真核细胞翻译起始因子eIF4E与白血病

真核细胞翻译起始因子eIF4E在30%以上的人类恶性肿瘤中过表达.靶向eIF4E及其上游通路的药物可以部分抑制肿瘤细胞的生物学行为.本文就eIF4E在白血病中的作用及其靶向治疗的研究进展作一综述.     

真核细胞翻译起始因子eIF4E与白血病

真核细胞翻译起始因子eIF4E在30%以上的人类恶性肿瘤中过表达.靶向eIF4E及其上游通路的药物可以部分抑制肿瘤细胞的生物学行为.本文就eIF4E在白血病中的作用及其靶向治疗的研究进展作一综述.     

真核生物启动因子4E在喉癌、下咽癌及良性病变中表达的研究

目的:探讨检测真核生物启动因子4E(eukaryotic initiation factor 4E,eIF4E)表达水平用于诊断喉癌、下咽癌的临床价值.方法:选择喉癌、下咽癌、咽喉部良性病变组织标本共48例,正常黏膜(行悬雍垂腭咽成形术手术切除的腭弓黏膜)13例,采用逆转录酶-PCR和蛋白印迹法分析其eIF4EmRNA和蛋白的表达水平,并比较其差异.结果:eIF4E mRNA和蛋白在癌组织中的表达水平较高(半定量值分别为0.8±0.3、76±21),而咽喉部良性病变的eIF4E表达水平较低(半定量值分别为0.3±0.1和13±5),后者与正常黏膜的eIF4E表达水平(半定量值分别为0.3±0.1和12±6)接近.结论:eIF4E在喉癌和下咽癌组织中的表达水平高,其对癌细胞生长调控中可能起着重要作用,eIF4E可考虑作为喉癌和下咽癌的分子水平肿瘤标记物.     

真核转录起始因子4E在食管癌中的表达及其与微淋巴管密度的关系

目的:观察真核转录起始因子4E(eIF4E)在食管癌组织中的表达并计数微淋巴管密度(MLVD),探讨eIF4E 与食管癌发生和转移的关系以及在食管癌微淋巴管生成中的作用.方法:应用免疫组织化学技术检测75 例食管癌石蜡标本切片中eIF4E 和D2-40 的表达,以26 例癌旁组织、55 例正常食管组织为对照;采用Image Pro Plus (IPP) 6.0 图像分析软件对采集的图片进行分析.结果:eIF4E 在食管癌组织(0.048 ± 0.023)中的表达较癌旁(0.028 ± 0.023)和正常食管组织(0.013 ± 0.016)高(P ＜ 0.05),且随着食管癌分化程度的降低,表达强度逐渐增强;eIF4E 在淋巴结转移组(0.068 ± 0.014)中的表达高于非淋巴结转移组(0.033 ± 0.016)(P ＜ 0.05);eIF4E 在中晚期食管癌组中的表达高于早期食管癌组(P ＜ 0.05);eIF4E 的表达与患者的性别、年龄无关(P ＞ 0.05).低分化食管癌组中的MLVD 较中分化和高分化的MLVD 高;淋巴结转移组MLVD 较未转移组高(P ＜ 0.05).eIF4E 的表达与食管癌MLVD 呈正相关(r ＝ 0.624,P ＜ 0.01).结论:eIF4E 在食管癌组织中有较高的表达,且与淋巴结转移、分化程度及食管癌组织的MLVD 密切相关,提示食管癌的发生和淋巴转移可能与eIF4E 有关,eIF4E 可能作为食管癌新的标志物以及评估食管癌进展的客观指标.     

真核细胞起始因子4E和p53在舌癌中的表达及其意义——附84例检测报告

目的：探讨真核细胞起始因子4E（eIF4E）和p53在舌癌中的表达及意义.方法：采用免疫组织化学染色法分别检测84份舌鳞癌组织（舌癌组）、26份以舌白斑为代表的癌前病变组织（癌前病变组）、20份正常舌黏膜组织（正常对照组）的eIF4E、p53 表达情况,并对eIF4E、p53 表达变化趋势进行一致性分析及比较.结果：eIF4E在舌癌组、癌前病变组及正常对照组中的阳性表达率分别为92%、73%、0,组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.p53在舌癌组、癌前病变组及正常对照组中的阳性表达率分别为69%、23%、0,组间两两比较差异均有统计学意义（P〈0.05）.eIF4E与p53表达变化趋势一致（r=0.491,P〈0.05）.eIF4E在舌癌组和癌前病变组中的阳性表达率均高于p53（P〈0.01）.结论：舌癌组织和癌前病变组织的eIF4E和p53阳性表达率较高,两者可能与舌癌的发生有关,可能适用于舌鳞癌检测.     

慢病毒感染稳定敲减eIF4E基因的鼻咽癌CNE2细胞系的建立

目的构建稳定干扰真核起始因子4E(eIF4E)基因的鼻咽癌CNE2细胞系。方法设计针对eIF4E基因mRNA序列的RNA干扰序列,以慢病毒载体pGC-LV为基础构建感染体系。慢病毒感染CNE2细胞后,经嘌呤霉素压力筛选稳定敲减eIF4E基因的CNE2细胞株。采用定量聚合酶链反应和免疫印迹法检测eIF4EmRNA和蛋白的表达水平;采用细胞增殖和迁徙实验验证eIF4E敲减对CNE2细胞的影响。结果成功构建并筛选获得带有eIF4E特异性短发夹RNA的慢病毒颗粒;将慢病毒颗粒转入CNE2细胞,经抗菌药物压力筛选获得稳定敲减eIF4E基因的CNE2细胞(CNE2siEp)及阴性对照细胞(CNE2siNC)。与CNE2siNC细胞相比,CNE2siEp细胞eIF4EmRNA表达水平下调76.0%,蛋白表达水平下调50.0%,细胞增殖活性下调85.0%,运动活性下调59.0%。结论成功构建稳定敲减eIF4E的CNE2细胞系,其eIF4E基因表达水平与功能明显受抑。     

半定量逆转录-PCR检测骨髓eIF4E相对表达水平在急性髓细胞白血病疗效监测中的意义

目的 通过比较初治、完全缓解(CR)、未缓解及复发的急性髓细胞白血病(AML)患者骨髓eIF4E相对表达水平,探讨其在AML疗效监测中的意义.方法 选择2012年8月至2014年5月,四川省人民医院血液科收治的152例初治AML患者为研究对象,纳入研究组.对研究组AML患者按照法国、美国和英国协作组(FAB)进行分型,M1型为18例,M2型为60例,M3型为28例,M4型为20例,M5型为24例,M6型为2例,分别纳入相应亚组.选择本科同期收治的20例非血液肿瘤疾病患者纳入对照组,其中,免疫性血小板减少症患者为14例,血液系统良性疾病导致的缺铁性贫血为6例.本研究遵循的程序符合四川省人民医院人体试验委员会制定的伦理学标准,得到该委员会批准,并征得受试对象的知情同意.收集研究组AML患者治疗前、后与复发前、后及对照组患者骨髓标本,采用半定量逆转录-PCR法检测骨髓eIF4E表达相对水平.以β-actin为内标物,采用PDQuest软件分析eIF4E/β-actin的比值,计算骨髓eIF4E相对表达水平.对研究组AML患者骨髓标本均采用半定量逆转录-PCR进行融合基因及突变基因检测.采用R语言软件对研究组与对照组、研究组各亚型之间化疗缓解前、后和复发前、后骨髓eIF4E相对表达水平及骨髓eIF4E与FLT3/ITD基因表达的相关性进行统计学分析.结果 研究组患者中,因各种原因未接受治疗者为21例.接受诱导化疗的131例患者中,获得CR的患者为95例(72.5％).对获得CR的患者平均随访18个月后,34例(35.8％)复发.研究组与对照组患者骨髓标本的eIF4E相对表达水平分别为0.81±0.27与0.04±0.01,二者比较,差异有统计学意义(W=3 040,P＜0.05).研究组各亚型AML患者中,M4和M5型患者的骨髓eIF4E相对表达水平较其他亚型高,但各亚型患者的骨髓eIF4E相对表达水平比较,差异无统计学意义(W=13,P＞0.05).研究组经诱导治疗后获得CR的95例患者中,化疗缓解前骨髓eIF4E相对表达水平为0.87±0.25,化疗缓解后骨髓eIF4E相对表达水平降低至0.28±0.17.化疗缓解前、后骨髓eIF4E相对表达水平比较,差异仍有统计学意义(W=4 408,P＜0.05).但缓解后骨髓eIF4E相对表达水平仍高于对照组,且二者比较,差异有统计学意义(W=1 898.5,P＜0.05).获得CR各亚型AML患者的骨髓eIF4E相对表达水平比较,差异均无统计学意义(W=34,P＞0.05).研究组34例复发AML患者中,复发前、后骨髓eIF4E相对表达水平分别为0.30±0.10和0.86±0.27,二者比较,差异有统计学意义(W=1 249,P＜0.05).eIF4E与FLT3/ITD基因突变无相关性(x2=0.017,P＞0.05).结论 eIF4E在AML的发病中起着重要作用.骨髓eIF4E相对表达水平在诱导治疗获得CR后明显下降,复发时升高.半定量逆转录-PCR检测骨髓eIF4E相对表达水平,可用于AML的疗效监测.     

真核细胞翻译起始因子eIF4E的研究进展

在真核细胞,翻译的调节在基因表达调控方面具有十分重要的作用。翻译的调节主要出现在起始阶段,真核细胞翻译启动因子4F（eukaryotic translation initiation factor 4F,eIF4F）启动帽依赖蛋白质的翻译。eIF4F由三个蛋白质分子组成：包括eIF4E（帽结合蛋白）、eIF4A（依赖于RNA的ATP酶）和eIF4G（起连接结合作用的亚基）。eIF4E是一个分子量为25×10^3u的多肽,其基因位于4q21-25,在帽依赖性翻译的调节中起中心作用。本文就eIF4E的研究进展进行综述。     

结直肠癌组织真核细胞起始因子4E和基质金属蛋白酶-9的表达及临床意义

目的探讨结直肠癌患者组织真核细胞起始因子4E(eIF4E)和基质金属蛋白酶-9(MMP-9)的表达及两者的相关性。方法入选在我院确诊的结直肠癌患者80例。免疫组化检测eIF4E和MMP-9的表达。分析eIF4E和患者性别、年龄、肿瘤部位、大小、分化程度、肿瘤侵润深度、临床分期及有无淋巴结转移等和MMP-9表达的关系。结果结直肠癌患者eIF4E和MMP-9的表达较癌旁正常组织明显升高。相关分析结果显示eIF4E的表达水平与肿瘤的侵润深度、有无淋巴结转移有关,与MMP-9的表达水平呈正相关。结论 eIF4E和MMP-9是结直肠癌患者恶性改变及判断其恶性程度的标记物,并在结直肠癌的侵袭和转移机制中发挥重要作用。     

eIF4E在白血病中的表达及其临床意义

本研究旨在比较eIF4E在正常人和白血病患者中的表达水平,了解eIF4E是否在白血病的发生和发展中起到一定的作用。收集10例正常人和76例白血病患者的外周血细胞标本,76例患者包括39例急性髓系白血病,15例慢性髓系白血病和22例急性淋巴细胞白血病,分离标本中的白细胞,分别通过实时定量PCR和Western blot检测eIF4E在mRNA和蛋白质水平的表达变化。结果表明,就eIF4E mRNA绝对表达水平而言,在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及慢性髓系白血病急变期,其表达增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05);在慢性髓系白血病慢性期,其表达水平无明显改变,在慢性髓系白血病加速期,其表达水平虽有所上调,但与正常对照无显著性差异。就eIF4E mRNA相对表达水平而言,在慢性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病及除M4、M5之外的急性髓系白血病中,其表达均无显著性变化。eIF4E蛋白质表达在急性髓系白血病、急性淋巴细胞白血病、慢性髓系白血病加速期和急变期中均有不同程度的增高,与正常对照比较有显著性差异(P<0.05)。结论:虽然eIF4EmRNA相对表达水平在大多数白血病中并无显著性改变,但是eIF4E mRNA绝对表达水平及其蛋白质水平在大多数白血病中均显著性上调。因此推测,eIF4E可能对白血病的发生和发展起到一定的作用,以它为靶点治疗白血病,尤其是复发和难治性白血病,可能是一条有希望的途径。     

真核细胞翻译起始因子4E在子宫内膜癌中的表达及意义

目的：探讨子宫内膜样腺癌组织中真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）的表达情况及意义。方法：应用免疫组织化学技术检测124例子宫内膜样腺癌及20例正常子宫内膜组织中eIF4E的表达情况,同时结合患者的临床病理资料进行分析。结果：子宫内膜样腺癌和正常子宫内膜组织中eIF4E的阳性表达率分别为72.6%和5.0%,差异有统计学意义（P=0.000〈0.05）。eIF4E的表达与肿瘤组织分化程度明显相关（P=0.039〈0.05）,而与FIGO分期无明显相关（P=0.296〉0.05）。结论：过度表达的eIF4E可能作为判断子宫内膜恶变及恶性程度的分子标志。     

真核细胞翻译起始因子4E 对鼻咽癌侵袭转移的作用

目的：分析真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）对鼻咽癌侵袭转移的促进作用,为临床评估鼻咽癌侵袭转移提供新的筛查靶点。方法利用细胞试验研究eIF4E在鼻咽癌细胞中高表达的机制,和被人潜伏膜蛋白（LM P1）诱导转录活化的机制,以及转录活化对鼻咽癌细胞侵袭转移的影响。结果 eIF4E可以被LM P1诱导转录活化,vector组eIF4E的mRNA表达水平与MOCK组间差异无统计学意义（P＞0．05）。LMP1组与vector组比较,eIF4E的mRNA表达水平显著上升,差异有统计学意义（P＜0．05）。经灰度分析,MOCK组与vector组eIF4E的mRNA表达水平差异无统计学意义（P＞0．05）,LMP1组为vector组的2．173倍,差异有统计学意义（P＜0．05）。结论 eIF4E经LM P1诱导转录活化后,可促进鼻咽癌的侵袭转移,提示LM P1是致癌效应信号传递的一个关键节点,可以作为临床评估鼻咽癌侵袭转移的一个新的筛查靶点。     

电子克隆结合RT-PCR获得两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA

本研究旨在克隆急性白血病复发相关的新EST片段全长cDNA并进行生物信息学分析。电子克隆结合RT—PCR克隆新EST片段的全长cDNA,利用生物信息学技术分析所获得的cDNA。结果获得全长序列为1904bp和3393bp的两条真核细胞翻译起始因子4E（eukaryotic initiation factor4E,eIF4E）新的剪接变异体,命名为真核细胞翻译起始因子剪接变异体1（splicing variant 1 of eIF4E）和真核细胞翻译起始因子剪接变异体2（splicing variant 2 of eIF4E）。编码的蛋白产物分别为245和132个氨基酸。二者编码的蛋白产物与eIF4E蛋白有所不同。结论：获得了两条eIF4E剪接变异体的全长cDNA,这为进一步探讨与急性白血病复发的相关性提供基础。     

eIF4E和ki67在子宫内膜异位症中的表达及其临床意义

目的探讨eIF4E和ki67在子宫内膜异位症中的表达及临床意义。 方法采用免疫组化技术SP法检测异位内膜组（30例）,在位内膜组（30例）及正常内膜组（20例）中eIF4E及ki67蛋白的表达水平。 结果eIF4E和ki67在3组内膜中表达强弱依次为异位内膜>在位内膜>正常内膜,其差异有显著统计学意义（P<0.01）;eIF4E在正常内膜组和在位内膜中分泌期高于增殖期,其差异有显著统计学意义（P<0.05）,ki67在正常内膜组分泌期高于增殖期（P<0.05）,在位内膜组增殖期高于分泌物（P<0.05）;而eIF4E和ki67两者在异位内膜和在位内膜中的表达呈正相关（r=0.861,P<0.01;r=0.788,P<0.01）,在正常内膜表达无明显相关性（r=0.297,P=0.207）。 结论eIF4E和ki67在子宫内膜异位症表达明显增高,eIF4E和ki67可能与子宫内膜异位症发生发展密切相关。      

Survivin和eIF4E在喉鳞癌组织中的表达及其关系

目的探讨Survivin和eIF4E在喉鳞癌组织中的表达及其相互关系。方法应用免疫组化法测定40例喉鳞癌组织标本及20例声带息肉组织中Survivin与eIF4E的表达,并进行比较。结果Survivin在喉鳞癌标本中的阳性表达率为65%,而在声带息肉组织中的阳性表达率为25%,二者比较差异有显著性（χ2=12.19,P〈0.05）。Survivin的表达与喉鳞癌临床分期、分化程度有明显的相关性（χ^2=8.993、7.238,P〈0.05）,而与淋巴结转移无相关性（χ^2=1.134,P〉0.05）。eIF4E在喉鳞癌和声带息肉组织中的阳性表达率分别为97.5%和65.0%,二者比较差异有显著性（χ^2=8.54,P〈0.05）,其与临床分期、分化程度、淋巴结转移情况无明显相关性（χ^2=0.054～2.477,P〉0.05）。Survivin和eIF4E在喉鳞癌组织中的表达无相关性（r=0.11,P〉0.05）。结论Survivin与eIF4E在喉鳞癌组织中的过度表达与喉鳞癌的发生有关,但两者在喉癌组织中表达的相关性还有待进一步研究。     

急性髓系白血病中eIF4E高表达与疾病进展相关

本研究检测未治疗、未缓解/复发及缓解期间急性髓系白血病(AML)和其他良性血液病患者骨髓细胞中eIF4E基因表达水平并分析其与疾病进展的关系。采用SYBR Green I荧光定量PCR和相对定量分析法检测30例AML患者(M2型6例,M3型5例,M4型8例,M5型10例,M6型1例),11例AML化疗后完全缓解患者和20例非肿瘤性血液病患者骨髓单个核细胞的eIF4E表达情况,以β2微球蛋白基因(β2M)作为内参,采用公式2-△Ct×100%计算eIF4E基因表达水平。结果表明:AML未治疗及未缓解/复发组患者骨髓细胞eIF4E表达水平(7.098±5.544)%明显高于非肿瘤患者(0.248±0.163)%(P<0.01)和化疗后完全缓解患者(0.964±0.312)%(P<0.01),各AML亚型之间不存在统计学差异,尽管M4、M5亚型的表达水平相对较高。非白血病患者与缓解患者比较,eIF4E表达水平不存在显著性差异。结论:eIF4E基因在急性髓系白血病细胞中出现高表达,并随着疾病的缓解而明显降低,因此eIF4E有可能作为监测白血病进展的一项参数。     

苦参碱抑制宫颈癌HeLa细胞增殖作用及机制

目的探讨苦参碱对人宫颈癌HeLa细胞体外增殖的抑制作用及其分子机制。方法以不同浓度（0.5、1.0、1.5、2.0g/L）的苦参碱分别处理HeLa细胞24、48、72h后,应用MTT法检测细胞增殖抑制率,WesternBlot方法检测培养48h细胞中真核细胞翻译起始因子4E（eIF4E）、4E结合蛋白1（4E-BP1）蛋白表达情况;1.0g/L的苦参碱作用HeLa细胞1、3、6、12h后,Western Blot方法测其eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平。结果苦参碱明显抑制HeLa细胞增殖,且呈时间和剂量依赖性：在相同时间内,随着苦参碱浓度的增加,HeLa细胞的增殖抑制率明显升高（F=235.035,P〈0.05）;在同一浓度时,随着苦参碱作用时间的延长,HeLa细胞的增殖抑制率也明显升高（F=320.207,P〈0.05）;2.0g/L苦参碱作用72h对HeLa细胞增殖抑制率最大,为（65.30±2.17）%。不同浓度苦参碱处理HeLa细胞48h后,eIF4E、4E-BP1蛋白的表达均无明显变化（F=0.171、0.932,P〉0.05）。1.0g/L苦参碱作用于HeLa细胞不同时间后,细胞中eIF4E、4E-BP1蛋白磷酸化水平均降低,且呈时间依赖性（F=43.48、107.23,P〈0.01）。结论苦参碱可以明显抑制体外培养宫颈癌HeLa细胞的增殖,其作用可能是通过抑制eIF4E以及4E-BP1的磷酸化,从而抑制蛋白翻译来实现的。     

儿童急性淋巴细胞性白血病Bmal1、eIF4E基因表达及临床意义

目的探讨儿童急性淋巴细胞性白血病(ALL)外周血Bmal1、eIF4E基因表达及临床意义。方法选取2011年7月至2014年12月该院收治的ALL患儿80例作为研究对象,分为初诊组与缓解组,另选取同期健康体检儿童40例为对照组,对比各组Bmal1、eIF4E基因表达情况。结果初诊组外周血Bmal1基因表达水平依次高于缓解组、对照组,比较差异有统计学意义(P0.05);初诊组eIF4E基因表达水平依次高于缓解组与对照组,比较差异有统计学意义(P0.05)。结论儿童外周血ALL Bmal1、eIF4E基因表达异常,可作为临床诊疗指标。     

利巴韦林与eIF4E相关性急性髓系白血病的研究进展

人真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)特异性地与真核细胞mRNA 7-甲基鸟嘌呤核苷(m7G)帽状结构结合,在帽状结构依赖的翻译起始阶段起限制性调控作用.其高表达于急性髓系白血病(AML)部分类型等多种恶性肿瘤.利巴韦林(ribavirin)与m7G帽状结构相似,并可阻碍其活性.体外及临床研究均发现,利巴韦林对eIF4E相关性AML有抑制作用,少部分患者达完全缓解,其疗效与患者是否表达FMS样酪氨酸激酶3(FLT3)及核磷蛋白(NPM)基因突变无关.     

eIF4E对多发性骨髓瘤CD138~+细胞自噬的影响

目的:探讨真核细胞翻译起始因子4E(eIF4E)对多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞自噬的影响。方法:eIF4E抑制剂4EGI处理多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞,采用荧光定量PCR和Western blot法检测细胞自噬相关因子LC3-Ⅱ和Beclin1的变化,MTT法检测细胞增殖抑制的变化,流式细胞术检测细胞凋亡。结果:荧光定量PCR检测显示,4EGI处理骨髓瘤细胞后,LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA的表达水平具有时间及浓度依赖性,随着4EGI浓度增加和作用时间延长,LC3-Ⅱ、Beclin1 mRNA的表达水平逐渐增加,差异均有统计学意义(48 h:LC3-Ⅱ,r=0. 942,Beclin1,r=0. 952; 80μg/ml:LC3-Ⅱ,r=0. 966,Beclin1,r=0. 998)。Western blot检测显示,随着4EGI浓度增加,LC3-Ⅱ、Beclin1蛋白表达逐渐增加(LC3-Ⅱ,r=0. 923; Beclin1,r=0. 977)。CCK-8检测显示,细胞抑制率逐渐增加(r=0. 996); 4EGI处理各组(20、40、80μg/ml组)细胞凋亡率(23. 23±4. 47、7. 59±1. 67、2. 03±0. 19)均明显高于对照组(0. 03±0. 04)(P 0. 05)。结论:抑制eIF4E对多发性骨髓瘤CD138~+浆细胞的自噬有激活作用,并引起骨髓瘤细胞自噬性死亡。