压应力下兔软骨细胞凋亡的实验性研究

目的 观察持续及间歇压应力下关节软骨的组织学变化、软骨细胞的凋亡,探讨压应力下软骨细胞凋亡和关节软骨退变的相互关系及压应力下软骨细胞凋亡的相关机制.方法 在活体新西兰大白兔左后肢的髌股关节间造成持续及间歇的不同压应力模型,60只新西兰大白兔,随机分为7组:A组,对照组;B组,持续伸直位;C组,持续屈曲80°位;D组,持续屈曲140°位;B1组,间歇伸直位;C1,间歇屈曲80°位;D1组,间歇屈曲140°位.持续组于1周、2周、4周、6周、8周,间歇组于4周、8周、12周先进行髌股关节间压应力测试,然后取材利用HE染色、甲苯胺蓝染色、TUNEL法等方法观察关节软骨细胞及关节软骨的组织学变化.结果 关节间持续及间歇的较高压应力可以引起关节软骨细胞凋亡并伴有关节软骨退变;持续的压应力引起的变化大于间歇的压应力;较长时间的关节制动也可以引起上述变化.结论 关节间持续及间歇的较高压应力可以引起软骨细胞凋亡,并继而出现软骨退变.     

组织工程化关节软骨细胞凋亡的研究

目的 观察离心管构建的组织工程骨细胞亡及细胞增殖情况。方法 对离心管构建3周的组织工程骨进行透射电镜，流式细胞仪检测和^3H-TdR掺入测定，与3周龄兔关节软骨对照。结果 透射电镜检查组织工程软骨在5％左右的细胞凋亡，正常关节软骨未见明显的细胞凋亡；流式细胞仪显示软骨细胞有8．5％左右的亚二倍体细胞，正常关节软骨在2．4％左右的亚二倍体细胞。^3H-TdR掺入测定显示细胞增殖能力较正常关节软骨明显增强。结论 培养3周的组织工程软骨细胞凋亡与细胞增殖均较正常软骨增强。     

骨关节炎软骨细胞凋亡率的实验研究

目的检测和分析髋关节骨关节炎中软骨损伤轻重部位的软骨细胞凋亡率。方法关节软骨组织切片分别进行HE染色，番红O-固绿染色，Mankin评分评价软骨损伤程度，TUNEL方法检测软骨细胞凋亡率。结果关节软骨损伤重的部位的Mankin评分值及软骨细胞凋亡率均高于软骨损伤轻的部位。结论软骨细胞凋亡率与骨关节炎软骨损伤程度相一致，说明细胞凋亡可能是骨关节炎软骨损伤的机制之一。     

兔膝骨关节炎关节软骨细胞凋亡的实验研究——超微结构观察

目的 为探讨骨关节炎关节软骨退变的发生机理。方法 按照Hulth法建立兔膝关节炎模型实验组，12只实验兔随机分为2组，每组6只，自身健侧做实验对照组，分别为建模后2周组和4周组后取材，分别制作光镜电镜标本进行系统观察研究。结果 不同时期的骨关节炎关节软骨有程度不一的软骨细胞凋亡，以4周组最为显著，特别是在电镜下软骨细胞凋亡的形态学改变更具特征、更为典型。结论 (1)膝骨关节炎的关节软骨细胞退变时，软骨细胞数目的减少有软骨细胞凋亡的参与。(2)关节软骨退变的程度与软骨细胞数目的减少即与软骨细胞凋亡的程度有关。(3)形态学的特征性表现可作为判断软骨细胞是否发生凋亡的“金指标”。     

关节软骨的细胞凋亡

目的 观察正常及关节炎时关节软骨是否发生细胞凋亡及其可能的意义。方法 采用光镜、电镜观察软骨细胞形态,以琼脂糖凝胶电泳检测软骨细胞特异ＤＮＡ的梯形带,以激光共聚焦显微镜观察细胞内「Ｃａ＾２＋」ｉ动脉变化。结果 骨性关节炎及风湿性关节炎患者的关节软骨细胞经体外培养３ｄ后,光镜及电镜下均可见处于正常分化期的软骨细胞,而未经培养直接分离的部分软骨细胞可见细胞凋亡早期形态学改变。此外,体外培养的牛正常软骨     

骨关节病与大骨节病关节软骨细胞凋亡的比较

目的比较成年人大骨节病与骨关节病关节软骨细胞凋亡及凋亡相关调控因子Fas和诱导型一氧化氮合酶(iNOS)的表达分布特点,探讨两种疾病发病机制的异同。方法收集15例大骨节病、15例正常对照以及15例骨关节病的关节软骨,分别采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和免疫组化法,观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的细胞凋亡率、Fas及iNOS蛋白表达及其分布特点。结果大骨节病及骨关节病关节软骨细胞凋亡率较正常对照高(P<0·01),且关节软骨剥蚀区的细胞凋亡率较未剥蚀区高(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡率差异无显著性。大骨节病与骨关节病关节软骨Fas及iNOS表达阳性细胞数较正常关节软骨增多(P<0·01),且关节软骨剥蚀区Fas及iNOS表达阳性细胞数较未剥蚀区增多(P<0·05),但大骨节病与骨关节病之间Fas及iNOS表达阳性细胞数差异无显著性。结论骨关节病和大骨节病均存在软骨细胞异常凋亡,Fas和iNOS可能参与了细胞凋亡过程。     

大骨节病游离体软骨Bcl-2及Caspase-8的表达

目的探讨细胞凋亡及相关调控因子在大骨节病关节游离体形成中的作用机制。方法收集50例成人大骨节病游离体软骨和10例正常对照关节软骨。采用抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)免疫组化法染色,观察成人大骨节病游离体软骨和对照组关节软骨Bcl-2、Caspase-8阳性细胞表达率与分布特点。结果 (1)大骨节病游离体软骨细胞Bcl-2及Caspase-8阳性表达率分别为(18.40±8.78)%和(67.54±12.29)%,显著高于对照组关节软骨细胞Bcl-2及Caspase-8阳性表达率[(12.25±1.58)%和(24.70±4.35)%]。(2)Bcl-2与Caspase-8参与了大骨节病游离体软骨细胞的凋亡。(3)Bcl-2与Caspase-8阳性表达细胞主要发生在深层肥大的软骨细胞,或者临近深部骨组织的细胞。结论大骨节病游离体软骨细胞凋亡及相关调控因子Caspase-8及Bcl-2表达显著高于对照组,Caspase-8的促进细胞凋亡作用较Bcl-2的抑制凋亡作用占优势。     

胶原-纤维蛋白混合凝胶对关节软骨细胞合成Ⅱ型胶原的影响

目的：以胶原蛋白和人血纤维蛋白混合物为载体在体外进行关节软骨细胞三维立体培养,构建人工软骨组织,研究载体对软骨细胞在其中的表达及合成Ⅱ型胶原的影响。方法：取2周龄的新生兔关节软骨,经消化,将获得的软骨细胞与牛Ⅰ型胶原、人血冻干纤维蛋白原、凝血酶按一定比例混合,制成软骨培养物并在体外培养。培养第3周时,取材进行Masson染色、Ⅱ型胶原寡核苷酸探针原位杂交和Ⅱ型胶原的免疫组化观察。 结果：体外培养3周,培养物内细胞大部分存活, Masson染色形成软骨陷窝,同源性细胞簇出现,细胞周围有蓝色物质环绕存在,原位杂交证实其软骨细胞表达Ⅱ型胶原mRNA,免疫组化证实软骨细胞分泌Ⅱ型胶原。 结论：用胶原蛋白和人血纤维蛋白为载体支架体外培养软骨细胞,可促进关节软骨细胞合成分泌Ⅱ型胶原,Ⅱ型胶原是软骨组织最主要的细胞外基质成分。     

关节制动制作骨性关节炎动物模型的探讨

目的 探讨应用关节制动的方法制作OA动物模型的可行性及可靠性。方法 成年新西兰太白兔28只，左后肢膝关节伸直住石膏管型固定，分别于制动后1,2、4和6周随机处死一只．观察其左后肢膝关节软骨病理改变，了解制动效果，其余动物6周后取左侧膝关节软骨及滑膜标本为实验组．对侧肢体膝关节软骨及滑膜标本为对照组，比较两组软骨及滑膜细胞凋亡情况。结果 6周后，无论从大体还是镜下以及细胞凋亡情况，兔左后肢膝关节均呈典型的OA特征。结论 膝关节伸直位制动5—6周是一个制作OA动物模型的较为理想的方法。     

超关节制动下家兔膝关节软骨的超微结构变化

作者用透射电镜对30只左膝功能位管型石膏制动的家兔关节软骨进行超微结构研究,发现制动早期就出现退行性变和组织修复的病理变化。显著的形态学变化表现为:(1)关节软骨的各层次中的多数软骨细胞发生了进行性退行性变;(2)在某些阶段中同时发生的软骨细胞异常增殖,由制动造成的机械应力改变,影响了关节软骨的营养状态,并最终导致反应性关节软骨结构重     

实验性骨关节病中软骨细胞的凋亡

The right knees of rabbits were immobilized in full extension for up to eight weeks using plaster cast. Specimens of the articular cartilage obtained from tibial plateau were studied by histopathologic and TDT-mediated fluorescein-dUTP nick-end labelling(TUNEL) techniques. The results showed that TUNEL-positive chondrocytes with apoptosis specific morphology were detected on superficial and middle layer of the articular cartilage from one to two weeks after immobilization, and these changes progressed until 4 weeks after immobilization. Six weeks after immobilization, TUNEL-positive chondrocytes were seen through the entire thickness of the articular cartilage. Our findings indicate that apoptosis of chondrocytes could be induced by immobilization and might be responsible for articular cartilage degeneration, and which is one of the pathways involved in the pathophysiological mechanism of osteoarthritis.     

糖蛋白YKL-40在骨关节炎中的表达

目的探讨YKL-40在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原位末端标记技术(TUNEL)等检测YKL-40在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中YKL-40的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与YKL-40的表达呈正相关(P<0.05)。结论YKL-40骨关节炎发生发展有密切关系。     

Bak、Fas在骨关节炎软骨及滑膜中表达的实验研究

目的探讨Bak、Fas基因在骨关节炎软骨细胞及滑膜中的表达及意义。方法成年新西兰大白兔24只，根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型，用免疫组化、原位末端标记技术（TUNEL）等方法检测Bak、Fas在兔膝关节软骨细胞及滑膜中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Bak、Fas的表达实验组阳性率均高于对照组（P〈0．03）；实验组软骨细胞凋亡程度与Fas、Bak的表达均呈正相关（P〈0．03）。结论Bak、Fas基因与骨关节炎发生发展有密切关系。     

Caspase-3、XIAP在骨关节炎中的表达及意义

目的探讨Caspase-3、XIAP在骨关节炎软骨细胞中的表达及意义。方法用免疫组化SP法、原住末端标记技术（TUNEL）等检测Caspase-3、XIAP在22例骨关节炎患者关节软骨细胞中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨细胞中Caspase-3的表达实验组阳性率高于对照组（P〈0．01）；实验组软骨细胞凋亡程度与XIAP的表达呈负相关（P〈0．05），与Caspase-3的表达呈正相关（P〈0．01）。结论Caspase-3、XIAP基因的表达与骨关节炎发生发展有密切关系。     

uPA/uPAR在骨关节中的表达及与软骨细胞凋亡的关系

目的探讨uPA/uPAR在骨关节炎软骨中的表达及与软骨细胞凋亡的关系。方法成年新西兰大白兔24只,根据文献采用石膏固定方法制作骨关节炎动物模型,用免疫组化、原位末端标记技术(TUNEL)等方法检测uPA/uPAR在兔膝关节软骨中的表达和软骨细胞凋亡情况。结果在软骨中uPA/uPAR的表达实验组阳性率高于对照组(P<0.05);实验组软骨细胞凋亡程度与uPA/uPAR的表达均呈正相关(P<0.05)。结论uPA/uPAR与骨关节炎发生发展有密切关系。     

大骨节病与骨关节病患者软骨细胞凋亡及其机制的比较研究

目的比较分析大骨节病与骨关节病关节软骨中细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达分布特点，探讨两病发病机制的异同。方法收集大骨节病和骨关节病的关节软骨各15例．并以15例正常人作对照。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记（TUNEL）技术和免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶（B-SA）法染色，观察大骨节病、骨关节病和正常对照关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNOS蛋白阳性表达率及其分布特点。结果（1）大骨节病及骨关节病关节软骨凋亡阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=20．90～53．16，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区的凋亡阳性细胞数较未剥蚀关节软骨区增多（t=4，154-6.004，df=28，P〈0.01），但大骨节病与骨关节病之间软骨细胞凋亡阳性数无显著性差异（t=1.329～1.362，df=28，P〉0.05）。（2）大骨节病与骨关节病关节软骨Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较正常关节软骨增多（F=25.46-215.31，df=42，P〈0．01），且关节软骨剥蚀区Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性细胞数较未剥蚀区增多忙2．278～7.77，df=28，P〈0．05），但大骨节病患者与骨关节病Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达阳性细胞数无显著性差异（t=0.284-1．590，df=28，P〉0．05）。结论大骨节病与骨关节病均有相似的细胞凋亡，而且凋亡机制相同，即Bcl-2、Bax、Fas及iNos途径。     

大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达

目的 探讨大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达分布的特点。方法 收集15例大骨节病儿童和15例正常对照儿童关节软骨。采用脱氧核糖核酸末端转移酶介导的脱氧核糖核酸缺口标记(TUNEL)技术和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白免疫组化抗生物素蛋白-生物素-碱性磷酸酶(B-SA)法染色,观察大骨节病儿童和正常对照儿童关节软骨的凋亡细胞和Bcl-2、Bax、Fas及iNos蛋白阳性表达细胞的密度与分布。结果 (1)大骨节病儿童关节软骨中层凋亡阳性细胞数[(33.60±2.71)%]较正常关节软骨[(1.33±0.41)%]显著增多(t=11.59,P<0.01);(2)大骨节病儿童关节软骨表层和中层Bcl-2、Bax、Fas及iNos的表达显著高于正常关节软骨中的表达(t=11.75~18.65,P<0.01);大骨节病儿童关节软骨各层Bcl-2、Bax、Fas及iNos表达阳性率有显著性差异(F=73.49~114.42,P<0.01),以表层最多[分别为(41.93±12.26)%、(45.60±15.78)%、(53.60±16.49)%和(45.47±14.02)%],其次为中层[分别为(14.93±3.50)%、(13.87±4.32)%、(23.27±4.83)%、(21.67±6.82)%]。结论 大骨节病患者关节软骨细胞凋亡及相关调控因子Bcl-2、Bax、Fas、iNos表达较正常人显著增多。     

大骨节病关节软骨细胞凋亡及其相关调控因子的表达

OBJECTIVE: To investigate the characteristics of chondrocyte apoptosis and distribution of Bcl-2, Bax, Fas and iNos expressions in articular cartilage in Kashin-Beck disease (KBD). METHODS: Samples of articular cartilage were collected from 15 healthy children and 15 children with KBD diagnosed according to the Pathological Criteria of KBD Diagnosis in China. Chondrocyte apoptosis was detected by TUNEL method, and the articular chondrocytes positive for Bcl-2, Bax, Fas and iNos were stained by B-SA immunohistochemistry. RESULTS: The percentage of apoptotic chondrocytes positively stained by TUNEL in the middle layer of articular cartilage was significantly higher in KBD children than in the control group (33.60%+/-2.71% vs 1.33%+/-0.41%, t=11.59, P<0.01). Significant difference in Bcl-2, Bax, Fas and iNos expressions was observed between the upper, middle and deep layers of the articular cartilage of KBD children (F =73.49-114.42, P<0.01), and staining for Bcl-2, Bax, Fas and iNos in KBD children was prominent in the upper layer (41.93%+/-12.26%, 45.60%+/-15.78%, 53.60%+/-16.49%, and 45.47%+/-14.02%, respectively) and the middle layer (14.93%+/-3.50%, 13.87%+/-4.32%, 23.27%+/-4.83%, and 21.67%+/-6.82%, respectively) of the articular cartilage; the percentages of chondrocytes positively stained for Bcl-2, Bax, Fas and iNos were significantly higher than those of the control group (t=11.75-18.65, P<0.01). CONCLUSION: The percentages of apoptotic chondrocytes and chondrocytes positive for Bcl-2, Bax, Fas and iNos in the articular cartilage of children with KBD are significantly higher than those in healthy children.     

低硒和/或低碘对子三代大鼠关节软骨细胞凋亡的影响

目的 研究低硒和/或低碘对于三代大鼠软骨细胞凋亡的影响.方法 将48只断乳SD大鼠随机分为低硒组、低碘组、低硒低碘组和对照组4组,采用末端脱氧核苷酸转移酶介导的缺口末端标记(TUNEL)技术和免疫组织化学方法检测各组子三代大鼠关节软骨细胞的凋亡率、Bcl-2和Bax蛋白表达及其分布情况.结果 与对照组相比,低硒组、低碘组及低硒低碘组子三代大鼠关节软骨表层和中层软骨细胞凋亡增多,尤以中层增多更显著(P<0.05),低硒组、低碘组及低硒低碘组间细胞凋亡阳性率差异无统计学意义(P>0.05);低硒组、低碘组及低硒低碘组子三代大鼠关节软骨表层和中层Bcl-2和Bax表达阳性细胞数较对照组明显增多(P<0.05),低硒组、低碘组及低硒低碘组间Bcl-2和Bax表达阳性细胞数差异无统计学意义(P>0.05).结论 低硒和/或低碘可能诱导大鼠关节软骨细胞异常凋亡.