。方法:采用脉冲场电泳(PFGE)对菌株进行分析。结果:1.云南省鼠疫菌株被分为5个型,所有鼠疫菌株在680kb和330kb有两条共同的带;2.大部分家鼠鼠疫具有一致图谱;3.云南家、野两型鼠疫菌的脉冲场电泳图谱存在差异。结论:脉冲场电泳分析可用于云南鼠疫分子流行病学研究。     

简便快速的PCR产物回收方法

目的分析比较几种PCR产物回收方法的回收效果.方法针对PCR DNA的回收效果及回收特点,采用内皮素(Endothelin)基因PCR反应产物,分别利用本室建立的二种新方法--速冻-快速离心法、凝胶浸泡法和传统方法--玻璃珠试剂盒回收法对PCR产物DNA进行回收,用琼脂糖凝胶电泳鉴定3种方法回收PCR产物的效果.结果发现两种新方法回收DNA带的亮度强,与传统方法相比,差异无显著性(P＞0.10).结论说明速冻-快速离心法与凝胶浸泡法不仅具有玻璃珠试剂盒回收PCR 产物的效果,而且经济、方便、可靠,是两种可行的PCR产物回收方法.     

血红蛋白电泳方法的研究进展

血红蛋白(Hb)电泳是分离鉴定Hb最常用且最为有效的方法,使用不同支持介质的电泳方法,其原理、分辨敏感度、操作简繁各有特点,对分离诊断Hb疾病有重要价值的HbA2和HbF的效果也各有不同。因静止型地中海贫血可以不表现出HbA2的异常,所以电泳分析都有一定的漏诊率,因此电泳只能作为Hb疾病的筛查方法。