钙调神经磷酸酶调控血管升压素诱导大鼠心脏成纤维细胞胶原合成的作用

目的：探讨钙调神经磷酸酶（CaN）信号通路对血管升压素（AVP）诱导新生大鼠心脏成纤维细胞（CF）胶原合成的调控作用。方法：采用胰酶消化法培养新生SD大鼠CF，应用羟基脯氨酸比色法测定细胞培养上清中羟基脯氨酸含量，CaN活性通过分光光度计测定。结果：①CF培养上清中羟基脯氨酸含量随着AVP浓度的升高而增加，其中10^-7mol／LAVP和10^-6mol／LAVP组羟基脯氨酸含量与空白对照组比较有显著性差异（均P〈0．01）；在0．5μg／mlCaN的特异性抑制剂环孢素共同干预下，羟基脯氨酸含量明显减少，并有统计学意义（P〈0．01）。②随着AVP浓度的升高，CF内CaN活性亦随之增高，与空白对照组比较，10^-7和10^-6mol／LAVP组细胞内CaN活性显著增高（P〈0．01）。③在10^-7mol／LAVP作用下，随着细胞内CaN活性的升高，CF培养上清中羟基脯氨酸含量随之增加，两者之间呈显著正相关（r=0．91，P〈0．05）：④在10^-7mol／LVI受体拮抗剂[d（CH2）5-Tyr2（Me）]AVP和10^-7mol／LAVP共同作用下，CF中CaN活性和培养上清中羟基脯氨酸含量与单独10^-7mol／LAVP作用组比较均显著降低，并有统计学意义（均P〈0．01）：结论：CaN信号通路在AVP诱导CF胶原合成过程中起到了重要的调控作用，该通路的激活可能是通过V1受体介导的.     

17β-雌二醇诱导内皮型一氧化氮合酶活性增高及其与细胞内钙的关系

目的　研究 17β -雌二醇 (E2 )对新生小牛主动脉血管内皮细胞 (BAECs)中内皮型一氧化氮合酶 (eNOS)活性的长期基因效应 ,并进一步探讨胞内钙信号途径在其中的作用。方法　采用培养的BAECs,同位素法测定eNOS的活性 ;Westernblot检测eNOS蛋白表达 ;荧光分光光度计法检测E2 对细胞内钙的影响。结果　 (1)E2 (0 .0 0 1,0 0 1,0 .1,1μmol/L)作用于BAECs 4 8h ,使eNOS活性分别增加 130 %± 2 7% ,178%± 19% ,14 2 %± 2 0 % ,14 4 %± 2 7%。E2 激活eNOS活性的作用被雌激素受体拮抗剂Tamoxifen(0 .1μmol/L)所阻断 ;(2 ) 0 .0 1μmol/LE2 作用于BAECs 1h对eNOS蛋白表达无明显影响 ,而作用 2 4h和 4 8h分别使eNOS蛋白表达增加了 2 76 %± 36 %和374 %± 2 0 % ;Tamoxifen明显抑制E2 处理 4 8h后诱导的eNOS蛋白表达 ,抑制率为 6 6 5 %± 7 4 % ;(3) 0 .0 1μmol/LE2 作用BAECs 4 8h ,分别使静息 [Ca2 + ]i增加了 70 .3± 2 1.5nmol/L ,使 10mmol/LATP诱导的BAECs[Ca2 + ]i峰值增加了 2 4 0 .2± 6 8 2nmol/L ,ATP诱导的 [Ca2 + ]i增加值 (峰值与静息值之差 )增加了 170 .5± 4 8.9nmol/L。结论　雌激素可通过长期基因效应而激活eNOS ,至少部分通过核ER介导 ,并与胞内钙动员有关     

阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞增殖和胶原合成的影响及其意义

目的　探讨阿伐他汀对幼年大鼠心肌成纤维细胞 (CF)增殖和胶原合成的影响。方法　用消化法培养新生SD大鼠的CF ,采用3H 胸腺嘧啶核苷 ( 3H TdR)掺入法测定CF的DNA合成功能 ,四氮唑蓝 (MTT)比色法测定细胞增殖 ,流式细胞分析仪技术检测细胞周期 ,3H 脯氨酸掺入法测定胶原合成 ,分别观察不同浓度阿伐他汀对CF增殖和胶原合成的影响。结果　 ( 1)阿伐他汀以浓度依赖的方式抑制CF的3H TdR掺入率。其中 ,10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的3H TdR掺入率分别为(cpm/ 5 0 0 0细胞 ) 314± 6 8、2 5 3± 5 2、2 0 1± 5 3和 170± 48,显著低于对照组 ( 378± 6 5 ) (F =16 912 ,P <0 0 0 1)。 ( 2 )随着阿伐他汀浓度的增高 ,CF的MTT比色法A4 90 值呈明显的递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和 10 -4 mol/L组的A4 90 值分别为 0 2 88± 0 0 0 8、0 2 5 2± 0 0 0 7、0 2 2 5± 0 0 0 8和 0 2 16± 0 0 13,与对照组 ( 0 311± 0 0 0 5 )相比 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 3)G0 /G1期细胞百分率随阿伐他汀浓度的增高而呈递增趋势 ,S期G2 /M期细胞百分率和增殖指数呈递减趋势 ,其中 10 -7、10 -6、10 -5和10 -4 mol/L组与对照组比较 ,差异有非常显著意义 (P均 <0 0 1)。 ( 4)CF的3H 脯     

非对称性二甲基精氨酸对人阻力血管EDVD的抑制作用

目的探讨非对称性二甲基精氨酸(ADMA)对人离体阻力血管环内皮依赖性舒张(endothelium-dependent vasodilatation,EDVD)的抑制作用。方法在血液透析患者行动-静脉内瘘成形术时留取桡动脉,制备血管环,用机械法去内皮并设立内皮存在组和内皮缺失组。应用离体血管张力记录仪观察2组血管环在不同质量浓度ADMA(10-7mol/L、10-6mol/L、10-5mol/L、10-4mol/L和10-3mol/L)作用下张力的变化。内皮存在组用10-5mol/L苯肾上腺素(phenylephrine,PE)引发血管环收缩,再用质量浓度为10-5mol/L的乙酰胆碱(ACh)引发EDVD,然后用不同质量浓度ADMA处理,观察ADMA在内皮存在情况下对ACh所引起EDVD的抑制作用。内皮缺失组用质量浓度为10-5mol/L的PE引发血管环收缩后,再用质量浓度为10-7mol/L的硝普钠(SNP)引发非内皮依赖性血管舒张(EIVD),然后用不同质量浓度ADMA处理,观察ADMA在内皮缺失情况下对SNP引起EIVD的抑制作用。结果内皮存在组用10-5mol/L的ACh处理可使67.10%±18.63%因PE(10-5mol/L)引起收缩的血管舒张,ADMA对ACh引起的EDVD呈浓度依赖性抑制作用,相对收缩幅度依次为EDVD幅度的7.32%±8.60%(10-7mol/L)、20.03%±13.49%(10-6mol/L)、29.93%±11.78%(10-5mol/L)、43.30%±11.29%(10-4mol/L)和80.21%±18.16%(10-3mol/L)。在内皮缺失组,ADMA对SNP引起的EIVD呈微弱的抑制作用,且不表现为浓度依赖性。相对收缩幅度为EIVD的2.76%±1.98%(10-7mol/L)、2.27%±1.82%(10-6mol/L)、3.38%±2.99%(10-5mol/L)、3.59%±3.66%(10-4mol/L)和4.16%±3.67%(10-3mol/L)。结论ADMA可以有效地抑制ACh引发的EDVD反应,该抑制作用呈浓度依赖性和内皮依赖性。     

白细胞介素10对AVP诱导心脏成纤维细胞增殖及p27蛋白表达的影响

目的:研究白细胞介素10(IL-10)对血管升压素(AVP)诱导大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖及p27蛋白表达的影响. 方法:以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,四氮唑盐(MTT)比色法检测CFs增殖,流式细胞分析仪(FCM)技术测定细胞周期及p27蛋白表达阳性率. 结果:① 10-7 mol/L AVP作用24 h,CFs的A490为0.216±0.013,较空白组(0.132±0.006)明显增高(P＜0.01). ② 10-11～10-8 kg/L IL-10 10-7 mol/L AVP组A490分别为0.201±0.007,0.187±0.006,0.173±0.010,0.157±0.029,均明显低于10-7 mol/L AVP组(其中 10-11组P＜0.05,10-10,10-9,10-8三组P均 ＜0.01). ③10-7 mol/L AVP作用24 h,CFs的S期百分率(12.3±0.7)及增殖指数(19.6±0.9)较空白组(4.2±0.5, 7.1±0.6)均明显增高(P＜0.01);10-9 kg/L IL-10 10-7 mol/L AVP组S期百分率(9.6±1.1)及增殖指数(13.86±1.28)均明显低于AVP组(P＜0.01). ④ 10-7 mol/L AVP作用24 h,p27蛋白表达阳性率为(63.7±2.4)%,较空白组(78.5±2.5)%明显降低(P＜0.01);10-9 kg/L IL-10 10-7 mol/L AVP组p27蛋白表达阳性率为(70.5±2.4)%,较AVP组(63.7±2.4)%明显增高(P＜0.01). 结论:IL-10具有抑制AVP诱导CFs增殖的作用,p27蛋白可能是IL-10调控AVP诱导CFs增殖的细胞内靶蛋白.     

核转录因子κB及其抑制基因在自体移植静脉中的表达

目的　研究核转录因子 κB (NF κB)及其抑制因子IκB基因在自体移植静脉中的表达 ,及其在内膜增生中的作用。方法　Wistar大鼠 80只 ,建立自体移植静脉模型 ,术后随机分为 6、2 4h ,3、7d ,2、4、6、8周等 8组 ,于相应时点取材 ,进行病理形态学研究 ,半定量逆转录PCR检测NF κBp6 5mRNA和IκBβmRNA表达的变化 ,原位杂交方法检测NF κBp6 5mRNA表达 ,联合应用Western蛋白印迹和免疫组织化学方法检测p6 5、IκBα和IκBβ的蛋白质表达。 结果　移植静脉术后 6h即出现p6 5mRNA和IκBβmRNA表达增强 ,基因表达值分别为 16 %± 4 %和 31%± 9% ,与正常静脉比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1) ;p6 5mRNA表达 3～ 7d达高峰 ,术后 3、7d的表达值分别为 37%± 12 %和34%± 10 % ,IκBβmRNA表达则于术后 1～ 2周达到高峰 ,表达值分别为 5 3%± 17%和 4 9%± 10 % ,与其余各时点比较差异有非常显著意义 (P <0 0 1)。p6 5蛋白质阳性表达 1周达高峰 32 %± 13% ,IκBα、IκBβ蛋白质术后 2周达高峰 ,阳性率分别为 35 %± 11%和 4 4 %± 13% (P <0 0 1)。IκBα、β蛋白质术后 6～ 2 4h表达量有所降低 ,为正常静脉的 1/3～ 1/2。结论　移植静脉中存在NF κB系统及其抑制因子IκB基因的活化。核转录因子κB可能     

西洛他唑对糖尿病大鼠黏附分子的影响

目的　探讨西洛他唑对糖尿病 (DM)大鼠黏附分子CD54、CD10 6、CD62p的表达和坐骨神经传导速度及对肾脏以及主动脉病变的影响。方法　实验设正常组 8只大鼠 ,糖尿病组 8只大鼠 ,胰岛素组 7只大鼠和西洛他唑组 7只大鼠。测定各组坐骨神经传导速度 ,单个核细胞表面CD54、血小板表面CD62p以及肾脏、主动脉CD54或CD10 6的表达水平。结果　西洛他唑明显加快坐骨神经传导速度 (DM组 2 0 3m·s-1± 2 2m·s-1,西洛他唑组 2 8 9m·s-1± 7 9m·s-1,P <0 0 5 )。降低单个核细胞表面CD54的表达 (DM =6 5 1%± 14 9% ,西洛他唑组 2 5 4 %± 8 6 % ,P <0 0 5 ) ,减少肾脏和主动脉CD54和CD10 6表达 ,改善肾脏和主动脉病理变化。而降低血小板表面CD62p的作用不明显 (DM组 4 0 4 %±8 7% ,西洛他唑组 2 8 5 %± 3 7% ,P >0 0 5 )。结论　西洛他唑能降低CD54、CD10 6的表达 ,同时减缓糖尿病大鼠肾和主动脉及坐骨神经病变的发生发展     

HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞免疫病理改变的研究

目的　探讨我国HIV感染和AIDS患者T淋巴细胞的免疫病理改变情况及其临床意义。方法　收集 13例HIV感染患者 (HIV组 )、2 7例AIDS患者 (AIDS组 )和 5 1名健康献血员 (正常对照组 )的抗凝血 ,用人T淋巴细胞亚群的特异性荧光抗体标记 ,通过流式细胞仪检测外周血CD4 + T淋巴细胞 (T4细胞 )、CD8+ T淋巴细胞 (T8细胞 )及其亚群 ,并检测患者血浆HIV载量。结果　正常对照组、HIV组和AIDS组外周血T4细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 84 9± 2 88,4 37± 184 ,5 0± 5 1,组间比较P <0 0 1;T8细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 5 79± 175 ,10 31± 345 ,5 35± 338,HIV组明显高于正常对照组(P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞 (CD4 + CD4 5RA+ CD6 2L+ )亚群比例分别为 4 3 0 %± 11 4 % ,4 4 2 %± 12 8% ,2 4 8%± 15 5 % ,AIDS组明显为低 (P <0 0 5 ) ;T4纯真细胞计数 (× 10 6个 /L)分别为 36 8± 16 2 ,185±134,18± 2 0 ,组间比较P <0 0 1;T4功能细胞 (CD4 + CD2 8+ )亚群比例分别为 93 1%± 8 1% ,6 2 6 %±2 8 2 % ,5 6 9%± 2 6 4 % ,组间比较P <0 0 1;T4和T8激活细胞 (CD4 + HLA DR+ ,CD8+ HLA DR+ ,CD8+CD38+ )亚群比例均表现为AIDS组 >HIV组 >正常对照组 (P <0 0 5 ) ;T4和T8凋亡细胞 (CD4 +CD95 + ,C     

鼠心肌成纤维细胞NOS活性的变化和AVP对NO合成的影响

目的　探讨在基础状态和精氨酸升压素 (AVP)干预下 ,心肌成纤维细胞 (CFs)一氧化氮合酶 -一氧化氮 (NOS-NO)系统活性的变化 .方法　胰酶消化法分离、培养新生 SD大鼠 CFs,采用硝酸还原酶法和分光光度法分别测定基础状态和 AVP干预下 CFs的 NOS活性和 NO含量 .结果　 1基础状态下 CFs的 36 h组 NO含量 (4 2± 5 ) μm ol· L- 1 和 NOS活性 (6 17± 83)μkat· L- 1 ,显著高于 6 h组 (14± 3)μmol·L- 1 ,(16 7± 6 7)μkat· L- 1 . 2 AVP干预下 36 h组 NO含量(6 2± 1) μm ol· L- 1和 NOS活性 (115 0± 10 0 ) μkat· L- 1也显著高于 6 h组 (34± 4) μmol· L- 1 ,(6 0 0± 33) μkat· L- 1 ,且AVP干预组的 NO含量和 NOS活性均高于同时间点基础状态组(P<0 .0 5 ) . 3CFs的 NO含量和 NOS活性随 AVP浓度的增高而增加 ,其中 10 - 6mol· L- 1 AVP组 (6 3± 6 ) μmol· L- 1 ,(110 0± 5 0 )μkat· L- 1 和 10 - 7mol· L- 1 AVP组 (6 9± 6 )μmol· L- 1 ,(12 0 0± 5 0 )μkat· L- 1 都显著高于对照组 (2 9± 5 )μmol· L- 1 ,(4 5 0± 83) μkat· L- 1 ,10 - 9mol· L- 1 AVP组(32± 2 )μmol· L- 1 ,(5 0 0± 133)μkat· L- 1 和 10 - 8mol·L- 1 AVP组 (37± 2 ) μmol· L- 1 ,(6 0 0     

辛伐他汀对大鼠心脏成纤维细胞增殖的抑制作用

目的探讨辛伐他汀(simvastatin,Sim)对大鼠心脏成纤维细胞(CFs)增殖的抑制作用,为防治高血压心肌纤维化提供理论依据。方法以培养的新生SD大鼠CFs为实验模型,采用四氮唑盐(MTT)比色法测定细胞数目,流式细胞分析技术(FCM)检测细胞周期,分别观察不同浓度Sim对AVP诱导CFs增殖的作用。结果(1)随着Sim浓度的增高,CFsMTT比色法D490值呈明显的递减趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组的D490值分别为0.215±0.041和0.163±0.018,均较对照组D490值(0.393±0.048)显著降低(P<0.01);(2)FCM细胞周期分析表明,CFs的S期细胞百分率和细胞增殖指数随Sim刺激浓度的增加而呈递减趋势,G0/G1期细胞百分率呈递增趋势,其中1×10-6 和1×10-5 mol/LSim组与对照组1×10-7 mol/LAVP比较,差异显著(P<0.01)。结论Sim可抑制AVP诱导的CFs增殖,其作用可能与影响CFs细胞周期有关。     

热休克蛋白27/转录激活因子5复合物在高糖诱导足细胞凋亡中的意义

目的研究足细胞内热休克蛋白27(HSP27)是否与转录激活因子5(ATF5)形成复合物及其在足细胞凋亡中的意义。方法高糖刺激体外培养的小鼠肾小球足细胞系建立细胞凋亡模型,应用Hochest染色、流式细胞技术测定细胞凋亡。应用Western印迹分析技术检测丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号途径的活化,应用免疫共沉淀技术检测HSP27和ATF5形成复合物的变化,阻断实验观察MAPK信号途径对高糖调节足细胞HSP27与ATF5形成复合物以及足细胞凋亡的影响。结果成功建立了高糖刺激足细胞凋亡的模型,30mmol/L高糖刺激48h凋亡率(27.2%±8.9%)显著高于5.5mmol/L正常糖(对照)48h组(10.6%±2.7%,P<0.05)。正常糖(对照)组细胞HSP27与ATF5即可形成复合物,而在高糖刺激12hHSP27与ATF5形成的复合物明显增加为正常糖组的195%±36%(P<0.05)。高糖刺激30min即可使细胞外信号调节激酶(ERK1/2)和p38活化。进一步阻断实验显示ERK1/2活化抑制剂可以减弱高糖刺激引起HSP27和ATF5形成复合物的效应(PD98059+高糖组为109%±19%,高糖组211%±46%,P<0.05),同时加重高糖诱导细胞凋亡(PD98059+高糖组凋亡率为51%±4%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。p38活化抑制剂不影响高糖刺激引起的HSP27和ATF5形成复合物(SB20358+高糖组为290%±43%,高糖组为231%±20%,P>0.05),但可减轻高糖诱导细胞凋亡(SB20358+高糖组凋亡率为16%±6%,高糖组凋亡率为27%±9%)(P<0.05)。结论高糖依赖ERK1/2信号通路而不是p38信号通路刺激足细胞HSP27与ATF5形成复合物的增加,蛋白复合物可能在高糖诱导的足细胞凋亡中起保护作用。     

p53抑制剂PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞增殖和凋亡的影响

目的探讨p53抑制剂PFT-α(PFT-α)对结肠上皮细胞增殖、周期的影响及周期调控机制。观察PFT-α对热化疗损伤结肠上皮细胞的影响。方法运用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法观察不同浓度PFT-α对结肠上皮细胞增殖的影响。顺铂联合温热处理原代培养结肠上皮细胞30min,对比加入不同浓度PFT-α后,膜联蛋白V-异硫氰酸荧光素(FITC)/碘化丙啶(PI)染色,流式细胞仪检测细胞凋亡,PI染色检测细胞周期。Western印迹检测结肠上皮细胞细胞周期蛋白(cyclin)B1和Cdc2(Tyr15)表达。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)检测结肠上皮细胞cyclinB1mRNA的表达变化。结果PFT-α在低于50μmol/L时对结肠上皮细胞增殖无任何影响,高于60μmol/L则对该细胞的增殖产生抑制效应(10、20、30、40μmol/L的PFT-α,对细结肠上皮细胞的凋亡率分别为14.8%±1.5%、9.7%±1.2%、6.1%±1.3%、3.8%±0.3%)。不同浓度PFT-α作用于热化疗处理的结肠上皮细胞后,细胞凋亡率下降且呈剂量依赖性。流式细胞仪细胞周期分析显示在运用PFT-α后,结肠上皮细胞的G2/M延长,cyclinB1和Cdc2(Tyr15)蛋白表达随PFT-α的剂量升高而逐渐增强。结论PFT-α可能通过促进cyclinB1蛋白和mRNA表达,Cdc2(Tyr15)磷酸化水平升高,降低cyclinB1/Cdc2活性,细胞停滞于G2/M期,减轻热化疗对结肠上皮细胞的损伤而发挥保护效应。     

促红细胞生成素保护神经元免受氯胺酮所致的损伤

目的 研究促红细胞生成素(EPO)是否可以保护神经元免受氯胺酮所致损伤.方法 原代培养神经元,分别加入不同浓度的氯胺酮、EPO后培养24 h.噻唑蓝(MTT)法检测神经元存活率,TdT介导的dUTP缺口末端标记技术(TUNEL)检测凋亡神经元,荧光法测定半胱氨酸蛋白水解酶(caspase)-3活性,蛋白质印迹法检测磷酸化蛋白激酶B(pAkt)的表达.结果 1、10、30 μmol/L氯胺酮处理组神经元的存活率分别为(91±5)%、(42±6)%和(23±7)%,明显低于对照组(P＜0.05或0.01);10 μmol/L氯胺酮分别加0.3、1、3、10 U/mlEPO处理组神经元存活率分别为(73±6)%、(86±9)%、(78±8)%和(71±10)%,明显高于10 μmol/L氯胺酮组(P＜0.05或0.01).10 μmol/L氯胺酮组神经元凋亡增加,caspase-3相对活性为(280±60)%,明显高于对照组[(97±15)%,P＜0.01],而pAkt的表达减少.10 μmol/L氯胺酮+1 U/mlEPO组caspase-3相对活性为(130±30)%,明显低于10 μmol/L氯胺酮组,而pAkt表达增加.磷酸肌醇3激酶(PI3K)抑制剂LY294002拮抗了EPO的作用.结论 EPO可以保护神经元免受氯胺酮导致的损伤,其保护作用是通过促进pAkt表达实现的.     

阿魏酸钠抑制心肌成纤维细胞增殖的作用及机制

目的:研究阿魏酸钠(SF)对AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞(CFs)增殖的作用及其机制。方法:培养新生鼠心肌成纤维细胞分为3组:对照组、AngⅡ(10-7mol/L)组和AngⅡ+SF组。MTT法检测细胞增殖;流式细胞仪分析细胞周期改变;免疫荧光法检测TGFβ1蛋白表达。结果:AngⅡ作用24h后MTTOD值显著高于对照组(P<0.01)。不同浓度SF(0.04mg/ml,0.08mg/ml,0.16mg/ml)组MTTOD值均显著低于AngⅡ组(P<0.01),呈剂量依赖性。AngⅡ组S期细胞百分率明显高于对照组,G0/G1期细胞百分率则明显低于对照组(P<0.01)。AngⅡ+SF组S期细胞百分率显著低于AngⅡ组,G0/G1期细胞百分率显著高于AngⅡ组(P<0.01),且呈剂量依赖性。AngⅡ组TGFβ1蛋白表达显著高于对照组(P<0.01),AngⅡ+SF组显著低于AngⅡ组(P<0.01)。结论:阿魏酸钠可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖,其效应呈现剂量依赖性,作用机制与降低TGFβ1蛋白表达有关。     

Her-2/neu小分子干扰RNA对肺腺癌细胞周期和凋亡机制的影响

目的研究人类表皮生长因子受体2(Her2/neu)小分子干扰RNA(siRNA)对Her2/neu过表达的肺腺癌细胞的细胞周期和凋亡机制的影响。方法用化学合成的靶向Her2/neusiRNA转染肺腺癌calu3细胞,转染前后通过逆转录聚合酶链反应(RTPCR)测定细胞中Her2/neu、细胞周期蛋白(Cyclin)D1mRNA水平;流式细胞术检测Her2/neu蛋白水平和细胞周期的变化;AnnexinⅤ异硫氢酸荧光素(FITC)试剂盒检测肺癌细胞的凋亡情况;荧光分光光度法测定Caspase3活性;酶联免疫吸附试验(ELISA)技术检测培养液上清中血管内皮生长因子(VEGF)水平。结果Her2/neusiRNA能在mRNA和蛋白水平下调肺癌细胞株calu3中Her2/neu基因的表达。calu3细胞转染Her2/neusiRNA48h后处于G0/G1期的细胞增多,同时S期的细胞比例减少,与未转染对照组、空载体组和非特异性siRNA组比较差异有统计学意义(F=6.1,P<0.01)。转染Her2/neusiRNA后CyclinD1mRNA水平下降,同时培养上清液中的VEGF含量为176pg/ml±6pg/ml(F=24.7,P<0.01),Caspase3活性为135%±4%(F=8.9,P<0.01),细胞凋亡率为25.1%±1.2%(F=10.3,P<0.01)。结论化学合成的靶向Her2/neusiRNA能够下调Her2/neu基因表达,继而降低CyclinD1和VEGF水平,激活Caspase3途径,从而阻滞细胞周期于G0/G1期和诱导凋亡。     

吡格列酮下调DC-SIGN蛋白表达抑制树突状细胞黏附和迁移

目的 探讨吡格列酮(Pio)调节树突状细胞(DC)黏附和迁移功能的可能机制.方法 体外培养人外周血单核细胞来源的DC和人脐静脉内皮细胞,使用不同浓度的Pio及加过氧化物酶体增殖物活化受体-γ拮抗剂(GW9662)干预DC 24 h,Western印迹和免疫荧光试验检测Pio对表达DC特异性细胞间黏附分子3捕获的非整合蛋白(DC-SIGN)的影响,细胞黏附试验检测Pio对DC黏附功能的作用,细胞迁移试验检测Pio对DC迁移功能的作用.结果 (1)Pio呈浓度依赖性下调DC-SIGN蛋白的表达,在Pio 1.0 μmol/L时DC-SIGN蛋白表达量明显减少(0.96 ±0.09,对照1.25±0.23,均P＜0.05),Pio 10 μmol/L时减少更明显(0.80 ±0.08,均P＜0.01),GW9662干预组(1.10±0.12,均P＜0.01)蛋白表达量增加;(2)在Pio 1.0 μmol/L时DC黏附和迁移降低(10.8%±2.0%和24.6%±0.5%,均P＜0.05),Pio 10 μmol/L时降低更明显(7.6%±1.5%和23.4%±3.0%,均P＜0.01),GW9662干预组DC黏附和迁移增加(12.1%±1.9%和26.8%±0.8%),经抗DC-SIGN抗体作用后DC黏附和迁移较对照降低(5.7%±0.9%和23.2%±2.9%,均P＜0.01).结论 Pio能通过激活过氧化物酶体增殖物活化受体-γ,下调DC-SIGN蛋白表达,从而抑制DC的黏附和迁移功能.     

苦参碱对心肌成纤维细胞细胞周期的影响及其机制

目的 :观察苦参碱 (Mat)对血管紧张素Ⅱ (angiotensin ,AngⅡ )诱导的心肌成纤维细胞细胞 (CFs)增殖的影响并探讨其机制。方法 :体外培养新生Wistar大鼠的心肌成纤维细胞 ,四氮唑盐 (MTT)比色法检测细胞增殖 ,流式细胞分析仪测定细胞周期及细胞周期蛋白表达。结果 :①随苦参碱浓度的增加 ,CFsMTT值呈递减趋势 ,且均明显低于AngⅡ组 ;②苦参碱可使CFs的S期细胞百分率下降 ,G0 /G1 期百分率上升 ,与AngⅡ组比较差异较显著(P <0 .0 5 ) ;③AngⅡ可使CFsP2 7表达阳性率降低 ,而苦参碱可促进CFsP2 7表达。结论 :苦参碱可抑制AngⅡ诱导的心肌成纤维细胞增殖 ,P2 7参与了抑制CFs增殖的作用     

血管衰老性重塑及其相关基因差异表达的变化

目的 分析相关基因差异表达与血管衰老性重塑的联系,探讨血管衰老性重塑可能的基因调控机制.方法 常规观察主动脉组织形态及显微结构变化,应用基因差异表达技术、逆转录-聚合酶链反应、Western印迹分析验证健康衰老进程中,4、10、16、22个月龄大鼠血管衰老性重塑相关基因及其差异表达变化.结果 基因差异PCR共选出5条表达差异的片段,同源性对比证明分别与L型Ca2+通道α1c亚单位(Cacna1c)、基质金属蛋白酶9(MMP-9)、NAD(P)H氧化酶α亚单位(p22-phox)、基质细胞衍生因子1α(SDF-1α)、半胱氨酸蛋白水解酶-9(Casp9)基因高度同源.其中Cacnalc和p22-phox表达随龄增加,16月龄组(0.74±0.13;0.73±0.12)较10月龄组(0.12±0.05;0.20±0.03)增加.SDF-1α表达随龄降低.MMP-9和Casp9表达呈双相变化,16月龄组表达正向峰值(0.56±0.15;0.47±0.16).分别以平滑肌和胶原纤维为因变量作多元逐步回归分析,(r=0.92,P＜0.01);(r=0.93,P＜0.01)均呈正相关.结论 血管衰老性重塑并非恒速进行,存在缓慢起始、加速进展、减速维持的时相性过程.基因时相性差异表达变化同血管衰老性重塑高度相关.Cacna1c、p22-phox、SDF-1α基因时相性差异表达可能参与血管衰老性重塑.     

L-赖氨酸锌和牛磺酸对高热致畸拮抗作用的实验研究

目的　探讨L 赖氨酸锌、牛磺酸对小鼠胚胎高热损伤的保护作用。方法　选择 8日孕龄Swiss小鼠 87只 ,置于 4 2 5～ 4 3 0℃水浴中 9min ,6h后再水浴 8min。 30只孕鼠于孕 9日灌服L 赖氨酸锌 ,剂量为 2 0 0mg/kg ,2 7只孕鼠灌服牛磺酸剂量为 30 0mg/kg。于孕 18日处死。计算畸胎、死胎、吸收胎率 ,并分别测量体重、身长及尾长。结果　L 赖氨酸锌组与牛磺酸组畸胎率分别为 1 1%和1 2 % ,高热组为 5 4 % ,与前两组比较P <0 0 1。前两组死胎率分别为 1 0 %和 1 5 % ,高热组为3 5 % ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的吸收胎率均为 5 6 % ,高热组为 14 3% ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的平均体重分别为 1370mg± 180mg和 1380mg± 190mg ,明显重于高热组 12 80± 2 4 0mg(P <0 0 1)。前 2组鼠的身长分别为 2 8 1mm± 1 9mm和 2 8 0mm± 2 1mm ,高热组为 2 6 7mm±2 2mm ,与前两组比较P <0 0 1。前两组鼠的尾长分别为 12 2mm± 1 3mm和 12 2mm± 1 9mm ,高热组为 11 6mm± 1 5mm ,与前两组比较P <0 0 1。结论　L 赖氨酸锌、牛磺酸可明显增强胚胎对高热致畸的拮抗作用 ,促进胚胎的正常发育。